ANALISIS KADAR BETA KAROTEN PADA MINYAK

SAWIT MERAH (RED PALM OIL) DENGAN

METODE SPEKTROFOTOMETRI VIS

LAPORAN TUGAS AKHIR

Qodariyati.S

13171079

PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS BHAKTI KENCANA
BANDUNG
2019
 ABSTRAK
ANALISIS KADAR BETA KAROTEN PADA MINYAK
SAWIT MERAH (RED PALM OIL) DENGAN
METODE SPEKTROFOTOMETRI VIS

Oleh :
Qodariyati.S
13171079

Minyak sawit merah memiliki kandungan gizi yang lebih lengkap

dibandingkan dengan minyak zaitun, kedelai dan jagung. Adapun
kandungan bioaktif pada minyak sawit merah yaitu mikronutrien
yang tinggi seperti karotenoid yang merupakan provitamin A yaitu
α-karoten, β-karoten dan vitamin E. Penelitian ini bertujuan untuk
mengetahui kadar beta karoten pada produk minyak sawit merah
(red palm oil) dengan metode spektrofotometri vis. Proses analisis
senyawa beta karoten dilakukan dengan 2 tahapan yaitu
transesterifikasi kemudian dilanjutkan dengan ekstraksi senyawa
betakaroten dengan pelarut campuran dietil eter : aseton (1:3) Hasil
penelitian menunjukan kadar beta karoten pada sampel A berbentuk
cair lebih kecil yaitu 8,0649 mg/g dibandingkan kadar beta karoten
sampel B yang berbentuk padatan sebesar 10,1905 mg/g.

Kata kunci : minyak sawit merah, beta karoten, provitamin A,

spektrofotometri Vis.

ii
 ABSTRACT
ANALYSIS OF BETA CAROTENE LEVELS IN
RED PALM OIL PRODUCTS USING VIS
SPECTROPHOTOMETRY METHOD

By:

Qodariyati.S

13171079

Red palm oil has a more complete nutritional content than olive oil,
soybeans and corn. The bioactive content in red palm oil is high
micronutrients such as carotenoids which are provitamin A, namely
α-carotene, β-carotene and vitamin E. This study aims to determine
the levels of beta carotene in red palm oil products using the UV-Vis
spectrophotometry method. The process of analyzing beta carotene
compounds was carried out with 2 stages, namely transesterification
and then followed by extraction of beta-carotene compounds with a
mixture of diethyl ether : aceton (1: 3). The results showed that beta
carotene levels in liquid sample A were smaller at 8.0649 mg / g
compared to solid beta carotene content in sample B which was
10.1905 mg / g.

Keywords: red palm oil, beta carotene, provitamin A, Vis

spectrophotometry.

iii
iv
KATA PENGANTAR

Bismillahirrahmaanirrahim
Puji syukur kehadirat Allah SWT karena atas rahmat dan karunia-
Nya penulis dapat menyelesaikan Laporan Tugas Akhir ini dengan
judul “Analisis Kadar Beta Karoten Pada Minyak Sawit Merah
(Red Palm Oil) Dengan Metode Spektrofotometri Vis” guna
memenuhi sebagian persyaratan untuk dapat memperoleh gelar
Strata Satu Farmasi pada Sekolah Tingg Farmasi Bandung.

Penyelesaian Laporan Tugas Akhir ini tidak lepas dari bantuan

dukungan serta doa dari berbagai pihak, oleh karena itu pada
kesempatan ini penulis menyampaikan ucapan terima kasih yang
sebesar-besarnya kepada :
1. Ketua Sekolah Tinggi Farmasi Bandung Dr. Entris Sutrisno,
S.Farm., MH.Kes., Apt.
2. Ibu Emma Emawati, S.T., M.Si selaku pembimbing utama atas
bimbingan, ketulusan, kesabaran dan keikhlasannya dalam
memberikan arahan, pengertian serta sarannya.
3. Ibu Winasih Rachmawati, M.Si., Apt selaku pembimbing serta
atas bimbingan, ketulusan, kesabaran dan keikhlasannya dalam
memberikan arahan, pengertian serta sarannya.
4. Keluarga (Mak, Ayah, Udo, Adek) serta saudara yang telah
memberikan segala dukungan, doa, dan cinta kasih yang tanpa
batas yang tiada henti untuk penulis.
5. Keluarga rantauan Lampung ke Bandung yang telah
mendukung, menghibur dan menguatkan dikala hati gundah
sehingga kembali semangat.

v
6. Segenap dosen dan staff Sekolah Tinggi Farmasi Bandung yang
telah banyak memberikan ilmu dan pelajaran yang berharga.
7. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang
secara langsung maupun tidak langsung terlibat pada
penyusunan tugas akhir ini.

Penulis menyadari bahwa Laporan Tugas Akhir ini masih jauh dari
sempurna, banyak kekurangan yang terdapat dalam Laporan Tugas
Akhir ini karena keterbatasan pengetahuan dan pengalaman penulis.
Segala bentuk saran dan kritik yang bersifat membangun sangat
penulis harapkan.
Bandung, Juli 2019

Penulis

vi
 DAFTAR ISI

ABSTRAK................................................................................ i
PENGESAHAN........................................................................ ii
KATA PENGANTAR.............................................................. iii
DAFTAR ISI............................................................................. iv
DAFTAR GAMBAR DAN ILUSTRASI................................. v
DAFTAR TABEL..................................................................... vi
Bab I Pendahuluan.................................................................... 1
I.1 Latar Belakang..................................................................... 1
I.2 Rumusan Masalah................................................................ 3
I.3 Tujuan Penelitian................................................................. 3
I.4 Waktu dan Tempat Penelitian.............................................. 3
Bab II Tinjauan Pustaka............................................................ 4
II.1 Minyak Nabati.................................................................... 4
II.2 Minyak Sawit Merash......................................................... 5
II.3 Kandungan Minyak Sawit Merah....................................... 6
II.4 Beta Karoten....................................................................... 7
II.4.1 Kebutuhan Vitamin A...................................................... 8
II.4.2 Kekurangan Minyak Sawit Merah................................... 9
II.5 Spektrofotometri UV-VIS.................................................. 9
II.6 Validasi Metode.................................................................. 10
II.6.1 Linearitas......................................................................... 10
II.6.2 Batas Deteksi................................................................... 11
II.6.3 Batas Kuantifikasi........................................................... 12
II.6.4 Akurasi............................................................................ 13
II.6.5 Presisi.............................................................................. 14

vii
Bab III Metode Penelitian......................................................... 16
Bab IV Alat dan Bahan............................................................. 17
Bab V Prosedur Penelitian........................................................ 18
V.1 Persiapan Sampel............................................................... 18
V.2 Ekstraksi Senyawa Beta Karoten....................................... 18
V.3 Pembuatan Larutan Induk Beta Karoten............................ 18
V.4 Penetapaan Panjang Gelombang Serapan Maksimum Beta
Karoten...................................................................................... 19
V.5 Pembuatan Kurva Kalibrasi............................................... 19
V.6 Validasi Metode Analisis................................................... 19
V.6.1 Uji Linearitas................................................................... 19
V.6.2 Uji Presisi........................................................................ 20
V.6.3 Uji Akurasi...................................................................... 20
V.7 Penetapan Kadar Beta Karoten.......................................... 21
Bab VI Hasil dan Pembahasan.................................................. 23
VI.1 Persiapan Sampel.............................................................. 23
VI.2 Penetapan Panjangan Gelombang Maksimum Beta Karoten23
VI.3 Validasi Metode Analisa................................................... 25
VI.4 Proses Ekstraksi Beta Karoten.......................................... 29
VI.4.1 Transesterifikasi............................................................. 29
VI.4.2 Ekstraksi Senyawa Beta Karoten................................... 31
VI.5 Penetapan Kadar Beta Karoten......................................... 32
Bab VII Kesimpulan dan Saran................................................. 35
DAFTAR PUSTAKA............................................................... 36

viii
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Minyak Sawit Merah (Red Palm Oil)................... 5

