Abstrak

Sesamin dan sesamolin secara klinis merupakan antioksidan penting yang menunjukkan sifat
antikolestrolemik, antihipertensi, dan antikanker. Secara kimia mereka dimer fenil propana disintesis
sebagai produk metabolisme sekunder di beberapa tanaman. Tanaman minyak kuno Sesamum indicum,
sejauh ini, adalah sumber utama lignan ini. Beberapa upaya yang dilakukan sebelumnya untuk isolasi
lignan yang sedang dipertimbangkan, dalam bentuk murni, jauh dari memuaskan mengakibatkan biaya
tinggi dan kelangkaannya di pasar.

Di sini kami melaporkan hasil kami tentang isolasi dan karakterisasi dua lignan yang sukses dari minyak
wijen komersial. Campuran 1: 8 minyak dengan aseton, pada titik beku pada −80 ◦C, menghasilkan
trigliserida dan minyak kuning. Yang terakhir ketika mengalami perlakuan yang sama tetapi dengan
isooctane pada 4 ◦C menghasilkan produk kristal tidak berwarna. TLC diikuti oleh HPLC mengungkapkan
bahwa produk kristal adalah campuran 88% sesamin dan 12% sesamolin. Campuran lignan yang
terisolasi dikenai HPLC semi preparatif dan TLC untuk menghasilkan pemisahan yang sukses antara
sesamin dan sesamolin yang diduga dalam dua fraksi independen. Kemurnian senyawa yang diisolasi
dikonfirmasi oleh TLC dan LC-MS. Detail struktur isolat dikonfirmasi oleh NMR. Sesamolin yang
dimurnikan dalam penelitian ini selanjutnya diuji dengan sukses untuk membuktikan bahwa itu dapat
berfungsi sebagai standar biokimia yang dapat diandalkan untuk analisis keanekaragaman lignan di
antara plasma nutfah wijen. Relevansi metode yang dikembangkan untuk studi analitik dan untuk
produksi industri lignan untuk tujuan terapeutik dibahas.

Pendahuluan

Lignan adalah produk metabolisme sekunder yang diproduksi oleh beberapa tanaman untuk berfungsi
sebagai molekul pertahanan terhadap predator. Secara kimia mereka adalah dimer fenil propana yang
juga menunjukkan beragam aktivitas biologis. Lignan yang berasal dari tanaman minyak wijen kuno
(nama Botani - Sesamum indicum L.), yang tumbuh terutama di India, Cina, dan Myanmar, sejauh ini,
merupakan sumber utama yang penting secara klinis yang dikenal sebagai lignan wijen. Ada sebelas
lignan aglikon larut lemak yang berbeda dan enam glikosida lignan tidak larut lemak berbeda yang
dilaporkan, masing-masing, dari minyak wijen dan tepung biji wijen bebas minyak (Kamal-Eldin et al.,
1994; Moazzami et al., 2006; Kamal-Eldin et al., 2011). Dua aglikon yaitu, sesamin dan sesamolin adalah
antioksidan utama lignan. Berdasarkan sifat antioksidannya, lignan ini tahan terhadap tengik dan
karenanya memberikan umur simpan yang lama pada minyak wijen. Secara klinis sesamin menunjukkan
sifat anti-kolesterolemik dan antihipertensi (Kang et al., 1999; Nakai et al., 2003; Penalvo et al., 2006;
Nishant et al., 2008), dan baru-baru ini dikaitkan dengan stimulasi diferensiasi osteoblas. dalam sel induk
adiposa (Wanachewin et al., 2012). Sesamolin di sisi lain menunjukkan sifat antikanker terhadap sel
leukemia limfoid manusia (Miyahara et al., 2001), sedangkan lignan minor wijen seperti sesamol,
sesaminol dan pinoresinol, menghambat peroksidasi lipid membran dan kerusakan DNA (Osawa, 1999;
Kang et al. al., 1998; Parihar et al., 2006). Ketersediaan jumlah lignan individu yang cukup dalam bentuk
murni dengan biaya terjangkau sangat penting untuk aplikasi mereka dalam terapi dan analisis biokimia.
Sementara standar sesamin murni mahal, ketersediaan sesamolin standar sangat jarang (Amarowicz et
al., 2001; Hemalatha dan Ghafoorunissa, 2004). Sebuah tinjauan literatur saat ini tentang wijen lignan
mengungkapkan bahwa fokus penelitian saat ini terutama pada pengayaan persiapan lignan individu
dalam bentuk murni (Sok et al., 2009), diikuti oleh penelitian tentang pemetaan keanekaragaman lignan
dalam plasma nutfah wijen untuk perbaikan genetik tanaman untuk konten lignan (Laurentin et al.,
2008). Beberapa upaya telah dilakukan sebelumnya untuk isolasi dan pemurnian lignan individu dari
minyak wijen dan biji-bijian (Tracy, 1958; Amarowicz et al., 2001; Hemalatha dan Ghafoorunissa, 2004;
Reshma et al., 2010; Zhou et al., 2010) . Metode yang diadopsi sejauh ini sebagian besar hanya
menghasilkan campuran lignan (sesamin dan sesamolin) daripada panen individu dalam bentuk murni
dengan yang terakhir terus jauh dari memuaskan (Reshma et al., 2010; Zhou et al., 2010; Chami et al.,
2013). Oleh karena itu sangat penting bahwa protokol dikembangkan untuk isolasi bentuk murni dari
lignan dalam skala industri dan kemurnian mereka dikonfirmasi sebelum mereka bekerja dalam aplikasi
medis, dalam studi yang melibatkan pengembangan obat berbasis target dan dalam biokimia analitik.

