Ion kromatografi (IC) adalah teknik pemisahan yang banyak berbagi fitur umum dengan HPLC,

namun memiliki aspek-aspek novel yang cukup seperti itu prinsip pemisahan atau mode
deteksi, menjadikannya objek yang terpisah belajar. IC disesuaikan dengan pemisahan ion dan
senyawa polar. Ponsel fase terdiri dari media ionik berair dan fase diam adalah resin penukar
ion. Selain metode deteksi berdasarkan absorbansi atau fluoresensi, kromatografi ion juga
menggunakan metode elektrokimia berdasarkan ionik sifat dari spesies yang akan dipisahkan.
Utilitas terbesarnya adalah untuk analisis anion yang tidak ada metode analitik cepat lainnya.
Padahal aplikasi saat ini IC jauh lebih luas daripada analisis ion sederhana yang dengannya
teknik pertama diperoleh terkenal. Domain operasi, sebanding dengan kapiler elektroforesis,
menyangkut pemisahan berbagai jenis anorganik atau organik spesies seperti asam amino,
karbohidrat, nukleotida, protein dan peptida di matriks kompleks. Bab ini juga akan meninjau
metode utama analisis kuantitatif dari data kromatografi.

4.1 Dasar-dasar kromatografi ion Teknik kromatografi ini berkaitan dengan pemisahan ion dan
polar senyawa. Fase stasioner mengandung situs ion yang menciptakan interaksi dipolar
dengan analit yang ada dalam sampel. Jika suatu senyawa memiliki densitas muatan yang
tinggi, itu akan dipertahankan lebih lama oleh fase diam. Proses pertukaran ini jauh lebih lambat
jika dibandingkan dengan yang ditemukan dalam kromatografi jenis lain. Mekanisme ini
mungkin terkait, untuk senyawa molekuler, dengan yang sudah ada ditangani oleh HPLC bila
dilengkapi dengan RP-kolom. Untuk HPLC, beberapa kolom mengandung paket pertukaran ion
tetapi digunakan secara signifikan berbeda. Mereka tidak dianggap sebagai kolom IC. Mereka
membutuhkan buffer terkonsentrasi yang tidak dapat ditekan dan tidak kompatibel dengan
deteksi konduktivitas. Aplikasi dengan kolom ini menggunakan lebih tradisional Metode deteksi
HPLC (seperti UV atau fluoresensi).
Gambar 4.1 Skema instrumen kromatografi ion. Desain bangunan modular klasik
kromatografi cair terlihat di sini lagi, namun dengan perbedaan pemisahan itu
umumnya dilakukan secara isokratis. Konfigurasi menunjukkan perangkat 'penekan' yang dipasang setelahnya
kolom dan seri dengan detektor konduktivitas. Penekan berfungsi untuk menghilangkan
ion yang timbul dari eluen untuk meningkatkan sensitivitas.
Instrumen kromatografi ion memiliki modul yang sama dengan yang ditemukan di
HPLC (Gambar 4.1). Mereka dapat eksis sebagai komponen individu atau sebagai terintegrasi
model. Potongan-potongan yang bersentuhan dengan fase gerak harus terbuat dari lembam
bahan yang mampu menahan korosif asam atau basa,
yang berfungsi sebagai eluen. Deteksi spesies ionik yang ada dalam sampel adalah
sulit karena analit ini berada dalam konsentrasi rendah dalam fase gerak itu
mengandung jumlah ion yang tinggi.
Pemisahan senyawa dalam sampel didasarkan pada kejadian tersebut
pertukaran ion, yang dua contoh klasik diberikan di bawah ini:
• jika spesies kationik (tipe M +) dipisahkan, kolom kationik dengan
fase diam yang mampu bertukar kation akan digunakan. Misalnya
fase terbentuk, misalnya, dari polimer yang mengandung sulfonat −SO−
3
kelompok. Akibatnya fase diam sama dengan polianion.
• secara bergantian, jika spesies anionik (tipe A) harus dipisahkan, kolom anionik
dipilih mampu bertukar anion. Ini dicapai, misalnya, oleh
menggunakan polimer yang mengandung gugus amonium kuaterner.
Untuk memahami mekanisme pemisahan, ambillah contoh kolom anionik
mengandung gugus amonium kuaterner, dalam kesetimbangan dengan fase gerak
tersusun dari larutan anion karbonat terhidrogenasi (mis. penghitung natrium
ion). Semua situs kationik dari fase diam menemukan diri mereka berpasangan
anion dari fase gerak (Gambar 4.2).
Ketika anion A− dalam sampel diambil oleh fase gerak, seri
dari equilibria reversibel diproduksi yang diarahkan oleh persamaan pertukaran
memberikan distribusi ion antara fase gerak (MP) dan stasioner
fase (SP)

