Fitoterapia 73 Suppl.

1 (2002) S21 – S29

Aktivitas antioksidan propolis: peran caffeic

asam fenetil ester dan galangin
A. Vanell Sebuah Sebuah
A. Russo Sebuah, *, R. Longo
b,

Sebuah Departemen Biokimia, Kimia Medis dan Biologi Molekuler, Universitas Catania,
V.le A. Doria 6, 95125, Catania, Italia
b Laboratorium Farmasi C. Sessa, V.le Gramsci 212, 20099 Sesto SG Milano, Italia

Abstrak

Propolis, produk alami yang diproduksi oleh lebah madu, telah digunakan selama ribuan tahun dalam pengobatan
tradisional untuk beberapa tujuan. Ekstraknya mengandung asam amino, asam fenolat, ester asam fenolat, flavonoid, asam
sinamat, terpene dan asam caffeic. Ia memiliki beberapa aktivitas biologis seperti antiinflamasi, imunostimulatori, antivirus
dan antibakteri. Mode pasti dari mekanisme fisiologis atau biokimia yang bertanggung jawab atas efek medis,
bagaimanapun, belum ditentukan. Dalam pekerjaan ini, kami telah menyelidiki aktivitas antioksidan dari ekstrak propolis yang
kehilangan asam caffeic phenethyl e (sC
teArPE). Tambahan,
aktivitas CAPE dan galangin juga diperiksa. Propolis ex (trwaictht dan tanpa
CAPE) dan komponen aktifnya menunjukkan efek pembersihan radikal bebas yang bergantung pada dosis, penghambatan
aktivitas xantin oksidase yang signifikan, dan kapasitas antilipoperoksidatif. Ekstrak propolis dengan CAPE lebih aktif
dibandingkan ekstrak propolis tanpa CAPE. CAPE, digunakan sendiri, menunjukkan aktivitas antioksidan yang kuat, lebih tinggi
dari galangin. Bukti eksperimental, oleh karena itu, menunjukkan bahwa CAPE memainkan peran penting dalam aktivitas
antioksidan propolis.

2002 Elsevier Science BV Semua hak dilindungi undang-undang.

Kata kunci: Caffeic acid phenethyl este (rCAPE); Galangin; Operasi lipoperoksidasi; Propolis; Kegiatan pemulungan; Xantin oksidase
(XO)

* Penulis yang sesuai. Telp q . : 39-095-7384073; fax q : 39-095-7384220.

Alamat email: alrusso@mbox.unict.i (tA. Russo).

0367-326X / 02 / $ - lihat materi depan 2002 Elsevier Science BV Semua hak dilindungi undang-undang. PII:
S0367-326X Ž 02.00187-9
S22 A. Russo dkk. / Fitoterapia 73 Suppl. 1 (2002) S21 – S29

1. Perkenalan

Propolis menunjukkan rangkaian getah, resin, dan balsem dengan konsistensi kental yang dikumpulkan oleh
lebah madu dari bagian tertentu, terutama pucuk dan kulit tanaman, terutama yang ditemukan di pohon jenis
konifera. Lebah membawa propolis kembali ke sarangnya, di mana ia dimodifikasi dan dicampur dengan zat lain
termasuk lilin dan sekresi air liur lebah itu sendiri. Ekstrak propolis adalah campuran bahan alami yang sangat
rumit w s1,2 x. Ini mengandung asam amino, asam fenolik, ester asam fenolik, flavonoid, asam sinamat, terpene
dan asam caffeic.

