Rencana baca : Kamis, 03-10-2019

Waktu : 13.00 WIB

Journal Reading

Infeksi Human Herpesvirus 6 dari Saluran Genital Wanita

Charles T. Leach, Edward R. Newton, Sheila McParlin, Hal B. Jenson

Pembimbing : dr. Kristina Nadeak, SpKK, FINSDV, FAADV

Penyaji : dr. Arridha Hutami Putri

DIVISI INFEKSI MENULAR SEKSUAL DAN TREPONEMATOSIS

DEPARTEMEN ILMU KESEHATAN KULIT DAN KELAMIN
FAKULTAS KEDOKTERAN UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2019

Infeksi Human Herpesvirus 6 dari Saluran Genital Wanita

 Charles T. Leach, Edward R. Newton, Sheila McParlin, Hal B. Jenson

Empat dari tujuh human herpesvirus diketahui bereplikasi di saluran genital perempuan
dan dapat menular ke pasangan seksual dan bayi yang baru lahir. Beberapa virus ini juga
terlibat dalam etiologi berbagai kanker manusia, termasuk tumor yang berasal dari sel epitel.
Human herpesvirus 6 (HHV-6) adalah virus herpes yang baru diidentifikasi yang
menyebabkan exanthem subitum. Patogenesis HHV-6 dalam saluran genital sebagian besar
belum banyak diketahui. Sekresi vagina aselular dari 29 wanita yang datang ke klinik
penyakit menular seksual diperiksa adanya sekuens DNA HHV-6 dengan metode polymerase
chain reaction. Tiga sampel (10%) secara konsisten positif terhadap DNA HHV-6. Karena
DNA HHV-6 shed dalam saluran genital beberapa wanita, sehingga ada kemungkinan virus
dapat ditularkan melalui kontak seksual dan kepada bayi baru lahir melalui perinatal.
Human herpesvirus 6 (HHV-6) adalah herpesvirus yang baru ditemukan secara luas
pada manusia yang merupakan agen etiologi exanthem subitum (roseola infantum). Terdapat
tingkat ekskresi HHV-6 yang tinggi dalam air liur dan virus mungkin ada dalam keadaan
laten dalam kelenjar ludah dan bronkial.
Karena beberapa virus herpes manusia lainnya (cytomegalovirus [CMV], virus herpes
simpleks [HSV] tipe I dan 2, dan virus Epstein-Barr [EBV]) ditemukan dalam saluran genital
serta orofaring, kami menyelidiki apakah HHV-6 juga dapat ditemukan dalam saluran
genital. Kehadiran HHV-6 dalam saluran genital wanita menjadi penting karena beberapa
alasan: HHV-6 dapat menular secara seksual, infeksi HHV-6 dapat berkontribusi pada
perkembangan kanker rahim dan kanker saluran genital lainnya dan HHV-6 berpotensi
menular kepada janin atau bayi baru lahir. Di sini, kami melaporkan analisis kami tentang
sekresi saluran genital wanita melalui DNA HHV-6 menggunakan polymerase chain reaction
(PCR).

Material dan Metode

Populasi penelitian. Wanita (n = 29) datang ke klinik penyakit menular seksual (PMS)
secara sukarela untuk penelitian ini. Semua pasien adalah peserta dalam studi paralel yang
meneliti epidemiologi berbagai agen PMS yang diakui termasuk Neisseria gonorrhoeae.
Streptococcus agalactiae, Chlamydia trachomatis, Gardnerella vaginalis (bacterial
vaginosis) dan Treponema pallidum.

1
 Pengumpulan dan pemrosesan spesimen. Swab vagina dan darah (10 mL) diambil
dan dikumpulkan. Swab yang mengandung cairan vagina ditempatkan di dalam tabung steril
yang mengandung 15 mL PBS. Sampel disimpan terlindung dari cahaya pada suhu 4°C
sampai diproses di laboratorium 12-48 jam kemudian. Plasma dipisahkan dari darah setelah
sentrifugasi kecepatan rendah dan disimpan pada suhu -20°C sampai diperiksa antibodinya.
Swab vagina dicampurkan dengan PBS, kelebihan PBS itu dikeluarkan dan swab
dibuang. Setelah sentrifugasi kecepatan rendah, cairan supernatan dihilangkan dan disaring.
Filtrat disentrifugasi pada 100.000 g selama 45 menit (SW 50.1 rotor; Beckman Instruments,
Brea, CA). Dalam persiapan untuk PCR, supernatan dibuang dan pelet diinkubasi selama 1
jam pada 55°C dalam 10 mM TRIS-HCl (pH 8.4), 50 mM KCl, gelatin 0.01%
(berat/volume), 0.045% NP-40, 0.045% Tween 20 dan proteinase K (1 mg/rnl). Kultur untuk
virus tidak dilakukan.

