I Nengah Wirajana Email: nwirajana@gmail.com Pendahuluan Ekspresi gen meliputi dua tahapan, yaitu transkrisi dan translasi.
DNA RNA protein
11/18/2017 Transkripsi INW 2
Ekspresi gen pada prokariot dan eukariot
11/18/2017 Transkripsi INW 3
Pendahuluan
Transkripsi : proses penyalinan kode-kode
genetika yang ada pada urutan DNA menjadi molekul RNA. RNA yg tersintesis pada proses ini ada 3 : mRNA, tRNA, dan rRNA Transkripsi mrpk proses yg mengawali ekspresi sifat-sifat genetik yg nantinya akan muncul sebagai fenotip.
11/18/2017 Transkripsi INW 4
Komponen utama proses transkripsi: 1. Urutan DNA yg akan ditranskripsi (cetakan/templet), 2. Enzim RNA polimerase, 3. Faktor-faktor transkripsi, 4. Prekursor untuk sintesis RNA
11/18/2017 Transkripsi INW 5
Definisi gen Urutan DNA yg ditranskripsi adalah gen yg akan diekspresikan. Gen : urutan DNA yg mengkode urutan lengkap asam amino suatu polipeptida atau molekul RNA tertentu. Gen yg lengkap terdiri atas 3 bagian utama: 1. Daerah pengendali (regulatory region) yg umum disebut promoter, 2. Bagian struktural, 3. Terminator. 1 2 3
11/18/2017 Transkripsi INW 6
Promoter: bagian gen yg berperan dalam mengendalikan proses transkripsi dan terletak pada daerah bagian ujung 5 (upstream). Bagian struktural: bagian gen yg mengandung urutan DNA spesifik (kode-kode genetika) yg akan ditranskripsi; bagian ini terletak di sebelah hilir (downstream) dari promoter. Terminator: bagian gen yg terletak di sebelah hilir dari bagian struktural dan berperan dalam pengakhiran/terminasi proses transkripsi.
11/18/2017 Transkripsi INW 7
Mekanisme Dasar Sintesis RNA 1. Faktor-faktor yg mengendalikan transkripsi menempel pada bagian promoter. 2. Penempelan tersebut menyebabkan terbentuknya kompleks promoter yg terbuka. 3. RNA polimerase membaca cetakan (DNA templete) dan mulai melakukan pengikatan nukleotida yg komplementer dg cetakannya. 4. Setelah terjadi proses pemanjangan untai RNA hasil sintesis, selanjutnya diikuti dg proses terminasi transkripsi yg ditandai dg pelepasan RNA polimerase.
11/18/2017 Transkripsi INW 8
Beberapa karakteristik kimiawi sintesis RNA:
1. Prekursor untuk sintesis RNA adalah 4
ribunukleotida (5-trifosfat ATP, GTP, CTP, dan UTP). 2. Reaksi polimerisasi RNA pd prinsipnya sama dg polimerisasi DNA, yaitu dg arah 5 3. 3. Urutan RNA ditentukan oleh cetakannya 4. Yang berperan sebagai cetakannya hanya salah satu untai-ganda DNA 5. Hasil transkripsi berupa molekul RNA untai tunggal.
11/18/2017 Transkripsi INW 9
Organisasi Gen pada Prokariot Gen-gen pd prokariot yg bertanggung jawab dalam jalur biokimia tertentu pd umumnya diorganisasikan dlm struktur operon. Operon : organisasi beberapa gen struktural yg ekspresinya dikendalikan oleh satu promoter yg sama.
11/18/2017 Transkripsi INW 10
The operon model, as proposed in 1961 by Jacob and Monod.
11/18/2017 Transkripsi INW 11
RNA polimerase RNA polimerase pada prokariot mengkatalisis sintesis mRNA, rRNA, dan tRNA. Hasil eksperimen menunjukkan bahwa rifampicin, suatu antibiotik yg dapat menginhibisi RNA polimerase secara in vitro dan memblok sintesis mRNA, rRNA, dan tRNA secara in vivo.
11/18/2017 Transkripsi INW 12
RNA polimerase pada eukariot Ada tiga macam : RNA polimerases I , II, dan III. Enzim tersebut berbeda sensitivitasnya terhadapat inhibisi amanitin, senyawa racun dari Amanita mushroom. RNA polimerase II diinhibisi pd konsentrasi rendah, , RNA polimerase III diinhibisi pd konsentrasi tinggi, dan RNA polimerase I hampir resisten.
11/18/2017 Transkripsi INW 13
Transkripsi
11/18/2017 Transkripsi INW 14
11/18/2017 Transkripsi INW 15 11/18/2017 Transkripsi INW 16 11/18/2017 Transkripsi INW 17 Latihan Soal 1. Urutan satu untai tunggal dari 53basa nukleotida DNA open reading frame (ORF) adalah sebagai berikut: 5- ATGGGCAA ATTGCGCTTGGGGCCGCCGATGGTA TTGCCCAAATTTGCCCCGATGGTAC CGGGGTACTTTTGGCCGCTCTAA-3 Tentukan urutan basa nukleotida mRNA hasil transkripsi dan urutan asam amino hasil translasi!
11/18/2017 Transkripsi INW 18
Latihan soal 2. Gambar proses transkripsi secara umum!
11/18/2017 Transkripsi INW 19
Jawaban soal no. 2 ATGGGCAAAGCG DNA yang sedang 5 3 UAAU 5-PO4 ditranskripsi 5 3 AUUA AUGGGCAAA TACCCGTTTCGC 3-OH mRNA hasil transkripsi