Majalah Obstetri & Ginekologi, Vol. 22 No.

2 Mei - Agustus 2014 : 94-100

Pengaruh Genistein terhadap Penurunan Kadar Vascular Endothelial Growth

Factor-A pada Kultur Sel Endometriosis
Jehanara1, Sutrisno2, Santoso S3
1
Program Studi Magister Kebidanan, 2Divisi Fertilitas dan Endokrinologi Reproduksi, Departemen Obstetri dan
Ginekologi, 3Laboratorium Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya, Rumah Sakit Umum Dr. Saiful
Anwar, Malang

ABSTRAK

Terapi genistein dikembangkan karena bersifat anti-estrogenik, berfungsi sebagai antioksidan, inhibitor proliferasi, dan anti-kanker.
Tujuan penelitian ini adalah menganalisa pengaruh genistein berbagai dosis dan waktu inkubasi terhadap penurunan kadar
Vascular Endothelial Growth Factor-A (VEGF-A) pada kultur sel endometriosis. Penelitian ini merupakan studi eksperimental yang
dilakukan dilaboratorium Fisiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang dengan menggunakan kultur sel
endometriosis. Sampel berasal dari dinding kista endometriosis dari tindakan laparoskopi. Kultur dibagi 7 kelompok, yaitu
kelompok tanpa perlakuan dan 6 kelompok yang masing-masing ditambahkan genistein dosis 5 μm/L, 10 μm/L, 20 μm/L, 30 μm/L, 40
μm/L, dan 50 μm/L. Setelah di inkubasi 6, 24, dan 48 jam, supernatannya dilakukanpemeriksaan kadar VEGF-A dengan teknik
ELISA. Data hasil pengamatan dianalisis dengan uji ANOVA, uji Tukey, dan uji korelasi. Perbandingan kadar VEGF-A antara
kelompok kontrol tidak berbeda signifikan dengan kelompok genistein 5 µM/L dan 10 µM/L pada jam ke-6, tetapi dalam kelompok
dosis yang sama berbeda signifikan pada jam ke-24 dan 48. Rerata kadar VEGF-A terendah terdapat pada kelompok genistein 50
µM/L inkubasi 48 jam (97.44 ± 3.42 pg/ml), tetapi tidak berbeda signifikan dengan 40 µM/L Peningkatan dosis Genistein pada jam
ke-6, 24, dan 48 akan menurunkan kadar VEGF-A pada kultur sel endometriosis (p<0,05). Simpulan, genistein berbagai dosis dan
waktu inkubasi dapat menurunkan kadar VEGF-A. Semakin tinggi dosis genistein dan semakin lama inkubasi kadar VEGF-A pada
kultur sel endometriosis cenderung menurun. (MOG 2014;22:94-100)

Kata kunci: Kultur sel endometriosis, genistein, VEGF-A

ABSTRACT

Genistein therapy is developed as it is anti-estrogenic, has a function as antioxidant, proliferatory inhibitor, and anti-cancer. The
objective of this study was to analyze the effect of various genistein doses and incubation times of the decreased concentration of
Vascular Endothelial Growth Factor-A on the endometriosiscell culture. This was an experimental study performed in Physiology
Laboratorium,Medical Faculty of Brawijaya University Malang, using endometriosis cell culture. Samples derived from the wall of
endometriosis cysttaken by laparascopy. The cultures were divided into 7 group, one group was without treatment and six other were
with treatment, each of them added by genistein doses of 5 µm/L, 10 µm/L, 20 µm/L, 30 µm/L, 40µm/L, and 50 µm/L. After
incubation period of 6, 24, and 48 hours, the supernatant then analyzed of VEGF-A with ELISA. The datas from observation result
was analysed with ANOVA test, Tukey test and correlation test. The Comparison of VEGF-A concentration between the control
group and genistein group 5 µm/L, 10 µm/L at the 6th hour were not significantly different but they were significantly different at the
24 and 48 th hour later. Most of the lowest VEGF-A concentration were at the genistein group of 50µm/L, 48 hours of incubation
(7.44 ± 3:42 pg /ml)but not differerent significantly with group 40µm/L.The Increasing doses of Genistein on the 6th, 24th, and 48th
hour could reduce theVEGF-Aconcentration ofthe endometrioticcell culture (p < 0.05). In conclusion, various Genistein doses and
incubation timescould reduce the concentration of VEGF-A. The higher dose of genistein and the longer incubation times tend to
decreasedconcentration of VEGF-A. (MOG 2014;22:94-100)

Keywords: Endometriosis cell culture, genistein , VEGF- A

Correspondence: Jehanara,Program Studi Magister Kebidanan Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang, email :
khalyn_chandra@yahoo.com

