Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553

Daftar isi tersedia diScienceDirect

Ilmu & Teknik Material C

halaman utama jurnal:www.elsevier.com/locate/msec

Degradasi struktur dan perubahan kekuatan perancah tulang kalsium fosfat

yang disinter dengan struktur fase berbeda selama simulasi biodegradasiin
vitro
Premysl Stastnysebuah, Radek Sedlacekb, Tomas Suchyb,c, Vera Lukasovad,e,f, Michala Rampichovad, Martin
Trunecsebuah,g,⁎
sebuahCEITEC BUT, Universitas Teknologi Brno, Purkynova 123, 612 00 Brno, Republik Ceko
bDepartemen Mekanika, Biomekanik dan Mekatronika, Universitas Teknik Ceko di Praha, Technicka 4, 166 07 Praha, Republik Ceko
cInstitut Struktur dan Mekanika Batuan, Akademi Ilmu Pengetahuan Ceko, V Holesovickach 41, 182 09 Praha, Republik Ceko
dInstitut Pengobatan Eksperimental, Akademi Ilmu Pengetahuan Ceko, Videnska 1083, 142 20 Praha, Republik Ceko
ePusat Universitas untuk Bangunan Hemat Energi, Universitas Teknik Ceko di Praha, Trinecka 1024, 273 43 Bustehrad, Republik Ceko
fDepartemen Biologi Sel, Universitas Charles, Vinicna 5, 128 00 Praha, Republik Ceko
gInstitut Sains dan Teknik Material, Universitas Teknologi Brno, Technicka 2, 616 69 Brno, Republik Ceko

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Degradasi struktur dan perubahan kekuatan perancah kalsium fosfat setelah paparan jangka panjang ke
Perancah lingkungan asam yang mensimulasikan aktivitas osteoklastik ditentukan dan dibandingkan. Perancah kalsium fosfat
Kalsium fosfat yang disinter dengan struktur fase berbeda disiapkan dengan struktur pori seluler yang serupa dan porositas
Komposisi fase terbuka lebih dari 80%. Karena fitur mikrostruktur, perancah kalsium fosfat (BCP) bifasik memiliki kekuatan tekan
Degradasi
yang lebih tinggi sebesar 1,7 MPa dibandingkan dengan perancah hidroksiapatit (HA) dan β-trikalsium fosfat (TCP),
Kekuatan tekan
yang menunjukkan kekuatan serupa sebesar 1,2 MPa. Setelah paparan larutan buffer asam pH = 5,5, kekuatan
Respon sel
perancah HA tidak berubah selama 14 hari. Di sisi lain, kekuatan perancah TCP menurun tajam dalam 2 hari
pertama dan mencapai nilai 0 yang dapat diabaikan. 09 MPa setelah 14 hari. Kekuatan perancah BCP menunjukkan
penurunan yang stabil dengan nilai wajar 0,5 MPa setelah 14 hari. Kehilangan massa, komposisi fasa dan perubahan
mikrostruktur perancah selama degradasi di lingkungan asam diselidiki dan mekanisme degradasi perancah
diusulkan. Perancah BCP menunjukkan respons sel terbaik diin vitrotes. Struktur perancah BCP dengan fase yang
sangat larut (α-TCP) tertanam dalam matriks yang kurang larut (β-TCP / HA) menunjukkan degradasi yang dapat
dikontrol dengan stabilitas kekuatan yang sesuai dan dengan perilaku biologis yang menguntungkan itu mewakili
struktur kalsium fosfat yang disukai untuk a perancah tulang yang dapat diserap.

1. Perkenalan
Cangkok tulang secara tradisional telah digunakan untuk memulihkan tulang
yang rusak dengan cacat yang melebihi ukuran kritis untuk penyembuhan diri
tulang. Meskipun autograft tulang telah dianggap sebagai standar emas untuk
aplikasi tersebut [1,2], mereka terkait dengan kerugian yang signifikan termasuk
nyeri situs donor, peningkatan waktu operasi, risiko infeksi luka, dan ketersediaan
yang tidak memadai [3,4]. Baru-baru ini, rekayasa jaringan tulang telah
menyediakan cangkok sintetik sebagai alternatif. Perancah tulang,yaitucangkok
sintetik tiga dimensi, biasanya terbuat dari bahan berpori yang dapat terdegradasi
dan memberikan dukungan yang diperlukan selama regenerasi tulang. Selain itu,
mereka dapat mengantarkan obat-obatan dan/atau
diunggulkan dengan sel [5]. Perancah tulang yang ideal harus
memenuhi banyak kebutuhan material dan geometris [6,7], seperti
sifat osteogenik dan porositas hierarkis yang optimal. Persyaratan
perancah lainnya, yang semakin penting dalam perbaikan tulang besar,
termasuk kekuatan mekanik yang cukup untuk penanganan perancah
serta untuk bertahan hidup melalui kekuatan fisik.in vivo.Daya serap
dengan biodegradasi terkontrol harus sesuai dengan pertumbuhan
jaringan baru. Jelas bahwa perilaku kekuatan scaffold setelah
implantasi terkait erat dengan biodegradasi dan resorpsinya dan sifat
scaffold ini harus dikontrol dan disesuaikan dengan hati-hati untuk
setiap aplikasi tertentu.
Kalsium fosfat (CaPs) adalah bahan keramik pilihan pertama untuk

⁎Penulis
koresponden di: Institut Teknologi Eropa Tengah, Universitas Teknologi Brno, Purkynova 123, 612 00 Brno, Republik Ceko.
Alamat email:martin.trunec@ceitec.vutbr.cz (M.Trunec).