Propolis telah digunakan dalam pengobatan tradisional di seluruh dunia. Telah terbukti memiliki aktivitas
antiinflamasi, imunostimulatori, antivirus dan antibakteri
w 3–6 x. Sifat farmakologis propolis pada prinsipnya dikaitkan dengan keberadaan flavonoid w s7,8 x. Ini
dilaporkan memiliki aktivitas anti-inflamasi, antihepatotoksik, antikanker dan antivirus, serta efek antibakteri. w
f9 e, c1ts0 x.
Pendapat yang berlaku adalah bahwa aktivitas biologis flavonoid yang luas terkait, setidaknya sebagian,
dengan kemampuannya untuk melindungi dari tindakan merusak dari radikal bebas. Faktanya, biopolifenol ini
telah terbukti mengganggu tidak hanya reakti propagasi w n11,12 x tetapi juga dengan pembentukan radikal
bebas, baik dengan mengkelat meta transisi w 1l 3 x atau dengan menghambat enzim yang terlibat dalam
reaksi inisiasi w 11,12,14,15
x. Lin dkk. w 16 x telah menunjukkan etanol propolis itu
ekstrak, secara signifikan mencegah peningkatan enzim mikrosomal hati tikus dan peroksidasi lipid setelah
pemberian alkohol kronis.
Baru-baru ini, telah dilaporkan bahwa komponen fenolik lain dari ekstrak propolis menunjukkan aktivitas
farmakologis yang menarik. Fenetil asam kafeat e (C. staferPE)
telah diidentifikasi sebagai salah satu prinsip aktif biologis utama dalam propolis dengan chemoprevention
dan antitumor propert w ie1s7,18 x. Mengingat pertimbangan ini, dalam penelitian ini kapasitas antioksidan dari
ekstrak propolis tanpa asam caffeic phenethyl este (rCAPE) dievaluasi. Selain itu, aktivitas CAPE dan
lengkuas juga diperiksa.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Bahan kimia

Fenetil este asam kafeat (C. r APE), galangin, b- nikotinamida-adenin-dinukleo-

pasang (NADH), 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil radika (lDPPH), xantin (X), xantin oksidase (XO), asam
linoleat, asam tiobarbiturat (TBA) diperoleh dari Sigma Aldrich Co (St. Louis , AS). Ekstrak propolis
etanol (twith dan tanpa CAPE) diperoleh oleh Laboratorium C. Ses (sMailano); Mengandung CAPE
10,44% dan lengkuas 9,04%. Semua bahan kimia lainnya berasal dari Me (rF
ckrankfurter, Jerman) y.
Larutan stok ekstrak propolis, CAPE dan galangin disiapkan dalam etanol.

2.2. Efek pemulung pada anion superoksida

Anion superoksida dihasilkan 'in vitro' seperti yang dijelaskan oleh Paoletti e w 1 t 9a x l ..
Campuran uji yang terkandung dalam volume total 1 ml, 100 mM trietanolamina-
 A. Russo dkk. / Fitoterapia 73 Suppl. 1 (2002) S21 – S29 S23

buffer diethanolamine, pH 7,4, 3 mM NADH, 25 m y M 12,5 mM EDTA y MnCl 2, 10

mM b- merkaptoethanol; beberapa sampel mengandung konsentrasi pro-
ekstrak polis (dengan dan tanpa CAPE ) ( 0,75, 1,5 dan 3 m g y ml), CAPE (0,03, 0,06
dan 0,12 m M) dan galangin (4, 8 dan 16 m M). Setelah inkubasi 20 menit pada 25 8 C, penurunan
absorbansi diukur l d s a3t40 nm. Superoksida dismutase
( SOD) (80 mU y ml) digunakan sebagai standar.

2.3. Pendinginan DPPH

Kapasitas pemulung radikal bebas propolis ext (ra wcitth dan tanpa CAPE ),
CAPE dan galangin diuji kemampuannya dalam memutihkan radikal 1,1-difenil-2 pikril-hidrazil (DPPH) yang
stabil. w 20 x. Campuran reaksi tersebut mengandung 8 m 6M DPPH dan konsentrasi propolis ekstra yang
berbeda (dengan dan tanpa CAPE ) ( 12, 25
dan 50 m g y ml), CAPE (0,6, 1,2 dan 2,5 m M) dan galangin (20, 50 dan 100 m M) dalam 1 ml etanol.
Setelah 10 menit pada suhu kamar absorbanc l e s a5t17 nm direkam.