Gambar 2.2 Struktur Beta Karoten............................................ 7
Gambar 2.3 Struktur retinol (Vitamin A).................................. 8
Gambar 4.1 Sampel Minyak Sawit Merah (red palm oil)......... 23
Gambar 4.2 Panjang Gelombang Maksimum Beta Karoten..... 24
Gambar 4.3 Kurva Kalibrasi Beta Karoten............................... 26
Gambar 4.4 Reaksi Transesterifikasi........................................ 30
Gambar 4.5 Hasil Transesterifikasi........................................... 31

ix
 DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Standar Mutu Special Prime Bleach (SPB),

dibandingkan dengan Mutu Ordinari Minyak Kelapa Sawit.... 6
Tabel 2.2 Kandungan Karotenoid dalam Berbagai Jenis Bahan
Pangan ...................................................................................... 7
Tabel 6.1 Linearitas................................................................... 25
Tabel 6.2 Regresi Linear........................................................... 26
Tabel 6.3 Presisi Interday Beta Karoten Minyak Sawit Merah 27
Tabel 6.4 Akurasi Beta Karoten Minyak Sawit Merah ............ 29
Tabel 6.5 Kadar Beta Karoten .................................................. 34

x
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Perhitungan Larutan KOH 2% dan BHT 0,01%... 36

Lampiran 2 Perhitungan Larutan Induk.................................... 38
Lampiran 3 Perhitungan Kurva Kalibrasi................................. 39
Lampiran 4 Perhitungan Kadar Beta Karoten........................... 41

xi
 Bab I Pendahuluan

I.1 Latar Belakang

Produsen minyak sawit mentah (CPO) terbesar didunia saat ini
adalah Indonesia. Pada tahun 2012 luas lahan perkebunan
diperkirakan sebesar 9 juta hektar, dengan produksi CPO 24 juta ton
per tahun, degan komposisi 5 juta dalam negeri, sementara 80%
sisanya diekspor ke luar negeri. Namun sayangnya buah kelapa sawit
di Indonesia hanya dimanfaatkan sebagai bahan utama dalam
pembuatan minyak makan atau minyak goreng. Pemanfaatan minyak
sawit merah ternyata dapat dikembangkan menjadi berbagai produk
pangan dan kesehatan karena kaya akan berbagai senyawa bioaktif
yang memiliki sifat fungsional dapat digunakan sebagai minyak
nabati atau nutraceutical yang potensial, yaitu minyak untuk
menumis, minyak salad, minuman emulsi, produk spreads
(mayonnaise, margarine, dll) (Priatni dkk, 2017)

Minyak sawit merah memiliki kandungan gizi yang lebih lengkap

dibandingkan dengan minyak zaitun, kedelai dan jagung. Adapun
kandungan bioaktif pada minyak sawit merah yaitu mikronutrien
yang tinggi seperti karotenoid yang merupakan provitamin A yaitu
α-karoten, β-karoten dan vitamin E (tokoferol dan tokotrienol),
riboflavin, niasin, likopen, mineral yang terdiri dari fosfor,
potassium, kalsium, dan magnesium. Minyak sawit berwarna merah
kekuningan menandakan kandungan karotenoid yang tinggi (Sibuea,
2011).

1
 2

Salah satu jenis karotenoid yang banyak terdapat di alam dan

makanan adalah beta-karoten yang merupakan pigmen yang
ditemukan dalam tanaman. Beta-karoten juga digunakan sebagai zat
pewarna makanan seperti margarin. Selain digunakan sebagai
pigmen warna pada tanaman beta-karoten juga memiliki fungsi lain
sebagai sumber vitamin A yang sangat diperlukan tubuh manusia.
Beta-karoten disebut sebagai provitamin A karena satu molekul beta-
karoten, dapat dikonversi menjadi 2 molekul vitamin A oleh tubuh
manusia. Vitamin A diperlukan untuk penglihatan yang baik dan
kesehatan mata, untuk sistem kekebalan yang kuat, dan untuk
kesehatan kulit dan selaput lendir (Nurrahman dan Widiarnu, 2013).
[

Kandungan beta-karoten pada tanaman umumnya ditemukan pada

wortel, labu kuning, buah naga dan sayuran berwarna lainnya.
Namun ternyata minyak sawit merah juga memiliki kandungan beta-
karoten yang berpotensi untuk dikembangkan menjadi makanan atau
pangan fungsional. Dalam pembuatannya, buah kelapa sawit yang
telah dipanen akan diekstraksi menjadi larutan berwarna orange
pekat yang juga dikenal sebagai crude palm oil (CPO). Setelah
melalui proses ekstraksi, CPO akan terus mengalami penyaringan
hingga menghasilkan minyak goreng jernih siap pakai (Wulandari,
2016). Namun faktanya CPO atau minyak kelapa sawit yang belum
mengalami tahapan bleeching lebih banyak mengandung nutrisi
karena adanya kandungan beta karoten yang tinggi ditandai dengan
warna merah pada minyak dibandingkan minyak goreng jernih yang
biasa digunakan.
 3

Berdasarkan potensi senyawa beta karoten pada minyak sawit merah

sebagai senyawa obat dan adanya kandungan senyawa beta karoten
pada minyak sawit merah, maka perlu dilakukan analisis kandungan
kadar beta-karoten pada minyak sawit merah yang beredar dipasaran.
Dengan melakukan proses pemisahan senyawa betakaroten dari
minyak sawit merah dari fraksi nonpolar dan semipolar sesuai
dengan sifat betakaroten yang nonpolar.

I.2 Rumusan Masalah

Berapa kadar beta karoten pada minyak sawit merah (red palm oil)
yang beredar dipasaran?

I.3 Tujuan Penelitian

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui kadar beta
karoten pada minyak sawit merah (red palm oil) dengan metode
spektrofotometri VIS.

I.4 Waktu dan Penelitian

Waktu penelitian dilaksanakan dari bulan Maret – Juni 2019 di
Laboratorium Politeknik Kesehatan Bandung.
 BAB II. Tinjauan Pustaka

II.1 Minyak Nabati

Jenis minyak yang dihasilkan oleh alam dibedakan menjadi dua
golongan yaitu minyak nabati dan minyak hewani yang bisa dimakan
(edible fat). Dalam tanaman atau hewan minyak tersebut berfungi
sebagai sumber cadangan energi. Adapun perbedaan umum antara
lemak atau minyak nabati dan hewani adalah lemak hewani
mengandung kolesterol sedangkan minyak nabati mengandung
fitosterol, kadar asam lemak tidak jenuh dalam minyak hewani lebih
kecil dari minyak nabati, lemak hewani memiliki bilangan Reichert
Meissl lebih besar serta bilangan Polenske lebih kecil dari pada
minyak nabati. Sumber minyak nabati yang biasa digunakan ialah
minyak kelapa sawit, jagung, zaitun, kedelai, bunga matahari dan
lainnya.

Lemak dan minyak terdiri dari trigliserida campuran yang

merupakan ester dan gliserol dan asam lemak rantai panjang.
Sebagian besar minyak nabati berbentuk cair karna mengandung
sejumlah asam lemak tidak jenuh. Minyak sawit disebut sebagai
minyak dengan kadar lemak jenuh moderat yang menjadikannya
stabil secara oksidatif karena kandungan asam lemak jenuh dan tak
jenuhnya seimbang (Sibuae, 2014).

4
 5

II.2 Minyak Sawit Merah

Selama ini buah kelapa sawit di Indonesia hanya dimanfaatkan
sebagai bahan utama dalam pembuatan minyak makan atau minyak
goreng. Dalam pembuatannya, buah kelapa sawit yang telah dipanen
akan diekstraksi menjadi larutan berwarna orange pekat yang juga
dikenal sebagai crude palm oil (CPO). Setelah melalui proses
ekstraksi, CPO akan terus mengalami penyaringan hingga
menghasilkan minyak goreng jernih siap pakai (Wulandari, 2016).