Gambar 4.2 Skema yang menunjukkan perkembangan anionA− oleh pertukaran berturut-turut dengan counter
anion E− dalam kontak dengan fase diam amonium. (1) Awalnya counterion E− diperbaiki ke
fase diam dipertukarkan dengan spesies anionik yang ada dalam fase gerak. (2) Selanjutnya,
elusi inversi fenomena dengan meregenerasi fase diam dengan anion E− yang,
(3) ganti lagi untuk A− pada fase diam. Ion OH− akan menjadi pilihan yang paling sederhana
untuk E− tetapi campuran karbonat dan hidrogenokarbonat CO2−
3 dan HCO−
3 pada 0,003M) adalah
disukai karena mereka lebih efisien untuk menggantikan anion untuk dipisahkan.
Panah 1 sesuai dengan lampiran anion A− ke SP dan panah
2 untuk kembali ke fase gerak dan karena itu untuk perkembangannya ke bawah
kolom.

Kequ mewakili selektivitas antara dua anion sehubungan dengan kation dari fase diam. Karena
anion berbeda memiliki Kequ berbeda disimpan di kolom selama waktu yang berbeda. Waktu di
mana ion yang diberikan elusi dari kolom dapat dikontrol dengan menyesuaikan pH. Sebagian
besar instrumen menggunakan dua waduk fase bergerak yang berisi buffer dengan pH
berbeda, dan

Gambar 4.3 Pemisahan beberapa kation, mono dan divalen dengan kolom kationik (Courtesy
dari Alltech)

pompa yang dapat diprogram yang dapat mengubah pH fase gerak selama pemisahan.
Menggunakan resin penukar kation, situasi serupa dapat dijelaskan (stasioner fase SP sesuai,
misalnya, untuk Polym-SO3H, sangat asam):
Fenomena pertukaran ini, yang memungkinkan spesies kutub dipertahankan pada
resin, dikenal sebagai ekstraksi fase padat (Gambar 4.3). Jika sampel mengandung dua
ion X dan Y dan jika KY> KX, Y akan dipertahankan lebih dari X pada kolom.
4.2 Fase diam
Kromatografi ion dapat dibagi menjadi kromatografi pertukaran kation, dalam
yang bermuatan positif mengikat ion ke fase diam yang bermuatan negatif dan
kromatografi penukar anion, di mana ion bermuatan negatif mengikat
fase stasioner bermuatan positif. Paket kolom terdiri dari reaktif
lapisan terikat ke partikel polimer inert. Fase diam-diam harus memuaskan secara implisit
sejumlah persyaratan sebagai distribusi granulometri sempit (mono-disperse),
luas permukaan spesifik yang besar, ketahanan mekanis, stabilitas di bawah asam dan basa
pH dan transfer ion cepat.
4.2.1 Bahan berbasis polimer
Fasa diam yang paling dikenal dikeluarkan dari kopolimer styrene dan
divinylbenzene, untuk mendapatkan kemasan yang cukup keras untuk menahan tekanan masuk
kolom. Mereka terbuat dari partikel bulat dengan diameter 5 hingga 15 m
(Gambar 4.4) yang dimodifikasi di permukaan untuk memperkenalkan fungsional
kelompok dengan sifat asam atau dasar.
Untuk pemisahan kation resin pertukaran kation biasanya merupakan sulfonat atau karboksilat
AC id. Dengan demikian, asam sulfat pekat digunakan untuk menyerang aromatik yang dapat diakses
cincin permukaan kopolimer untuk menghubungkan gugus fungsi SO3H. A sangat asam
fase diperoleh - untuk pertukaran kation - di mana anion adalah tetap ke
makromolekul sementara kation dapat dipertukarkan secara reversibel dengan kationik lainnya
spesies hadir dalam fase gerak. Bahan-bahan ini stabil dalam rentang yang luas
pH dan memiliki kapasitas tukar beberapa mmol / g.
Pendekatan lain untuk memperoleh fase diam ini didasarkan pada kopolimerisasi
dari campuran dua monomer akrilik. Salah satunya adalah anionik (atau kation), menurut
ke sifat fase yang diinginkan, dan yang lainnya adalah polyhydroxylated (Gambar 4.5), di
memesan untuk memastikan karakter hidrofilik dari fase diam. Namun demikian,
ketidaknyamanan dengan resin ini karena laju pembengkakan mereka tergantung pada

