Maulidya Hafsari Fauzi

Kimia FMIPA UNMUL

UJI FITOKIMIA, TOKSISITAS (BRINE SHRIMP LETHALITY TEST) SERTA

ANTIOKSIDAN KULIT BATANG TERAP (Artocarpus elasticus reinw) DENGAN METODE
DPPH (2,2-diphenyl-1-picrylhidrazyl)

THE PHYTOCHEMICAL TEST, BRINE SHRIMP LETHALITY TEST, AND

ANTIOXIDANT ACTIVITY FROM STEM BARK OF TERAP (Artocarpus elasticus reinw)
WITH DPPH (2,2-Diphenyl-1-Picrylhidrazyl) METHOD

Maulidya Hafsari Fauzi1*), Erwin1, Irawan2

1
Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mulawarman, Samarinda
2
Fakultas Kehutanan, Universitas Mulawarman, Samarinda
*)
Corresponding Author: mldyahff@gmail.com

ABSTRACT

Phytochemical test, the mortality of larvae shrimp (Brine Shrimp Lethality Test) and antioxidant
activity test of secondary metabolites stem bark of Terap (Artocarpus elasticus reinw) by several of method
such as extraction, phytochemical test, the mortality of larvae shrimp (Brine Shrimp Lethality Test) and
antioxidant activity test. Based on the result of Brine Shrimp Lethality Test was analyzed using SAS probit
analysis to know the value of Lethal Concentration 50 % (LC50), Brine Shrimp Lethality test result that the
fraction of ethyl acetate has the highest toxicity with LC50 value obtained 153,3788 ppm. Based on the results
of antioxidant activity test that ethanol extract has the highest antioxidant activity with IC 50 value obtained at
70.59 ppm. Based on the Phytochemical test, the mortality of larvae shrimp (Brine Shrimp Lethality Test)
and antioxidant activity test , it was obtained secondary metabolite compound of phenolic active in stem bark
of Terap.

Keywords: Terap (Artocarpus elasticus reinw), Brine Shrimp Lethality Test, Antioxidant Activity test.

PENDAHULUAN menggunakan metode BSLT memiliki aktivitas

Indonesia adalah negara yang sangat kaya
dengan beraneka ragam tumbuhan-tumbuhan atau
tanaman. Sebagai negara yang mempunyai hutan
hujan tropis terbesar kedua di dunia, Indonesia
kaya akan sumber daya alam hayati yang
memiliki manfaat sebagai obat-obatan tradisional.
Salah satu famili tumbuhan yang dikenal
mempunyai banyak manfaat adalah Moraceae
(Heyne, 1987). Genus yang termasuk famili
Moraceae salah satunya yaitu Artocarpus.
Tumbuhan dari genus Artocarpus diketahui
mengandung senyawa fenolik termasuk flavonoid,
stilbenoids dan arylbenzofurans. Flavonoid
diketahui memiliki aktivitas antioksidan yang
berkaitan dengan aktivitas antidiabetes (Jagtap,
2010). Salah satu spesies dari genus Artocarpus
adalah Artocarpus elasticus. Berdasarkan hasil
penelitian Wang et al (2015), beberapa senyawa
dari A. elasticus memiliki aktivitas biologi antara
lain sifat sitotoksik, antiinflamasi, antitumor,
antikanker, antibakteri, antivirus, antijamur dan
antidiabetes. Berdasarkan kajian literatur dari
genus yang sama Artocarpus, daun dari Terap (A.
odoratissimus B.) yang diuji sitotoksiknya
LC50 yang paling tinggi sebesar 110,5176 ppm
pada ekstrak total dan pada uji aktivitas
antioksidan dengan metode peredaman radikal
DPPH memiliki aktivitas antioksidan yang paling
kuat dengan nilai lC50 sebesar 45,30 ppm pada
fraksi etil asetat dari daun Terap (A. odoratissimus
B.) (Septiani, 2013).
Antioksidan dalam arti biologis adalah
senyawa yang mampu menangkal atau meredam
dampak negatif oksidan dalam tubuh. Antioksidan
merupakan senyawa pemberi elektron (electron
donor) atau reduktan. Senyawa ini memiliki berat
molekul kecil, tetapii mampu menginaktivasi
berkembangnya reaksi oksidasi dengan cara
mencegah terbentuknya radikal (Winarsi, 2007).
Antioksidan mampu bertindak sebagai
penyumbang radikal hidrogen atau bertindak
sebagai akseptor radikal bebas sehingga dapa
menunda tahap inisiasi pembentukan radikal
bebas (Windono et al, 2001).
Berdasarkan latar belakang di atas maka
perlu dilakukan penelitian lebih lanjut pada salah
satu spesies Artocarpus yaitu tanaman Terap pada
bagian kulit batangnya. Penelitian ini dilakukan