2.4. Penghambatan aktivitas xantin oksidase

Xantin oksidase ( Xanthine: oksigen oksidoreduktase, EC1.1.3.22) Aktivitas dievaluasi secara

spektrofotometri dengan mengikuti pembentukan aci urat l d sdi292
nm ( ´ 9.2
M = 10 3). Campuran uji mengandung, dalam volume akhir 1 ml, 50 mM dapar fosfat pH 7,8, 2 m

Larutan 5M xantin dan 24 mU xantin oksidase

( kegiatan khusus 1 U y mg protein). Konsentrasi ekstrak propolis berbeda
( dengan dan tanpa CAPE ) ( 12, 25 dan 50 m g y ml), CAPE (10, 20 dan 40 m M) dan
galangin (100, 200 dan 400 m M) ditambahkan ke sampel sebelum enzim dan pengaruhnya terhadap
pembentukan asam urat digunakan untuk menghitung garis regresi. Hasilnya dinyatakan sebagai persentase
aktivitas enzim penghambatan.

2.5. Operasi oksidasi yang diinduksi

Peroksidasi asam linoleat diinduksi oleh 2 H 2 O UV-fotolisis. Percobaan dilakukan dalam volume 4 m
0l mengandung 1,4 M asam linoleat larut dalam
kloroform, dengan tidak adanya dan adanya konsentrasi yang berbeda dari ekstrak propolis (dengan dan
tanpa CAPE ) ( 200, 400 dan 800 m g y ml), CAPE (200, 400 dan
800 m M) dan galangin (200, 400 dan 800 m M). Segera sebelum penyinaran
sampel dengan sinar UV, H. 2 HAI2 ditambahkan ke konsentrasi akhir 2,5 mM.
Volume reaksi disimpan dalam tutup tabung microcentrifuge polietilen, itu
ditempatkan langsung di permukaan transillumina (t8o0r00 m W cm y 1) di 300
nm. Sampel diiradiasi selama 30 menit pada suhu kamar. Setelah iradiasi, kadar zat asam-reaktif
thiobarbituric (T eBsARS) ditentukan sebagai
dijelaskan oleh Stock w s21 x.
S24 A. Russo dkk. / Fitoterapia 73 Suppl. 1 (2002) S21 – S29

2.6. Uji TBARS

Setelah inkubasi, sampel diperlakukan dengan triklorasetik a (konsentrasi akhir c1i0d%) n; supernatan
800-g digunakan untuk uji TBARS menggunakan prosedur kolorimetri yang melibatkan reaksi dengan
thiobarbituric ac (iTdBA) w 21 x.
Hasil dinyatakan sebagai persentase penghambatan lipoperoksidasi sehubungan dengan kontrol.

3. Hasil

Dalam penelitian ini untuk mengetahui kapasitas pemulungan anion superoksida dari ekstrak propolis (dengan dan
tanpa CAPE ) , CAPE dan galangin, kami menggunakan metode
Paoletti w 19 x yang tidak termasuk reaksi tipe Fenton dan xan y sistem oksidase thxiannethine. Ekstrak propolis dengan
dan tanpa CAPE menghambat pembentukan anion superoksida dengan cara yang bergantung pada dosis, tetapi
ekstrak propolis dengan CAPE menunjukkan capaci pemulungan yang lebih kuat (tF).
yig. 1). CAPE dan galangin menunjukkan dosis-
efek pemulungan superoksida tergantung; CAPE lebih aktif dari pada lengkuas. Dalam kondisi percobaan 0.1 m
2M CAPE sesuai dengan aksi 80 m yU
ml SOD (Gbr. 1).
Aktivitas pembersihan radikal bebas senyawa alami ini juga diuji kemampuannya dalam memutihkan radikal
stabil 1,1-difenil-2-pikril-hidra (zDyPl PH).

