ANALISIS SEMEN

DAN
UJI FUNGSI SPERMA

DR. Restu Syamsul Hadi,M.Kes

 PENDAHULUAN

Infertilitas merupakan masalah klinis

yang berpengaruh terhadap :
- Aspek kesehatan
- Psikososial

Statistik infertilitas :
15 % pasangan di AS
25 % faktor pria
(al.Oksidative Stress,kerusakan DNA)
Pada kasus infertilitas dijumpai :
- banyak sperma mengalami kerusakan DNA
- penurunan laju fertilisasi
- penurunan kualitas embrio
(Makker et al., 2009.Indian J.Med Res 129:357-367).

Ada korelasi positif :

Infertilitas pria dengan jumlah apoptosis sperma
(Wang et al.,2003. Fertil Steril. 80: 531 -535 ).
Table
The causes of infertility and their approximate frequency
(adapted from Hull et al 19853)

Cause Frequency (%)

Sperm defects or dysfunction 30

Ovulation failure (amenorrhoea

25
or oligomenorrhoea)

Tubal infective damage 20

Unexplained infertility 25
Endometriosis (causing
5
damage)
Coital failure or infrequency 5
Cervical mucus defects or
3
dysfunction
Uterine abnormalities (such as
fibroids or abnormalities of (<1)
shape)
Agarwal etal.,2015. Reprod.Biol
Endocrinol, Biomed Central

….. Infertility affects an estimated 15% of

couples globally, amounting to 48.5 million
couples.
Males are found to be solely responsible for
20-30% of infertility cases.
Tujuan Analisa Semen

untuk mengetahui tingkat kesuburan

seorang pria melalui pengukuran :
- Jumlah semen
- Kualitas semen, yang dihasilkan
- Membantu mengatasi masalah infertilitas
 Human Semen
Semen can be divided into 4 fractions:
1. Pre-ejaculatory –secretion from urethral
and bulbourethral gland (no sperms)
2. Dilute fluid from prostate gland (no
sperms)
3. Major portion of sperms from vas
deferens and distal epididymis (volume
5%)
4. Seminal vesicle secretion (few sperms)
• Fraction 1, 2, 3 made up of the first
portion of the ejaculate (30% of total
volume).
Analisa Dasar Semen

MAKROSKOPIK MIKROSKOPIK
SEMEN SEMEN

• Volume • Motilitas
• Warna • Viabilitas
• Bau • Morfologi
• pH • Densitas
• Viskositas
Cara koleksi semen
Abstinensi (tidak dikeluarkan)
min. 2 hari max.7 hari
Transportasi < 1 jam
Suhu simpan 20-40 oC
Semen mengalami likuifaksi (mencair
15-20 menit
 Methods of collection
1. Masturbation (the method of choice for all
seminal fluid tests).
2. By condom: it is not recommended for
fertility testing because the condoms may
contain spermicidal agents.
3. By coitus interrupts: (withdrawal method).
4. TESA: Testicular sperm extraction (TESE)-
Open Testicular Biopsy: is a highly invasive,
open surgical procedure performed under
general anaesthetic. The scrotum and testes
are cut open, before testicular tissues are
cut away and examined for sperm, which, if
present can be extracted.
PEMERIKSAAN MAKROSKOPIK
Berdasarkan volume semen :

Aspermia,
jika dia tidak mengeluarkan semen
sewaktu ejakulasi.
hipospermia,
jika volume semennya kurang dari 1 mL.
hiperspermia,
jika volume semen lebih dari 6 mL.
Rata-rata volume semen pria Indonesia,
sekitar 2-5 mL.
Warna Semen

Semen yang normal berwarna putih

keruh/putih mutiara.

Adanya warna putih kekuning-kuningan

kemungkinan adanya leukosit -infeksi

Warna kemerah-merahan dapat

disebabkan adanya pendarahan saluran
reproduksi pria.
pH Semen

Semen normal : pH antara 7,2 – 8.

pH  7,8 dicurigai adanya infeksi.
pH  7 pada semen azoospermia,
kemungkinan terjadi disgenesis pada
vas deferens, vesika seminalis atau
epididimis.
VISKOSITAS SEMEN

Semen dengan konsistensi tinggi,

kecepatan gerak sperma
akan terhambat.

Semen yang terlalu encer,

jumlah spermanya rendah.