Material method

Material

Minyak wijen merek Idhayam komersial dari pasar lokal Pondicherry, India digunakan sebagai sumber
untuk isolasi sesamin dan sesamolin. Sesamin (Cat No. S9314), sesamol (Cat No. S8518) dan standar
naringenin (Cat No. N5893) dari Sigma Aldrich, aseton dan AR grade isooctane, metanol dan air kadar
HPLC, pelat pelat Kieselgel Silica 60 F254 (Cat No. 1.05554.0007) dari Merck dan etanol absolut dari
Bengal Chemicals, India digunakan dalam percobaan. Varietas wijen dengan warna kulit biji yang
berbeda, yaitu putih (Rajeswari, Shekhar, Phuletil, Praghti), hitam (Paiyur, Krishna, JLT1, Prachi) dan
coklat (Uma, Nirmala, Vinayak, Kallika) diperoleh dari National Bureau of Plant Genetic Sumberdaya,
New Delhi, dan dipelihara di kebun eksperimental Departemen kami digunakan untuk analisis
keanekaragaman lignan.

Metode

Isolasi lignan dari minyak wijen

Lignan wijen diisolasi dari minyak mengikuti metode yang dijelaskan dalam Hemalatha dan
Ghafoorunissa (2004) (Biji wijen / minyak. Biji wijen (sampel pasar atau sampel yang diidentifikasi secara
botani) dan minyak komersial diperoleh dari berbagai negara bagian di India. Minyak diekstraksi dengan
eter dari 5 g biji menggunakan alat Soxhlet. Untuk minyak yang diperoleh ditambahkan 0,5 g natrium
sulfat untuk menghilangkan kelembaban, dan eter dihilangkan dengan menggunakan rotary
evaporator.) dengan beberapa modifikasi. Lima ratus mililiter minyak wijen dilarutkan dalam aseton
dengan perbandingan 1: 8 (v / v) dan diinkubasi untuk semalam pada suhu − 80◦C. Perawatan ini
menyebabkan pengendapan trigliserida yang kemudian dipisahkan dengan penyaringan vakum melalui
membran nilon 0,45 m pada suhu 4 ◦C. Filtrat menjadi sasaran penguapan putar untuk menghasilkan
minyak kuning. Yang terakhir dicampur dengan isooctane pada 1: 8 (v / v) dan diinkubasi selama 4-5 hari
pada suhu 4◦C untuk menginduksi kristalisasi lignan. Lignan kristal yang diperoleh dikumpulkan melalui
filtrasi melalui kertas saring Whatman No. 1 dan dikeringkan pada suhu kamar. Sejumput kristal
dipasang di bawah fotomikroskop stereo zoom SMZ 1000 Nikon untuk observasi dan kristal yang
representatif difoto.
HPLC Analitik

Kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC) dilakukan untuk menguji kemurnian lignan yang terisolasi. HPLC
buatan Shimadzu (model LCATVP) yang dilengkapi dengan fase terbalik Spincotech mengaktifkan kolom
fase terbalik C18 (250 mm × 4,6 mm, ukuran partikel 5-m) yang dilengkapi dengan detektor UV (model
SPD-10AVP) digunakan. Fase gerak terdiri dari metanol: air (70:30) dijalankan pada laju aliran 0,7 ml /
menit. Puncak terdeteksi pada 290 nm. Untuk analisis HPLC, kristal lignan dilarutkan dalam metanol
tingkat HPLC untuk membuat stok 1 mg / ml. Larutan lignan disaring melalui membran nilon 0,45-m
sebelum disuntikkan ke dalam HPLC. Sampel 10-l dari 0,0001 M standar sesamin / sesamol / naringenin,
secara independen maupun dalam campurannya disuntikkan ke dalam HPLC untuk menentukan waktu
retensi mereka.

Pemisahan HPLC semi preparatif dari sesamin dan sesamolin

HPLC semi preparatif dilakukan untuk memisahkan sesamin dan sesamolin dari kristal lignan primer
menjadi dua fraksi terpisah. Mesin yang sama dijelaskan untuk HPLC analitik di atas tetapi dilengkapi
dengan fase terbalik semi preparatif Phenominex Luna C18 dimensi 250 mm × 10 mm i.d., ukuran
partikel 10-m digunakan. Fase gerak yang dijelaskan untuk HPLC analitik di atas dijalankan dengan laju
aliran 3,1 ml / menit (Amarowicz et al., 2001). 300-l larutan 1 mg / ml lignan disiapkan dalam metanol
tingkat HPLC disuntikkan ke dalam HPLC. Puncak terdeteksi pada 290 nm. Begitu puncak sesamin
muncul pada 24,34 menit pada monitor komputer, fraksi dikumpulkan secara manual dalam botol
reagen yang terpisah berulang kali dengan 50 injeksi. Fraksi sesamolin dikumpulkan dengan cara yang
sama dengan penampilan puncak pada 31,75 menit. Pelarut dari fraksi yang terkumpul diuapkan
menggunakan rotary evaporator untuk mendapatkan fraksi bubuk sesamin dan sesamolin dalam dua
fraksi terpisah (Fraksi I dan Fraksi II).

Kromatografi lapis tipis (KLT)

TLC juga dilakukan untuk menemukan kemurnian senyawa yang diisolasi. Lignan dilarutkan dalam
kloroform pada 1 mg / ml dan terlihat pada pelat TLC bersama dengan standar sesamin dan sesamol.
TLC dikembangkan dengan campuran pelarut yang terdiri dari Chloroform, Benzene dan Methanol
dalam perbandingan 60: 40: 1 dan bintik-bintik divisualisasikan dalam ruang yodium (Kamal-Eldin et al.,
1994). Bergantian TLC divisualisasikan di bawah HPTLC-UV analyzer. Untuk mendapatkan hasil yang lebih
baik dari sesamin dan sesamolin, tiga hingga empat TLC dijalankan dengan memuat 1 ml sampel stok 10
mg / ml sebagai satu garis lurus / pita pada pelat 20 cm × 20 cm dan TLC dijalankan bersama dengan
sesamin komersial sebagai standar. TLC setelah pengembangan divisualisasikan di bawah UV dan fraksi
yang sesuai dengan sesamin diduga dan sesamolin putatif dikumpulkan menjadi dua botol terpisah
dengan scrapping. Lignan kemudian dilepaskan dari silika dengan melarutkan dalam 20 ml kloroform
sebagai dua fraksi terpisah. Lignan dari dua fraksi dikristalisasi ulang dengan penguapan pelarut pada
suhu kamar dan diberi nama putamin sesamin dan putatif sesamolin