Gbr. 1. Efek pemulung propolis ekstra (cwtith dan tanpa CAPE ) ( 0,75, 1,5 dan 3 m g y ml), CAPE
( 0,03, 0,06 dan 0,12 m M) dan galangin (4, 8 dan 16 m Mono y 2, dinyatakan sebagai persentase penghambatan
y
oksidasi NADH; tingkat O 2 produksi adalah 4 nmo y lein.
m Superoksida dismutas (eSOD) (80 mU y ml)
digunakan sebagai standar. Setiap nilai mewakili "mSe.D sebuah. dari lima percobaan.
 A. Russo dkk. / Fitoterapia 73 Suppl. 1 (2002) S21 – S29 S25

Gambar. 2. Efek pemulung propolis ekstra (cwtith dan tanpa CAPE ) ( 12, 25 dan 50 m g y ml), CAPE
( 0,6, 1,2 dan 2,5 m M) dan galangin (20, 50 dan 100 m M) pada radikal 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil (DPPH) stabil. Hasilnya dinyatakan sebagai
persentase penurunan absorbansi pada 517 nm sehubungan dengan kontrol. Setiap nilai mewakili m "
eaSn.D. dari lima percobaan.

w 20 x. Pengujian ini memberikan informasi tentang reaktivitas senyawa uji dengan radikal bebas yang stabil. Karena
elektronnya yang ganjil, DPPH memberikan pita serapan yang kuat pada 517 nm dalam spektroskopi tampak (ydeep
violet colo) r. Karena elektron ini berpasangan dengan adanya pemulung radikal bebas, absorpsi menghilang, dan
dekolorisasi yang dihasilkan bersifat stoikiometri sehubungan dengan jumlah elektron yang diambil. Ekstrak propolis
dengan dan tanpa CAPE menunjukkan kapasitas pendinginan DPPH yang bergantung pada dosis. Selain itu dalam
pengujian ini ekstrak propolis dengan CAPE lebih efisien dibandingkan ekstrak propolis tanpa CAP (EFig. 2). CAPE di
2.5 m Konsentrasi M menurunkan absorpsi sebesar 100% dan menunjukkan efisiensi quenching yang lebih tinggi
dibandingkan galangin.

Pengaruh propolis dan komponennya terhadap aktivitas xantin oksidase ditunjukkan pada Tabel 1. Hasilnya
dinyatakan sebagai persentase penghambatan aktivitas xantin oksidase sehubungan dengan kontrol. Penambahan
ekstrak yang diuji menentukan penghambatan aktivitas xantin oksidase yang bergantung pada dosis, tetapi
penambahan ekstrak propolis tanpa CAPE menunjukkan efek yang lebih rendah pada pembentukan asam urat. CAPE
menunjukkan aksi penghambatan yang lebih efisien pada aktivitas xantin oksidase dibandingkan galangin, pada
konsentrasi terendah (sTabel 1).

Gambar 3 menunjukkan pengaruh konsentrasi yang berbeda dari ekstrak propolis dan ekstraknya
komponen pada peroksidasi asam linoleat yang diinduksi b 2 y H 2 O UV-fotolisis, dimonitor

oleh substansi reaktif asam thiobarbituric (T esBARS). Dengan tidak adanya diuji
senyawa alami, 1,15 nm y OML l TBARS terbentuk. Dari gambar tersebut terlihat jelas bahwa ekstrak propolis dengan CAPE
menunjukkan kemampuan yang lebih potensial untuk menurunkan TBARS
S26 A. Russo dkk. / Fitoterapia 73 Suppl. 1 (2002) S21 – S29

Tabel 1
Pengaruh propolis (dengan dan tanpa CAPE ) , CAPE dan galangin pada aktivitas xantin oksidase