Gambar 2.1 Minyak sawit merah (red palm oil)

Minyak kelapa sawit yang belum mengalami beberapa penyaringan

faktanya lebih banyak mengandung nutrisi dibandingkan minyak
goreng jernih yang biasa digunakan. Hal ini dikarenakan didalam
minyak sawit terdapat kandungan beta karoten yang tinggi ditandai
dengan warna merah sehingga disebut minyak sawit merah.
Pemanfaatan minyak sawit merah ternyata dapat dikembangkan
menjadi berbagai produk pangan dan kesehatan karena kaya akan
berbagai senyawa bioaktif yang memiliki sifat fungsional dapat
digunakan sebagai minyak nabati yang potensial (Sibuea, 2014)
 6

II.3 Kandungan Minyak Sawit Merah

Minyak sawit merah adalah sumber alami yang kaya senyawa
bioaktif, memiliki sifat fungsional dan digunakan sebagai minyak
nabati yang potensial. Adapun kandungan bioaktif pada minyak
sawit merah yaitu mikronutrien yang tinggi seperti karotenoid (500-
700 ppm) yang merupakan provitamin A yaitu α-karoten, β-karoten
dan vitamin E (tokoferol dan tokotrienol) (1000 ppm), riboflavin,
niasin, likopen, mineral yang terdiri dari fosfor, potassium, kalsium,
dan magnesium (Sibuea, 2014).

Tabel 2.1
Standar Mutu Special Prime Bleach (SPB), dibandingkan
dengan Mutu Ordinari Minyak Kelapa Sawit.

Kandungan SPB Ordinary

Asam lemak bebas (%) 1-2 3-5

Kadar air (%) 0,1 0,1
Kotoran (%) 0,002 0,01
Besi ppm 10 10
Tembaga ppm 0,5 0,5
Bilangan Iod 53 ± 1,5 45-56
Karotenoid ppm 500 500-700

II.4 Beta Karoten

Salah satu jenis karotenoid yang banyak terdapat di alam dan bahan
makanan antara lain adalah beta-karoten C40H56 yang merupakan
jenis pigmen yang ditemukan dalam tanaman. Beta-karoten juga
dapat dikonversi menjadi vitamin A (retinol) oleh tubuh. Vitamin A
diperlukan untuk penglihatan yang baik dan kesehatan mata, untuk
 7

sistem kekebalan yang kuat, dan untuk kesehatan kulit dan selaput
lendir (Nurrahman dan Widiarnu, 2013).

Gambar 2.2 Struktur beta karoten

Tabel 2.2
Kandungan Karotenoid dalam Berbagai Jenis Bahan Pangan

Bahan Pangan µg RE/g

Jeruk 21
Pisang 50
Tomat 130
Wortel 400
Minyak Sawit Merah 5000

II.4.1 Kebutuhan Vitamin A

Pada minyak sawit merah terkandung kadar total beta karoten sekitar
500-1000 ppm yang ditandai dengan pigmen warna merah pada
minyak sawit. Fungsi beta karoten sebagai sumber vitamin A yang
sangat diperlukan tubuh manusia. Satu molekul betakaroten dapat
dikonversi menjadi dua molekul vitamin A oleh tubuh manusia,
sehingga beta karoten juga disebut sebagai provitamin A.
 8

Gambar 2.3 Struktur retinol (Vitamin A)

Vitamin A merupakan salah satu jenis vitamin yang larut lemak.

Vitamin A (Acon, Aquasol) membantu menjaga pertumbuhan
jaringan epitel, mata, rambut, dan tulang. Selain itu juga digunakan
untuk pengobatan kelainan kulit seperti acne (Kamiensky dan Keogh
2006). Vitamin A didapat dalam 2 bentuk yaitu preformed vitamin A
(vitamin A, retinoid, retinol, dan derivatnya) dan provitamin A
(karotenoid/ karoten dan senyawa sejenis) (Dewoto, 2007). Sumber
makanan vitamin A antara lain semua jenis susu, mentega, telur,
sayuran dengan daun berwarna hijau dan kuning, buah-buahan, dan
liver. Menurut U.S Recommended Dietary Allowance (RDA)
kebutuhan vitamin A pada pria dewasa sebanyak 1000 µg, wanita
dewasa 800 µg, pada kehamilan membutuhkan sebanyak 1000 µg,
dan pada ibu menyusui 1200 µg (Kamiensky dan Keogh 2006).

II.4.2 Kekurangan Minyak Sawit Merah

Kurangnya vitamin A mengakibatkan potensi terkena penyakit akan
meningkat. Berdasarkan buku Prinsip dasar Ilmu Gizi menyebutkan
bahwa pada anak balita yang kekurangan vitamin A (KVA) akan
meningkatkan kesakitan dan kematian, mudah terkena penyakit
infeksi seperti diare, radang paru-paru, pneumonia, dan akhirnya
kematian dan sebanyak tiga juta anak-anak buta karena kekurangan
vitamin A (Sibuea, 2014).

II.5 Spektrofotometri UV-VIS

 9

Spektrofotometri UV-VIS dapat digunakan untuk informasi kualitatif

dan sekaligus dapat digunakan untuk identifikasi kuantitatif obat atau
metabolitnya. Aspek kualitatif bila dilihat berdasarkan data
sperofotometri UV-VIS secara sendiri atau tunggal tidak dapat
digunakan untuk identifikasi kualitatif obat atau metabolitnya. Akan
tetapi jika digabungkan dengan cara lain seperti spektroskopi massa,
maka dapat digunakan untuk maksud identifikasi atau analisis
kualitatif suatu senyawa tersebut. Sedangkan dalam aspek
kuantitatif, suatu berkas radiasi dikenakan pada cuplikan (larutan
sampel) dan intensitas sinar radiasi yang diteruskan diukur besarnya.
Radiasi yang diserap oleh cuplikan ditentukan dengan
membandingkan intensitas sinar yang diteruskan dengan intensitas
sinar yang diserap jika tidak ada spesies penyerap lainnya. Intensitas
atau kekuatan radiasi cahaya sebanding dengan jumlah foton yang
melalui satu satuan luas penampung perdetik (Gandjar dan Rohman,
2007).

II.6 Validasi Metode

Validasi adalah proses yang digunakan untuk mengkonfirmasi
bahwa prosedur analitik yang digunakan untuk pengujian spesifik
sesuai untuk penggunaan yang diinginkan. Hasil dari metode validasi
dapat digunakan untuk menilai kualitas, reliabilitas, dan hasil
konsistensi analitik (Ermer dan Miller, 2005). Validasi biasanya
diperuntukkan untuk metode analisa yang baru dibuat atau yang
dikembangkan (Riyanto, 2014).
 10

Metode analisis perlu tervalidasi atau divalidasi kembali: (Ermer dan

Miller, 2005)
a. Sebelum diperkenalkan ke dalam penggunaan rutin
b. Terdapat perubahan kondisi yang metodenya telah tervalidasi
(misalkan instrumen dengan karakteristik yang berbeda dan
dengan matriks yang berbeda).
c. Terdapat perubahan metode dan perubahannya berada di luar
lingkup asli metode.
Beberapa parameter analisis yang harus dipertimbangkan dalam
validasi metode analisis diuraikan dan didefinisikan sebagaimana
cara penentuannya (Harmita, 2004).