PENDAHULUAN diterima adalah implantasi endometrium yang keluar

Endometriosis dikarakterisasi sebagai endometrium
yang tumbuh di luar kavum uterus.1 Prevalensi dari
endometriosis mencapai 6-10% perempuan usia subur
dan 50-60% mengalami masalah nyeri pelvik serta
infertilitas.2 Patogenesis endometriosis yang paling luas
secara retrograde selama menstruasi berlangsung.
Implan endometriosis membutuhkan pembentukan
pembuluh darah baru yang disebut angiogenesis untuk
perkembangannya.3 Vascular Endothelial Growth
Factor-A (VEGF-A) atau yang biasa disebut VEGF saja
adalah faktor angiogenesis yang berpengaruh besar

94
 Jehanara et al. : Pengaruh Genistein terhadap Penurunan Kadar VEGF-A pada Kultur Sel Endometriosis
dalam perkembangan penyakit ini.3,4 Penelitian in vivo
dan in vitro menunjukkan peningkatan VEGF-A dalam
sel endometrium dan cairan peritoneal pada
endometriosis.5 Sel endometriosis secara lokal
memproduksi estrogen, memilki peranan penting dalam
regulasi ekspresi VEGF-A.3
Genistein unsur utama isoflavon yang ditemukan pada
kedelai dan produknya bekerja sebagai antiangiogenik.6
Untuk menimbulkan respon biologis, genistein memiliki
struktur serupa estradiol berikatan dengan reseptor
estrogen dan berkompetisi dengan estrogen endogen,
sehingga dapat memberikan efek estrogenik maupun
anti estrogenik.7 Pada studi invitro, genistein dalam
rentang konsentrasi 5 μM/L sampai dengan 50 μM/L
dapat menekan pertumbuhan sel tumor pada leukemia,
limphoma, kanker prostat, kanker payudara, dan kanker
paru.8 Penelitian dengan sistem kultur selendometrium
berguna untuk identifikasi faktor hormonal dan
imunologi yang terlibat dalam proses angiogenik dan
antiangiogeniksebagai terapimasa depan.9 Penelitian ini
bertujuan mengetahui pengaruh genistein terhadap
penurunan Kadar VEGF-A pada kultur sel
endometriosis. Diharapkan Dapat digunakan sebagai
dasar untuk terapi endometriosis menggunakan
genistein melalui efek penurunan kadar VEGF-A.
BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan bulan Oktober 2013 di
Laboratorium Fisiologi Fakultas Kedokteran Universitas
Brawijaya Malang, secara eksperimental antara
kelompok kontrol dan kelompok perlakuan yang
diberikan genistein dosis 5 μmol/L, 10 μmol/L, 20
μmol/L, 30 μmol/L, 40 μmol/L, 50 μmol/L. Masing-
masing kelompok diinkubasi selama 6 jam, 24 jam dan
48 jam. Penentuan lamanya waktu inkubasi berdasarkan
penelitian sebelumnya pada kultur sel kanker ovarium
dan prostat dalam menilai efek genistein terhadap kadar
VEGF.10,11 Hasil penelitian ditabulasi dan disajikan
dalam bentuk tabel dan grafik serta dilakukan analisis
secara statistik menggunakan program SPSS for
Windows 15 dihitung dengan menggunakan uji
ANOVA, uji Tukey, serta uji korelasi dan regresi.
Probabilitas dianggap bermakna secara statistik apabila
didapatkan nilai p<0,05 dengan selang kepercayaan
95%.
Bahan Penelitian
Sel endometriosis berasal dari dinding kista coklat dan
ditetapkan berdasarkan hasil pemeriksaan patologi
anatomi. Jaringan diambil melalui tindakan laparoskopi
sebanyak 0,5-1gr. Tiga macam larutan yang disaring
dengan menggunakan saringan 0,22 mikron untuk
95
sterilisasi yaitu Larutan I merupakan larutan transport
dengan pencucian yang berisi HBSS (Ham’s Balanced
Salt Solution) dan gentamicin 50 μg/ml untuk mencegah
kontaminasi. Larutan II merupakan larutan disosiasi
yaitu larutan yang digunakan untuk memisahkan sel
satu dengan sel yang lain, berisi 0,14% kolagenase IV
(500 μg/ml) (Sigma), 0,1% Dnase (2,5 μg/ml) (Sigma)
dalam HBSS. Ke III, Medium kultur yang terdiri dari
DMEM (Dulbecco Minimum Essensial Medium), FBS
(Fetal Bovine Serum) merk Gibco, penicillin-
streptomycin (Penstrep) 50-100 μg/ml, L-Giutamine 2
mM (Sigma), Steptomycin 50-100 μg/ml (Sigma).12
Prosedur Kultur
Spesimen diproses secara aseptik. Jaringan hasil
tindakan laparoskopi diletakkan dalam botol berisi
larutan I dan harus diolah dalam satu jam. Jaringan
dibersihkan dengan menggunakan PBS dan medium
serum free yang diletakan pada cawan petri steril 9 cm
untuk membersihkan jaringan dari sisa darah pasca
tindakan laparoskopi. Setelah jaringan bersih
selanjutnya jaringan dicincang sehingga didapatkan
potongan jaringan yang berukuran ± 0,5-2,0 mm3
dengan menggunakan scalpel steril. Potongan jaringan
sebesar 0,5-1,0 gram dimasukkan ke dalam tabung
sentrifugasi steril berukuran 15 ml, yang berisi 10 ml
larutan II (enzim disosiasi).
Disosiasi Spesimen tersebut menjadi suspensi sel
dengan cara meletakkan tabung sentrifuse yang telah
berisi potongan jaringan pada shaker bath dengan arah
gerakan secara vertical, inkubasi pada shaker bath
dilakukan selama 3-6 jam, suhu 370C yang bertujuan
untuk menyebarkan potongan jaringan ke seluruh