Gambar 4.4 Fase diam di IC. Penampang partikel bulat dari polystyrene digunakan sebagai
penukar kation. Matriks polystyrene diubah menjadi kation (ex. DOWEX® 4)
atau ke resin penukar anion (ex. DOWEX® MSA-1). Untuk pemisahan anion resin biasanya
kelompok amonium kuaterner.
komposisi fase gerak. Mereka biasanya disediakan untuk tekanan sedang
kromatografi dan beberapa aplikasi biokimia.
Mulai dari kopolimer yang sama, resin penukar anion dapat disintesis,
pertama dengan kloromethylation, yang mengikat − CH2Cl (resin Merryfield), diikuti oleh
reaksi dengan amina sekunder atau tersier tergantung pada kebasaan yang diperlukan
untuk fase diam.
Pada kontak dengan air fase diam agak dasar seperti Polym-NMe2
menghasilkan fase terionisasi lemah (Polym-NMe2H + OH− terutama ketika medium
dasar. Bergantian dalam medium asam akan muncul sebagai fase sangat dasar
yang permukaan aktifnya akan sangat terionisasi: (Polym-NMe2H + Cl−. Pertukaran
kapasitas resin ini bervariasi dengan pH.
4.2.2 Bahan berbasis silika
Partikel silika berpori dapat berfungsi untuk mendukung, melalui ikatan kovalen, alkilfenil
rantai yang membawa kelompok tersulfonasi atau gugus amonium kuaterner. Fiksasi ini
langkah ini mirip dengan yang digunakan untuk mendapatkan fase silika terikat yang dikembangkan di HPLC.

Gambar 4.5. Kopolimerisasi dua monomer monoetilenat (asam dan trihidroksiamida).

Contoh struktur yang diperoleh (CM-TRISACRYL M® dari IBF-France). Timbul dari yang lemah
asam fasa yang dihasilkan akan tidak dapat digunakan pada pH asam, karena tidak akan lagi dalam bentuk
terionisasi.

Gambar 4.6 Resin film. Contoh resin yang terbuat dari inti keras yang telah digunakan
disimpan kopolimer, berasal dari reaksi asam maleat pada 1,3-butadiena (Direproduksi
milik Perusahaan Dionex).
Beberapa fase ini mengaitkan sifat kromatografi ion dengan sifat-sifat
HPLC. Pemisahan bergantung secara simultan pada koefisien ion dan partisi
koefisien. Kemasan silika biasanya menampilkan efisiensi yang lebih besar daripada polimerik mereka
setara.
4.2.3 Film resin
Polimer yang disebut 'lateks', disiapkan dari monomer yang mengandung kelompok organik,
diendapkan sebagai susunan manik-manik kecil berdiameter 0 1–0 2 m) pada tahan air
dukungan untuk membentuk lapisan film seperti berkelanjutan sekitar 1–2 m ketebalan. Dukungan
terbuat dari mikro-bola silika atau kaca atau polistiren dengan diameter sekitar 25 m
(Gambar 4.6) Hal ini memberikan keseimbangan yang cepat antara fase diam dan fase gerak.
Polimer lateks dihasilkan dari reaksi dua monomer tak jenuh seperti
1,3-butadiena dengan asam maleat atau 2-hidroksietil metakrilat.
4.3 Fase seluler
Fase seluler IC biasanya 100 persen berair dengan organik atau anorganik
buffer untuk mengontrol selektivitas dan bila perlu, sedikit kandungan metanol
atau aseton digunakan untuk melarutkan sampel tertentu yang memiliki tingkat ionisasi rendah.
Tergantung pada jenis fase diam, ion counter hadir dalam
fase gerak yang berasal dari asam (perkhlorik, benzoat, ftalat, metana sulfonat),
atau basa (analisis anion yang paling populer adalah varian natrium hidroksida
dan natrium karbonat / bikarbonat).
PH diatur sesuai dengan pemisahan yang ingin dicapai. Para eluen
dapat dipersiapkan sebelumnya mengingat bahwa solusi dasar memiliki kecenderungan
menyerap karbon dioksida atmosfer, dengan konsekuensi modifikasi di
waktu retensi

