Disusun Oleh :
Kelompok 1
Kelas 2/AP1
Video 3
(Membrane filtration to test for faecalis contamination of water sample)
1. Membrane filtration adalah suatu pengujian yang dilakukan untuk menentukan kualitas
air
2. Pengambilan sampel dilakukan untuk menguji ada tidaknya bakteri yang
mengontaminasi
3. Proses penyaringan air dilakukan pada membran yang berukuran lebih kecil dari bakteri
4. Koliform fekal dapat membentuk koloni pada suhu 44ᴼC
5. Pada saat pengujian, sampel air ditempatkan pada media petrifilm
6. Koloni bakteriindikator fekal yang bertahan ketika diinkubasi kemungkinan besar
terdapat di air
7. Pada analisis sampel, diperlukan peralatan pengujian (kit) yang berisi komponen untuk
menghasilkan sampel bakteri
8. Faecalis merupakan bakteri yang terindikasi dan berasal dari koloni
9. Air yang terkontaminasi bakteri ditunjukkan dengan adanya faecalis pada sampel air
10. Sampel yang digunakan pada uji ini adalah air bersih
11. Tahap pertama yang dilakukan ialah suplai makanan bakteri, Untuk penumbuhan bakteri
digunakan (Lauryl Sulphate broth)
12. Lauryl sulphate broth dan air panas dituang ke dalam tabung
13. Untuk menghasilkan larutan homogen perlu dikocok agar terlarut
14. Kemudian dilakukan Sterilisasi peralatan, hal ini bertujuan untuk mencegah
kontaminasi
15. Digunakan dua cawan petri alumunium dan disterilkan
16. Cara sterilisasi bisa dengan mendekatkan alat pada api dan metanol
17. Digunakan juga jarum steril untuk mengeluarkan lauryt sulphate broth dan tutup wadah
terbalik
18. Saat sampel air dituangkan, bakteri yang tertinggal pada membran akan menjadi padatan
tersuspensi
19. Tahap penumbuhan bakteri dilakukan dengan memberi label pada cawan petri
20. Kemudian dibiarkan selama empat jam sebelum diinkubasi
21. Inkubasi pada inkubator pada suhu 44ᴼC
22. Koloni yang berwarna merah muda menunjukkan air telah terkontaminasi oleh koliform
lain
23. Jika koloni yang ada pada cawan petri terlalu banyak, maka ditulis koloni sebagai TBUD
atau terlalu banyak untuk dihitung
24. Biasanya ketika pengenceran diperlukan 10 ml sampel air dan 90 ml air yang tidak
mengandung bakteri
25. Air yang tidak mengandung bakteri akan menghasilkan pengenceran satu sampai seratus
Video 4
(Pengujian Non Konvensional Identifikasi Koliform API Kit)
1. Dalam melakukan suatu identifikasi diperlukan kultur murni
2. API kit merupakan pengujian non konvensional untuk identifikasi koliform
3. Kultur yang digunakan tidak boleh campuran
4. Sedangkan API20E digunakan untuk mendeteksi enzim yang sebagian besar terkait
dengan fermentasi karbohidrat
5. API merupakan singkatan dari Analytical profile index
6. Identifikasi Kit digunakan utnuk bakteri dan ragi gram positif maupun negatif
7. API 20E digunakan untuk identifikasi dan diferensiasi Enterobacteriaceae