bagian tabung sampai terlihat suspensi sel yang telah
terdisosiasi.
Preparat sel tersebut disentrifugasikan pada 1700 rpm
dalam waktu 7 menit, kemudian larutan disosiasi
dibuang dan sel diresuspensi (larutkan kembali) dalam
10 ml medium kultur. Dilakukan sentrifuge dan
supernatan dibuang, kemudian ditambahkan 10 ml
medium kultur komplit. Spesimen diinkubasikan secara
vertical dalam tabung kerucut selama 5 menit.
Supernatan yang mengandung suspensi sel dan medium
kultur dipindahkan ke dalam TC Flask, lalu sel
diinkubasi di dalam incubator 95% humidified CO2 5%
suhu 370C. Dilakukan pengamatan dan pencucian sel
pada hari pertama pasca inkubasi sel. Pengamatan sel
dilakukan dengan menggunakan mikroskop inverted
untuk melihat apakah sel sudah tumbuh atau belum dan
apakah terjadi kontaminasi oleh jamur maupun bakteri.
Medium kultur diganti 2 hari sekali hingga sel-sel
tumbuh dan confluent di dalam TC Flask. Setelah
Majalah Obstetri & Ginekologi, Vol. 22 No. 2 Mei - Agustus 2014 : 94-100
confluent, dilakukan pemeriksaan flowcytometri pada
supernatan sel untuk menilai karakterisasi sel
endometriosis melalui ekspresi RE α dan RE β.Sel
dipanen dengan larutan 0,05% Tripsin. Medium didalam
TC flask dibuang lalu dicuci dengan medium tanpa
serum, kemudian ditambahkan 2-3 ml larutan 0,05%
Tripsin, diinkubasikan selama 7 menit dalam inkubator
95% CO2 5% suhu 370 C lalu observasi di bawah
mikroskop sehingga sel-sel lepas semua dari TC flask.
Medium komplit (dengan serum) ditambahkan untuk
menginaktivasi kerja tripsin. Suspensi sel dimasukkan
ke dalam tabung sentrifugasi, ditambahkan medium
hingga volume 10 cc, lalu disentrifugasi selama 7 menit
pada 1600 rpm sebanyak 2 kali. Setelah itu supernatan
dibuang, ditambahkan medium ke dalam endapan sel
hingga volume 12 ml.
Jumlah sel dihitung dengan kamar hitung. Kemudian sel
dimasukkan ke dalam setiap sumur (well) percobaan
dengan konsentrasi sel 2,6x104 sel/ml. Hasil resuspensi
ini dibagi kedalam 6 buah Tc Plate yang berisi 24 well.
Kemudian keenam TC plate tadi diinkubasi lagi sampai
didapatkan pertumbuhan yang baik. Setelah sel
confluent 70-80% pada Tc Plate ke 1 sampai dengan 6
diberikan perlakuan berupa dosis genistein. Tc Plat 1
pada well 1-5 merupakan kontrol yang tidak diberikan
perlakukan apapun, hanya diberikan medium kultur
saja, well 6-10 dimasukkan genistein dosis 5 μmol/L,
well 11-15 diberikan genistein dosis 10 μmol/L begitu
pula selanjutnya pada genistein dosis 20 μmol/L, 30
μmol/L, 40 μmol/L dan 50 μmol/L. TC Plate 1 dan 2
merupakan Tc Plate dengan inkubasi 6 jam, Tc plate 3
dan 4 adalah inkubasi genistein 24 jam, sedangkan Tc
Plate 5 dan 6 adalah inkubasi genistein 48 jam. Setelah
diinkubasi selama 6 jam, 24, jam, dan 48 jam,
supernatan yang ada diambil dan dipindahkan ke dalam
tabung/tube ependoff 1,5 ml dan disimpan dalam almari
es pada suhu -20oC hingga akan dilakukan pemeriksaan
kadar VEGF-A dengan menggunakan pemeriksaan
ELISA (Merek Komabiotech no. Katalog K0331132).
Hal ini dapat dilihat pada Gambar 1.
Hari ke-1
Gambar 1. Pertumbuhan kultur sel endometriosis
HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji penurunan kadar VEGF-A berdasarkan
dosis genistein
Pada rerata jumlah kadar VEGF-A pada kultur sel
endometriosis yang dipapar genistein berbagai dosis
didapati adanya penurunan kadar VEGF-A pada
kelompok perlakukan dengan berbagai dosis. Hasil uji
Anova menunjukkan bahwa ada perbedaan yang
bermakna (P=0,000<α) terhadap penurunan rerata kadar
VEGF-A antara kelompok kontrol dengan kelompok
perlakuan berbagai dosis. Tampak rerata teringgi pada
kelompok kontrol sebesar 195.77 ± 4.94epg/ml lalu
berangsur menurun dengan semakin tingginya dosis.
Rerata terendah didapatkan pada dosis 50 µM/L sebesar
96.62 ± 4.24apg/ml. Hal ini dapat dilihat pada Tabel 1.
Hasil uji penurunan kadar VEGF-A berdasarkan
waktu inkubasi genistein
Hasil uji Anova menunjukkan ada perbedaan bermakna
(p=0,000) terhadap penurunan rerata kadar VEGF-A
antara kelompok waktu inkubasi. Tampak rerata kadar
VEGF-A kelompok waktu inkubasi 6 jam lebih besar
dan menurun seiring dengan penambahan waktu
inkubasi. Hal ini dapat dilihat pada Tabel 2.
Hasil uji penurunan kadar VEGF-A terhadap
dosis genistein dan waktu inkubasi 6 jam, 24
jam, dan 48 jam
Berdasarkan hasil uji Anova, data kadar VEGF-A kultur
sel endometriosis dengan pemaparan genistein berbagai
dosis dan waktu inkubasi 6 jam, 24 jam, dan 48 jam,
diperoleh ada perbedaan bermakna rerata kadar VEGF-
A pada ketujuh kelompok sampel pengamatan, hal ini
ditunjukkan dengan nilai p-value=0,000<α. Hal ini
dapat dilihat pada Tabel 3.
Hari ke -3 Hari ke-7
96
 Jehanara et al. : Pengaruh Genistein terhadap Penurunan Kadar VEGF-A pada Kultur Sel Endometriosis