https://doi.org/10.1016/j.msec.2019.03.027
Diterima 28 Desember 2018; Diterima dalam bentuk revisi 5 Maret 2019; Diterima 8 Maret 2019
Tersedia online 09 Maret 2019
0928-4931/ © 2019 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.
P. Stastny, dkk.
perancah tulang yang kaku dan relatif kuat. CaP menunjukkan kemiripan
yang dekat dengan komponen anorganik tulang dan menunjukkan sifat
biologis yang menjanjikan seperti biodegradabilitas, osteokonduktivitas, dan
dalam beberapa kasus bahkan osteoinduktivitas.8–10]. Hidroksiapatit (Ca10
(PO4)6(OH)2), trikalsium fosfat (α-Ca3PO4dan β-Ca3PO4
fase), dan campuran bifasiknya adalah keramik CaP yang paling sering
dipelajari untuk rekayasa jaringan tulang [9,11–16]. Karena kemiripannya
yang dekat dengan mineral tulang, mereka memiliki potensi untuk diserap
sepenuhnya oleh sel dan digunakan sebagai bahan pembangun untuk
pembentukan tulang baru.17]. Kalsium ortofosfat yang paling umum
digunakan sebagai biomaterial (misalnyaCaHPO4, α dan β-Ca3(PO4)2, Ca5(PO
4)3(OH)) sedikit larut dalam air suling tetapi larut dalam lingkungan asam.
Model pembubaran mereka baru-baru ini ditinjau [18] dan, secara umum,
semakin rendah rasio Ca/P, semakin larut fase kalsium fosfat [17,19].
Ada dua proses yang terlibat dalam biodegradasi dan resorpsi CaPin
vivo,yaitu mekanisme fagositik yang dimediasi oleh makrofag dan sel
raksasa lainnya, dan mekanisme asam yang digerakkan oleh larutan yang
dikendalikan oleh osteoklas [20,21]. Selama fagositosis, partikel CaP kecil
(<10 μm) diserapmelaluiinternalisasi dan pencernaan antar sel. Untuk
menyerap partikel yang lebih besar (10–100 μm), makrofag bergabung
bersama membentuk sel raksasa, yang menelan partikel dan mencernanya.
Dalam kasus partikel yang lebih besar, pencernaan massal dapat dilakukan
dengan degradasi ekstraselulermelaluipelepasan enzim dan/atau
penurunan pH oleh makrofag dan sel raksasa yang menyatu. Mekanisme
asam dari biodegradasimelaluiosteoklas terdiri dari pengurangan pH
lingkungan mikro lokal di zona adhesi sel (zona penyegelan), yang
menghasilkan pembubaran dan resorpsi CaP. PH di zona terlampir sel
diukurin vitrodan nilai 3,0 dan 3,6 masing-masing ditemukan untuk
osteoklas dan makrofag aktif [22]. Lingkungan mikro osteoklas juga diukurdi
tempatdalam fragmen tulang osteoporosis dan pH mencapai nilai yang lebih
tinggi, 4,7, dengan konsentrasi ion kalsium maksimum 40 mM [22].
Ditemukan bahwa fagositosis secara aktif berpartisipasi dalam biodegradasi
dan resorpsi semen CaP yang dihasilkan oleh proses suhu rendah dan
rekristalisasi.23]. Namun, defek tulang yang besar memerlukan perancah
dengan makroporositas tinggi dan kekuatan yang masih cukup.24]. Hanya
perancah CaP yang disiapkan dengan pemrosesan suhu tinggi yang
melibatkan sintering partikel individu dan menunjukkan struktur kristal yang
berkembang dengan baik yang dapat memberikan kekuatan yang
dibutuhkan. Berbeda dengan semen, perancah yang disinter menunjukkan
mikroporositas yang lebih rendah dan luas permukaan yang spesifik karena
butiran keramik dikemas dengan padat dalam struktur yang kompak.
Perancah seperti itu lebih sulit untuk dihancurkan menjadi partikel individu
atau fragmen kecil. Jadi dalam kasus scaffold sinter satu-satunya mekanisme
biodegradasi yang relevan (setidaknya pada awal biodegradasi) adalah
mekanisme asam yang dimediasi oleh osteoklas.
Banyak penelitian menyelidiki biodegradasi perancah tulang CaP in
vitro [25–27] sebaikin vivo [28–30] telah diterbitkan. Selain itu, dalam
penyelidikan lain aktivitas degradasi osteoklas dan sel lain
disimulasikan oleh lingkungan asamin vitro [31–33]. Perbandingan
langsung [28,34] serta ikhtisar hasil telah menunjukkan bahwa
kelarutan perancah dengan fase CaP yang berbeda dalam lingkungan
asam sesuai dengan perilaku biodegradasi perancah ini di hadapan sel
osteoklastikin vitroatauin vivo.Namun, informasi tentang perubahan
kekuatan dari CaP-
Tabel 1
Komposisi bubur keramik.
bubuk HA bubuk TCP Air
% berat vol% % berat vol% % berat
HA 58.5 31.4 – – 30.8
TCP – – 61.1 34.4 28.0
BPK 29.7 16.1 29.7 16.6 29.0
545
Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553
mengandung perancah selama biodegradasi sangat jarang dan acak [31,32,
35] dan investigasi sistematis yang menghubungkan perubahan kekuatan
dengan struktur fase perancah CaP yang menurun masih belum ada.
Pengetahuan tentang perubahan kekuatan yang bergantung pada waktu
dan degradasi struktur perancah tulang dapat membantu mengoptimalkan
komposisi perancah sesuai dengan persyaratan aplikasi bedah tertentu
(ukuran cacat, pemuatan perancah, tingkat pengerasan,dll.). Oleh karena itu
tujuan dari penelitian ini adalah untuk menyelidiki perubahan kekuatan dan
struktur yang terjadi selama biodegradasi perancah CaP sinter berpori tinggi
dengan struktur makro yang serupa tetapi komposisi fasa berbeda. Aktivitas
biodegradasi sel osteoklastik disimulasikan oleh lingkungan asamin vitro.
Investigasi ini memungkinkan untuk membangun korelasi antara
perubahan kekuatan struktur CaP fase tunggal dan multi-fase yang berbeda
dan degradasi strukturnya setelah terpapar lingkungan asam. Selain itu,
efek perancah CaP dengan struktur fase berbeda pada respons selin vitro
juga dipelajari dan dikorelasikan dengan komposisi scaffold.
2. Prosedur eksperimental
2.1. Persiapan perancah
Tiga jenis perancah keramik disiapkan, yaitu perancah hidroksiapatit
(HA), β-trikalsium fosfat (TCP) dan kalsium fosfat (BCP) bifasik. Penjelasan
rinci tentang prosedur pemrosesan scaffold dapat ditemukan di [36], di sini
hanya deskripsi singkat yang diberikan. Perancah hidroksiapatit (HA)
disiapkan menggunakan bubuk hidroksiapatit (tri-kalsium fosfat ekstra
murni, Riedel-de Haen, Jerman) dikalsinasi pada 1000 ° C selama 3 jam
sebelum digunakan. Serbuk HA didispersikan dalam larutan air deionisasi,
resin epoksi - etilen glikol diglicidyl eter (EGDGE) (Quetol 651, Electron
Microscopy Sciences, USA), dan dispersan (Darvan 821A, RT Vanderbilt
Company, USA). Bubur digiling dengan attritor (HD-01, Union Process, UK)
selama 3 jam dengan bola zirkonia. Bubur HA halus dengan ukuran partikel
rata-rata 130 nm diperoleh setelah penggilingan. Busa HA disiapkan dengan
metode pembusaan langsung menggunakan blender dapur (Bamix Swiss
Line, ESGE, Swiss). Sebelum berbusa, agen pembusa (Triton X-100, Fluka,
Swiss) dan pengeras – dipropylenetriamine (DPTA) (Sigma-Aldrich, Jerman)
ditambahkan. Pengeras ditambahkan ke resin epoksi dalam rasio
stoikiometri. Komposisi akhir bubur HA ditunjukkan pada Tabel 1. Setelah
berbuih, slurry dicetak ke dalam cetakan plastik dengan diameter 10 mm
dan tinggi 25 mm. Sampel busa cor disegel dan dipolimerisasi pada 35 ° C
selama 40 menit. Setelah konsolidasi, busa keramik dikeluarkan dari cetakan
dan dikeringkan di bawah suhu terkontrol (20 °C) dan kelembaban relatif (98
dan 80%) dalam ruang iklim (Weiss, WK3-180/40, Jerman) sampai kehilangan
air turun di bawah 40 –45%; kemudian dibiarkan kering sepenuhnya dalam
kondisi laboratorium. Berdasarkan penelitian sebelumnya [36], impregnasi
dengan lilin parafin digunakan untuk mencegah munculnya retakan selama
perlakuan panas. Perancah Tricalcium phosphate (TCP) disiapkan
menggunakan bubuk trikalsium fosfat (Kalsium fosfat, purum pa, Honeywell,
Jerman). Perancah TCP disiapkan dengan cara yang sama seperti perancah
HA dengan satu pengecualian. Karena bubuk TCP yang lebih kasar,
penggilingan gesekan diperpanjang hingga 8 jam. Bubur dengan ukuran
partikel rata-rata 1 μm diperoleh. Komposisi akhir dari bubur TCP
ditunjukkan padaTabel 1. Kalsium fosfat bifasik (BCP)
TELUR DPTA Darvan 821A Triton X-100
% berat % berat % berat % berat
5.9 1.8 0,7 2.3
5.4 1.6 0,6 3.3
5.7 1.7 0,7 3.5
P. Stastny, dkk.
perancah disiapkan dengan mencampur bubur HA dan TCP. Bubur dicampur
dengan perbandingan 1:1 (dihitung sebagai perbandingan berat bubuk
keramik dalam bubur). Campuran dihomogenkan dengan pengadukan
selama 15 menit sebelum berbusa. Komposisi akhir bubur BCP juga
ditunjukkan padaTabel 1. Perlakuan panasnya sama untuk semua jenis
scaffold. Lilin parafin dan gel epoksi dihilangkan dengan pemanasan pada
kecepatan 50 ° C jam-jam−1hingga 500 °C dan perlakuan panas dilanjutkan
dengan pemanasan pada laju 120 °C h−1ke suhu sintering 1250 °C dengan 2
jam tinggal di suhu ini.
2.2. Biodegradasi simulasi