2.6.1 Linieritas
Linieritas suatu metode merupakan ukuran seberapa baik kurva
kalibrasi yang menghubungkan antara respon (y) dengan konsentrasi
(x). Linieritas dapat diukur dengan melakkukan pengukuran tunggal
pada konsentrasi yang berbeda-beda. Data yang diperoleh
selanjutnya diproses dengan metode kuadarat terkecil, untuk
selanjutnya dapat ditentukan nilai kemiringan (slope), intersep, dan
koefisien korelasinya (Gandjar, 2012). Linearitas ditentukan dari
nilai koefiien kolerasi (r) yang diperoleh dari penetapan kurva baku
betakaroten. Nilai r hitung tersebut dibandingkan dengan nilai r table
dengan derajat bebas (df) = 3 dan taraf kepercayaan 99%. Selain itu,
linearitas ditentukan juga dri nilai koefisien variasi fungsi (Vx 0) yang
diperoleh dengan cara megolah data hasil penetapan kurva baku
betakaroten.

2.6.3 Batas Deteksi

 11

Batas deteksi merupakan parameter uji batas. Batas kuantitasi

merupakan parameter pada analisis renik dan diartikan sebagai
kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi
kriteria cermat dan seksama (Harmita, 2004).

Batas deteksi sering dihubungkan dengan sensitivitas metode.

Sensitivitas dari metode analisis adalah kemampuan metode untuk
membedakan konsentrasi terkecil atau massa test suatu analit. Secara
praktis sensitivitas adalah kemiringan kurva kalibrasi yang diperoleh
dengan merencanakan respon terhadap konsentrasi analit atau massa
ICH (4) menggambarkan tiga metode untuk menentukan batas
deteksi: (Huber, 2007).

a. Inspeksi Visual
Batas deteksi ditentukan oleh analisis sampel dengan
konsentrasi analit yang diketahui dan dengan penetapan tingkat
minimum di mana analit dapat dideteksi dengan baik.
b. Respon Standar Deviasi (SD) Berdasarkan SD Blanko
Pengukuran besarnya respon latar belakang analitik dilakukan
dengan menganalisa jumlah yang sesuai dari sampel blanko dan
menghitung tanggapan standar deviasi
c. Respon SD Berdasarkan Kemiringan Kurva Kalibrasi
 12

Kurva kalibrasi tertentu dipelajari dengan menggunakan sampel

mengandung analit dalam kisaran batas deteksi. Standar deviasi
adalah sisa dari garis regresi, atau standar deviasi penyadapan y
dari garis regresi, dapat digunakan sebagai standar deviasi.

2.6.4 Batas Kuantifikasi

Batas kuantifikasi didefiniskan sebagai konsentrasi analit terendah
dalam sampel yang dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang
dapat diterima pada kondisi operasional metode yang digunakan.
Sebagaimana batas deteksi, batas kuantifikasi juga diekspresikan
sebagai konsentrasi (dengan akurasi dan presisi juga dilaporkan).
Kadang-kadang rasio signal to noise 10:1 digunakan untuk
menentukan batas kuantifikasi. Jika konsentrasi batas kuantifikasi
menurun, maka presisi juga menurun. Jika presisi tinggi
dipersyaratkan, maka batas kuantifikasi yang lebih tinggi harus
dilaporkan (Gandjar, 2012).

Setiap hasil batas deteksi dan pengukuran kuantisasi harus dilakukan

verifikasi oleh tes eksperimental dengan sampel yang mengandung
analit. Hal yang sama pentingnya untuk menilai metode valida-
parameter, seperti presisi, reproduktifitas dan akurasi, mendekati
batas deteksi dan kuantisasi (Huber, 2007).

2.6.1 Akurasi
Akurasi merupakan ketelitian metode analisis atau kedekatan antara
nilai terukur dengan nilai yang diterima baik nilai konvensi, nilai
sebenarnya, atau nilai rujukan. Akurasi diukur sebagai banyaknya
 13

analit yang diperoleh kembali pada suatu pengukuran dengan

melakukan spiking pada suatu sampel. Untuk pengujian senyawa
obat, akurasi diperoleh dengan membandingkan hasil pengukuran
dengan bahan rujukan standar (Gandjar, 2012).

Kecermatan dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery)

analit yang ditambahkan. Kecermatan hasil tergantung sistematik
keseluruhan seperti upaya mencegah dapat dilakukan dengan cara
mengurangi galat sistematik tersebut seperti menggunakan peralatan
yang telah dikalibrasi, menggunakan pereaksi dan pelarut yang baik,
pengontrolan suhu, dan pelaksanaannya yang cermat, taat asas sesuai
prosedur (Harmita, 2004).

Akurasi dapat ditentukan dengan dua cara yaitu metode simulasi

(spiked placebo recover) atau metode penambahan baku (standard
addition method). Dalam metode simulasi, sejumlah analit bahan
murni yaitu larutan baku betakaroten ditambahkan ke dalam sampel
minyak sawit merah lalu campuran tersebut dianalisis dan hasilnya
dibandingkan dengan kadar analit yang yang sebenarnya. Dalam
metode penambahan bahan baku, sampel dianalisis lalu sejumlah
analit tertentu yang diperiksa ditambahkan kedalam sampel
dicampur dan dianalisis lagi. Selisih kedua hasil dibandingkan
dengan kadar sebenarnya atau yang diharapkan. Dalam kedua
metode tersebut, persen perolehan kembali dinyatakan sebagai rasio
antara hasil yang diperoleh dengan hasil yang sebenarnya (Susanti
dan Dachriyanus, 2017).
 14

2.6.2 Presisi
Presisi merupakan ukuran keterulangan metode analisis yang
biasanya diekspresikan sebagai simpangan baku relatif dari sejumlah
sampel yang berbeda signifikan secara statistik. Sesuai dengan ICH,
presisi harus dilakukan pada 3 tingkatan yang berbeda yaitu:
keterluangan, presisi antara, dan ketertiruan (Gandjar, 2012).
a. Keterulangan yaitu ketepatan pada kondisi percobaan yang
sama baik orangnya, peralatannya, tempatnya, maupun
waktunya.
b. Presisi antara yaitu ketepatan pada kondisi percobaan yang
berbeda, baik orangnya, peralatannya, tempatnya, maupun
waktunya.
c. Ketertiruan merujuk pada hasil-hasil dari laboratorium yang
lain.

Keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian

antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil
individual dari rata-rata jika prosedur diterapkan secara berulang
pada sampel-sampel yang diambil dari campuran yang homogen
(Harmita, 2004).

Presisi dinyatakan dengan koefisien variasi (KV). Dari data hasil

penetapan kadar betakaroten pada minyak sawit merah dihitung nilai
KV % kadar betakaroten dalam minyak sawit merah untuk tiap
replikasi dengan menggunakan kalkulator. Selanjutnya dihitung nilai
rata-rata KV.
15
 BAB III. Metode Penelitian

Pada penelitian ini dilakukan analisis kuantitatif kadar beta karoten

dalam produk minyak sawit merah. Tahapan kerja pada penelitian
ini adalah penyiapan bahan meliputi pengumpulan sampel minyak
sawit merah yang beredar dipasaran. Transesterifikasi dilanjutkan
dengan ekstraksi minyak sawit merah dengan pelarut dietil eter :
aseton (1:3) untuk menarik senyawa beta karoten. Pembuatan
larutan induk beta karoten, pembuatan kurva kalibrasi beta karoten,
validasi metode analisis yang meliputi penentuan linearitas,
penentuan batas deteksi dan batas kuantifikasi, penentuan presisi
dan akurasi, penentuan panjang gelombang maksimum sampel
dengan pelarut dietil eter : aseton (1:3) dan penetapan kadar beta
karoten dalam sampel minyak sawit merah.

16
 BAB IV Alat dan Bahan

IV.1 Alat
Alat-alat yang digunakan dalam proses penetapan kadar senyawa
beta karoten dalam minyak sawit merah antara lain yaitu;
Spektrofotometri UV-VIS, kuvet, labu ukur, neraca analitik,,
spatula, beaker glas, pipet ukur, gelas ukur, hot plate magnetic
stirrer, corong pisah, erlenmeyer.