Tabel 1. Kadar VEGF-A (pg/ml) pada kultur sel endometriosis berdasarkan dosis genistein

Kelompok Waktu Inkubasi (Mean ± SD)

Dosis 6 Jam 24 Jam 48 Jam Rerata total p-value
c d d e
Kontrol 195.97 ± 4.35 193.94 ± 6.75 197.41 ± 4.11 195.77 ± 4.94
5 µM/L 189.86 ± 3.67c 155.39 ± 4.00c 155.75 ± 5.34c 167.00 ± 17.35d
10 µM/L 193.27 ± 6.07c 137.62 ± 3.49b 135.16 ± 3.33b 155.35 ± 28.32c
20 µM/L 140.54 ± 3.87b 136.21 ± 3.64b 136.64 ± 5.81b 137.80 ± 4.59b 0.000<
b b b b
30 µM/L 137.21 ± 4.91 134.53 ± 2.87 137.30 ± 3.80 136.35 ± 3.82
40 µM/L 101.15 ± 5.71a 98.66 ± 4.11a 100.08 ± 4.24a 99.96 ± 4.42a
50 µM/L 97.44 ± 3.42a 98.18 ± 2.73a 94.23 ± 5.93a 96.62 ± 4.24a
Keterangan: pada rerata ±sd jika memuat huruf yang berbeda berarti ada perbedaan yang bermakna (p
value<0.05) dan jika memuat huruf yang sama berarti tidak ada perbedaan yang bermakna (p-value>0.05)

Tabel 2. Kadar VEGF-A (pg/ml) pada kultur sel endometriosis BerdasarkanWaktu Inkubasi