8. Untuk API 20E diperlukan untuk mengambil satu koloni dan membuat emulsinya di air
suling steril
9. Kemudian dilakukan proses pemijaran ose
10. Satu koloni dari air cawan dimasukkan ke dalam 10 ml air steril
11. API20E terdapat 20 kompartemen yang masing-masing berisi reagen yang berbeda
12. Sehingga bakteri akan bereaksi dengan reagen dan menghasilkan warna yang berbeda
13. API20E terdiri atas ONPG, ADH, LDC, ODC, [CIT], H2S, URE, TDA, IND, [VP],
[GEL] dan senyawa lain yang berkaitan dengan karbohifrat
14. Inkubasi dilakukan pada suhu 37ᴼC dan dalam waktu 18 sampai 48 jam
15. Perubahan warna yang dilakukan merupakan spontan
16. Koloni yang diinokulasikan dari bakteri kultur murni ke dalam larutan NaCl 0,85%
17. Reagen yang digunakan adalah VP, TDA, INI, dan NO2
18. Terdapat tnda kotak [GEL], artinya kompartemen harus terisi hingga bagian paling atas
19. Kompartemen yang diisi hingga bagian paling atas bertujuan memberikan area
permukaan yang lebih banyak untuk oksigen
20. CIT untuk menguji suatu bakteri dapat menggunakan sitrat sebagai sumber karbon atau
tidak
21. GEL merupakan pengujian suatu bakteri dapat mencerna gelatin atau tidak
22. Tidak semua bakteri dapat mencerna gelatin
23. Jika kompartemen terdapat tanda garis bawah artinya harus ada penambahan steril oil
24. Steril oil akan menghasilkan amonia dan hidrogen sulfide sehingga mempengaruhi hasil
kompartemen
25. Penutup perlu diberi tanda sebelum ditutup berupa nomer kultur, tanggal uji, dan inisial
penguji
Soal Multiple Choice
1) Suhu yang digunakan dalam identifikasi koliform melalui API Kit adalah...
a. 37ᴼC
b. 50ᴼC
c. 20ᴼC
d. 40ᴼC
2) Berikut yang tdiak termasuk API20E adalah...
a. ADH
b. LDC
c. TGC
d. [CIT]
e. [GEL]
3) Konsentrasi larutan NaCl untuk menginokulasikan koloni adalah...
a. 0,85%
b. 0,50%
c. 1,85%
d. 0,90%
4) Kompartemen yang memiliki tanda garis bawah artinya harus diberi..
a. Air kotor
b. Steril oil
c. Air keruh
d. Air jernih
5) Pengujian suatu bakteri menghasilkan gelatin atau tidak merupakan tujuan dari...
a. [GEL]
b. [CIT]
c. URE
d. TDA
Soal True False
1) Bakteri yang bereaksi dengan reagen akan memberikan hasil yang sama (F)
2) Identifikasi dilakukan dengan menggunakan kultur murni (T)
3) Setiap bakteri menghasilkan warna yang berbeda karena reagennya berbeda (T)
4) Suhu yang digunakan ialah 40ᴼC (F)
5) Semua bakteri dapat mencerna gelatin (F)
Video 5
(Reading an API20E)
1. Pada pengujian API 20e, menggunakan 20 reagent yang diteteskan pada sampel
untuk diidentifikasi melalui perubahan warnanya
2. sampel diteteskan pada semacam plat tetes sebanyak 20 lubang untuk kemudian
dilakukan pengujian dan direaksikan dengan beragam reagent
3. Uji yang dilakukan yaitu, ONPG, ADH, LDC, ODC, CT, H2S, URE, TDA, IND, VP,
GEL, GLU, MAN, INO, SOR, RHA, SAC, MEL, AMY, dan ARA.