Biodegradasi osteoklastik dan resorpsi dari sampel keramik yang disinter disimulasikan
dalam lingkungan buffer McIlvaine yang sedikit asam dengan pH 5,5. Larutan buffer dengan pH=
5,5 memungkinkan dilakukan uji degradasi selama 2, 7, 14 hari. Tes degradasi perancah keramik
jangka panjang seperti itu didekati dengan waktu regenerasi dan resorpsi yang sebenarnya.
Larutan penyangga disiapkan sebagai campuran 0,1 M larutan asam sitrat (asam sitrat
monohidrat, pa 99,5%, Penta, Republik Ceko) dan larutan 0,2 M disodium fosfat (disodium fosfat
dodekahidrat, Lachema, Republik Ceko). Satu set sampel yang disinter untuk setiap waktu
pengujian ditempatkan secara terpisah ke dalam gelas kimia dengan 10 g larutan buffer per 1 g
sampel keramik. Gelas kimia disegel dan ditempatkan ke dalam ruang dengan suhu konstan 37
°C. Larutan buffer diganti setiap 48 jam. Perubahan pH diukur sebelum pertukaran reguler
larutan buffer. Setelah simulasi degradasi, sampel dicuci dengan lembut dengan air deionisasi
untuk mencegah pembubaran lebih lanjut. Kekuatan mekanik sampel setelah degradasi diukur
dalam keadaan basah untuk mencegah perubahan struktur mikro yang berhubungan dengan
gaya kapiler selama pengeringan. Perubahan berat dievaluasi pada sampel kering. Kekuatan
mekanik sampel setelah degradasi diukur dalam keadaan basah untuk mencegah perubahan
struktur mikro yang berhubungan dengan gaya kapiler selama pengeringan. Perubahan berat
dievaluasi pada sampel kering. Kekuatan mekanik sampel setelah degradasi diukur dalam
keadaan basah untuk mencegah perubahan struktur mikro yang berhubungan dengan gaya
kapiler selama pengeringan. Perubahan berat dievaluasi pada sampel kering.
2.3. Karakterisasi struktur
Mikrofotograf SEM (Verios 460L, FEI, Republik Ceko) dari sampel yang tidak dirawat
dan terdegradasi diambil untuk menunjukkan efek lingkungan asam pada struktur mikro
perancah HA, TCP, BCP yang disinter. Struktur makro berpori dari sampel yang disinter
dijelaskan oleh ukuran pori dan ukuran jendela penghubung antar pori. Perangkat lunak
Gwyddion (Gwyddion 2.49, Republik Ceko) digunakan untuk mengukur ukuran pori dan
jendela pada mikrograf SEM dari permukaan rekahan scaffold sinter. Setidaknya 150
pengukuran pada setiap sampel keramik (HA, TCP, BCP) dilakukan. Pori-pori dan jendela
pori masing-masing dianggap berbentuk bola dan melingkar. Tidak ada faktor koreksi
untuk ukuran pori atau jendela yang diterapkan. Ukuran pori dan jendela yang paling
sering ditentukan sebagai pusat nampan dengan frekuensi tertinggi dalam histogram
lebih dari 150 nilai. Frekuensi berdasarkan volume dan luas masing-masing digunakan
untuk ukuran pori dan jendela. Ukuran butir keramik perancah sinter dievaluasi dari
mikrograf permukaan keramik. Setidaknya 150 butir dari setiap jenis perancah diukur
dan dihitung dengan menggunakan metode intersep linier tanpa faktor koreksi.
Porositas terbuka dan tertutup dari busa yang disinter dievaluasi dalam air dengan
metode Archimedes. Kepadatan teoritis 3,16 g cm-1 Setidaknya 150 butir dari setiap jenis
perancah diukur dan dihitung dengan menggunakan metode intersep linier tanpa faktor
koreksi. Porositas terbuka dan tertutup dari busa yang disinter dievaluasi dalam air
dengan metode Archimedes. Kepadatan teoritis 3,16 g cm-1 Setidaknya 150 butir dari
setiap jenis perancah diukur dan dihitung dengan menggunakan metode intersep linier
tanpa faktor koreksi. Porositas terbuka dan tertutup dari busa yang disinter dievaluasi
dalam air dengan metode Archimedes. Kepadatan teoritis 3,16 g cm-1−3untuk HA, 3,07 g
cm-1−3untuk β-TCP dan Ca2P2HAI7, dan 2,87 g cm-1−3untuk fase α-TCP digunakan.
Komposisi fase perancah dievaluasi dengan difraksi bubuk sinar-X (XRD) (Rigaku
SmartLab 3kW, Rigaku, Jepang). Pola difraksi diukur dari 10° hingga 100° (2θ) dengan Cu
Kαradiasi. Sampel perancah HA, TCP, dan BCP untuk analisis XRD dikeringkan (dalam
kasus sampel terdegradasi) dan dibubuhi bubuk dalam mortar sebelum pengukuran. Isi
fase diukur menggunakan analisis Rietveld. Distribusi fase TCP dan HA dalam keramik
BCP yang disinter ditentukan dengan metode difraksi balik elektron (EBSD) yang
dilakukan pada SEM (Verios 460l, FEI, Republik Ceko) yang dilengkapi dengan detektor
EBSD (EDAX DigiView IV,
546
Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553
EDAX, Jerman). Data mentah dianalisis dalam perangkat lunak analisis data
(OIM Analysis v8, EDAX, Jerman). Analisis EBSD dilakukan pada sampel BCP
padat yang disiapkan dengan cara yang sama seperti perancah BCP sambil
menghilangkan langkah berbusa.
2.4. Pengujian mekanik
Tes kompresi perancah yang tidak dirawat dan terdegradasi
dilakukan melalui adaptasi hati-hati dari standar ISO 13314 yang
mengacu pada pengujian mekanis logam berpori dan seluler. Sampel
berbentuk silinder dengan diameter 15 mm dan panjang 24 mm diuji
sebanyak 15 buah pada masing-masing kelompok. Sampel
menunjukkan rasio panjang-ke-diameter sekitar 1,6. Sampel yang tidak
diolah (tidak terdegradasi) diuji dalam keadaan kering, sampel yang
terdegradasi diuji dalam keadaan basah. Kekuatan kompresi tertinggi
dan penyerapan energi ditentukan menggunakan sistem MTS Mini
Bionix 858.02 (MTS, USA) yang dilengkapi dengan sel beban 1000 N dan
250 N. Pengukuran dilakukan pada kecepatan crosshead konstan 4,0
mm/menit (laju deformasi sekitar 0,003 detik−1). Kurva tegangan-
regangan yang diperoleh digunakan untuk menentukan kekuatan
tekan dan energi yang diserap selama fraktur. Kekuatan tekan ultimat
dihitung sebagai gaya tekan maksimum dibagi dengan luas
penampang benda uji. Penyerapan energi dihitung sebagai area di
bawah kurva tegangan-regangan hingga regangan 20% dibagi dengan
volume sampel. Parameter distribusi Weibull yang menjelaskan data
kekuatan dihitung secara numerik, menggunakan metode
kemungkinan maksimum, sesuai dengan standar EN 843-5. Outlier
dianalisismelaluiTes Grubbs atau Dixon dan perbedaan statistik antara
data kekuatan ditentukan dengan menggunakan tes Games-Howell
(Stratgraphics Centurion XVII, StatPoint Technologies, USA).
2.5. Pengujian in vitro
Perancah keramik bundar dengan diameter 9 mm dan tinggi 4 mm
ditempatkan di piring 48-sumur dan diunggulkan dengan ukuran 30 × 103sel
induk mesenchymal (hMSCs) yang diturunkan dari sumsum tulang manusia
(ScienCell, AS) per sumur. Perancah dengan sel unggulan dikultur dalam 700
μL media pertumbuhan (α-MEM dilengkapi dengan 10% serum janin sapi
dan 1% Penicillin/Streptomycin, Gibco, UK) dalam inkubator dengan 5% CO2
pada 37 °C. Setengah dari media kultur diubah pada hari ke 7. Untuk
menentukan aktivitas metabolisme hMSC yang diunggulkan pada perancah,
uji MTS (CellTiter96®Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay,
Promega, USA) digunakan. Perancah dipindahkan ke sumur baru dan 400 μL
media segar dan 80 μL substrat MTS ditambahkan ke masing-masing sumur.
Setelah inkubasi 2 jam pada 37 °C, absorbansi 100 μL larutan kultur
terdeteksi pada 490 nm (referensi pada 690 nm) menggunakan pembaca
pelat mikro (Infinite®M200 PRO; Tecan, Swiss). Adhesi dan proliferasi sel
yang menempel pada scaffold ditentukan dari jumlah DNA, menggunakan
Quant-iT dsDNA Assay Kit (Thermo Fisher Scientific, USA). Perancah
dimasukkan ke dalam botol dengan 500 μL larutan lisis sel (0,2% v / v Triton
X-100, 10 mM Tris (pH 7,0), dan 1 mM EDTA) dan diproses melalui 3 siklus
pembekuan / pencairan. Sampel (10 μL) dicampur dengan 200 μL larutan
reagen dan intensitas fluoresensinya dideteksi menggunakan pembaca
fluoresensi multiplate (Infinite M200 PRO, Tecan, Swiss; λex = 485 nm, λem =
525 nm). Kandungan DNA ditentukan menurut kurva kalibrasi,
menggunakan standar dalam kit. Data kuantitatif disajikan sebagai rata-rata
sampel ± standar deviasi (SD). Nilai rata-rata ditentukan dari setidaknya
empat sampel yang disiapkan secara independen. Hasil dievaluasi secara
statistik menggunakan One-Way Analysis of Variance dan tes Student-
Newman-Keuls (SigmaStat 12.0, Systat, USA). Kami menganalisis perbedaan
antara berbagai perancah pada titik waktu tertentu (ditunjukkan dalam
grafik) serta perbedaan satu perancah tertentu pada titik waktu yang
berbeda (dijelaskan dalam teks saja). DiOC6(3) (3,3′-dihexyloxacarbocyanine
iodide; Pewarnaan Thermo Fisher Scientific, USA) digunakan
P. Stastny, dkk. Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553