Waktu Dosis Genistein (Mean ± SD)

Inkubasi Kontrol 5 10 20 30 40 50 Rerata P
µM/L µM/L µM/L µM/L µM/L µM/L total Value
6 jam 195.97c 189.86c 193.27c 140.54b 137.21b 101.15a 97.44a 150.78b
± 4.35 ± 3.67 ± 6.07 ± 3.87 ± 4.91 ± 5.71 ± 3.42 ±40.53
24 jam 193.94d 155.39c 137.62b 136.21b 134.53b 98.66a 98.18a 136.36a 0.000<
± 6.75 ± 4.00 ± 3.49 ± 3.64 ± 2.87 ± 4.11 ± 2.73 ±31.39
48 jam 197.41d 155.75c 135.16b 136.64b 137.30b 100.08a 94.23a 136.65a
± 4.11 ± 5.34 ± 3.33 ± 5.81 ± 3.80 ± 4.24 ± 5.93
Keterangan: pada rerata ±sd jika memuat huruf yang berbeda berarti ada perbedaan yang bermakna (p-value<0.05)
dan jika memuat huruf yang sama berarti tidak ada perbedaan yang bermakna (p-value>0.05)

Tabel 3. Kadar VEGF-A (pg/ml) pada kultur sel endometriosis berdasarkan dosis genistein dan waktu Inkubasi

6 Jam 24 Jam 48 Jam

Kelompok
P P P
Perlakuan Rerata ± SD Rerata ± SD Rerata ± SD
Value Value Value

Kontrol 195.97 ± 4.35c 193.94 ± 6.75d 197.41 ± 4.11c

5 µM/L 189.87 ± 3.67c 155.40 ± 4.01c 155.75 ± 5.34c
10 µM/L 193.27 ± 6.06c 137.62 ± 3.49b 135.16 ± 3.34b
20 µM/L 140.54 ± 3.86b 136.21 ± 3.64b 136.64 ± 5.82b 0.000<
0.000< 0.000<
30 µM/L 137.21 ± 4.91b 134.53 ± 2.87b 137.30 ± 3.80b
40 µM/L 101.15 ± 5.71a 98.66 ± 4.11a 100.08 ± 4.24a
50 µM/L 97.44 ± 3.42a 98.18 ± 2.73a 94.23 ± 5.93a
Keterangan: pada rerata ±sd jika memuat huruf yang berbeda berarti ada perbedaan yang bermakna (p
value<0.05) dan jika memuat huruf yang sama berarti tidak ada perbedaan yang bermakna (p-
value>0.05)