IV.2 Bahan
Bahan yang digunakan dalam proses penetapan kadar beta karoten
dalam minyak sawit merah yaitu; minyak sawit merah yang beredar
dipasaran, pelarut dietil eter dan aseton, baku murni beta karoten,
NaSO4 Anhidrat, BHT 0,01%, aquadest.

17
 BAB V Prosedur Penelitian

V.1 Persiapan Sampel

Persiapan sampel meliputi pengumpulan sampel minyak sawit
merah (red palm oil) yang beredar dipasaran.

V.2 Pembuatan Larutan Induk Beta Karoten

Ditimbang beta karoten murni sebanyak 10 mg, kemudian
dilarutkan dengan dietil eter dan aseton di dalam labu ukur 10 ml,
sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi 1000 bpj. Dibuat
larutan beta karoten dengan konsentrasi 100 bpj dengan cara dipipet
menggunakan mikro pipet larutan 1000 bpj sebanyak 1 ml,
kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 10 ml dan ditambahkan
dietil eter hingga tanda batas lalu kocok hingga homogen.

V.3 Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Beta Karoten

Dibuat larutan beta karoten konsentrasi 40 bpj dengan cara dipipet 4
ml dari larutan beta karoten 100 bpj, dimasukkan ke dalam labu
ukur 10 ml dan tambahkan pelarut dietil eter dan aseton hingga
tanda batas, kocok hingga homogen. Setelah itu larutan beta karoten
konsentrasi 40 bpj diukur panjang gelombang serapan
maksimumnya dengan spektrofotometer.

18
 19

V.4 Pembuatan Kurva Kalibrasi

Pembuatan kurva kalibrasi dilakukan dengan membuat larutan seri
standar beta karoten dengan konsentrasi 20 bpj, 25 bpj, 30 bpj, 35
bpj, 40 bpj, 45 bpj dan 50 bpj. Larutan beta karoten dibuat dengan
cara dipipet larutan induk 100 bpj sebanyak 2 ml; 2,5 ml, 3 ml, 3,5
ml, 4 ml; 4,5 ml dan 5 ml kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur
10 ml, ditambahkan pelarut aseton-dietil eter hingga tanda batas dan
kocok homogen.

V.5 Validasi Metode Analisis

V.5.1 Linearitas
Diukur absorbansi masing-masing dari larutan seri standar 20 bpj,
25 bpj, 30 bpj, 35 bpj, 40 bpj, 45 bpj dan 50 bpj menggunakan
spektrofotometer visible pada panjang gelombang maksimum beta
karoten, kemudian dilakukan perhitungan regresi linear dimasukkan
dalam persamaan garis (y = bx + a).

V.5.2 Uji Sensitifitas

Dari hasil kurva kalibrasi beta karoten dihitung konsentrasi terkecil
yang masih dapat dideteksi (BD) dan terdeteksi secara kuantitatif
(BK) dengan menggunakan perhitungan statistik sebagai berikut.

Sy/x =
√ Σ( Xi−X )²
n−2
3 x Sy / x 10 x Sy / x
BD = dan BK =
b(slope) b(slope)
 20

Nilai slope b berasal dari persamaan kurva kalibrasi y = bx + a.

Semakin kecil nilai yang didapat maka semakin tinggi sensitifitas
instrument yang digunakan. Hal ini menunjukkan bahwa instrument
memiliki kepekaan yang tinggi.

V.5.3 Presisi
Uji presisi dilakukan dengan cara sampel 10 gram ditambahkan
larutan beta karoten konsentrasi 20 bpj kedalam botol dan
dilanjutkan dengan perlakuan seperti pada pada point V.6.1 dan
V.6.2. Kemudian diukur absorban intraday (pagi dan sore) lalu
dihitung simpangan baku relativ dengan rumus presisi.

√ Σ( Xi−X )² SD
SD = dan KV = x
n−2 x rata−rata
100%

V.5.4 Akurasi
Uji akurasi yang dilakukan dengan menggunakan metode adisi,
dengan penambahan baku beta karoten ke dalam sampel dengan tiga
konsentrasi yang berbeda yaitu 20 bpj, 25 bpj, dan 30 bpj dan
dilanjutkan dengan perlakuan seperti pada pada point V.6.1 dan
V.6.2. Selanjutnya larutan diukur absorbansinya kemudian
menentukan kadar menggunakan persamaan regresi linear dan
dihitung % perolehan kembalinya.
 21

V.6 Proses Ekstraksi Beta Karoten

Proses ekstraksi beta karoten dari minyak sawit merah ini terdiri dari
dua tahapan. Tahap pertama adalah transesterifikasi trigliserida yang
terdapat di minyak sawit merah hingga diperoleh beta karoten yang
terikat pada senyawa ester dan tahap kedua adalah pemisahan beta
karoten dari senyawa ester dengan menggunakan pelarut dietil eter
dan aseton.

V.6.1 Transesterifikasi
Minyak sawit merah sebanyak 10 gram ditambahkan larutan KOH
2% (KOH dalam metanol). Campuran kemudian dikocok selama 2
jam dengan kecepatan 7 mot pada suhu kamar dengan menggunakan
alat hot plate magnetic stirer. Selanjutnya ditambahkan larutan BHT
(butil hidroksi toluene) 0,01% dan diaduk kembali menggunakan
magnetic stirer degan kecepatan yang sama selama 30 menit.
Setelah proses tersebut akan terbentuk 2 lapisan. Lapisan merah
diatas sedangkan lapisan bawah berwarna kuning. Pisahkan kedua
lapisan tersebut menggunakan corong pisah. Terhadap lapisan atas
yang berwarna merah dilakukan pencucian atau pembilasan dengan
aquadest sampai tiga kali.

V.6.2 Ekstraksi Senyawa Beta Karoten

 22

Sebanyak 10 ml lapisan atas yang diperoleh ditambahkan dengan 10

ml dietil eter dan 30 ml aseton (1:3) dimasukkan kedalam labu ukur
50 ml, kemudian dipindahkan kedalam botol diekstraksi pada suhu
60c selama 8 jam dengan kecepatan 8 mot. Simpan di dalam lemari
es selama 12 jam. Padatan putih kuning yang terbentuk dipisahkan
dan terhadap filtratnya yang berwarna jingga ditambah Natrium
Sulfat Anhidrat sampai bebas air. Pada filtrat pekat yang diperoleh
dilakukan pengenceran yaitu diambil sebanyak 0,1 ml larutkan
dengan pelarut dietil eter dan aseton (1:3) ke dalam labu 5 ml
kemudian dilakukan uji konsentrasi beta karoten.

V.7 Penetapan Kadar Beta Karoten

Hasil ekstraksi sampel yang telah didapatkan kemudian diencerkan
0,1 ml kedalam 5 ml labu ukur lalu diukur absorbansinya dengan
panjang gelombang maksimum yang telah ditetapkan, larutan
blanko yang digunakan adalah dietil eter : aseton (1:3). Kadar beta
karoten dihitung berdasarkan persamaan regresi linear yang
didapatkan dari kurva kalibrasi y = a + bx.
23
 Bab VI Hasil dan Pembahasan

VI.1 Persiapan Sampel

Produk minyak sawit merah yang digunakan dalam penelitian ini
terdiri dari 2 produk dengan merek dan bentuk yang berbeda. Produk
yang pertama dengan inisial sampel A dengan bentuk padatan.dan
produk yang kedua dengan bentuk cair yaitu sampel dengan inisial
B. Adapun sampel didapatkan dari hasil transaksi jual beli di aplikasi
Shopee. Baku beta karoten didapatkan dari Pusat Pengujian Obat dan
Makanan (PPOMN).