Senyawa Inhibisi
(%)

Propolis dengan CAPE

12 m g y ml 36.7 "1.0
25 m g y ml 62.5 "2.1
50 m g y ml 95.5 "2.4

Propolis tanpa CAPE

12 m g y ml 18.3 "1.7
25 m g y ml 34.6 "2.3
50 m g y ml 64,7 "0,8

TANJUNG

10 m M 32.5 "1.0
20 m M 56.7 "1.5
40 m M 93.4 "3.2

Galangin
100 m M 13.2 "2.1
200 m M 43.0 "0.9
400 m M 82.4 "1.8

Hasil dinyatakan sebagai persentase penghambatan aktivitas xantin oksidase sehubungan dengan kontrol. Setiap nilai mewakili m "
eaSnD dari lima percobaan.

Gambar. 3. Pengaruh ekstrak propolis (twith dan tanpa CAPE ) ( 200, 400 dan 800 m g y ml), CAPE (200,
400 dan 800 m M) dan galangin (200, 400 dan 800 m M) pada peroksidasi asam linoleat yang diinduksi oleh
H 2 HAI 2 Fotolisis UV. Hasil dinyatakan sebagai persentase penghambatan lipoperoksidasi sehubungan dengan kontrol (1,15 nmo y lml).
Setiap nilai mewakili m " eaSn.D. dari lima percobaan.
 A. Russo dkk. / Fitoterapia 73 Suppl. 1 (2002) S21 – S29 S27

pembentukannya dibandingkan ekstrak propolis tanpa CAPE. CAPE dan galangin juga menunjukkan efek perlindungan
terhadap peroksidasi, dibandingkan dengan kontrol; CAPE lebih aktif dari pada lengkuas. Etanol yang digunakan untuk
melarutkan senyawa alam pada konsentrasi 0,5% tidak mempengaruhi pembentukan hidroksil radika (lsdata tidak
menunjukkan) n.

4. Diskusi

Spesies oksigen reaktif (sROS) terbentuk terus menerus dalam sel sebagai konsekuensi dari reaksi biokimia
oksidatif dan faktor eksternal. Namun, mereka menjadi berbahaya jika diproduksi secara berlebihan dalam
kondisi abnormal tertentu seperti peradangan, iskemia dan keberadaan ion besi katalitik. Dalam kondisi ini,
antioksidan endogen mungkin tidak dapat melawan pembentukan ROS

w 22,23 x. Spesies oksigen reaktif yang terbentuk dapat menyebabkan kerusakan sel dengan peroksidasi lipid
membran, inaktivasi enzim sulfhidril, ikatan silang protein dan kerusakan DNA w 24 x. Kerusakan ini mungkin terlibat
dalam etiologi berbagai penyakit manusia, seperti penyakit jantung koroner, peradangan, penyakit
neurodegeneratif.
( Parkinson dan Alzheimer), kanker dan intoksikasi etanol w n 25–27 x.
Baru-baru ini dilaporkan bahwa CAPE menunjukkan efek perlindungan pada iskemia usus y cedera reperfusi pada
tikus w 28 x dengan menghambat pembentukan radikal oksigen.
Hasil kami menunjukkan bahwa ekstrak propolis dengan dan tanpa CAPE mampu menghambat
pembentukan anion superoksida, yang dihasilkan selama autoksidasi. b n-merkaptoethanol, senyawa tiol, tetapi
ekstrak propolis dengan CAPE menunjukkan kapasitas pemulungan yang lebih kuat. CAPE juga menunjukkan
kapasitas pembersihan radikal bebas, lebih tinggi dari galangin, dan pada 0,1 m Konsentrasi 2M aksinya setara
dengan 80 mU y ml SOD.