Tren penurunan rata-rata kadar VEGF-A dengan waktu
inkubasi 6 jam, 24 jam, dan 48 jam, dimulai dari
kelompok kontrol berturut-turut terjadi penurunan rata-
rata kadar VEGF-A pada kelompok perlakuan
97
pemberian genistein seiring dengan dosis yang
meningkat pada setiap waktu inkubasi (6 jam, 24 jam,
dan 48 jam). Ditunjukkan pula rata-rata paling rendah
kadar VEGF-A pada kelompok perlakuan genistein 50
Majalah Obstetri & Ginekologi, Vol. 22 No. 2 Mei - Agustus 2014 : 94-100
µmol/L waktu inkubasi 48 jam ((94.23 ± 5.93 pg/ml).
Hal ini dapat dilihat pada Gambar 2.
Hubungan berbagai dosis genistein dengan
inkubasi waktu terhadap kadar VEGF-A
Berdasarkan hasil analisis regresi pengaruh dosis
genistein dan waktu inkubasi terhadap kadar VEGF-A
menunjukkan pada waktu inkubasi 6 jam didapatkan
koefisien regresi sebesar -2,219 dengan signifikansi
sebesar 0,000. Koefisien determinasi (R-square) sebesar
0,929 menunjukkan bahwa dalam penelitian ini kadar
VEGF-A waktu inkubasi 6 jam pada kultur jaringan
endometriosis dipengaruhi oleh dosis genistein sebesar
92,9% dan kadar VEGF-A dipengaruhi oleh variabel
lain selain dosis genistein yang tidak diteliti dalam
penelitian ini sebesar 20.7%.Berdasarkan hasil analisis,
pada waktu inkubasi 24 jam didapatkan koefisien
regresi sebesar -1,609 dengan signifikansi sebesar
Gambar 2. Tren penurunan rata-rata kadar VEGF-A pada waktu inkubasi 6 jam, 24, jam, dan 48 jam
Tabel 4. Uji regresi pengaruh dosis genistein terhadap kadar VEGF-A (pg/ml)
Persamaan Regresi
Waktu Inkubasi
6 Jam y = – 2,219 X + 199,904
24 Jam y = – 1,609 X + 171,991
48 Jam y = – 1,665 X+ 173,515
Keterangan:
Y= kadar VEGF-A pada kultur sel endometriosis
X= dosis genistein
98
0,000. Koefisien determinasi (R-square) sebesar 0,815
menunjukkan bahwa dalam penelitian ini kadar VEGF-
A waktu inkubasi 24 jam pada kultur jaringan
endometriosis dipengaruhi oleh dosis genistein sebesar
81,5%. dan kadar VEGF-A dipengaruhi oleh variabel
lain selain dosis genistein yang tidak diteliti dalam
penelitian ini sebesar 18,5%.Berdasarkan hasil analisis,
pada waktu inkubasi 48 jam didapatkan koefisien
regresi sebesar -1,664 dengan signifikansi sebesar
0,000. Koefisien determinasi (R-square) sebesar 0,793
menunjukkan bahwa dalam penelitian ini kadar VEGF-
A waktu inkubasi 48 jam pada kultur jaringan
endometriosis dipengaruhi oleh dosis genistein sebesar
79.3% dan kadar VEGF-A dipengaruhi oleh variabel
lain selain dosis genistein yang tidak diteliti dalam
penelitian ini sebesar 20.7%. Hal ini dapat dilihat pada
Tabel 4.
Prosentase pengaruh P
92,9% 0,000
81,5% 0.000
79,3% 0.000
 Jehanara et al. : Pengaruh Genistein terhadap Penurunan Kadar VEGF-A pada Kultur Sel Endometriosis
Pada penelitian ini didapatkan satu sampel jaringan
endometriosis dengan hasil pemeriksaan PA positif
endometriosis. Hasil pemeriksaan flowcytometri
terdapat 87,16% ekspresi reseptor estrogen, dimana RE
β (55,18 %) lebih dominan dibandingkan dengan RE α
(30,40 %). Hal ini menunjukkan bahwa tingkat kadar
estrogen sel endometriosis ini tinggi. Pada kultur sel
stroma dan kelenjar endometrium yang tinggi tingkat
estrogennya, genistein bersifat antagonis dan
menurunkan efek estrogenik.8,13 Genistein cenderung
memiliki afinitas yang tinggi pada RE-β, namun
walaupun genistein memiliki afinitas yang hampir sama
dengan 17-β estradiol, induksi transformasi struktural
dari RE-β tidak cukup untuk memfasilitasi pengikatan
co activator dalam proses transkripsi gen.14 Mekanisme
ini menghambat estrogen untuk mengaktifkan gen
dalam menstimulasi produksi protein spesifik untuk
pertumbuhan sel termasuk VEGF-A.
Dosis genistein mempunyai peran penting pada
timbulnya respon. Hasil analisis Anova berdasarkan
dosis genisteindengan inkubasi waktu 6 jam, 24 jam,
dan 48 jam, menunjukkan adanya penurunan kadar
VEGF-A yang bermakna dengan penambahan genistein
pada kultur sel Endometriosis (p<0,005). Hal ini juga
didukung hasil uji regresi yang diperoleh bahwa
terdapat pengaruh yang sangat bermakna antara dosis (5
µM/L, 10 µM/L, 20 µM/L, 30 µM/L, 40 µM/L dan 50