untuk mendeteksi adhesi sel ke perancah. Sampel difiksasi dengan metil Meja 2
alkohol beku (−20 °C) selama 10 menit dan dibilas dengan saline yang Porositas terbuka dan ukuran pori dan jendela perancah yang paling sering dan
mengandung fosfat (PBS; pH 7,4). Probe fluoresen DiOC6(3) pada ukuran butir rata-rata keramik perancah.
konsentrasi 1 μg mL-1−1dalam PBS ditambahkan dan diinkubasi dengan Sampel Porositas terbukasebuah Ukuran porib Ukuran jendelab Ukuran butir
sampel selama 30 menit pada suhu kamar. Selanjutnya, sampel dibilas
dengan PBS, dan propidium iodida (PI, Sigma Aldrich, USA) dengan (%) (μm) (μm) (μm)
konsentrasi 5 μg mL-−1dalam PBS ditambahkan selama 5 menit, diikuti
HA 83,1 ± 0,7 702 188 1.7
dengan pembilasan dengan PBS. Sampel divisualisasikan menggunakan TCP 82,3 ± 0,7 623 244 5.9
mikroskop confocal (LSM 5 DUO, Carl-Zeiss MicroImaging, Jerman). Nilai λex BPK 84,9 ± 1,1 698 184 2.2
= 488 dan 560 nm dan λem= 520 dan 580 nm masing-masing digunakan
sebuahRata-rata sampel diberikan dengan interval kepercayaan 95%.
untuk deteksi DiOC6(3) dan propidium iodida. Morfologi hMSC dievaluasi
bNilai yang paling sering.
oleh SEM (Tescan Vega 3, Brno, Republik Ceko) pada hari 1 dan 7. Perancah
dengan hMSC untuk penyelidikan SEM dicuci dalam PBS dan difiksasi dalam
komposisi fase perancah tetapi juga distribusi fase individu dalam perancah.
glutaraldehid 2,5% selama 2 jam pada suhu 4 °C. Sampel kemudian
Gambar 3menunjukkan pemetaan fase keramik perancah BCP. Hasil analisis
didehidrasi dalam etanol. Untuk mengeringkan perancah, ditambahkan
menunjukkan bahwa fase HA dan β-TCP terdistribusi secara homogen. Fase
hexamethyldisilazane (Sigma-Aldrich, USA).
α-TCP mungkin terletak sebagai lapisan tipis pada batas butir butir β-TCP
dan di beberapa daerah yang lebih besar, daerah nanograin α-TCP yang
3. Hasil
terdistribusi tidak teratur (hingga 5 μm). Pencampuran butiran hampir bulat
yang relatif baik dengan fase yang berbeda (HA dan β-TCP) mencegah
3.1. Struktur perancah dan perubahan degradasi
pertumbuhan butir dan menghasilkan ukuran butiran trikalsium fosfat yang
lebih kecil dalam perancah BCP dibandingkan dengan perancah TCP (lihat
Perancah yang disinter menunjukkan struktur seluler yang disukai [37,38
Meja 2).
] dengan porositas terbuka yang sangat tinggi di kisaran 82–85%. Struktur
Setelah terpapar ke lingkungan asam yang mensimulasikan degradasi
makro dari semua perancah (HA, TCP, BCP) sangat mirip (lihat Gambar 1).
dan resorpsi osteoklastik, struktur fase perancah berubah bergantung pada
Ukuran pori-pori bulat di perancah keramik berkisar antara 200 hingga 1200
komposisi perancah tertentu (Tabel 3). Perancah HA tetap sebagai
μm. Pori-pori ini saling berhubungan dengan “jendela” berdiameter 50–450
hidroksiapatit fase tunggal selama seluruh proses degradasi 14 hari. Juga
μm. Porositas terbuka dan ukuran pori dan jendela perancah tertentu yang
dalam scaffold TCP, dua fase yang teridentifikasi (β-TCP dan Ca2P2HAI7) tetap
paling sering diberikanMeja 2. Perbedaan mencolok antara perancah hanya
berada dalam struktur, dengan pergeseran rasio yang dapat diabaikan
dapat ditemukan pada ukuran butiran penyangga keramik (lihatGambar 2
menuju Ca2P2HAI7selama proses degradasi. Dalam perancah BCP, fase α-
danMeja 2). Keramik perancah HA menunjukkan struktur mikro berbutir
TCP larut secara bertahap selama degradasi, meninggalkan β-TCP dan HA
halus dengan ukuran butir rata-rata 1,7 μm. Di sisi lain, struktur mikro
satu-satunya fase setelah 7 hari. Rasio β-TCP terhadap HA tetap hampir
perancah TCP menunjukkan butiran yang jauh lebih besar dengan nilai rata-
sama selama proses degradasi. Perubahan morfologi yang terjadi pada
rata 5,9 μm. Ukuran butir 2,2 μm ditentukan dalam struktur mikro BCP.
struktur makro perancah selama degradasi ditunjukkan padaGambar 1.
Seperti yang ditunjukkan di bawah, struktur BCP agak bimodal, dengan butir
Struktur makro perancah HA tampak hampir utuh setelah 14 hari degradasi
HA yang lebih kecil dan butir TCP yang lebih besar. Meskipun ukuran
sementara struktur TCP dan BCP menunjukkan beberapa tanda erosi.
butirannya berbeda, struktur mikro penyangga keramik dari semua scaffold
Meskipun struktur makro berpori dari perancah TCP dan BCP tetap
cukup padat dengan <1% porositas tertutup dan beberapa pori dalam
dipertahankan, keramik dinding pori menunjukkan banyak lubang.
kisaran mikrometer. Struktur fase perancah yang diselidiki dirangkum
Khususnya pada scaffold BCP, erosi dinding pori yang tipis bahkan
dalamTabel 3. Perancah HA dibentuk oleh fase hidroksiapatit tunggal.
mengakibatkan munculnya jendela-jendela baru di antara pori-pori.
Perancah TCP bersifat bifasik, dengan β-TCP utama dan Ca minor2P2HAI7
Pembubaran keramik dimulai sepanjang batas butir dan permukaan retak
(lihatGambar 2). Dalam perancah TCP dan BCP, melemahnya batas butir
fase. Perancah BCP memiliki struktur multi-fase yang terdiri dari
mengakibatkan hilangnya (rontok) butir individu
hidroksiapatit, α-TCP, dan β-TCP. Untuk menjelaskan properti dan perilaku
perancah BCP dengan benar, kita tidak hanya perlu mengetahuinya