Gambar 4.7 Kromatografi ion yang mengandung generator OH− kemurnian tinggi. Penampilan
skematik posisi generator antara pompa dan kromatografi. The degasser memfasilitasi
penghapusan gas yang terbentuk di sekitar elektroda yang terletak di aliran eluen. Ion K +
adalah dibentuk untuk setiap OH− yang dihasilkan. Elusi isokratik atau gradien diberikan sesuai
permintaan (diagram berdasarkan dokumen dari Dionex). Untuk menghindari ketidaknyamanan
ini, generator eluen dapat digunakan (baik asam atau dasar) yang dimasukkan, sebagai modul
tambahan, antara pompa dan injektor kromatografi ion (Gambar 4.7). Jika laju aliran air dan
arus elektrolitik diketahui kemudian konsentrasi eluen dapat ditentukan dengan presisi dan
gradien konsentrasi dapat dipengaruhi, prosedur jarang digunakan dalam kromatografi ion.
Puncak injeksi. Puncak pertama dalam kromatogram untuk anion dihasilkan dari ionik kekuatan
sampel yang diinjeksi berbeda dari eluen. Anion dalam sampel menggantikan anion (misalnya
karbonat / bikarbonat atau hidroksida) itu diserap ke dalam pengepakan kolom. Anion yang
berpindah ini bergerak ke depan dengan fase gerak dan ketika melewati detektor muncul
sebagai positif puncak (Gambar 4.8). Jika penekan (lihat bagian 4.5) dipasang di outlet kolom
dan jika karbonat membuat fase gerak, puncak negatif, disebut ‘celupan air’ sering hadir.
Puncak ini adalah hasil karbon dioksida yang terbentuk di dalam fase gerak yang ditekan
(dalam bentuk asam karbonat). Jika kekuatan ionik sampel lebih besar dari eluen, maka akan
ada menjadi puncak positif. Puncak ini menunjukkan waktu penahanan kromatogram
berlangsung.

4.4 Detektor konduktivitas

Selain detektor spektrofotometri berdasarkan absorbansi atau fluoresensi Radiasi UV / terlihat,
dan digunakan ketika fase gerak tidak menyerap dengan baik, mode deteksi lain ada
berdasarkan konduktivitas elektrolit. Jadi, pada outlet dari kolom, konduktansi (kebalikan dari
resistensi) dari ponsel fase diukur antara dua microelectrodes. Sel pengukuran harus berupa a
volume sangat kecil (sekitar 2 L). Kesulitannya adalah mengenali dalam sinyal total bagian
karena ion atau zat ion yang ada dalam sampel. Untuk melakukan langsung pengukuran,
muatan ionik fase gerak harus serendah mungkin dan sel pengukur membutuhkan kontrol suhu
yang ketat ke dalam 0 01 C karena ketergantungan tinggi konduktansi pada suhu ∼5% / C).
Sensitivitas detektor terhadap ion X (valensi z dan konsentrasi molekuler) C) dapat diprediksi
jika konduktansi setara X dan bahwa dari eluen ion E E diketahui. Ini tergantung dari
perbedaannya K antara perilaku ekuivalen ion X dan E. K bisa dihitung menurut ungkapan 4.2,
mengetahui bahwa puncaknya akan positif atau negatif.