µM/L) dan waktu inkubasi (6 jam, 24 jam dan 48 jam)
(p<0,000), semakin tinggi dosis genistein dan semakin
cepat waktu paparannya maka kadar VEGF-A semakin
menurun. Hasil penelitian tersebut mendukung
penelitian terdahulu bahwa peningkatan pemberian
dosis genistein 5 µM – 160 µM dalam kultur sel kanker
ovarium, memiliki potensi semakin menurunnya
konsentrasi VEGF.10 Efekantiangiogenik genistein
dimediasi oleh penghambatan faktor hypoxia-inducible-
1 (HIF-1), suatu regulator pentingendotel vaskular
faktor pertumbuhan(VEGF) kadar gen, khususnya di
bawah kondisi oksigen rendah.15 Studidalam in vitro sel
kanker prostat menghasilkan, genistein pada konsentrasi
10 μM sampai dengan 50 μMsignifikan menghambat
sekresi VEGF yang dimediasi melalui jalur HIF-1α.16
Genistein yang merupakan SERM berinteraksi selain
pada tingkat paparan juga tergantung pada waktu. Hasil
uji tukey tabel 3di atas, genistein dengan dosis 5 µmol/L
dan 10 µmol/L dalam inkubasi waktu 6 jam tidak
berbeda signifikan dengan kelompok tanpa perlakuan
namun inkubasi waktu 24 jam dan 48 jam menunjukkan
berbeda secara signifikan. Sehingga, untuk menurunkan
kadar VEGF-A dalam kontek kultur sel endometriosis
ini pada pemberian genistein dosis 5 µmol/L dan 10
µmol/L membutuhkan waktu inkubasi yang lama.Hasil
tersebut berbeda padapenelitian in vitro sel kanker
prostrat, genistein dengan peningkatan konsentrasi yang
99
dimulai pada 5 μM/L sampai dengan 50 μM/L
menurunkan kadar VEGF dimulai pada waktu inkubasi
6 jam dengan penurunan maksimal pada inkubasi waktu
36 jam dan 72 jam dan penurunan rerata VEGF paling
rendah pada konsentrasi 50 μM/L.17 Berdasarkan hasil
analisis regresi linier menunjukkan bahwa pada jam ke-
6, 24, dan 48 terdapat perbedaan yang signifikan
(p<0,005) dari dosis genistein terhadap kadar VEGF-A
pada kultur sel endometriosis dan dapat dikatakan
penurunannya paling rendah pada jam ke-6 (koefisien
regresi -2,219 dan r square 92,9% paling besar diantara
waktu pengamatan lain). Ini menunjukkan bahwa
pengaruh genistein pada kadar VEGF-A tidak hanya
tergantung pada reaksi genomik melainkan juga melalui
mekanisme non genomik.
Mekanisme kerja genistein non genomik membutuhkan
waktu kurang dari 20 menit dan mekanisme genomik
biasanya membutuhkan waktu yang lebih lama (30
menit sampai beberapa hari) (Dongmin, 2005).
Mekanisme melalui jalur non genomik,genistein
merupakan inhibitor tirosin kinase yang menghambat
fosforilasi tirosin pada p38 MAPK, dan selanjutnya
mengarah pada inaktivasi dari jalur MAPK.17,18 Inhibisi
jalur MAPK dapat menghambat AP-1 yang dapat
memediasi ekspresi gen.18 Aktivasi jalur sinyal P38
MAPK diperlukan untuk memediasi sekresi VEGF pada
sel epitel dan stroma endometrium ektopik.19Sehingga
penghambatan jalur MAPK melalui inhibisi tirosin
kinase oleh genistein dapat menurunkan produksi
VEGF-A.
Mekanisme jalur genomik di mediasi oleh efek
genistein yang dapat mengikat dan merangsang sintesa
sex hormone binding globulin (SHBG).20 Perubahan
dalam konsentrasi SHBG dapat menghasilkan
perubahan konsentrasi hormon steroid yang beredar,
akibatnya makin banyak estrogen yang terikat dengan
globulin dan makin sedikit estrogen yang bebas.
Penurunan kadar estrogen ini mengakibatkan penurunan
sekresi VEGF-A karena Estrogen Response
Elemen(ERE) merupakan salah satu faktor transkripsi
dari pembentukan MRNA VEGF.Sifat genistein sebagai
anti estrogen bekerja dengan menduduki reseptor
sehingga menutup akses ko aktifator dan berinteraksi
dengan ko represor setelah komplek estrogen-reseptor
mengikat pada ERE, sehingga aktifitas transkripsi gen
untuk memproduksi suatu protein pertumbuhan tidak
aktif.21 Mekanisme penekanan aktifitas transkripsi ini
dapat mengakibatkan penurunan produksi VEGF-A.
SIMPULAN
Pemberian genistein berbagai dosis dan waktu
berpengaruh terhadap penurunan kadar VEGF-A pada
Majalah Obstetri & Ginekologi, Vol. 22 No. 2 Mei - Agustus 2014 : 94-100
kultur sel endometriosis dengan efek pencapaian nilai
rerata terendahpada genistein dosis 50 μM/L dalam
waktu inkubasi 48 jam. Diperlukan penelitian lebih