Kromatografi cair-spektroskopi massa (LC-MS) Para sesamin dan sesamolin diduga diisolasi oleh TLC
dilarutkan dalam metanol dan 10-l sampel disuntikkan ke dalam sistem UFLC Prominence (Shimadzu
Corporation, Kyoto, Jepang) melalui loop sampel rheodyne. Sistem ini dilengkapi dengan kolom Oimp
C18 Shimpack fase terbalik (10 × 4 mm, ukuran partikel 5-m). Sampel dielusi secara isokratik dengan 70%
metanol dijalankan pada laju aliran konstan 0,7 ml / menit dalam mode sampler otomatis. Eluen dipecah
dan diperkenalkan ke antarmuka (probe ESI) dari spektrometer massa quadruple tunggal (2.10EV,
Shimadzu Corporation, Kyoto, Jepang). Nitrogen pada aliran 1,5 l / mnt digunakan sebagai gas nebulizer
untuk membentuk semprotan halus; tetesan besar selanjutnya diatur dengan menggunakan aliran 10 l /
menit gas pengering nitrogen. Analisis dilakukan dalam mode SCAN. Hasil spektral diproses dengan
perangkat lunak solusi LC-MS V 3.4.

Studi resonansi magnetik nuklir (NMR)

Untuk penentuan struktur empiris, putamin sesamin dan sesamolin putatif dilarutkan dalam CDCl3 dan
dikenai spektroskopi resonansi magnetik nuklir-Fourier (Model Bruker: Avance-Ii). NMR dioperasikan
dengan cryomagnet kekuatan medan 9,4 T dan gelombang radio 400 MHz dan 100 MHz yang diterapkan
masing-masing untuk mendapatkan data 1H dan 13C NMR.

Perhitungan faktor respon dan penentuan konsentrasi dalam sampel yang tidak diketahui 0,0001 M
masing-masing naringenin sebagai standar internal, sesamin, sesamol dan sesamolin (terisolasi) sebagai
standar disiapkan. 10-l standar yang disebutkan di atas disuntikkan, secara individual maupun dalam
campuran, ke dalam HPLC analitik untuk menentukan waktu retensi standar dan untuk menghitung
faktor respons setelah Kupiec (2004). Faktor respons (F) dihitung menggunakan rumus F = Ax [S] / As [X]
di mana Ax dan As adalah daerah puncak standar referensi dan standar internal masing-masing, [X] dan
[S] adalah konsentrasi standar referensi dan standar internal masing-masing dalam campuran. Untuk
analisis lignan dalam ekstrak etanol biji, sampel disiapkan dengan mencampur 10-l ekstrak dengan 5-l
0,0001 M naringenin. 10 -l campuran ini diinjeksikan ke dalam kolom HPLC. Konsentrasi sesamin dan
sesamolin dalam sampel yang tidak diketahui ditentukan dengan substitusi nilai dalam formula yang
disebutkan di atas.

Hasil

3.1. Isolasi kristal lignan dari minyak wijen dan penilaian kemurniannya oleh HPLC Metode yang
dijelaskan dalam penelitian ini menghasilkan rata-rata 2,8 g / l lignan dari minyak wijen. Minyak kuning
pada pengobatan dengan isooctane pada suhu 4◦C menyebabkan kristalisasi bertahap lignan dan
prosesnya memakan waktu 5 hari untuk menyelesaikan langkah pertama ini. Pandangan kasar kristal
transparan ke kristal lignan yang terbentuk dalam lingkungan isooctane disajikan pada Gambar. 1. HPLC
analitik dari lignan yang diisolasi menghasilkan dua puncak (Gambar 2). Puncak besar menunjukkan
waktu retensi (RT) pada 23,63 sesuai dengan identitas standar sesamin. Puncak kedua yang lebih kecil
memiliki RT 31,71 (Gbr. 2). Dari laporan yang diterbitkan disimpulkan bahwa puncak ini mengidentifikasi
dengan RT sesamolin. Perhitungan rasio luas puncak di bawah metabolit diduga dengan luas total semua
puncak (hanya dua dalam kasus kami) dalam kromatogram mengungkapkan bahwa kristal lignan yang
diperoleh adalah campuran yang terdiri dari 88% sesamin dan 12% sesamolin.