Konduktansi G = 1 / R yang sesuai dengan kebalikan dari resistansi R, diukur antara dua
elektroda yang jatuh ke dalam larutan konduktor dan di mana dipertahankan perbedaan
potensial. G diekspresikan dalam Siemens (S). Untuk ion yang diberikan, konduktansi larutan
bervariasi dengan konsentrasi elektrolit. Hubungan ini linear untuk solusi yang sangat encer.
Konduktansi spesifik (dalam S / mol) atau konduktivitas k, memungkinkan pengukuran untuk
tidak bergantung pada parameter sel deteksi:

Kcell = d / A mewakili konstanta sel (luas A dan spasi d). Nilainya tidak bisa diperoleh dengan
pengukuran langsung, tetapi ditentukan dari solusi standar untuk dimana konduktivitas k
diketahui. Akhirnya konduktansi ionik setara (S · m2 / mol) mewakili konduktivitas ion dengan
valensi z, dalam larutan berair pada 25 C, ketika konsentrasi molar C (mol / L) cenderung
menuju nol dalam air (Tabel 4.1).

4,5 penekan Ion Fase gerak berisi ion yang menciptakan konduktivitas latar belakang, membuatnya sulit
untuk mengukur konduktivitas karena hanya untuk analit ion ketika mereka keluar kolom. Untuk
meningkatkan rasio signal to noise, saat menggunakan detektor konduktivitas, perangkat yang disebut
penekan, yang dirancang untuk secara selektif menghilangkan ion fase bergerak ditempatkan setelah
kolom analitis dan sebelum detektor. Prinsipnya terdiri untuk mengonversi ion fase bergerak ke bentuk
netral atau menggantinya dengan yang lain konduktivitas yang lebih tinggi. Deteksi berbasis suppressor
lebih berguna untuk analisis anion daripada untuk analisis kation. Model supresor yang paling sederhana
dapat dianggap sebagai kolom yang mengandung fase stasioner yang memiliki kelompok-kelompok
fungsional yang memiliki muatan berlawanan dari kolom pemisah. Seperti penekan kimia, yang
mengandung anionik resin dikaitkan dengan kolom pemisahan kationik. Mekanisme aksi bisa diuraikan
menggunakan contoh berikut. Misalkan suatu campuran yang mengandung kation Na + dan K + telah
dipisahkan menggunakan kolom kationik yang fase geraknya mengandung asam hidroklorat encer.
Dalam medium asam ini, di outlet kolom, ion Na + dan K + disertai ion H + yang berasal dari asam dan
anion Cl in dalam rangka untuk menjamin electroneutrality medium. Setelah kolom pemisahan, fase
gerak mengalir melalui kolom kedua yang berisi pertukaran anionik resin yang ion bergeraknya adalah
OH−. The Cl− anion akan ditempel di kolom ini, sehingga menggeser ion OH− yang akan bereaksi
dengan ion H + dalam larutan untuk diberikan air. Di outlet penekan, hanya spesies Na + OH− dan K +
OH− ditemukan di air. Ion H + dan Cl− secara efektif menghilang. Seperti OH− memiliki konduktivitas
yang lebih tinggi daripada Cl−, deteksi ion Na + dan K + lebih mudah, karena diperkuat (Gambar 4.9).
Singkatnya, untuk analisis anion (menggunakan detektor konduktivitas), penekan ion menetralisir fase
gerak, mengurangi konduktivitasnya, sementara secara bersamaan meningkatkan konduktivitas sampel.
Keterbatasan dari jenis penekan ini terletak pada volume mati yang sangat besar itu mengurangi efisiensi
pemisahan, karena remixing ion sebelum mereka deteksi. Ion-ion penekan harus diregenerasi secara
periodik dan itu harus digunakan secara eksklusif dalam mode isokratis. Jenis penekan lain, memiliki
kapasitas ionik yang tinggi, telah terjadi dikembangkan. Mereka terbuat dari serat berpori atau mikromembran
dan memiliki
volume mati yang sangat kecil dalam urutan 30-50 L. Itu memungkinkan elusi gradien
dengan drift dasar yang dapat diabaikan. Gambar 4.10 (a) menunjukkan bagian dari anion A−,
dalam larutan dalam elektrolit khas yang digunakan untuk kolom anionik, melalui penekan
dengan membran kationik.
Saat ini, penekan regenerasi terus menerus yang menggunakan elektrolitik
reaksi telah diperkenalkan untuk penentuan jejak. Mereka berperilaku baik
Gambar 4.9 Penekan kimia untuk kolom kation tukar. Untuk analisis kation, ponsel
fase sering mencairkan larutan HCl atau HNO3, yang dapat dinetralkan oleh penekan eluen
yang memasok OH−. Dalam contoh ini penekan anionik membersihkan fase gerak ion H +
dan hampir semua ion Cl,, memfasilitasi deteksi kation M +. Prinsip yang sama
berlaku untuk analisis anion. Dalam hal ini, fase gerak sering mengencerkan NaOH atau NaHCO3, dan
supresor eluen memasok H + untuk menetralisir anion dan mempertahankan atau menghapus Na +.