Gambar 4.1: Sampel minyak sawit merah (red palm oil)

VI.2 Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Beta karoten

Penetapan panjang gelombang serapan maksimum beta karoten
dilakukan dengan cara pemindaian panjang gelombang maksimum
pada saat spektrofotometer visible. Pemindaian dilakukan untuk
memperoleh serapan maksimum dari suatu senyawa yang dianalisis
sehingga dihasilkan nilai absorban yang tinggi. Pada penelitian ini

23
 24

hasil scanning panjang gelombang maksimum beta karoten dalam

fase gerak campuran dietil eter-aseton (1:3 v/v) dengan konsentrasi
100 bpj diukur dengan menggunakan spektrofotometer visible.
Berdasarkan buku harborne untuk daerah panjang gelombang
maksimum beta karoten diukur pada panjang gelombang 400-500
nm. Hasil pengukuran spektrofotometri pada standar beta karoten
dapat dilihat pada gambar berikut.

454

Gambar 4.2 Panjang gelombang maksimum beta karoten

Hasil pengukuran spektrum pada standar beta karoten terdapat pada

puncak utama dengan panjang gelombang 454 nm. Letak ketiga
puncak spektrum beragam, tepat, bergantung pada pigmen dan cukup
berbeda sehingga merupakan suatu cara untuk identifikasi. Pola
spektrum pemindaian panjang gelombang maksimum pada standar
digunakan untuk pengukuran kuantitatif.
 25

VI.3 Validasi Metode Analisis

Uji validasi metode analisis beta karoten yang bertujuan untuk
membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan
untuk penggunaannya. Uji validasi metode analisis yang dilakukan
adalah uji linearitas, uji batas deteksi dan batas kuantitasi, dan uji
presisi.

Uji linearitas dilakukan untuk mengetahui hubungan antara

konsentrasi dengan absorbansi. Pembuatan kurva kalibrasi dilakukan
dengan membuat larutan seri standar beta karoten dengan
konsentrasi 20 bpj, 25 bpj, 30 bpj, 35 bpj, 40 bpj, 45 bpj, 50 bpj di
add dengan dietil eter : aseton (1:3). Diukur berdasarkan hasil
panjang gelombang maksimum yang telah ditetapkan. Hasil
perhitungan regresi linear didapat persamaan kurva kalibrasi y =
0,0162x - 0,0079 dengan nilai r = 0,9989 mendekati 1. Persamaan
regresi linear yang diperoleh kemudian digunakan sebagai evaluasi
nilai serapan dari larutan sampel dan untuk menentukan uji
linearitas.

Tabel 6.1 Tabel Linearitas

 26

Gambar 4.3 Kurva kalibrasi beta karoten

No Konsentrasi ABS
1 20 0,314
2 25 0,4
3 30 0,478
4 35 0,561
5 40 0,63
6 45 0,73
7 50 0,799
 27

Tabel 6.2
Data Regresi Linear

Validasi Metode
Persamaan garis
Y = 0,0162x-0,0079
linearitas
Koefisien korelasi (r) 0,9989
Slope (b) 0,0162
Intersep (a) 0,0079
Sy/x 0,0028
Batas deteksi 0,5332
Batas kuantifikasi 1,7773
SD 0,1109
% RSD 0,2672
Batas deteksi merupakan parameter uji batas. Uji batas deteksi
dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui kadar terendah yang
masih dapat dideteksi yang masih memberikan respon signifikan
dibandingkan dengan blangko. Batas kuantifikasi merupakan
parameter pada analisis renik dan diartikan sebagai kuantitas terkecil
analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan
seksama (Harmita, 2004). Berdasarkan hasil penelitian nilai batas
deteksi adalah 0,533 bpj dan nilai batas kuantitasi adalah 1,777 bpj.

Uji presisi atau ketelitian menunjukkan derajat kesesuaian antara

hasil uji individual yang diterapkan secara berulang pada sampel
yang diambil dari campuran homogen. Presisi diukur sebagai
simpangan baku relative (relative standard deviation) atau koevisien
variasi (KV). Hasil uji presisi dilakukan dengan memakai baku 20
bpj didapat nilai RSD 0,2672% sehingga memenuhi persyaratan uji
presisi yaitu < 2 %.

Tabel 6.3
 28

Presisi Interday Beta Karoten Minyak Sawit Merah

Pengulangan
Absorbansi X(µg/ml)
20 ppm X-Xbar)^2
1 0,660 41,2284 0,0890
2 0,669 41,7840 0,0662
3 0,663 41,4136 0,0128
4 0,661 41,2901 0,0560
5 0,667 41,6605 0,0179
6 0,669 41,7840 0,0662
Rata-rata   41,5267 0,3080
SD 0,1110
% RSD   0,2673

Pengukuran akurasi atau kecermatan pada penelitian ini dilakukan

dengan metode adisi karena belum diketahui matriknya. Dalam
metode penambahan baku, sampel dianalisis lalu sejumlah tertentu
analit yang deperika ditambahkan kedalam sampel dicampur dan
dianalisis dengan tahapan yang sama seperti sebelumnya. Sampel 20,
25, 30 bpj dibuat 3 replikat dengan perlakuan yang sama. Rasio
perbandingan beta karoten yang terukur dengan beta karoten yang
ditambahkan adalah nilai perolehan kembali (recovery) yang
menunjukkan keakuratan metode. Serta persentase baku relatifnya
(SBR) atau koevisien variasi (KV).

Dari hasil percobaan terhadap sampel adisi didapatkan nilai

perolehan kembali beta karoten untuk 20 bpj sebesar 98,66%,
penambahan baku 25 bpj sebesar 100,5927% dan 30 bpj didapatkan
100,07%. Rata-rata dari ketiga data tersebut didapatkan 99,77%
sedangkan nilai perolehan kembali menurut Harmita sebesar 90-
120%. Maka dapat disimpulkan bahwa metode yang digunakan
 29

dalam penelitian ini mempunyai akurasi dan presisi yang memenuhi

persyaratan.

Tabel 6.4
Akurasi Beta Karoten Minyak Sawit Merah

Konsentra Absorban Konsentra % Rata-

si Baku si si (ppm) % Recovery Rata

20 ppm 1 0,66 41,2283 97,43%

20 ppm 2 0,669 41,7839 100,206% 98,66%

20 ppm 3 0,663 41,4135 98,35%

25 ppm 1 0,748 45,6851 95,7696%

100,5927
25 ppm 2 0,765 47,7098 103,8684%
%
25 ppm 3 0,758 42,2777 102,14%

30 ppm 1 0,828 51,5987 99,52% 100,07%

30 ppm 2 0,828 51,5987 99,52%

 30

30 ppm 3 0,836 52,0925 101,166%

Rata-rata
      Adisi 99,77%

VI.4. Proses Estraksi Beta Karoten

Proses analisis beta karoten dilakukan dengan berbagai tahapan.
Tahap pertama adalah transesterifikasi trigliserida yang terdapat di
RPO (Red Palm Oil) hingga diperoleh karotenoid yang terikat pada
senyawa ester dan tahapan kedua adalah pemisahan karotenoid dari
senyawa ester dengan menggunakan pelarut dietil eter dan aseton
perbandingan (1:3).

VI.4.1 Transesterifikasi
Dalam proses transesterifikasi dilakukan tahapan penyabunan atau
saponifikasi yang digunakan untuk memisahkan antara asam lemak
dan gliserol. Pada prinsipnya transesterifikasi adalah mengeluarkan
gliserin dari minyak dan mereaksikan asam lemak bebasnya dengan
alkohol (metanol) menjadi metil ester. Katalis yang biasa digunakan
pada reaksi transesterifikasi adalah katalis basa seperti NaOH, KOH,
NaOCH3 dan KOCH3. Pelarut metanol lebih sering digunakan
karena harganya lebih murah dibandingkan dengan alkohol jenis
lainnya dan dapat bereaksi cepat dengan trigliserida serta dapat
melarutkan katalis asam dan basa. Selain itu, secara fisiko-kimia
metanol bersifat polar dan memiliki rantai paling pendek.