Aktivitas pembersihan radikal bebas dari senyawa alami ini juga dievaluasi melalui kemampuannya dalam
memadamkan radikal DPPH sintetik. Pengujian ini memberikan informasi tentang reaktivitas senyawa yang diuji
dengan radikal bebas yang stabil, terlepas dari aktivitas enzimatik apa pun. Semua senyawa yang diteliti
menunjukkan aksi pemulungan radikal DPPH dan juga dalam uji ini ekstrak propolis dengan CAPE dan CAPE,
digunakan sendiri, menunjukkan efisiensi pendinginan yang lebih tinggi.

Enzim xantin oksidase merupakan sumber fisiologis anion superoksida pada sel eukariotik. Oleh karena itu,
penelitian ini juga mempertimbangkan kemungkinan aksi penghambatan ekstrak propolis (dengan dan tanpa
CAPE ) , CAPE dan galangin pada bagian primer
fungsi enzim. Semua senyawa alami menentukan penghambatan aktivitas xantin oksidase yang bergantung pada
dosis, seperti yang telah dilaporkan untuk beberapa senyawa polifenol w 11,12 x. Secara khusus, ekstrak propolis
dengan CAPE dan CAPE, digunakan sendiri, menghambat pembentukan asam urat, seperti yang ditunjukkan
pada Tabel 1. Bukti eksperimental ini menunjukkan bahwa tindakan perlindungan CAPE pada cedera reperfusi
iskemia, dilaporkan oleh penulis lain. w 28 x dapat disebabkan oleh kemampuannya untuk mengais obat bebas atau
kemampuannya untuk menghambat aktivitas xantin oksidase. Cedera iskemik, pada kenyataannya, ditandai
dengan kelebihan produksi anion superoksida karena kebocoran elektron pada rantai pernapasan mitokondria,
dan konversi xantin dehidrogenase menjadi xantin oksida. w s2e9 x yang menghasilkan anion superoksida ketika
mengoksidasi xantin menjadi asam urat.
S28 A. Russo dkk. / Fitoterapia 73 Suppl. 1 (2002) S21 – S29

Meski keduanya O y dan2 H 2 HAI2 berpotensi sitotoksik, sebagian besar oksidatif

kerusakan dalam sistem biologis disebabkan oleh • radikal OH, yang dihasilkan oleh
reaksi antara y 2 O dan 2 H 2 O dengan adanya meta transisi w l3io0n
x. dosa

Faktanya, itu • Radikal OH dapat bereaksi dengan sejumlah molekul target termasuk protein, membran lipid
dan DNA. Dalam penelitian ini, kapasitas antiperoksidatif ekstrak propolis (dengan dan tanpa CAPE
) dan komponen aktifnya, di linoleik
oksidasi asam, diinduksi oleh • Radikal OH, dihasilkan dari fotolisis UV 2 dari 2 HO, juga dievaluasi. Semua
senyawa alami menentukan penghambatan asam linoleat
oksidasi, tetapi pada konsentrasi yang lebih tinggi sejak metode yang digunakan untuk mengevaluasi kapasitas antioksidan
menghasilkan radikal bebas dalam jumlah yang sangat tinggi. Ekstrak propolis dengan CAPE menunjukkan kemampuan
yang lebih kuat untuk menurunkan pembentukan TBARS dibandingkan ekstrak propolis tanpa CAPE. Juga CAP (E200, 400
dan 800 m M) pameran
efek perlindungan terhadap peroksidasi, dibandingkan dengan kontrol dan menunjukkan kapasitas pembersihan radikal
hidroksil yang lebih kuat daripada galangin.
Sebagai kesimpulan, penelitian kami memberikan bukti bahwa ekstrak propolis menunjukkan sifat antioksidan
yang menarik, lebih tinggi daripada propolis yang kekurangan CAPE. Ini menunjukkan kontribusi yang signifikan dari
senyawa fenolik ini terhadap aktivitas antioksidan propolis.