74
Prosiding Seminar Nasional Kimia 2017
Kimia FMIPA UNMUL
untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit
sekunder aktif dan fraksi apa yang paling aktif
terhadap larva udang (Artemia salina L.) melalui
uji BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) serta
mengetahui besarnya aktivitas antioksidan.
METODOLOGI PENELITIAN
Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian
ini adalah pisau, gunting, neraca analitik, corong
pisah, corong kaca, botol vial, wada gelas, beaker
glass, botol kaca gelap 2500 mL, rotary
evaporator, hot plate, batang pengaduk, spatula,
pipet mikro, pipet tetes, plat mikro, lampu TL,
pompa aquarium, tabung reaksi, rak tabung reaksi,
labu ukur, erlenmeyer, program probit Statistical
Analysis (SAS) dan Spektrofotometer Visible.
Bahan
Bahan-bahan yang digunakan adalah kulit
batang Terap (A. elasticus), etanol 96%,
Aquadest, n-Heksana, etil asetat, DPPH, vitamin
C, DMSO, pereaksi Dragendorff, larva udang, air
larutan asam asetat glasial, asam nitrat, serbuk
Mg, HCL (p), FeCl3 1 %, kertas saring, aluminium
foil, tissue, plastik wrap, kertas label dan kapas.
Prosedur Penelitian
Ekstraksi Kulit Batang Terap
Sampel kulit batang terap sebanyak 1228 gr
diekstraksi secara maserasi dengan menggunakan
pelarut etanol. Filtrat yang diperoleh dari hasil
maserasi kemudian difraksinasi secara berturut-
turut dengan menggunakan pelarut n-Heksana dan
etil asetat.
Analisis Fitokimia
Uji Alkaloid (Uji Meyer’s dan Dragendroff)
Ekstrak etanol kulit batang Terap (A.
elasticus) dan fraksi n-heksana ditambahkan 2
tetes pereaksi Dragendorff (campuran
Bi(NO3)2.5H2O dalam asam nitrat dan larutan KI).
Apabila Setelah dicampurkan terbentuk endapan
jingga sampai merah coklat pada sampel, maka
sampel tersebut mengandung alkaloid (Robinson,
1995).
Uji Saponin/Uji Forth
Ekstrak etanol kulit batang Terap (A.
elasticus) dilarutkan dalam aquades kemudian
dikocok kuat selama 15 menit dalam tabung
reaksi. Adanya saponin ditandai dengan
terbentuknya busa yang tahan lama pada
permukaan cairan (Harborne, 1987). Apabila Busa
tetap stabil setelah penambahan beberapa tetes
HCl pekat menunjukkan adanya saponin.
ISBN 978-602-50942-0-0
Uji Steroid dan Triterpenoid/ Uji Lieberman-
Burchard
Ekstrak etanol kulit batang Terap (A.
elasticus) dilarutkan dalam pelarut yang kemudian
ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard
(CH3COOH anhidrat : H2SO4 pekat. Apabila
setelah dicampurkan sampel berwarna biru atau
hijau maka positif adanya senyawa steroid dan
apabila sampel berwarna merah atau ungu maka
positif triterpenoid (Harborne, 1987).
Uji Flavonoid
Ekstrak etanol kulit batang Terap (A.
elasticus) dimasukkan ke dalam 2 tabung reaksi
yang berbeda. Kemudian ditambah dengan serbuk
Mg dan HCl ke dalam masing-masing tabung
reaksi. Apabila sampel berwarna warna merah,
kuning atau jingga maka menunjukkan adanya
flavonoid (Harborne, 1987).
Uji Fenol
Ekstrak etanol kulit batang Terap (A.
elasticus) dimasukkan ke dalam 2 tabung reaksi
yang berbeda. Selanjutnya ditambahkan larutan
besi (III) klorida ke dalam masing-masing tabung
reaksi dan didihkan. Apabila sampel memberikan
perubahan warna dari hijau sampai hitam, maka
menunjukkan adanya fenol (Harborne, 1987).
Uji Mortalitas Larva Udang (Brine Shrimp
Lethality Test)
Menurut McLaughlin (1998) larutan induk
1000 ppm dibuat dengan melarutkan 1 mg ekstrak
pekat kulit batang terap dalam 100 mL air laut,
namun jika sampel sukar larut dalam air laut
ditambahkan DMSO, larutan diaduk sampai
homogen dan diperoleh konsentrasi sampel 1000
ppm.
Menurut Erma (2004), pada persiapan larva
udang air laut dimasukkan dalam media penetasan
yang terbagi menjadi 2 ruangan. Kedua ruangan
dihubungkan oleh sebuah sekat. Salah satu bagian
dari ruangan tersebut ditutup. Kemudian air laut
yang di dalamnya terdapat Artemia salina
dimasukkan ke bagian ruangan yang tertutup dan
setelah 24-48 jam, telur Artemia salina akan
menetas menjadi udang laut kecil yang disebut
nauplii dan siap digunakan.
Dibuat larutan uji dengan lima variasi
konsentrasi.
Analisis Hasil
Nilai LC50 ditentukan dengan Analisis
Probit (Probability Unit) menggunakan Program
SAS (Statistical Analysis System).
75
Maulidya Hafsari Fauzi
Kimia FMIPA UNMUL