Dalam minyak umumnya senyawa lipid berada dalam bentuk

trigliserida, yaitu ester dari 3 molekul asam lemak dengan 1 gliserol.
 31

Minyak atau lemak disabunkan dengan larutan KOH berlebihan

dalam alkohol maka KOH akan bereaksi dengan trigliserida, yaitu
tiga molekul KOH bereaksi dengan satu molekul minyak atau lemak.
Adapun reaksi transesteriikasi sebagai berikut :

Gambar 4.4 Reaksi transesterifikasi

Pada penelitian ini bahan yang digunakan pada proses

transesterifikasi yaitu KOH 2% dalam methanol dengan sampel 10
gram. KOH masuk kedalam kelompok gliserol sedangkan methanol
masuk kedalam kelompok asam lemak. Reaksi transesterifikasi
mengubah campuran trigliserida dan metanol menjadi 2 lapisan metil
ester asam lemak dan gliserol. Metil ester asam lemak terdapat pada
fase atas karena memiliki massa jenis (0,86-0,9g/mL) yang lebih
kecil dari massa jenis gliserol (1,26g/mL). Fase atas yang diperoleh
dinetralkan dengan asam sulfat untuk menghilangkan adanya
kelebihan basa dari katalis untuk menyerap kandungan air yang
masih terdapat pada larutan tersebut. Pencucian fase atas dengan
aquadest 3 kali bertujuan untuk untuk melarutkan sisa
menghilangkan metanol berlebih dan asam sulfat berlebih yang
digunakan dalam penetralan selanjutnya sampel diekstraksi Pada
 32

proses transesterifikasi ditambahkan larutan BHT 0,01% yang

berfungsi sebagai antioksidan meminimalisir terjadinya oksidasi
sehingga sampel minyak sawit merah yang mengandung beta karoten
tetap terjaga dan warna merah yang dihasilkan tidak berkurang
signifikan.

Gambar 4.5 Hasil transesterifikasi

VI.4.2 Ekstraksi Senyawa Beta Karoten

Tahap selajutnya sampel diekstraksi dengan metode pengadukan
mekanik. Ekstraksi adalah proses penarikan konstituen yang
diinginkan dengan menggunakan pelarut yang dipilih dimana zat
yang diinginkan dapat larut. Pelarut yang dipilih berdasarkan
kemampuan dalam melarutkan jumlah yang maksimum dari zat aktif
dan seminimum mungkin bagi unsur yang tidak diinginkan.

Sampel hasil transesterifikasi diekstraksi dengan pelarut dietil eter :

aseton (1:3) dengan pengadukan kecepatan 7 mot selama 8 jam
dengan uhu 60⁰C. Penggunaan aseton merupakan pelarut semi polar
bertujuan untuk melarutkan zat pigmen sehingga terpisah dari
sampel. Dietil eter termasuk kedalam pelarut non polar sehingga
 33

akan mudah menembus permukaan dinding sel sampel karena

senyawa beta karoten bersifat non polar. Selanjutnya disimpan
didalam kulkas selama 12 jam, akan terbentuk padatan putih
kekuningan. Memastikan agar padatan halus terpisah dari larutan
sampel maka dilakukan sentrifuge.

Ditambahkan natrium sulfat anhidrat digunakan untuk mengikat air

pada ekstrat sehingga diperoleh dietil eter dan pigmen β-karoten
sedangkan air sisa pencucian pada proses transesterifikasi dan
natrium sulfat membeku. Banyaknya komponen yang terekstrak
dipengaruhi oleh jenis pelarut yang digunakan, dalam hal ini sifat
polaritas pelarut dan komponen yang akan diekstrak harus sama,
komponen yang bersifat polar akan terekstrak dengan pelarut yang
bersifat polar, begitupun komponen yang bersifat non polar akan
terekstrak dengan pelarut yang bersifat nonpolar. Hal ini sesuai
dengan pernyataan Bennita (2008), bahwa prinsip ekstraksi adalah
melarutkan senyawa polar dalam pelarut polar dan senyawa non-
polar dalam senyawa non-polar.

VI.5 Penetapan Kadar Beta Karoten

Analisis kadar β-karoten Panjang gelombang maksimum penyerapan
setiap senyawa akan sangat dipengaruhi oleh pelarut yang
digunakan. Setiap pelarut akan ikut menyerap radiasi dan pengaruh
penyerapan ini tidak dapat dihilangkan. Hal ini akan menyebabkan
amplifier menghasilkan latar belakang yang kuat pada spektrum.
Penetapan kadar beta karoten dari produk minyak sawit merah
dengan merek cortino dan salmira dengan menggunakan metode
 34

spektrofotometri visible pada panjang gelombang maksimum β-

karoten pada dietil eter:aseton (454 nm).
[

Pengukuran spektrofotometri visible ini menggunakan panjang

gelombang 400-500 nm. Beta karoten dapat dapat diukur dipanjang
gelombang tersebut karena mamiliki warna kuning sampai merah
dan adanya ikatan rangkap terkonjugasi pada rantai panjangnya.
Ikatan rangkap terkonjugasi dapat menyebabkan tingkat energi
elektronik dari kromofor menjadi lebih rendah, sehingga akan
menyerap radiasi pada panjang gelombang yang makin tinggi.
Kenaikan panjang gelombang maksimum terkait dengan kepolaran
pelarut. Dalam pelarut yang lebih polar transisi π-π* pada ikatan
rangkap β-karoten memerlukan energi yang lebih energi yang lebih
rendah sehingga akan menyerap radiasi pada panjang gelombang
yang lebih p enting.Tahapan untuk menentukan penetapan kadar beta
karoten yaitu dilakukan tahapan transesterifikasi kemudian
dilanjutkan tahapan ekstraksi sehingga didapatkan larutan filtrat
berwarna jingga. Selanjutnya dilakukan pengenceran sampel 50 kali
yaitu dengan cara dipipet 0,1 ml kemudaian add 5ml pelarut dietil
eter : aseton (1:3). Larutan uji dan larutan standar diukur dengan
spektrofotometri visible pada panjang gelombang 454 nm yang
didapat dari hasil pemindaian panjang gelombang maksimum dari
standar beta karoten. Hasil perhitungan kadar beta karoten dalam
produk minyak sawit merah dapat dilihat pada tabel dibawah ini.

Tabel 6.4
Kadar Beta Karoten
 35

Konsentrasi Rata-rata Kadar

Nama Absorbansi
(µg/ml) (µg/ml) (mg/g)
0,308 19,5
sampel A 0,378 23,8209 21,5065 8,0649
0,324 21,5987
0,468 29,3765  
Sampel B 0,417 26,2283 27,1748 10,1905
0,412 25,9197  

Kandungan beta karoten yang didapat dalam produk salmira yang

berbentuk padatan lebih banyak dibandingkan dengan yang
berbentuk minyak atau cairan. Hal ini disebabkan karena minyak
sawit merah sampel B berbentuk padatan yang merupakan minyak
virgin oil diperoleh dari proses pengolahan minyak kelapa sawit
menggunakan proses pemanasan atau proses fermentasi sehingga
kualitas minyaknya lebih bagus dibandingkan kualitas minyak sawit
merah sampel A.
36
 Bab VII Ksesimpulan dan Saran

VII.1 Kesimpulan

Berdasarkan hasil analisis penetapan kadar beta karoten pada minyak

sawit merah didapatkan kadar beta karoten dari sampel A yaitu
8,0649 mg/g dan kadar beta karoten pada sampel B sebesar 10,1905
mg/g.

VII.2 Saran

Sebaiknya perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai kadar

beta karoten pada minyak goreng yang beredar di pasaran.

36
36
 DAFTAR PUSTAKA

Gandjar I.G, Rohman A. 2007. Kimia Farmasi Analisis. Pustaka

Pelajar. Yogyakarta.

Harborne J. B. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern

Menganalisis Tumbuhan. Bandung. Penerbit ITB.