Referensi

w 1 x P.Walker, E.Crane, Apidologie 1 (81987) 327.

w 2 x R. Volpert, EF Elster, Z Naturforsch 4 (81993) 851.
w 3 x MT Khayyal, MA El-Ghazaly, AS El-Khatib, Drugs Exp Clin Res (119993) 197.
w 4 x A. Kujumgiev, I. Tsvetkova, Y. Sekedjieva, V. Bankova, R. Christov, S. Popov, J Ethnopharmacol 64 (1999) 235.

w 5 x C.Bratter, M. Tregel, C. Liebenthal, HD Volk, Forsch Komplementarme (d 19699) 256.

w 6 x N. Vynograd, I. Vynograd, Z. Sosnowski, Phytomedicine ( 27000) 1.
w 7 x B. Vennat, A. Arvouet-Grand, D. Gross, A. Pourrat, J Pharm Belg (159095) 438.
w 8 x OK Mirzoeva, PC Calder, Prostaglandin Leukot Essent Fatty Acid (s19 5956) 441–449.
w 9 x NC Cook, S. Samman, J Nutr Biochem (17996) 66–76.
w 10 x G. Di Carlo, N. Mascolo, AA Izzo, F. Capasso, Life Sci (615999) 337.
w 11 x N.Cotelle, JL Bernier, JP Catteau, J.Pommery, Dompet JC, EM Gaydou, Med 20 Radic Bebas (1996) 35.

w 12 x A. Russo, R. Acquaviva, A. Campisi, dkk., Cell Biol Tox 1 ( 26000) 91.

w 13 x SABE van Acker, DJ van den Berg, MNJL Tromp, dkk., Free Radic Biol Me (d192906)
331.
w 14 x JRS Hoult, M. Moroney, M. Pàya, Metode Enzymol 2 (314994) 443.
w 15 x KM You, HG Jong, HP Kim, Arch Pharm Res 2 (1 2999) 18.
w 16 x SC Lin, CY Chung, CL Chiang, SH Hsu, Am J Chin Med (217999) 83.
w 17 x C. Jian-Hong, S. Yu, H. Mou-Tuan, C. Chee-Kok, H. Chi-Tang, Cancer Lett (1 109896) 211.
w 18 x SK Lee, L.Lagu, E.Mata Greenwood, GJ Kelloff, VE Steele, JM Pezzuto, Antikanker Res 19 (1999) 35.

w 19 x F. Paoletti, D. Aldinucci, A. Mocalli, A. Caparrini, Biochem 15 (41986) 536.

w 20 x F. Bonina, A. Saija, A. Tomaino, R. Lo Cascio, P. Rapisarda, JC Dederen, Kosmetik Sci 20
( 1998) 331.
w 21 x J. Stocks, TL Dormandy, Br J Haematol (210971) 95.
w 22 x H. Green, M. Plyley, D. Smith, J. Kile, J Appl Physiol 6 (6 1989) 1914.
w 23 x JM Gutteridge, B.Halliwell, Trends Biochem Sci 1 (15990) 129.
 A. Russo dkk. / Fitoterapia 73 Suppl. 1 (2002) S21 – S29 S29

w 24 x SRJ Maxwell, Drugs 49 (1995) 345.

w 25 x PF Baik, P. Werner, A. Hsu, CW Olanow, DP Perl, Am J Pathol (1 149996) 21.
w 26 x M. Gassen, MB Youdim, Pharmacol Toxicol 8 (10997) 159.
w 27 x B. Halliwell, JMC Gutteridge, Studi tentang emisi cahaya umum (io lunminescenc y efluores-
cence), edisi ke-3, University Press, Oxford, 1999, hal. 387.
w 28 x U. Koltuksuz, S. Ozen, E. Uz, dkk., J Pediatr Surg (1 39499) 1458.
w 29 x SW Wernes, R.Lucchesi, TIPS 1 (1 1990) 161.
w 30 x B.Halliwell, JMC Gutteridge, Biochem J 21 (91984) 1.