4. Pada 20 pengujian tersebut dipisahkan menjadi 7 set dengan masing masing 3 atau 2
pengujian secara berurutan
5. Pada masing masing set pengujian, jika terdapat reaksi positif pada pengujian yang
pertama mendapat score 1, pada pengujian kedua jika positif mendapat score 3, dan
pengujian ketiga jika reaksinya positif mendapat score 5
6. Reaksi negatif tidak diberikan score, dengan begitu score maksimal pada satu set
pengujian yaitu 7 score
7. Hasil akhirnya didapatkan 7 digit angka yang diwakili masing masing set pengujian,
kemudian dicocokan dengan katalog yang sudah tersedia untuk mengidentifikasi
mikroba spesifik yang menjadi sampel pengujian
8. Reagent yang pertama yaitu TDA atau tryptophan deaminase yang digunakan
sebanyak satu tetes
9. Lalu pada uji indol, reagent yang digunakan adalah kovac sebanyak satu tetes
10. Akan tetapi, reagent kovac dapat digantikan dengan reagent yang mirip seperti
reagent james
11. Reagent selanjutnya yaitu VP yang diteteskan sebanyak satu tetes
12. VP merupakan alkali kuat dengan 40% potassium hidroksida yang dapat membakar
kulit
13. lalu pada lubang yang sama dengan VP ditambahkan lagi alfa naftol sebanyak satu
tetes
14. Pada ONPG reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi kuning
15. Pada ADH reaksi positif ditandai dengan perubhan warna menjadi merah
16. Pada asam amino ADC dan ODC reaksi positif ditandai dengan warna merah
17. pada uji sitrat reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi warna biru
sedangkan negatif akan tetap berwarna hijau pucat
18. Pada H2s reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi warna hitam
19. Pada Urea reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi warna merah
20. Pada TDA reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi warna merah
pekat
21. Pada Uji indol reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi merah muda
22. Lalu pada uji VP reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi warna
merah
23. Pada gelatin reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi hitam akibat
hasil dari gelatin yang dicerna oleh bakteri tertentu
24. lalu pada uji menggunakan gula dan senyawa yang terkait seperti glukosa, mannitol,
sorbitol, amygdalin, dll reaksi positif ditandai dengan perubahan warna menjadi
kuning
25. sedangkan reaksi negatif ditandai dengan perubahan warna menjadi warna biru
Soal Multiple Choice
1. Alat tes analog laktosa dan berubah warna lisin dehidrogenase arginine
dekarboksilase adalah …
a. Om PG
b. Tes uji sitrat
c. Strip
d. PG om test
e. Uji indol
2 Berapa lama waktu yang dibutuhkan uji VP untuk bereaksi dengan reagennya
a. 10 menit
b. 20 menit
c. 30 menit
d. 60 menit
e. 15 menit
a. kuning
b. merah
c. biru
d. hijau
e. tidak berwarna
4. Untuk pengujian Non-Konvensional identifikasi Koliform API, amonia atau
hidrogen sulfida yang akan mempengaruhi hasil kompartemen lain yang efektif
untuk … dan membuatnya …
a. Pengeringan
b. Penyaringan
c. Semi anaerob
d. Aerob
e. Anaerob
5. Minyak steril yang diteteskan, pengujian yang dilakukan mengandung …
a. Asam amino
b. Triptofan deaminase
c. Hidrogen sulfida
d. Asam trigliserida
e. Lisin dehidrogenase arginine dekarboksilase
1) Suspense murni dipipet menggunakan pipet Pasteur untuk
mengisikompartemen yang ada. tetapi beberapa ada pengecualian dimana
harus mengisi kompartemen sampai penuh True
2) Pada pengujian indol hanya bisa menggunakan reagent kovac. False
3) Hidrogen sulfida digunakan untuk pengujian urease untuk enzim Lisin
dehidrogenase arginine dekarboksilase False
4) Skor maksimal dalam satu set pengujian yaitu sebanyak 7 skor. True
5) Hasil negatif dari glukosa adalah warna kuning True
Video 6
(Reading an API20E using online database)
1. Selain menggunakan katalog API, kita dapat menggunakan database atau basis data zona
PI yang didapatkan dari computer secara sistematik
2. Kelebihan menggunakan database pada API yaitu dapat ditambahkan pada kalatalog
jika seseorang menemukan strain baru dari suatu organisme.
3. Jumlah spesies pada organisme baru yang dihasilkan pada slip API dapat ditambahkan
ke dalam database.
4. API juga dapat melakukan strip untuk organisme lain selain bakteri.
5. Dalam penggunaan API pastikan bahwa kita sudah mendapatkan gambaran awal
tentang organisme yang diidentifikasi.
6. Pastikan dalam penggunaan API20E ini menggunakan strip/ strip staf yang
benar
7. Dalam online database terdapat 28 jenis data base API.
8. PI zone database juga dapat mengidentifikasi Streptococci dan
Staphylococci.