Gambar 4.10 Membran dan penekan yang diregenerasi secara elektrokimia. Ada dua jenis
membran, satu jenis permeabel terhadap kation (H + dan dalam contoh ini Na +), permeabel lainnya
ke anion (OH− dan di sini Cl−). (A) Membran mikro kortik disesuaikan dengan
elusi anion. Hanya kation yang dapat melintasi membran (sesuai dengan polianionik
dinding yang menjauhkan anion dalam larutan). (B) Sebuah penekan membran anionik
ditempatkan, bertentangan dengan model sebelumnya, di outlet kolom kationik. Ion diregenerasikan
oleh elektrolisis air. Perhatikan pada kedua kasus, aliran sirkulasi counter antara
fase dielusi dan solusi dari supresor post-kolom. (C) Contoh pemisahan
kation anorganik (konsentrasi urutan ppm) menggunakan penekan ini
mengetik.

seperti kolom khusus yang mengandung resin yang beregenerasi dengan elektrolisis atau
sejenisnya penekan membran di mana ion regenerasi diproduksi in situ oleh elektrolisis air.
Gambar 4.10b mengilustrasikan prosedur kedua: itu mewakili bagian dari kation, dalam larutan
asam hidroklorat encer, melalui penekan membran mana yang mudah berpindah ke anion.
Bergantian, jika masalah terdiri dari pemisahan campuran anion kolom anionik (bahan kationik),
dengan eluen yang mengandung natrium encer hidroksida, membran yang memungkinkan
difusi kation akan dipilih. Pada katoda, bagian ion hidronium menuju aliran utama dari elektrolit
akan menetralisir ion OH−. Pada anoda, ion Na + akan bermigrasi keluar dari fase gerak dan
akan bereaksi dengan ion OH−.
Analisis kuantitatif dengan kromatografi
Perkembangan penting kromatografi dalam analisis kuantitatif pada dasarnya
karena keandalannya dan penggunaannya dalam analisis standar. Trace dan ultratrace
analisis dengan kromatografi digunakan, khususnya metode EPA untuk lingkungan
analisis, meskipun biayanya agak tinggi. Jenis analisis ini terutama bergantung pada
reproduktifitas pemisahan dan pada hubungan linear antara yang disuntikkan
massa senyawa ke kolom dan area puncak yang sesuai
kromatogram yang dihasilkan. Ini adalah metode komparatif yang sangat baik digunakan di banyak
protokol, yang, bersekutu dengan perangkat lunak yang digunakan untuk perawatan data memungkinkan otomatisasi
semua perhitungan yang terkait dengan analisis ini.
Tiga metode yang paling banyak digunakan dijelaskan di bawah ini
format paling sederhana.