Gambar 1.Mikrograf SEM membandingkan struktur makro (a) perancah HA, (b) perancah TCP, dan (c) perancah BCP sebelum degradasi dengan struktur makro (d)
perancah HA, (e) perancah TCP, dan (f) perancah BCP setelah 14 hari-hari degradasi.

547
P. Stastny, dkk. Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553

Gambar 2.Mikrograf SEM membandingkan struktur mikro permukaan (a) perancah HA, (b) perancah TCP, dan (c) perancah BCP sebelum degradasi dengan struktur mikro
(d) perancah HA, (e) perancah TCP, dan (f) perancah BCP setelah 14 hari degradasi.

Tabel 3 kekuatan tekan perancah HA tidak terpengaruh selama seluruh

Komposisi fase perancah sinter sebelum dan sesudah degradasi. percobaan (yaitukekuatan tekan ultimat adalah tanpa perbedaan yang
Sampel Waktu degradasi (hari)
signifikan secara statistik). Di sisi lain, kekuatan sampel BCP dan TCP
menurun secara signifikan setelah terpapar larutan asam. Kekuatan
0 2 7 14 sampel BCP menurun menjadi 0,50 MPa dan kekuatan sampel TCP
mencapai 0,09 MPa yang dapat diabaikan setelah degradasi.Gambar 7
HA 100% HA 100% HA 100% HA 100% HA
TCP 89% β-TCP 88% β-TCP 86% β-TCP 86% β-TCP
menunjukkan kekuatan tekan sebagai fungsi dari waktu degradasi.
11% Ca2P2HAI7 12% Ca2P2HAI7 14% Ca2P2HAI7 14% Ca2P2HAI7 Terlihat jelas bahwa kekuatan perancah HA tidak berubah. Nilai
BPK 62% β-TCP 71% β-TCP 72% β-TCP 72% β-TCP kekuatan perancah TCP menurun tajam dalam 2 hari pertama
12% α-TCP 1% α-TCP 28% HA 28% HA sementara perancah BCP menunjukkan penurunan kekuatan yang
26% HA 28% HA
lebih stabil dibandingkan dengan perancah TCP.

(perancah TCP) atau bahkan kelompok biji-bijian besar (perancah BCP).

Kehilangan massa perancah selama degradasi ditunjukkan pada
Gambar 4dan sesuai dengan pengamatan mikroskopis. Kehilangan
massa total perancah TCP dan BCP setelah degradasi masing-masing
adalah 19 dan 15%, sedangkan kehilangan massa perancah HA hanya
sedang (3%). Ion kalsium dan fosfat terlarut meningkatkan pH
lingkungan asam.Gambar 5menunjukkan pH larutan asam sebelum
pertukaran berkala (larutan penyangga diganti dengan yang baru
setiap 2 hari). Larutan buffer dengan perancah BCP menunjukkan
peningkatan pH tertinggi pada awal degradasi, dengan penurunan pH
secara eksponensial selama degradasi. PH larutan dengan perancah
TCP atau HA lebih rendah dibandingkan dengan perancah BCP dan
perlahan-lahan menurun menuju pH larutan buffer asli selama
degradasi.
3.2. Degradasi kekuatan
Kuat tekan rata-rata dan parameter Weibull perancah sebelum dan
sesudah simulasi degradasi diberikanTabel 4. Plot Weibull yang sesuai
ditampilkan diGambar 6. Analisis statistik dari hasil mengungkapkan
bahwa kekuatan rata-rata perancah sebelum degradasi serupa pada
sampel HA dan TCP sedangkan sampel BCP memiliki kekuatan yang
lebih tinggi (1,2vs.1,7 MPa). Penyebaran nilai kekuatan (yaitumodulus
Weibull) serupa untuk semua perancah. Kekuatan yang lebih tinggi dari
perancah BCP dapat dikaitkan dengan fitur mikrostruktur (efek sinergis
dari butiran fase dan ukuran yang berbeda) karena struktur makro dari
semua perancah serupa. Perancah BCP menunjukkan energi yang
diserap secara statistik tertinggi selama uji kekuatan di antara semua
perancah. Energi yang diserap scaffold BCP, TCP dan HA sebelum
degradasi adalah 0,151, 0,063, dan 0,097 MJ m−3, masing-masing.
Setelah terpapar lingkungan asam,
3.3. Respon seluler in vitro
Untuk menguji biokompatibilitas perancah keramik, analisis adhesi dan
proliferasi serta analisis aktivitas metabolisme sel punca mesenkim unggulan
dilakukan pada hari ke 1, 3, 7, dan 14. Kandungan DNA (Gambar 8) mengacu pada
jumlah hMSC yang menempel pada perancah. Data dari hari pertama
mengungkapkan bahwa secara statistik lebih sedikit sel yang menempel pada
sampel BCP. Meskipun demikian, data menunjukkan bahwa jumlah sel sebanding
untuk semua perancah selama sisa percobaan (hari 3, 7, 14). Jumlah sel untuk
semua perancah tidak meningkat selama minggu pertama dan hanya meningkat
pada hari ke 14. Hasil penelitian menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan nyata
antara perancah yang diuji di lingkungan mikro permukaan yang dapat
mempengaruhi adhesi dan proliferasi sel punca [39]. Di sisi lain, sampel BCP
menunjukkan aktivitas metabolisme tertinggi secara statistik dari sel-sel yang
menempel dari semua perancah sejak hari ke-3 (Gambar 9). Selain itu, sampel BCP
mempromosikan peningkatan aktivitas metabolisme secara bertahap sejak hari
pertama meskipun jumlah sel konstan selama minggu pertama pembiakan seperti
yang ditunjukkan pada tes sebelumnya (Gambar 8). Untuk perancah TCP dan HA,
aktivitas metabolisme akhirnya mencapai tingkat yang sebanding pada hari ke-14
tetapi dengan peningkatan perancah HA yang jauh lebih lambat. Mikroskopi
confocal dan SEM digunakan untuk menganalisis penyebaran sel dan morfologi.
Sel-sel melekat pada semua perancah dan selama 14 hari menutupi permukaan
perancah (lihatGambar 10). Menggunakan SEM (Gambar 11) kami
mengungkapkan bahwa sel-sel pada perancah HA mempertahankan morfologi
berbentuk spindel sementara pada perancah lainnya mereka menyebar dari hari
ke 7 dan membentuk lapisan konfluen. Selain itu, kami mengamati bahwa sel
menutupi seluruh permukaan perancah BCP termasuk pori-pori.

548
P. Stastny, dkk.
Gambar 3.Distribusi fase keramik BCP. (a) pemetaan fase EBSD dari semua fase dengan batas butir yang disorot, (b) batas butir dihitung dari pola difraksi, (c) pemetaan
fase HA, (d) pemetaan fase β-TCP, dan (e) pemetaan fase α-TCP.
Gambar 4.Kehilangan massa perancah di lingkungan asam sebagai fungsi waktu
degradasi. Bilah kesalahan menunjukkan standar deviasi.
549
Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553
4. Diskusi
Struktur fase tampaknya menjadi salah satu parameter terpenting
yang memengaruhi degradasi dan respons biologis perancah CaP.
Namun, analisis perancah BCP yang disinter mengungkapkan
komposisi fase kompleks yang tidak sesuai dengan komposisi yang
diharapkan sesuai dengan detail pemrosesan perancah BCP (50%
hidroksiapatit dan 50% β-trikalsium fosfat). Untuk menjelaskan
perbedaan ini, kita harus melihat kandungan fase bubuk mentah.
Serbuk HA terdiri dari 100% fase hidroksiapatit tetapi serbuk TCP
mengandung 89% β-trikalsium fosfat dengan 11% kalsium pirofosfat
(Ca2PO7) sebagai pengotor. Perancah TCP mempertahankan komposisi
fase bubuk TCP (lihatTabel 3). Namun, komposisi fase perancah BCP
sangat dipengaruhi oleh pengotor bubuk TCP. Kalsium pirofosfat
bereaksi dengan hidroksiapatit selama sintering scaffold menurut
persamaan:
sebuah2P2HAI7+ 2Ca5(PO4)3OH→4Ca3(PO4)2+ H2HAI (1)
Komposisi fasa teoritis perancah BCP dihitung menggunakan
Persamaan.(1)mengandung 28% hidroksiapatit dan 72% trikalsium fosfat.
Komposisi teoretis ini sangat dekat dengan komposisi yang ditentukan
secara eksperimental (26% HA+ 74% TCP) seperti yang ditunjukkan pada
Tabel 3. Apalagi bagian dari trikalsium fosfat diubah menjadi
P. Stastny, dkk. Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553

Gambar 5.pH larutan buffer dengan perancah tertanam (sebelum pertukaran Gambar 7.Kekuatan tekan perancah sebagai fungsi waktu degradasi. Rata-rata
solusi) sebagai fungsi waktu degradasi. Jika tersedia (2, 4, dan 6 hari), bilah sampel diberikan dengan interval kepercayaan 95%.
kesalahan menunjukkan standar deviasi. Garis putus-putus menunjukkan tren
data.