Uji Aktivitas Antioksidan

Penyiapan Larutan DPPH
Kristal DPPH ditimbang dan dilarutkan
dengan etanol di dalam labu ukur gelap dan
disimpan pada tempat tertutup rapat dan
terlindung dari cahaya.
Pembuatan Konsentrasi Ekstrak Sampel
Ekstrak kasar dan masing-masing fraksi
ditimbang kemudian dilarutkan dengan etanol
hingga diperoleh larutan induk. Kemudian larutan
induk ekstrak kasar dan masing-masing fraksi
diencerkan menjadi beberapa konsentrasi masing-
masing konsentrasi dibuat 3 pengulangan.
Pembuatan Konsentrasi Vitamin C HASIL DAN PEMBAHASAN
(Pembanding)
Vitamin C ditimbang kemudian dilarutkan
dengan etanol hingga diperoleh larutan induk.
Kemudian larutan induk vitamin C diencerkan
menjadi beberapa konsentrasi masing-masing
konsentrasi dibuat 3 pengulangan.
Teknik analisis Data
Aktivitas antioksidan ditentukan dengan
menghitung persen penangkapan radikal bebas
DPPH oleh ekstrak dengan rumus.
% penangkapan radikal =
A adalah serapan control negative (DPPH +
etanol) dan B adalah serapan ekstrak uji (DPPH +
etanol + ekstrak uji).
Korelasi antara persen penangkapan radikal
dan konsentrasi ekstrak diplotkan dan nilai lC50
dihitung melalui persamaan regresi. lC50 adalah
konsentrasi efektif ekstrak yang mampu
menangkap (menurunkan) konsentrasi radikal
bebas DPPH 50% (Rita, 2011).
Uji Fitokimia
Berdasarkan hasil uji fitokimia ekstrak
kasar, fraksi etanol, fraksi n-Heksana, fraksi etil
asetat dan fraksi etanol-air dari kulit batang terap
(A.elasticus) yang diperoleh adalah sebagai
berikut:

Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia dari Ekstrak Kasar dan Fraksi Kulit Batang Terap (A.elasticus)
Jenis Ekstrak
Jenis
Ekstrak Fraksi Fraksi Fraksi
Senyawa
Kasar n-Heksana Etil Asetat Etanol-Air
Alkaloid + - - +
Fenolik + - + +
Steroid - + - -
Triterpenoid + - - -
Saponin + - - -
Flavonoid + - - -

Berdasarkan hasil uji fitokimia, pada Tabel 2. Hasil Uji Mortalitas Larva Udang
ekstrak kasar diketahui positif mengandung (BSLT) dari Ekstrak Kasar dan Fraksi
alkaloid, fenolik, triterpenoid, saponin dan Kulit Batang Terap
flavonoid. Pada fraksi n-Heksana diketahui positif Jenis Ekstrak LC50 (ppm)
mengandung steroid, sedangkan pada fraksi etil Ekstrak Kasar 897,3473
asetat diketahui hanya positif mengandung fenolik Fraksi n-Heksana 261,3169
saja dan pada fraksi etanol-air mengandung Fraksi Etil Asetat 153,3788
fenolik dan alkaloid. Fraksi Etanol-Air 6251,54

Uji Mortalitas Larva Udang (BSLT) Tabel 2. menunjukkan aktivitas toksisitas

Berdasarkan hasil uji toksisitas ekstrak
kasar, fraksi n-Heksana, fraksi etil asetat dan
fraksi etanol-air adalah sebagai berikut :
ekstrak etanol dan fraksi kulit batang terap (A.
elasticus). Sampel uji yang memiliki kekuatan
toksisitas paling tinggi berturut-turut adalah fraksi
etil asetat 153,3788 ppm, kemudian diikuti dengan
fraksi n-Heksana 261,3169 ppm, ekstrak kasar
897,3473 ppm dan fraksi etanol-air 6251,54 ppm.
Kekuatan toksisitas paling rendah dimiliki oleh
fraksi etanol-air 6251,54 ppm. Hasil uji aktivitas
toksisitas menunjukkan bawa ekstrak kasar, fraksi