Pemisahan persiapan sesamin dan sesamolin

HPLC semi preparatif lignan terisolasi dilakukan untuk memisahkan sesamin dari sesamolin. Proses ini
menghasilkan dua fraksi yang diberi label F-I dan F-II. HPLC analitik dari FI menunjukkan bahwa itu terdiri
dari hampir 98,7% sesamin murni seperti yang digambarkan oleh puncak terbesar dengan RT 24,34 dan
bahwa F-II dari sesamolin putatif sangat murni dilambangkan dengan cara yang sama oleh puncak utama
dengan kemurnian 97,4% pada RT dari 31,75. Hasil ini mengkonfirmasi keberhasilan isolasi dari sesamin
dan sesamolin masing-masing dengan kemurnian lebih dari 97%. Demikian pula TLC dari larutan kristal
lignan yang terisolasi menunjukkan adanya dua pita yang menunjukkan itu adalah campuran dan fraksi
FI dan F-II, dari HPLC semi preparatif menunjukkan pita-pita yang menonjol yang berhubungan dengan
sesamin dan sesamolin yang masing-masing mengkonfirmasi isolasi mereka dengan kemurnian yang
sangat tinggi. (Gbr. 3). HPLC semi preparatif menghasilkan kualitas lignan murni yang cukup baik,
hasilnya ternyata sangat rendah. Untuk mendapatkan hasil yang lebih baik dari sesamin dan sesamolin
diduga dilakukan upaya untuk menjalankan TLC skala besar pada pelat TLC 20 cm × 20 cm dalam skala
preparatif. Tiga jalan tersebut, pada pemulihan, menghasilkan sekitar 20 mg dan 6 mg diduga sesamin
dan sesamolin. Fraksi lignan yang diisolasi sedemikian rupa juga menunjukkan puncak soliter dalam
HPLC yang mengkonfirmasi kemurnian hampir 99% mereka (data tidak ditampilkan).

Analisis LC-MS dari dugaan sesamin dan sesamolin

Analisis massa dilakukan untuk mengkonfirmasi identitas senyawa yang diisolasi dengan TLC. LC-MS dari
fraksi yang sesuai dengan sesamin putatif menunjukkan adanya puncak karakteristik dengan m / z 354
sesuai dengan rasio m / z dari sesamin murni (Gbr. 4A). Demikian pula LC-MS dari fraksi sesamolin
diduga menunjukkan adanya puncak karakteristik dengan m / z 370 sesuai dengan m / z sesamolin
murni yang dijelaskan dalam literatur (Gambar 4B). Daftar ion molekuler yang disimpulkan dari data LC-
MS disajikan pada Tabel 1. Hasilnya menunjukkan bahwa senyawa lain yang ada dalam isolat lignan
primer adalah sesamolin.

NMR dari sesamin dan sesamolin diduga

The 1H dan 13C NMR dari diduga putamin dan sesamolin putatif disajikan pada Gambar. 5A-D. Sesamin
menjadi molekul simetris, 13C NMR menunjukkan 10 puncak yang mewakili perubahan kimia setengah
dari jumlah atom karbon yang ada dalam molekul (Gbr. 5A). Sesamolin adalah molekul asimetris, dan
karenanya menunjukkan pergeseran kimiawi untuk semua 20 atom karbon yang ada (Gbr. 5C). Demikian
pula 1H NMR menunjukkan adanya 9 dan 18 puncak masing-masing untuk sesamin dan sesamolin yang
sesuai dengan jumlah masing-masing atom hidrogen yang ada dalam molekul ini (Gambar 5B dan D).
Dengan demikian kemurnian dan keaslian struktural senyawa yang diisolasi dikonfirmasi.

Validasi putam sesamolin sebagai standar dalam studi keragaman lignan dalam plasma nutfah wijen.

Untuk memvalidasi kegunaan sesamolin putatif yang diisolasi dalam penelitian ini, keanekaragaman
metabolik wijen untuk lignan besar dipelajari dengan analisis HPLC dari ekstrak etanol biji. Langkah-
langkah utama yang melibatkan kalibrasi HPLC untuk lignan standar, perhitungan faktor respons mereka
menggunakan standar internal, isolasi lignan dari sampel dan analisis HPLC sampel untuk menentukan
konten lignan dijelaskan di sini.
HPLC standar dan perhitungan faktor respons

HPLC naringenin standar internal ketika dijalankan secara terpisah memberikan puncak tunggal dengan
waktu retensi (RT) 7,11 menit. Sesamol, sesamin dan sesamolin diduga dalam penelitian ini memberikan
puncak dengan RTs masing-masing 6,08, 23,24 dan 31,63 menit. Demikian pula HPLC dari campuran
standar memberikan puncak dengan RT yang sesuai dengan standar yang dijalankan secara individual
(Gbr. 6). Faktor-faktor respons yang dihitung untuk sesamol, sesamin dan sesamolin putatif sehubungan
dengan standar internal (naringenin) masing-masing adalah 0,08, 0,11 dan 0,09. Faktor respons
digunakan untuk kuantifikasi senyawa ini dalam lignan mentah yang diisolasi dari biji plasma nutfah
wijen

Analisis HPLC lignan dari biji varietas yang berbeda dari S. indicum L.