Tabel 4
Nilai rata-rata dan parameter Weibull dari kekuatan tekan akhir perancah sebelum
dan sesudah degradasi.

Sampel/ Kekuatan tekan

waktu degradasi
Rata-rata Jumlah Weibull Weibull
kekuatansebuah sampel kekuatanb modulusb

(MPa) (-) (MPa) (-)

HA/0 d 1,20 ± 0,16 14 . 31+0,18

- 0,16 . 85-+2.73
1.82
TCP/0 d 1,22 ± 0,18 15 . 34+0,22
- 0,19 3.82+−.05
2
1.39
BCP/0 d 1,67 ± 0,18 15 . 81+0,20
- 0,18
. 60+3.01
- 2.04
HA/14 d 1,01 ± 0,08 12 . 07+0,08
- 0,08 . 96-+5.64
3.60
TCP/14 d 0,09 ± 0,02 14 . 10+0,03 2.24
+1
- 0,02 -.26
0,84
BCP/14 d 0,50 ± 0,07 15 . 55+0,09
- 0,08
. 04+2.17
− 1.47

Gambar 8.Jumlah sel yang menempel pada perancah dikuantifikasi sebagai jumlah DNA
sebuahRata-rata sampel diberikan dengan interval kepercayaan 95%.
yang bergantung pada waktu kultur. Bilah kesalahan memberikan standar deviasi dan
bParameter Weibull ditentukan dengan interval kepercayaan 95% sesuai dengan
perbedaan yang signifikan secara statistik ditampilkan di atas kolom. *Data berbeda
standar EN 843-5. secara signifikan dari semua sampel lain pada titik data yang diberikan (p <0,05).

modifikasi α suhu tinggi karena sintering dilakukan di atas β→αsuhu

transisi (~1125 °C). Nampaknya fase α-TCP lebih disukai terbentuk pada
batas butir dan beberapa persimpangan butir β-TCP selama sintering
suhu tinggi (lihat Gambar 3). Namun demikian, rasio α-TCP ke β-TCP
dapat dikontrol dengan jadwal sintering dan pendinginan yang tepat [
40]. Dengan demikian perancah BCP yang diselidiki sebenarnya adalah
trifasik, dengan rasio fase akhir yang berbeda secara signifikan dari
rasio pencampuran. Kurangnya analisis rinci tentang komposisi fasa
dan distribusi fasa bisa menjadi salah satu alasan laporan kontroversial
tentang perancah BCP yang ditemukan dalam literatur [41,42].

Penjelasan rinci tentang komposisi dan distribusi fase dapat

membantu kami menjelaskan mekanisme degradasi perancah di
lingkungan asam. Karena hidroksiapatit adalah kalsium ortofosfat yang
paling tidak larut, struktur perancah HA hampir utuh selama uji
degradasi. Hal ini dikonfirmasi oleh kehilangan massa yang rendah dan
nilai kekuatan yang stabil selama uji degradasi. Di sisi lain, α-trikalsium
fosfat adalah fase yang paling larut dalam perancah BCP dan larut
hampir seluruhnya dalam 2 hari pertama. Pembubaran fase α-TCP
Gambar 6.Plot Weibull kekuatan tekan perancah sebelum dan sesudah 14 hari
pada batas butir melemahkan struktur keramik dan, setelah
degradasi.
pembubaran daerah yang lebih besar dengan