76
Prosiding Seminar Nasional Kimia 2017
Kimia FMIPA UNMUL
n-Heksana, fraksi etil asetat kulit batang terap
memiliki potensi sebagai antikanker. Hal ini
didukung oleh penelitian Mayer (1982) yang
menyatakan bahwa suatu ekstrak menunjukkan
aktivitas ketoksikan dalam Brine shrimp lethality
test (BSLT) jika ekstrak dapat menyebabkan
kematian 50 % hewan uji pada konsentrasi
LC50<1000 ppm. Sedangkan pada fraksi etanol-air
tidak berpotensi sebagai antikanker karena
memiliki LC50>1000 ppm.
Uji Aktivitas Antioksidan
Berdasarkan uji aktivitas antioksidan
ekstrak kasar, fraksi n-Heksana, fraksi etil asetat
dan fraksi etanol-air yang diperoleh adalah
sebagai berikut:
Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan dari
Ekstrak Kasar dan Fraksi Kulit Batang
Terap
Nilai IC50
Jenis Ekstrak
(ppm)
Ekstrak kasar 70,59
Fraksi n-Heksana 94,01
Fraksi etil asetat 100,06
Fraksi etanol-air 80,02
Vitamin C 6,78
Berdasarkan nilai IC50 yang diperoleh, nilai
IC50 pada ekstrak kasar yaitu 70,59 ppm, pada
fraksi n-Heksana yaitu 94,01 ppm, pada fraksi etil
asetat yaitu 100,06 ppm dan pada fraksi etanol-air
80,02 yaitu ppm.
Aktivitas antioksidan tertinggi dari
keempat fraksi tersebut adalah ekstrak kasar
(70,59 ppm), karena semakin kecil nilai lC50 maka
semakin tinggi aktivitas antioksidan, Secara
spesifik, suatu senyawa dikatakan sebagai
antioksidan sangat kuat jika nilai lC50 kurang dari
50 ppm, kuat untuk lC50 antara 50-100 ppm,
sedang jika nilai lC50 bernilai 101-150 ppm dan
lemah jika lC50 bernilai 151-200 ppm (Ramadhan,
2012).
Berdasarkan uji toksisitas diketahui bahwa
fraksi etil asetat memiliki tingkat toksisitas
tertinggi diantara lainnya dan pada uji aktivitas
antioksidan diketahui bahwa ekstrak kasar
memiliki aktivitas antioksidan yang kuat diantara
fraksi lainnya. Bila dihubungkan dengan hasil uji
fitokimia pada fraksi etil asetat dan ekstrak kasar
etanol mengandung senyawa fenolik dan
didapatkan hasil bahwa senyawa golongan fenolik
yang terkandung dalam sampel merupakan
senyawa yang aktif. Hal tersebut dibuktikan
dengan uji toksisitas yang telah dilakukan pada
ISBN 978-602-50942-0-0
sampel pohon surian bagian kayu teras yang
menyatakan bahwa ekstrak etanol bagian kayu
teras memiliki toksisitas tertinggi dibanding
dengan ekstrak lainnya karna diduga eksrak
didominasi oleh senyawa-senyawa dari kelompok
mono/ seskuiterpen dan fenolik (Rita, 2011) yang
bersifat antikanker (Duh et al, 2002), anti
serangga (Daisy et al, 2002) dan anti fungal (Ali
et al, 2008). Berdasakan Chang et al (2002), suatu
senyawa yang memiliki tingkat toksisitas tinggi
bersifat antiproliferasi terhadap beberapa sel
kanker. Studi pustaka menunjukkan bahwa
beberapa senyawa yang termasuk dalam
kelompok kuinon, triterpenoid, flavonoid seperti
tanin, aglikon flavonoid dan glikosidanya
memiliki tingkat toksisitas yang tinggi
berdasarkan hasil uji BSLT dan mempunyai
aktivitas kanker yang dapat menghambat
pertumbuhan sel kanker (Sajuthi, 2001).
Berdasarkan Wang (2007), bahwa beberapa
senyawa yang termasuk dalam kelompok fenolik
seperti fenol sederhana, flavonoid dan tanin
memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil uji fitokimia, uji
toksisitas (BSLT), dan uji aktivitas antioksidan
dapat disimpulkan bahwa fraksi etil asetat
memiliki bioaktivitas paling tinggi daripada
ekstrak fraksi lainnya karena memiliki LC50 yang
paling rendah sebesar 153,3788 ppm dan hasil uji
aktivitas antioksidan diketahui bahwa ekstrak
kasar memiliki aktivitas antioksidan yang paling