9. Dilihat dari kelebihan dan kekurangannya API dengan database dinilai lebih
baik digunakan dibandingkan dengan API katalog.
10. Dalam database tersebut dimasukkan data positif dan negatif dari hasil
pengujian
11. Tes 1 mendapatkan nilai 1 untuk hasil positif.
12. Tes 2 mendapatkan nilai 2 untuk hasil positif.
13. Tes 3 mendapatkan nilai 4 untuk hasil positif.
14. Saat memasukkan data positif atau negatif pastikan untuk tidak tertukar
karena akan mempengaruhi hasil akhir.
15. Skor tersebut akan di tambahkan berdasarkan jumlah positif yang
didapatkan per 3 strip.
16. Skor yang didapat hasil slip AP1 yaitu 5144572.
17. Setelah data selesai dimasukkan, klik dibagian konfirmasi untuk
mendapatkan hasil akhir
18. Setelah dilakukan konfirmasi maka hasil API 20E akan menunjukkan tabel
hasil.
19. Dalam tabel database tersebut memuat referensi, tanggal, komentar, dan
tabel Identifikasi
20. Pada tabel identifikasi terdapat informasi mengenai strip, profil, catatan dari
mikroorganisme yang diidentifikasi.
21. Pada tabel taxa signifikan terdapat informasi mengenai %ID, T, dan
keterangan mengenai uji dari bakteri yang teridentifikasi.
22. Pada bagian hext taxon terdapat informasi mengenai %ID, T, dan
keterangan mengenai uji dari bakteri yang teridentifikasi.
23. Pada video tersebut didapatkan hasil bahwa spesies mikroorganisme yang
teridentifikasi yaitu Escherichia coli.
24. Data base berfungsi dengan sangat baik jika terdapat dalam rip katalog.
25. Kelemahan dari katalog yaitu ketika nomer yang akan dilakukan identifikasi
dimasukkan dalam katalog namun tidak ada maka pilihan maka cara lain
yang digunakan yaitu dengan menggunakan data base.
Soal Multiple choice
1. Data yang dimasukkan dalam API untuk mendapatkan hasil identifikasi
yaitu…
a. Bakteri dalam sampel
b. Skor uji
c. Nama penguji
d. Banyaknya sampel
2. pengujian organisme harus dilakukan …
a. Berbeda di setiap strip
b. Hanya perlu dilihat warnanya saja
c. Beberapa organisme, perlu ditambahkan pereaksi/reagen
d. Digabungkan jenis pereaksi VP nya
e. Didiamkan atau dipanaskan
3. API digunakan untuk mengidentifikasi?
a. bakteri gram negatif
b. bakteri gram positif
c. koliform
d. kapang
e. khamir
4. Kelemahan dari katalog yaitu
a. Ketika nomer yang akan dilakukan identifikasi dimasukkan dalam
katalog namun tidak ada maka harus menggunakan cara lain yang
yaitu dengan menggunakan data base
b. Data yang dimasukkan sangat spesifik
c. Membutuhkan waktu lama
d. Terdapat strain baru dari suatu organisme
e. Margin error lebih dari 0,1%
5. Pada tabel identifikasi terdapat informasi mengenai…
a. Strip, profil, catatan dari mikroorganisme yang diidentifikasi
b. Tanggal dan tahun katalog
c. Hasil positif dan negatif pengujian
d. Nama penguji
e. Laboratorium penguji
Soal True False
1. Selain menggunakan API katalog yang berupa buku, identifikasi
pengujian dapat juga dilakukan dengan basis data base menggunakan
komputer. True
2. Dalam penggunaan API pastikan bahwa kita sudah mendapatkan gambaran
awal tentang organisme yang diidentifikasi True
3. Jika hasil positif, ADH (arginine dehydrogenase) akan menunjukan warna
kuning False
4. Setelah dilakukan konfirmasi pada database maka hasil API 20E akan
menunjukkan tabel hasil pengujian True
5. API 20E dapat digunakan untuk mengidentifikasi bakteri Gram-negatif dan
juga spesies bakteri lain. False