Untuk menghitung konsentrasi massa senyawa muncul sebagai puncak

pada kromatogram, dua kondisi dasar harus dipenuhi. Pertama, sampel yang otentik
dari senyawa yang akan diukur harus tersedia, sebagai referensi, untuk menentukan
sensitivitas detektor terhadap senyawa ini. Kedua, perangkat lunak yang memberi ketinggian
atau area-area dari puncak eluting minat yang berbeda juga diperlukan. Semua dari
metode kuantitatif dalam kromatografi bergantung pada dua prinsip ini. Mereka
metode komparatif tetapi tidak mutlak.
Untuk penyeteman instrumen tertentu, diasumsikan bahwa relasi linear ada
untuk setiap puncak kromatogram, di atas seluruh rentang konsentrasi, antara
daerahnya dan kuantitas senyawa yang bertanggung jawab atas puncak ini dalam suntikan
mencicipi. Ini berlaku untuk rentang konsentrasi tertentu tergantung pada detektor
dipekerjakan. Hipotesis ini diterjemahkan ke dalam persamaan berikut:

dimana mi adalah massa dari senyawa yang saya suntikkan pada kolom, Ki adalah absolut
faktor respon untuk senyawa i dan Ai adalah area puncak eluting untuk
senyawa i.
Faktor respon absolut Ki (jangan dikelirukan dengan koefisien partisi),
bukan merupakan parameter intrinsik dari senyawa karena tergantung pada
penyetelan kromatografi. Untuk menghitung faktor respon Ki, menurut
Ekspresi 4.5, adalah penting bahwa baik daerah Ai dan mi massa, senyawa
saya menyuntikkan pada kolom, diketahui. Namun, massa ini sulit ditentukan
dengan presisi karena bergantung secara bersamaan pada jarum suntik, pada injektor
ketik (dalam GC), atau pada loop injeksi (dalam HPLC). Inilah sebabnya mengapa kebanyakan kromatografi
metode yang digunakan untuk analisis kuantitatif, apakah pra-diprogram ke dalam
perekam terintegrasi atau dalam banyaknya perangkat lunak yang tersedia, jangan buat
penggunaan faktor respon absolut, Ki.

.7 Area perangkat lunak peaks dan pengolahan data

Untuk menentukan area puncak perangkat lunak kromatografi yang sesuai adalah
digunakan yang juga memastikan tidak hanya kontrol dan kerja kromatografi
tetapi juga perlakuan data untuk memberikan laporan yang sesuai dengan salah satu dari
metode analisis kuantitatif pra-diprogram.
Sinyal yang ditemukan oleh detektor diambil sampelnya oleh konverter analog-digital
(ADC) dengan frekuensi beberapa ratus hertz untuk menghasilkan yang akurat
reproduksi puncak tersempit dalam kromatogram yang diperoleh dari GC dengan
kolom kapiler. Setiap paket perangkat lunak memungkinkan koreksi dasar, perawatan
sinyal negatif dan semua menggabungkan metode yang berbeda untuk menghitung area puncak
(Gambar 4.11).
Metode triangulasi manual dan metode ‘cut and weight’ (berat adalah
dianggap proporsional terhadap area), tentu saja, tidak lagi bekerja. Namun demikian
berguna untuk mengingat bahwa untuk puncak gaussian eluting, produk lebarnya menjadi setengahnya
tinggi dengan tinggi penuh, sesuai dengan sekitar 94 persen dari total luas
puncaknya. Dengan cara yang sama, perekam dengan sistem integrasi untuk mengukur
area puncak tidak lagi digunakan.

Metode ini memungkinkan pengukuran konsentrasi (atau persentase dalam massa)

satu atau lebih komponen yang muncul sebagai puncak yang terselesaikan pada kromatogram,
bahkan di hadapan senyawa lain yang menghasilkan puncak yang belum terselesaikan. Mudah untuk
gunakan, metode ini sesuai dengan penerapan prinsip umum bagi banyak orang
teknik analisis kuantitatif.
Modus operandi didasarkan pada perbandingan dua kromatogram
diperoleh berturut-turut tanpa mengubah pengaturan kontrol kromatografi