kuat dengan nilai IC50 yang diperoleh sebesar
70,59 ppm.
DAFTAR PUSTAKA
Ali NA, Wurster M, Ulrike NA, Lindequist,
Wessjohan L. 2008. Essensial Oil
Composition From Oleogum Resin of
Soqotraen Commiphora kua. Rec Nad
Prod 2(3): 70-75.
Daisy BH, Strobel Ga, Castllo U, Ezra D,
Sears J, Weaver DK, Runyon JB. 2002.
Napthalene, an Insect Repellent, is
Produced by Muscodor Vitigenus, a
Novel Endophytic Fungus.
Microbiology 48(11): 3737-3741.
Duh CY, Chien SC, Song PY, Wang SK, El-
Gamal A, Dai CF. 2001. New Cadinene
Sesquiterpenoids From The Formosan
Soft Coral Xenia Puerto-Galarae. J Nat
Prod 65: 1853-1856.
77
Maulidya Hafsari Fauzi
Kimia FMIPA UNMUL
Erma N.N.S., Sundari, T., Susanty, A.l., Octavia,
D.R., Isnaeni, Sukardiman., 2004. Kajian
Pendahuluan Uji Tokisistas Ekstrak Air
Miselia dan Tubuh Buah Jamur Shittake
(Lentinus edodes) dengan Metode Brine
Shrimp Lethality Test (BSLT), Berk.
Penel.Hayati.
Chang HL, Hung WC, Huang MS, Hsu HK. 2002.
Extract From The Leaves of Toona Sinensis
Roemor Exerts Potent Antiproliferative
Effect On Human Lung Cancer Cells. Am J
Chin Med 30(2-3): 307-314.
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia. Bandung:
Penerbit ITB. Mclaughlin. 1998. The Use of
Biological Assays to Evaluate Botanicals.
Drug Information Journal. Vol 32: 513-524.
Jagtap, U. B. dan Bapat, V. A. 2010. Artocarpus:
Areview of Its Traditional Uses,
Phytochemistry and Pharmacology.
Ethnopharmacol 129 (2), 142-66.
Meyer, Lauhlin and Ferngni. 1982. Brine Shrimp.
Convenient general bioassay for active
constituen: Planta Medica. Vol 45: 31-34.
Musthapa, I., Lia, D., Juliawaty, Syah, Y. M.,
Hakim, E. H., Latip, J., Ghisalberti, E. L.
2009. An Oxepinoflavone from Artocarpus
elasticus with Cytotoxic Activity. Arch Pharm
Res. 32(3), 191-194.
Prastyorini, Wiendarlina, I. Y. dan Peron, A. B.
2011. Toksisitas Beberapa Ekstrak Rimpang
Cabang Temulawak (Curcumaxanthorrhiza
Roxb.) pada Larva Udang (Artemia salina
Leach.). Fitofarmaka, Vol. 1 No.2, 14-21.
Ramadhan, R. 2012. Potensi Tumbuhan Annatto
(Bixa orellana L) Sebagai Tumbuhan Obat
dan Pewarna Alami. Tesis Fakultas
Kehutanan, Universitas Mulawarman
Samarinda.
78
Rita K Sari, Wasrin Syafii, Suminar S Achmad,
Muhammad Hanafi. 2011. Aktivitas
Antioksidan dan Toksisitas Ekstrak Etanol
Surian (Toona sinensis). Jurnal Ilmu dan
Teknologi Hasil Hutan 4(2): 46-52.
Robinson, T. 1995. Kandungan Organik
Tumbuhan Tingkat Tinggi. Bandung: ITB.
Sajuthi D. 2001. Ekstraksi, Fraksinasi,
Karakterisasi dan Uji Hayati In Vitro
Senyawa Bioaktif Daun Dewa Sebagai
Antikanker, Tahap II. Buletin Kimia 1: 75-
79.
Septiani, Tri. W. 2013. Uji Toksisitas (brine
shrimp lethality test) dan Penentuan
Aktivitas Antioksidan Alami dari Daun Terap
(Artocarpus odoratissimus B.) dengan
Metode DPPH (2,2-diphenyl-1-
picrylhidrazyl). Jurnal Kimia Mulawarman:
Samarinda.
Wang KJ, Yang CR, Zhang YJ. 2007. Phenolic
Antioxidants From Chinese Toon (Fresh
Young Leaves and Shoots Of Toona
Sinensis). Food Chem 101: 365-371.
Winarsi. 2007. Antioksidan Alami dan Radikal
Bebas. Yogyakarta: Kanisius.
Windono, T., S. Soedirman, U. Yudawati, E.
Ermawati, A. Srielita dan T.I. Erowati. 2001.
Uji Peredam Radikal Bebas Terhadap DPPH
dari Ekstrak Kulit Buah dan Biji Anggur
(Vitis vinivera) Pobolinggo Biru dan Bali.
Artocarpus, Surabaya I. 1: 34-43.
Wu, D., Mei, H., Tan, P., Lu, W., Zhu, J., Wang,
W., Huang, J., Li, J. 2015. Total Synthesis of
The 2- Arylbenzo[b]furan- Containing
Natural Products From Artocarpus.
Tetrahedron Letter.