lanjut yang menambahkan zat-zat antiangiogenesis atau
kombinasinya dengan hormonal dan melihat
pengaruhnya pada kadar VEGF-A kultur sel
endometriosis.
DAFTAR PUSTAKA
1. Hsu HL, Khachikyan IK, Stratton P. Invasive and
Noninvasive Methods for the Diagnosis of
Endometriosis. Clinical Obstetrics and Gynecology.
2010;53(2):413-9.
2. Giudice LC. Endometriosis. Nengl J Med.
2010;362(25):2389-98.
3. Taylor RN, Yu J, Torres PB, Schickedanz AC, Park
JK., Mueller MD, Sidell N. Mechanistic and
Therapeutic Implications of Angiogenesis in
Endometriosis. Reprod Sci. 2009;16(2):140-6.
4. Artini PG, Ruggiero M, Papini F, Simi G, Cela V,
Genazzani AR. Endometriosis and angiogenic
factors. Endometriosis - basic concepts and current
research trends. Prof. Koel Chaudhury edition.
2012.
5. Cosın R, Estelles GJ, Ramon LA, Estelles A.
Influence of Peritoneal Fluid on the Expression of
Angiogenic and Proteolytic Factors in Cultures of
Endometrial Cells From Women With
Endometriosis. Human Reproduction.
2010;25(2):398-405.
6. Polkowski K and Mazurek AP. Biological
Properties of Genistein. A Review of In Vitro and
In Vivo Data. Drug Researdh. 2000;57(2):135-55.
7. Chang EC, Charn TH, Park SH, Helferich WG.
Estrogen Receptors α and β as Determinants of
Gene Expression: Influence of Ligand, Dose, and
Chromatin Binding. Molecular Endocrinology.
2008;22(5):1032-43.
8. Sha GH and Lin SQ. Genistein Inhibits
Proliferation of Human Endometrial Endothelial
Cell in Vitro. Chin Med sci j. 2008;23(1):49 -53.
9. Laschke MW, Menger M. In Vitro and In Vivo
Approaches to Study Angiogenesis in the
Pathophysiology and Therapy of Endometriosis.
Institute for Clinical and Experimental Surgery.
Human Reproduction Update. 2007;13(4):331-42.
10. Haito L, Jiang BH, King SM, Chen YC. Inhibition
of Cell Growth and VEGF Expression in Ovarian
Cancer Cells by Flavonoids. Nutrition and Cancer.
2008;60(6):800-9.
100
11. Yu X, Mi M, Zhu J. Genistein Inhibits the
Expression of Vascular Endothelial Growth Factor
in MDA-MB-453 Breast Cancer Cells. Chinese
journal of lymphology and oncology. 2008;7:1-2.
12. As’adi AS, Hestiantoro A, Arleni. Efek Zat
Aromatase Inhibitor dan GnRH Agonis Terhadap
Kadar Vascular Endhotelial Growth Factor-A Pada
Kultur Sel Endometriosis. Maj Obstet Ginecol
Indones. 2008;32(1):11-21.
13. Kayisli UA, Aksu CA, Berkkanoglu M, Arci A.
Estrogenicity of isoflavon on human endometrial
stromal and glandular cells. The journal of clinical
endocrinology and metabolism. 2002;87(12):5539-
44.
14. Morito K., Hirose T, Kinjo J, Hirakawa T, Okawa
M, Nohara T, et al. Interaction of Phytoestrogens
with Estrogen Receptors α and β. Biol. Pharm. Bull.
2001;24(4):351-6.
15. Buchler P, Reber HA, Buchler MW, Fries H, Lavey
RS. Antiangiogc activity of genistein in pankreatic
Carcinoma Cells is Mediated by the Inhibition of
Hipoxia-Inducible Factor-1 and the Down-
Regulation of VEGF Gene Expression. Cancer.
2004;100(1):201-10.
16. Guo Y, Wang S, Hoot DR, Clinton SK.
Suppression of VEGF-Mediated Autocrine and
Paracrine Interactions Between Prostate Cancer
Cells and Vascular Endothelial Cells by Soy
Isoflavones. Abstracts J Nutr Biochem.
2007;18:408-17.
17. Li Y, Sarkar FH. Down-regulation of invasion and
angiogenesis-related genes identified by cDNA
microarray analysis of PC3 prostate cancer cells
treated with genistein, Cancer Letters.
2002;186(2):157-164.
18. Banerjee S, Li Y, Wang Z, Sarkar FH. Multi-
Targeted Therapy of Cancer by Genistein. Cancer
Lett. 2008;269(2):226-42.
19. Veillat, Ce´ dric C, Christine NM, Yousef AA, Paul
HN, Akoum A. Macrophage Migration Inhibitory
Factor Elicits an Angiogenic Phenotype in Human
Ectopic Endometrial Cells and Triggers the
Production of Major Angiogenic Factors via CD44,
CD74, and MAPK Signaling Pathways. J Clin
Endocrinol Metab. 2007.;95:403-12.
20. Pomfrey VJ, Genistein: A Multimechanistic Anti-
cancer Agent from Soya. www.vivienpomfrey.co.
id/Genistein.pdf. Diakses pada 2 Desember 2013.
21. Gruber CJ, Gruber DM, Isabel ML,Wieser F.
Anatomy of the Estrogen Response Element.
TRENDS in Endocrinology and Metabolism.
2004;15(2).