HPLC dari ekstrak etanol biji wijen dengan naringenin sebagai standar internal tergantung pada varietas
menunjukkan adanya 7-12 puncak yang berbeda sesuai dengan banyak lignan yang berbeda dalam
sampel ini (Gbr. 7). Tiga puncak berhubungan dengan sesamol, sesamin dan sesamolin seperti yang
diungkapkan oleh waktu retensi mereka bertepatan dengan standar referensi masing-masing (Gambar 6
dan 7). Konsentrasi tiga senyawa dihitung menggunakan faktor respon dan data disajikan pada Tabel 2.
Variabilitas yang signifikan diamati pada konten lignan yang dipertimbangkan dalam ketiga kelompok.

Diskusi dan kesimpulan

Padahal sesamin standar umumnya tersedia meskipun dengan biaya tinggi, sesamolin komersial sangat
jarang. Panen tinggi lignan murni adalah suatu keharusan untuk tujuan terapeutik dan untuk digunakan
sebagai standar dalam eksperimen analitis yang melibatkan tanaman dan manusia (Dar dan Arumugam,
2013). Dalam terang pentingnya mereka dalam kesehatan manusia dan ekonomi penyelidikan tentang
isolasi bentuk murni dari senyawa ini dilakukan. Upaya yang kami lakukan untuk efek ini menghasilkan
isolasi sesamin dan sesamolin dari minyak wijen yang berhasil dalam dua fraksi independen dengan
kemurnian hampir 98%.

Upaya untuk mengisolasi lignan wijen terutama sesamolin telah dibuat sejak tahun 1940 ketika efek
sinergis dari minyak wijen untuk piretrin insektisida dilaporkan (Tracy, 1958). Sejak itu fokus utama telah
dibuat untuk mengisolasi dua lignan aglycon utama yaitu, sesamin dan sesamolin dari berbagai sumber
(Doskotch dan El-Feraly, 1969; Baures et al., 1992; Kamal-Eldin et al., 1994; Amarowicz et al., 2001;
Hemalatha dan Ghafoorunissa, 2004; Reshma et al., 2010; Zhou et al., 2010). Baru-baru ini, Williamson
et al. (2008) menjelaskan beberapa metode baru yang melibatkan deteksi array fotodioda untuk analisis
sesamin. Isolasi lignan melibatkan dua langkah utama. Langkah pertama adalah menghilangkan
trigliserida, menggunakan pelarut seperti-butyrolactone / n-hexane / aseton atau secara istimewa
melarutkan lignan dalam etanol alifatik atau metanol. Langkah kedua melibatkan kristalisasi lignan dari
residu yang diperoleh dari langkah pertama dimana pilihan pelarut yang digunakan adalah etil asetat /
dietil eter / isooctane. Dalam penelitian kami, kami menemukan kombinasi aseton dan isooctane
menjadi yang memuaskan untuk mencapai isolasi lignan berkualitas baik. Meskipun, kami belum
menguji materi yang tidak dapat disangkal (USM) untuk konten lignan, sering dianggap bahwa USM
diperkaya dengan lignan. Reshma et al. (2010), bagaimanapun, telah mengamati bahwa kristalisasi
lignan langsung dari ekstrak metanol minyak menghasilkan 10 g sedangkan USM kristal menghilangkan
ekstrak metanol menghasilkan 1 g lignan per 100 g minyak.