PCR. Dalam volume reaksi total 20 µL, PCR dilakukan menggunakan 5 µL sampel
yang diamplifikasi dalam 10 mM TRIS-HCl (pH 8.4), 50 mM KCl, 1.5 mM MgC12, gelatin
0.01% (berat / volume), 0.0 1% NP40, 0.01% Tween 20, 100 mM setiap dNTP, 1 unit Taq
polymerase dan 0.5 µM pada masing-masing primer. Primer H6-6 dan H6-7 mengamplifikasi
produk 223-bp yang digunakan. Kondisi yang digunakan adalah diinkubasi pada 94°C (2
menit), 40 siklus 65°C (2 menit) dan 94°C (1 menit) dan inkubasi akhir pada 65°C (10
menit). Kontrol negatif terdiri dari PBS dalam buffer lisis dan air. Kontrol positif tersebut
terdiri dari total DNA yang diekstraksi dari sel HSB-2 yang terinfeksi HHV-6 (strain DV).
Setelah amplifikasi, sampel dielektroforesis dan dipindahkan ke membran nilon, setelah itu
membran dipanggang pada suhu 80°C selama 2 jam. Probe H6-6/7 dilabeli dengan aktivitas

2
spesifik 107-108 cpm/µg dan diinkubasi dengan membran pada 25°C semalaman dalam 5%
SDS, 0.5 M buffer sodium fosfat (pH 7.2), albumin serum sapi 1%, 1 mM EDTA, dan 0.08
mg/mL ragi tRNA. Membran dicuci sekali dalam 2xSSC/1.0% SDS (1xSSC adalah 0.15 M
natrium klorida, 0.015 M natrium sitrat) selama 15 menit pada suhu kamar dan dua kali
dalam 0.2xSSC/0.1% SDS selama 15 menit masing-masing pada suhu kamar, kemudian
dipaparkan terhadap film Kodak XAR-5 selama 4-16 jam pada -70°C di antara dua layar
intensif (Du Pont, Wilmington, DE).
Spesifisitas metode PCR diuji dengan amplifying 1 µg DNA genom manusia dan 1 µg
total DNA dari sel yang terinfeksi dengan human herpesvirus lainnya (CMV [strain AD],
EBV [strain B95-8], HSV-I [strain F], HSV-2 [strain G] dan virus varicella-zoster [strain
Ellen]). Tidak ada pita HHV-6 yang diamati pada sampel ini dengan pewarnaan gel ethidium
bromida atau autoradiografi (data tidak ditunjukkan).
Serologi. Antibodi IgG anti-HHV-6 diukur dari sampel plasma dengan
imunofluoresensi indirect dengan sel HSB-2 yang terinfeksi HHV-6 (strain DV).

Hasil

Sampel genital bebas sel dari semua 29 wanita yang diuji rata-rata tiga kali untuk
melihat DNA HHV-6 dengan PCR (gambar 1). Semua kontrol negatif dan positif
memberikan hasil yang diharapkan pada setiap putaran PCR. Enam puluh sembilan persen
spesimen (20/29) berulang kali memberikan hasil negatif dari PCR dan dinilai negatif (tabel
1). Tiga dari 29 spesimen (10%) mengungkapkan terdapat DNA HHV-6 pada 67% -100%
dari amplifikasi (3/3, 4/4, 2/3) dan dianggap pasti positif. Enam spesimen (21%) memberikan
hasil spesifik HHV-6 tetapi tidak konsisten positif pada 33% atau lebih sedikit amplifikasi
(1/3, 1/3, 1/3, 1/3, 1/3. 1/4) dan dianggap sebagai indeterminate.
Serum hanya tersedia dari 12 wanita (tabel 1). Semua positif untuk antibodi IgG HHV-
6 dengan titer antara 1:40 dan 1:640 (rata-rata geometris 1:151). Karena serum yang diuji
hanya sejumlah kecil, tidak adanya perbandingan titer antibodi yang signifikan secara
statistik antara pasien PCR positif dan negatif untuk HHV-6 adalah mungkin. Semua subjek
diperiksa untuk keberadaan agen menular seksual lainnya (N. gonorrhoeae, S. agalactiae, C.
trachomatis. G. vagina [bacterial vaginosis] dan T. pallidum). Dua puluh dua subjek
mengalami infeksi bersamaan dengan satu atau lebih patogen yang dikenal. Dari 3 subjek
yang positif untuk DNA HHV-6 dengan analisis PCR, saya mendapatkan vaginosis

3
bakterialis dan juga S. agalactiae diisolasi dari vagina (tabel I). Tidak ada patogen saluran
genital yang diidentifikasi pada 2 pasien positif-PCR lainnya.