550
P. Stastny, dkk.
Gambar 9.Aktivitas metabolisme sel yang menempel pada perancah yang berasal dari uji
MTS bergantung pada waktu kultur. Bilah kesalahan memberikan standar deviasi dan
perbedaan yang signifikan secara statistik ditampilkan di atas kolom. *Data berbeda
secara signifikan (p <0,05). **Data berbeda secara signifikan dari semua sampel lainnya
pada titik waktu tertentu (p <0,01).
nanograins α-TCP terakumulasi, ada kehilangan massa karena jatuh dari beberapa
kelompok butir yang longgar (HA / β-TCP) (lihatGambar 12sebuah). Karena wilayah
butiran α-TCP yang lebih besar tidak terdistribusi secara homogen dalam struktur
keramik, pembubarannya tidak menyebabkan runtuhnya struktur scaffold total
melainkan mengakibatkan hilangnya cluster butiran secara acak, yang pada
gilirannya membentuk lubang lubang besar dan jendela baru. (melihatGambar 1).
Setelah pembubaran butiran α-TCP besar dalam perancah BCP, butiran
hidroksiapatit mencegah struktur cepat lebih lanjut.
Gambar 10.Visualisasi adhesi sel dan distribusi pada perancah menggunakan mikroskop confocal. Inti sel diwarnai merah dan membran internal sel berwarna hijau.
(Untuk interpretasi referensi warna dalam legenda gambar ini, pembaca dirujuk ke versi web artikel ini.)
551
Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553
degradasi dan penurunan kekuatan melambat. Perancah BCP
mempertahankan kekuatan yang wajar bahkan setelah degradasi 14 hari.
Meskipun kelarutan β-TCP lebih rendah dari kelarutan α-TCP [43], itu cukup
tinggi untuk melemahkan batas butir dan membuka antarmuka retak di
perancah TCP (lihatGambar 2e). Mekanisme degradasi β-TCP yang disinter
seperti itu juga ditemukan oleh penulis lainin vitro [33] danin vivo [28] dan
mengakibatkan hilangnya biji-bijian individu. Butir β-TCP individu besar yang
jatuh dari struktur ditunjukkan pada Gambar 12b. Proses degradasi ini
berlangsung di scaffold TCP selama seluruh uji degradasi dan menghasilkan
scaffold yang terkikis secara homogen dengan kekuatan minimum dan
kehilangan massa yang tinggi. Pembubaran cepat α-TCP dalam perancah
BCP membuat media asam menjadi terlalu jenuh dan hidroksiapatit yang
kekurangan kalsium mengendap pada permukaan perancah BCP (lihat
Gambar 13). Endapan ini baru ditemukan pada scaffold BCP setelah 2 hari
dan larut setelah pertukaran larutan buffer ketika konsentrasi ion kalsium
dan fosfat dalam medium menurun. Kehilangan massa yang terbatas akibat
proses disolusi-presipitasi menunjukkan bahwa butiran yang lepas dan
terlepas dari struktur keramik berperan penting dalam kehilangan massa
total. Ini mengikuti dari hasil kami bahwa degradasi dan resorpsi perancahin
vivodapat terjadi tidak hanya melalui pembubaran asam tetapi juga melalui
fagositosis partikel yang dilepaskan dari scaffold setelah degradasi asam.
Larutan asam untuk simulasi degradasi disangga pada pH= 5,5
menggunakan buffer sitrat-fosfat (buffer McIlvaine). Nilai pH larutan
penyangga ini dapat dengan mudah disesuaikan dengan mengubah
rasio komponennya (asam sitrat/disodium hidrogen fosfat). Ion kalsium
yang dilepaskan dari perancah kami mengubah stabilitas buffer
dengan membentuk kompleks Ca dengan asam sitrat pengkelat. Ion
fosfat (hidrogen atau dihidrogen fosfat) selanjutnya dapat menggeser
pH larutan ke nilai yang lebih tinggi. Karena interaksi terlarut
P. Stastny, dkk.
Gambar 11.Morfologi sel yang menempel pada (a) perancah HA, (b) perancah TCP, dan (c) perancah BCP divisualisasikan menggunakan pemindaian mikroskop elektron pada hari ke 7.
Gambar 12.Mikrograf SEM dari butiran keramik atau kluster butiran jatuh dari struktur (a) perancah BCP dan (b) perancah TCP selama degradasi di lingkungan asam.
Gambar 13.Mikrograf SEM dari endapan pada permukaan perancah BCP setelah 2
hari degradasi di lingkungan asam.
ion scaffold dengan buffer sulit untuk mengukur konsentrasinya secara langsung.
Namun demikian, secara kasar kita dapat mengkorelasikan peningkatan pH
larutan (lihatGambar 5) dengan jumlah ion yang dilepaskan dari perancah.
Berdasarkan asumsi ini, kita dapat mengkorelasikan peningkatan pH awal yang
tinggi dari larutan BCP dengan pembubaran fase α-TCP. Penurunan pH secara
eksponensial selama degradasi berhubungan dengan penghilangan fase α-TCP
dan endapan yang diendapkan. pH larutan buffer dengan scaffold TCP dan HA
yang direndam sedikit meningkat dibandingkan pH larutan buffer asli dan nilai pH
ini hampir konstan dengan hanya sedikit penurunan selama degradasi. Seperti
yang diharapkan, larutan buffer dengan perancah HA yang direndam
menunjukkan peningkatan pH terendah dan dengan demikian pembubaran dan
pelepasan ion terendah. walaupunin vivolingkungan dalam tubuh yang hidup
sangat berbeda dari kitain vitromodel, simulasi degradasi memberikan
perbandingan yang jelas dari sensitivitas perancah CaP yang berbeda terhadap
degradasi asam dan dapat memprediksi resorbabilitas perancah dalam kehidupan
552
Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553
tubuh.
Semuain vitrotes adhesi, proliferasi, dan aktivitas metabolisme
menunjukkan respons sel terbaik terhadap perancah BCP. Sulit untuk
mengidentifikasi parameter terpenting yang bertanggung jawab atas
respons sel yang berbeda terhadap perancah yang diuji. Perbedaan
utama ditemukan dalam komposisi fasa. Konsentrasi ion dalam
lingkungan sel, yang dapat mempengaruhi perilaku sel, berkaitan
dengan struktur fasa ini. Parameter lain yang mempengaruhi respon
sel adalah morfologi permukaan, yang berubah dengan perbedaan
ukuran butir keramik scaffold. Morfologi permukaan perancah
mungkin telah dimodifikasi lebih lanjut karena pembubaran fase
tertentu yang lebih disukai. Tampaknya struktur dengan fase yang
sangat larut (α-TCP) yang tertanam dalam matriks yang kurang larut (β-
TCP/HA) membawa beberapa keuntungan biologis dan,43,44].
5. Kesimpulan
Perancah kalsium fosfat berpori dengan struktur HA, TCP, dan BCP
dibuat dengan pembusaan langsung dari bubur keramik diikuti dengan
sintering. Perancah menunjukkan struktur pori seluler dengan ukuran
pori yang sama dan porositas terbuka lebih dari 80%. Perancah HA
dibentuk oleh fase hidroksiapatit tunggal. Perancah TCP bersifat bifasik
dengan β-TCP utama dan Ca minor2P2HAI7fase. Perancah BCP dibentuk
oleh tiga fase, yaitu α-TCP, β-TCP, dan HA. Karena fitur mikrostruktur,
perancah BCP memiliki kekuatan tekan yang lebih tinggi sebesar 1,7
MPa dibandingkan dengan perancah HA dan TCP, yang menunjukkan
kekuatan serupa sebesar 1,2 MPa. Setelah paparan larutan buffer asam
pH = 5,5, kekuatan scaffold HA tidak berubah selama 14 hari. Di sisi
lain, kekuatan scaffold TCP menurun tajam dalam 2 hari pertama dan
mencapai nilai 0,09 MPa yang dapat diabaikan setelah 14 hari.
Kekuatan perancah BCP menunjukkan penurunan yang stabil, dengan
nilai wajar 0,5 MPa setelah 14 hari. Kehilangan massa rendah 3% di
perancah HA setelah 14 hari
P. Stastny, dkk.
paparan lingkungan asam mengkonfirmasi degradasi struktur HA yang
rendah. Kehilangan massa yang lebih tinggi dari perancah TCP dan BCP
(masing-masing 19 dan 15%) dihasilkan oleh ekstraksi butiran dari struktur
keramik. Fase α-TCP dan β-TCP yang larut melemahkan struktur keramik dan
membiarkan butiran rontok. Disimpulkan bahwa butiran hidroksiapatit
dalam struktur perancah BCP bertanggung jawab atas degradasi yang lebih
rendah dan kekuatan yang lebih tinggi dibandingkan dengan perancah TCP.
Semuain vitrotes, adhesi sel, proliferasi, dan aktivitas metabolisme
menunjukkan respons terbaik sel terhadap perancah BCP. Struktur perancah
BCP dengan fase yang sangat larut (α-TCP) tertanam dalam matriks yang
kurang larut (β-TCP / HA) menunjukkan degradasi yang dapat dikontrol
dengan stabilitas kekuatan yang sesuai dan dengan perilaku biologis yang
menguntungkan itu mewakili struktur kalsium fosfat yang disukai untuk a
perancah tulang yang dapat diserap.
Deklarasi minat
Tidak ada.
Pengakuan
Penelitian ini didukung secara finansial oleh Kementerian