Pengamatan kami menunjukkan bahwa kristal yang menghasilkan lingkungan isooctane cukup baik
untuk mendapatkan jumlah yang wajar dari sesamin dan sesamolin dalam dua fraksi terpisah dengan
kualitas yang setara dengan standar analitik. Kualitas kristal lignan primer yang kami peroleh berbeda
dengan pengamatan Hemalatha dan Ghafoorunissa (2004). Laporan mereka menunjukkan kristal
sesamin ini 100% murni tetapi kami menemukan itu sebagai campuran sesamin dan sesamolin seperti
yang telah dilaporkan dalam banyak penelitian sebelumnya (Chami et al., 2013).

Persiapan murni lignan individu diperlukan untuk terapi, studi analitis dan untuk penjelasan struktural
mereka. Upaya awal kami untuk memisahkan sesamin dan sesamolin dengan HPLC semi preparatif
(spHPLC) melibatkan injeksi berulang dari larutan kristal lignan yang tidak murni yang diperoleh.
Aktivitas serupa dilaporkan oleh Amarowicz et al. (2001) yang mengadopsi spHPLC untuk pemisahan dua
senyawa dari USM. Konsumsi volume tinggi pelarut dan instrumentasi canggih yang terlibat membuat
pemurnian lignan oleh spHPLC merupakan proses yang mahal. Karena hasil sesamolin yang rendah
dicapai oleh spHPLC, kami mengandalkan TLC untuk hasil yang lebih baik dari senyawa. TLC sebenarnya
sederhana, cepat dan tidak memerlukan banyak instrumentasi dan karena itu bisa menjadi metode
pilihan untuk pemurnian lignan dalam skala kecil.

Dalam sebagian besar kasus, identitas lignan yang terisolasi dikonfirmasi oleh persamaan keseimbangan
massa daripada NMR. Salah satu keunikan dari laporan kami adalah konfirmasi struktural dari sesamin
dan sesamolin yang diisolasi dalam penelitian ini oleh NMR yang mengkonfirmasi lebih lanjut bahwa
senyawa yang diisolasi sangat murni. Pengotor kecil yang ada dalam persiapan lignan individu tidak
mengganggu data NMR kami dan hasilnya jatuh sejalan dengan laporan NMR dari sesamin dari Stachys
mialhesi (Laggoune et al., 2011) dan sesamolin yang diisolasi dari S. indicum ( Kang et al., 1995).

Kontribusi penting lainnya dari penelitian ini adalah penggunaan sesamolin diduga diisolasi di rumah,
sebagai standar untuk memperkirakan keragaman lignan dalam plasma nutfah wijen. S. indicum adalah
satu-satunya sumber utama lignan antioksidan yang dipertimbangkan. Sebagian besar varietas tanaman
ini berproduksi buruk dan membutuhkan banyak input agronomi untuk hasil yang lebih baik. Upaya
akhir sedang dilakukan untuk perbaikan genetik tanaman melalui pemuliaan selektif (Amarowicz et al.,
2001; Zhang et al., 2013). Dalam hal ini studi tentang keanekaragaman lignan dalam plasma nutfah wijen
akan sangat membantu peternak untuk mengidentifikasi varietas untuk konten lignan tinggi untuk
pemijahan wijen. Baru-baru ini, Lee et al. (2013) menjelaskan metode yang masuk akal untuk estimasi
kuantitatif sesamin dan sesamolin dalam sampel komersial dengan menggunakan naftalena sebagai
standar internal daripada naringenin. Penggunaan metode ini bersama dengan sesamolin yang diisolasi
dalam penelitian kami dapat menghasilkan analisis yang tepat dari lignan wijen dalam plasma nutfah
serta dalam produk lainnya.
Persiapan sesamin murni dan / atau sesamolin murni pada skala industri belum tercapai (Chami et al.,
2013). Kami mampu mengisolasi hampir 99% sesamin murni dan 98% sesamolin murni dengan hasil
yang baik yang dapat digunakan secara langsung untuk tujuan terapeutik atau untuk digunakan sebagai
standar dalam studi analitik lignan. Untuk produksi industri sesamin murni dan sesamolin, kristal lignan
primer dapat dikenakan kromatografi kolom seperti yang dilaporkan dalam Lee dan Choe (2006). Kami
percaya bahwa penyempurnaan metode yang dilaporkan di sini pasti akan membuka jalan untuk
memproduksi sesamin dan sesamolin pada skala industri yang pada akhirnya akan menghasilkan
pengurangan biaya dan ketersediaannya yang lebih baik.