Diskusi

Pengambilan CMV, HSV-1, HSV-2 dan EBV dari saluran genital pria dan wanita
didokumentasikan dengan baik. Namun, keberadaan dan signifikansi virus herpes manusia
lainnya dalam saluran genital telah menerima perhatian yang relatif sedikit. Sejauh
pengetahuan kami, analisis spesimen genital untuk HHV-6 telah dilaporkan oleh hanya satu
laboratorium. Para peneliti ini menggunakan metode kultur untuk mendeteksi HHV-6 pada
50 swab endoserviks dan 30 swab uretra pria yang telah disimpan di atas nitrogen cair. HHV-
6 tidak diidentifikasi dalam spesimen apa pun.
Hasil kami menunjukkan bahwa setidaknya 10% wanita yang menghadiri klinik PMS
membawa HHV-6 dalam saluran genital mereka, tetapi yang sebenarnya mungkin sebanyak
31% jika sampel yang pasti positif dan indeterminate dikelompokkan bersama sebagai
positif. Namun, prevalensi ekskresi DNA HHV-6 genital pada populasi umum wanita atau
pria tidak diketahui. Beberapa kemungkinan dapat menjelaskan perbedaan antara hasil kami
dan hasil Harnett dkk. yaitu: sensitivitas PCR lebih tinggi dibandingkan dengan kultur,
penggunaan spesimen yang masih fresh, jumlah spesimen yang lebih besar, konsentrasi
sampel sebelum pengujian PCR dan populasi sampel yang berbeda. Populasi kami sebagian
besar terdiri dari wanita yang aktif secara seksual dengan PMS lainnya, meskipun 2 dari 3
wanita dengan PCR-positif untuk HHV-6 tidak memiliki PMS lain yang diidentifikasi pada
saat melakukan sampling. Peneliti lain telah mencatat titer antibodi HHV-6 rata-rata secara
statistik lebih tinggi pada wanita yang menghadiri klinik PMS daripada kelompok kontrol.

4
 Identifikasi DNA HHV-6 dalam saluran genital oleh PCR tidak dapat disamakan
dengan keberadaan virus menular, karena kami tidak secara bersamaan membiakkan
spesimen ini untuk virus. Namun, pengamatan oleh orang lain menunjukkan bahwa >60%
orang dewasa normal memiliki HHV-6 yang shed di dalam air liur, baik yang diuji dengan
kultur atau dengan PCR, mendukung gagasan bahwa PCR positif menunjukkan adanya virus
yang bisa menular.
Kehadiran HHV-6 yang menular dalam saluran genital wanita dapat memiliki implikasi
penting. Seperti beberapa virus herpes lainnya, HHV-6 dapat menular secara seksual. Juga,
HHV-6 dapat dikaitkan dengan kanker saluran genital, mungkin bersamaan dengan agen
infeksi lain seperti human papillomavirus. Perlu dicatat bahwa DNA HHV-6 telah terdeteksi
pada sebagian kecil kanker limfositik. Akhirnya, ekskresi HHV-6 pada saluran genital wanita
dapat menyebabkan penularan melalui transmisi perinatal kepada keturunannya dan
berkembang pada infeksi neonatal.
Singkatnya, DNA HHV-6 telah terdeteksi oleh PCR dalam saluran genital 3 dari 29
wanita yang menghadiri klinik PMS. Meskipun infeksi HHV-6 sangat lazim pada orang
dewasa dan virus dapat ditemukan dalam air liur kebanyakan orang, ini adalah laporan
pertama yang menunjukkan DNA HHV-6 dalam saluran genital wanita. Penelitian lebih
lanjut diperlukan untuk menggambarkan riwayat alami infeksi HHV-6 pada saluran genital
pria dan wanita dan menentukan implikasi klinis dari pengambilan tersebut.

Ucapan Terima Kasih

Kami berterima kasih kepada Carmen Dennis karena memperoleh sampel klinis dan
Nathaniel Brown karena menyediakan HHV-6 (strain DV).