Kesehatan Republik Ceko di bawah hibah 17-31276A, BUT CEITEC,
Universitas Teknologi Brno di bawah hibah STI-J-18-5307, dan Czech
Science Foundation di bawah hibah 18- 09306S dan 16-14758S.
Sebagian pekerjaan dilakukan dengan dukungan CEITEC Nano
Research Infrastructure (MEYS CR, 2016-2019).
Referensi
[1]V. Campana, G. Milano, E. Pagano, M. Barba, C. Cicione, G. Salonna, W. Lattanyi,
G. Logroscino, Pengganti tulang dalam bedah ortopedi: dari sains dasar hingga praktik
klinis, J. Mater. Sains. Mater. Kedokteran 25 (2014) 2445–2461.
[2]WH Wang, KWK Yeung, Bone grafts and biomaterials subtitutes for bone defect
repair: a review, Bioact. Mater. 2 (2017) 224–247.
[3] P. Tessier, H. Kawamoto, J. Posnick, Y. Raulo, JF Tulasne, SA Wolfe, Komplikasi
pengambilan cangkok tulang autogenous: pengalaman kelompok 20.000 kasus,
Plast. Rekonstruksi Surg. 116 (2005) 72-75.
[4]R. Dimitriou, GI Mataliotakis, AG Angoules, NK Kanakaris, PV Giannoudis, Komplikasi
setelah pengambilan cangkok tulang autologus dari puncak iliaka dan
menggunakan RIA: tinjauan sistematis, Cedera 42 (2011) S3–S5.
[5]M. Orciani, M. Fini, R. Di Primio, M. Mattioli-Belmonte, Biofabrikasi dan regenerasi
jaringan tulang: sumber sel, pendekatan, dan tantangan, Depan. Bioeng.
Bioteknologi. 5 (2017) 17.
[6]S. Bose, M. Roy, A. Bandyopadhyay, Kemajuan terbaru dalam perancah rekayasa jaringan
tulang, Trends Biotechnol. 30 (2012) 546–554.
[7]V. Karageorgiou, D. Kaplan, Porositas perancah biomaterial 3D dan osteogenesis,
Biomaterial 26 (2005) 5474–5491.
[8]JD Debruijn, CA Vanblitterswijk, JE Davies, Pembentukan matriks tulang awal pada
antarmuka hidroksiapatit in-vivo, J. Biomed. Mater. Res. 29 (1995) 89–99.
[9]SV Dorozhkin, Biokeramik berbasis kalsium ortofosfat, Bahan 6 (2013) 3840–3942.
[10]XH Wang, SF Wang, F. Dia, E. Tolba, HC Schroder, B. Diehl-Seifert,
WEG Muller, Polyphosphate sebagai bahan implan bioaktif dan biodegradable:
induksi regenerasi tulang pada tikus, Adv. Eng. Mater. 18 (2016) 1406–1417.
[11]SM Best, AE Porter, ES Thian, J. Huang, Bioceramics: dulu, sekarang dan untuk masa
depan, J.Eur. Seram. Soc. 28 (7) (2008) 1319–1327.
[12]W. Habraken, P. Habibovic, M. Epple, M. Bohner, Kalsium fosfat dalam aplikasi
biomedis: bahan untuk masa depan? Mater. Hari ini 19 (2016) 69–87.
[13]JM Bouler, P. Pilet, O. Gauthier, E. Verron, keramik kalsium fosfat bifasik untuk
rekonstruksi tulang: tinjauan respons biologis, Acta Biomater. 53 (2017) 1–12.
[14]E. Champion, Sintering biokeramik kalsium fosfat, Acta Biomater. 9 (2013) 5855–5875.
[15]I. Denry, LT Kuhn, Desain dan karakterisasi perancah keramik kalsium fosfat untuk
rekayasa jaringan tulang, Dent. Mater. 32 (2016) 43–53.
[16]M. Trunec, Z. Chlup, Manufaktur subtraktif perancah hidroksiapatit yang
disesuaikan untuk regenerasi tulang, Seram. Int. 43 (2017) 11265–11273.
[17]Z. Sheikh, S. Najeeb, Z. Khurshid, V. Verma, H. Rashid, M. Glogauer, Biodegradable
553
Ilmu & Teknik Material C 100 (2019) 544–553
bahan untuk aplikasi perbaikan tulang dan rekayasa jaringan, Bahan 8 (2015)
5744–5794.
[18]SV Dorozhkin, Mekanisme pembubaran kalsium apatit dalam asam: tinjauan
literatur, World J. Methodol. 2 (2012) 1–17.
[19]EO Huffman, WE Cate, ME Deming, KL Elmore, Kelarutan fosfat, laju larutan kalsium
fosfat dalam larutan asam fosfat, J. Agric. Makanan
kimia 5 (1957) 266–275.
[20]Z. Sheikh, MN Abdallah, AA Hanafi, S. Misbahuddin, H. Rashid, M. Glogauer,
Mekanisme degradasi in vivo dan resorpsi biomaterial berbasis kalsium fosfat,
Bahan 8 (2015) 7913–7925.
[21]JX Lu, M. Descamps, J. Dejou, G. Koubi, P. Hardouin, J. Lemaitre, JP Proust, Mekanisme
biodegradasi biomaterial kalsium fosfat dalam tulang, J. Biomed. Mater. Res. 63
(2002) 408–412.
[22]IA Silver, RJ Murrills, DJ Etherington, Microelectrode mempelajari lingkungan mikro
asam di bawah makrofag dan osteoklas yang melekat, Exp. Sel Res. 175 (1988) 266–
276.
[23]JX Lu, A. Gallur, B. Flautre, K. Anselme, M. Descamps, B. Thierry, P. Hardouin, Studi
perbandingan reaksi jaringan terhadap keramik kalsium fosfat di antara situs
tulang kanselus, kortikal, dan medula pada kelinci, J. Bioma. Mater. Res. 42 (1998)
357–367.
[24] GF de Grado, L. Keller, Y. Idoux-Gillet, Q. Wagner, AM Musset, N. Benkirane-Jessel, F. Bornert,
D. Offner, Pengganti tulang: ulasan tentang karakteristiknya, penggunaan klinis, dan
perspektif untuk manajemen cacat tulang yang besar, J. Tissue Eng. 9 (2018)
2041731418776819.
[25]S. Yamada, D. Heymann, JM Bouler, G. Daculsi, Resorpsi osteoklastik keramik kalsium
fosfat bifasik in vitro, J. Biomed. Mater. Res. 37 (1997) 346–352.
[26]S. Yamada, D. Heymann, JM Bouler, G. Daculsi, Resorpsi osteoklastik dari keramik
kalsium fosfat dengan rasio hidroksiapatit/beta-trikalsium fosfat yang berbeda,
Biomaterial 18 (1997) 1037–1041.
[27]S. Schaefer, R. Detsch, F. Uhl, U. Deisinger, G. Ziegler, Bagaimana degradasi bahan
pengganti tulang kalsium fosfat dipengaruhi oleh komposisi fasa dan porositas,
Adv. Eng. Mater. 13 (2011) 342–350.
[28]HK Koerten, J. van der Meulen, Degradasi keramik kalsium fosfat, J. Biomed. Mater.
Res. 44 (1999) 78–86.
[29]J. Lu, M. Descamps, J. Dejou, G. Koubi, P. Hardouin, J. Lemaitre, J.-P. Proust,
Mekanisme biodegradasi biomaterial kalsium fosfat dalam tulang, J. Biomed.
Mater. Res. 63 (2002) 408–412.
[30]F. Theiss, D. Apelt, B. Brand, A. Kutter, K. Zlinsykz, M. Bohner, S. Matter, C. Frei,
JA Auer, B. von Rechenberg, Biokompatibilitas dan resorpsi semen kalsium fosfat
brushite, Biomaterial 26 (2005) 4383–4394.
[31]RM Pilliar, MJ Filiaggi, JD Wells, MD Grynpas, RA Kandel, perancah kalsium polifosfat
berpori untuk aplikasi pengganti tulang – karakterisasi in vitro, Biomaterial 22
(2001) 963–972.
[32]JG Dellinger, AM Wojtowicz, RD Jamison, Pengaruh degradasi dan porositas pada sifat
bantalan beban model perancah tulang hidroksiapatit, J. Biomed. Mater. Res. A 77A
(2006) 563–571.
[33]A. Diez-Escudero, M. Espanol, S. Beats, MP Ginebra, Degradasi kalsium fosfat secara
in vitro: efek porositas multiskala, sifat dan komposisi tekstur, Acta Biomater. 60
(2017) 81–92.
[34]VM Wu, V. Uskokovic, Apakah ada hubungan antara kelarutan dan daya serap fase
kalsium fosfat yang berbeda secara in vitro? Biochim. Biofisika. Acta, Jenderal Subj.
1860 (2016) 2157–2168.
[35]A. Motealleh, S. Eqtesadi, A. Civantos, A. Pajares, P. Miranda, Robocast 45S5 perancah
bioglass: perilaku in vitro, J. Mater. Sains. 52 (15) (2017) 9179–9191.
[36]P. Stastny, Z. Chlup, D. Kalasova, T. Zikmund, J. Kaiser, M. Trunec, pengecoran gel berbasis
epoksi dari busa hidroksiapatit yang dapat dikerjakan untuk aplikasi medis, J. Am. Seram.
Soc. 101 (2018) 3317–3327.
[37]A. Barba, Y. Maazouz, A. Diaz-Escudero, K. Rappe, M. Espanol, EB Montufar,
C. Ohman-Magi, C. Persson, P. Fontecha, MC Manzanares, J. Franch, MP Ginebra,
Osteogenesis oleh scaffold kalsium fosfat berstruktur nano berbusa dan dicetak
3D: efek arsitektur pori, Acta Biomater. 79 (2018) 13.
[38]M. Rumpler, A. Woesz, JWC Dunlop, JT van Dongen, P. Fratzl, Pengaruh geometri
pada pertumbuhan jaringan tiga dimensi, JR Soc. Antarmuka 5 (2008) 1173–1180.
[39]C. Gao, S. Peng, P. Feng, C. Shuai, Biomaterial tulang dan interaksi dengan sel
punca, Bone Res. 5 (2017) 17059.
[40]O. Brown, M. McAfee, S. Clarke, F. Buchanan, Sintering kalsium fosfat bifasik, J. Mater.
Sains. Mater. Kedokteran 21 (2010) 2271–2279.
[41]SV Dorozhkin, biokeramik kalsium ortofosfat (CaPO4) multifasik dan aplikasi
biomedisnya, Ceram. Int. 42 (2016) 6529–6554.
[42]M. Ebrahimi, MG Botelho, SV Dorozhkin, Biphasic calcium phosphates bioceramics
(HA/TCP): konsep, sifat fisikokimia dan dampak standardisasi protokol studi dalam
penelitian biomaterial, Mater. Sains. Eng. C 71 (2017) 1293–1312.
[43] RG Carrodeguas, S. De Aza, α-Tricalcium phosphate: sintesis, sifat dan aplikasi
biomedis, Acta Biomater. 7 (2011) 3536–3546.
[44]M. Tamai, R. Nakaoka, T. Tsuchiya, Sitotoksisitas berbagai keramik kalsium fosfat,
Key Eng. Mater. 309-311 (2006) 263–266.