Ketaren, S. 2005. Minyak dan Lemak Pangan. Edisi pertama.

Jakarta: UI-Press.

Nurrahman dan Widiarnu W. 2013. Analisis Kadar Beta-Karoten

Kulit Buah Naga Menggunakan Spektrofotometri UV-VIS.
Jurnal Dinamika, Universitas Cokroamino Palopo. Vol 04.
No 1: P15-26.

Sihombing K. 2017. Penentuan Kadar Β – Karoten Dalam Crude

Palm Oil (CPO). Universitas Sumatera Utara.

Risza, S. 1994. Minyak Kelapa Sawit Upaya Peningkatan

Produktivitas. Cetakan Pertama. Kanisius. Yogyakarta.

Pahan, I. 2008. Panduan Lengkap Kelapa Sawit: Manajemen

Agribisnis Dari Hulu Hingga Hilir. Penebar Swadaya:
Jakarta.

Sibuea, P. 2014. Minyak Kelapa Sawit Teknologi & Manfaat Untuk

Pangan Nutrasetika. Penerbit Erlangga. Jakarta.

Mangoensoekardjo, S. 2003. Manajemen Agrobisnis Kelapa Sawit.

Gadjah Mada University Press. Yogyakarta.

37
 38

Priatni A, Fauziati, Adiningsih Y. 2017. Ekstraksi Karotenoid Dari

Minyak Sawit Mentah (CPO) Dengan Pelarut Dietil Eter
Dan Aceton. Jurnal Riset Teknologi Industri. Vol.11 No.2.
Desember 2017.Baristand Industri Samarinda.

Pasaribu N. 2004. Minyak Buah Kelapa Sawit. Universitas Sumatera

Utara.

Fauzi Y. 2004. Kelapa Sawit. Edisi Revisi. Penebar Swadaya.

Jakarta.

Fauzi Y, Yustina E W, Iman S, dan Rudi Hartono. 2005. Kelapa

Sawit Budidaya, Pemanfaatan Hasil dan Limbah , Analisis
Usaha Dan Pemasaran. Penebar Swadaya. Jakarta.

Lubis A. U dan Sipayung A. 1987. Serangga Penyerbuk Kelapa

Sawit E. kamerunicusdi Indonesia. Makalah Pertemuan
Balai Penelitian Dan Direksi PTP, Tanjung Morawa,
Medan.
 39

Lampiran 1

Perhitungan Larutan KOH 2 %

 % = g/100ml

= 2g/100ml x 100

= 2 gram

Larutan Perhitungan Larutan BHT 0,01 %

 % = g/100ml

= 0,01g/100ml x 100

= 0,01g = 10 mg
 40

Lampiran 2

Perhitungan Larutan Induk 1000 bpj Beta Karoten

Ditimbang 10 mg beta karoten  10 ml Dietil Eter-Aseton (1-3)

10000 µg beta karoten  10 ml Dietil Eter-Aseton (1-3)

10000 µg / 10 ml = 1000 µg/ml

= 1000 bpj
 41

Lampiran 3

Kurva Kalibrasi Beta Karoten

 Pembuatan larutan beta karoten 100 bpj dari 1000 bpj

V1×N1 = V2×N2
V1×1000 = 25 ml×100
V1 = 2500/1000
= 2,5 ml

 Pembuatan larutan baku beta karoten 20 bpj dari 100 bpj

V1×N1 = V2×N2
V1×100 = 10×20
V1 = 200/100
= 2 ml

 Pembuatan larutan baku beta karoten 25 bpj dari 100 bpj

V1×N1 = V2×N2
V1×100 = 10×25
V1 = 250/100
= 2,5 ml

 Pembuatan larutan baku beta karoten 30 bpj dari 100 bpj

V1×N1 = V2×N2
V1×100 = 10×30
V1 = 300/100
= 3 ml

 Pembuatan larutan baku beta karoten 35 bpj dari 100 bpj

V1×N1 = V2×N2
V1×100 = 10×35
V1 = 350/100
= 3,5 ml

 Pembuatan larutan baku beta karoten 40 bpj dari 100 bpj

V1×N1 = V2×N2
V1×100 = 10×40
V1 = 400/100
= 4 ml
 42

 Pembuatan larutan baku beta karoten 45 bpj dari 100 bpj

V1×N1 = V2×N2
V1×100 = 10×45
V1 = 450/100
= 4,5 ml

 Pembuatan larutan baku beta karoten 50 bpj dari 100 bpj

V1×N1 = V2×N2
V1×100 = 10×5
V1 = 500/100
= 5 ml
 43

Lampiran 4

Perhitungan Kadar Beta Karoten

Kadar Beta Karoten = X × Fp × V

Berat sampel (g)
= 21,5065 (µg/mL) × 50 × 50 ml

= 53766 µg 53,766 mg

= 53,766mg / 10 ml = 5,3766 mg/ml

= 5,3766 mg/ml × 15 ml = 80,649 mg

= 80,649 mg / 10 g = 8,0649 mg/g

X = Nilai konsentrasi

Fp = Faktor Pengenceran

V = Volume labu ukur

10 ml = ekstrak transesterikasi

10 g = berat sampel
 44

Lampiran Tabel

Lampiran tabel 1. Data Linearitas

No Konsentrasi ABS
1 20 0,314
2 25 0,4
3 30 0,478
4 35 0,561
5 40 0,63
6 45 0,73
7 50 0,799

Lampiran BD BK

No. Konsentrasi Y Yi (Yi-Yi)2

1 20 0,314 0,3161 4,41E-06
2 25 0,4 0,3971 8,41E-06
3 30 0,478 0,4781 1E-08
4 35 0,561 0,5591 3,61E-06
5 40 0,63 0,6401 0,00010201
6 45 0,73 0,7211 7,921E-05
7 50 0,799 0,8021 9,61E-06
      Total 0,00020727
s(y/x) 0,002879375
LOD 0,53321758
LOQ       1,777391933
 45

Akurasi

No Konsentra Absorban Konsentra % % Rata-

. si Baku si si Recovery Rata
20 bpj 1 0,66 41,2283 97,43%
1 20 bpj 2 0,669 41,7839 100,206% 98,66%
20 bpj 3 0,663 41,4135 98,35%
25 bpj 1 0,748 45,6851 95,7696%
103,8684 100,5927
2
25 bpj 2 0,765 47,7098 % %
25 bpj 3 0,758 42,2777 102,14%
30 bpj 1 0,828 51,5987 99,52%
3 30 bpj 2 0,828 51,5987 99,52% 100,07%
30 bpj 3 0,836 52,0925 101,166%
        Rata-rata 99,77%

Presisi

Pengulanga
n 20 bpj Abs X(µg/ml) X-Xbar)^2
1 0,660 41,22839506 0,089015055
2 0,669 41,78395062 0,066152687
3 0,663 41,41358025 0,01280716
4 0,661 41,29012346 0,055991634
5 0,667 41,66049383 0,017887686
6 0,669 41,78395062 0,066152687
Rata-rata 41,52674897 0,30800691
SD 0,11099674
% RSD   0,267289743
 46

Data Penetapan Kadar Beta Karoten

Rata-
Absorbans
Nama Konsentras rata Kadar
i
i (µg/ml) (µg/ml) (mg/g)
sampel A (1) 0,308 19,5
sampel A (2) 0,378 23,8209 21,5065 8,0649
sampel A (3) 0,313 21,5987
Sampel B (1) 0,468 29,3765  
Sampel B (2) 0,417 26,2283 27,1748 10,1905
Sampel B (3) 0,412 25,9197  

Lampiran Gambar
 47

Gambar Keterangan

Proses Ekstraksi
dan
Transesterifikasi

Hasil disimpan
dikulkas terdapat
endapan putih
kuning

Hasil sentrifuge
 48

Hot Plate
Magnetic Stirer

Spektrofotometer
Uv-Visibel