Kedua-duanya dapat menyebabkan

kesuburan pria berkurang.
PEMERIKSAAN MIKROSKOPIK
SEMEN
Motilitas Sperma
-Katagori a, spermatozoa bergerak cepat
dan lurus ke depan.
-Katagori b, gerak lambat/sulit maju lurus
atau bergerak tidak lurus
-Kategori c, tidak bergerak maju
(bergerak ditempat)
-Kategori d, spermatozoa tidak bergerak
sama sekali
DENSITAS/JUMLAH SPERMA

konsentrasi spermatozoa :
Jumlah sperma terhitung
dalam bidang X
5 X 10.000 (faktor multiplikasi) X
faktor pengencer

Jika sperma terhitung 40

maka konsentrasi sperma adalah :
40 x 5 x10.000 x 20 = 40 juta/ml
SUMBER :
http://www.vivo.colostate.edu/hbooks/pathphys/reprod/semeneval/hemacytometer.html

SAMPLING
 1 mm : 4 = 0,25 mm, ….luas = 0,25 x 0,25
= 0,0625 mm2

1 mm
1 mm : 5 = 0,2 mm, ….luas = 0,2 x 0,2
= 0,04 mm2

0,2 mm : 4 = 0,05 mm….luas = 0,05 x 0,05

= 0,0025 mm2
Berapa
jumlah
sel ?
SOAL:

Semen pasien diperoleh setelah ejakulasi sebanyak 3 ml, diambil 0,1

ml, diencerkan dengan penambahan pelarut sebanyak 0,9 ml.
(0,1 ml : 1 ml = 0,1…pengenceran 10 x)
Sampel dihitung dengan hemositometer pada kotak bagian tengah yaitu
sebanyak 5 kotak kecil dari 25 kotak, diperoleh sebanyak 130 sel.
Berapa densitas sperm pasien?
Berapa total sperma pasien per-ejakulatnya?

JAWAB :
Jumlah sel per area : 130 x 5 = 650 sel
Pengenceran : 10 x
Faktor pengali : 10.000 = 104
Densitas sperma = 130 x 5 x 10 x 104
= 650 x 105
= 6,5 x 107 sel/ml (65 juta sel/ml)

Jumlah sel per ejakulat = 65 x 3 ml x 106 sel/ ejakulat

= 19,5 x 107 sel/ejakulat
= 1,95 x 108 sel/ejakulat (195 juta sel/ ejakulat)
SPERMATOZOA
MIKROSKOPIS (lanjutan)

 Viabilitas Sperma
• Spermatozoa hidup atau spermatozoa mati.
• Pewarnaan supravital yaitu Eosin Y.
 dicampurkan satu tetes (10 – 15 mikroliter) semen
segar dengan satu tetes larutan Eosin 0,5 % pada
kaca obyek kemudian ditutup dengan gelas penutup
 Setelah 1 – 2 menit diamati dengan menggunakan
mikroskop biasa atau beda fase dengan
pembesaran 400 X
• Mikroskop cahaya,
 spermatozoa mati berwarna merah
 spermatozoa hidup tidak berwarna
Interpretation - WHO Criteria
(2010)
Seminal parameter Normal Value

Volume > 2 ml
pH > 7.2
Sperm concentration 20 million / ml
Motility 50 % a+b
Morphology 15 % (10 %)
ASAB < 50 %
White blood cells < 1million / ml
 Interpretation - Terminology

Sperma dapat dikelompokkan menjadi :

Polyzoospermia : konsentrasi sperma sangat tinggi

Oligozoospermia : jumlah sperma  20 juta / mL
Hypospermia : volume semen  1,5 mL
Hyperspermia : volume semen  5,5 mL
Aspermia : tidak ada semen
• Pyospermia : semen ditemukan adanya leukosit
• Hematospermia : semen ditemukan eritrosit
• Asthenozoospermia: motilitas sperma  40%
• Teratozoospermia :  40% sperma abnormal
• Necrozoospermia : tidak ada sperma yang hidup
• Oligoasthenozoospermia: motilitas , jumlah sperma
< 20 juta sperma / mL
Morfologi Sperma
Morfologi sperma abnormal :

-Kepala besar (macrocephalic)

atau kecil (microcephalic), bentuk
seperti tetesan air mata, bundar, tak
berbentuk, ganda
-Leher, midpiece rusak (defect): tebal,
patah, tipis atau asimetris
-Ekor rusak
Morfologi sperma normal :

-Kepala oval
-Leher, midpiece utuh
-Ekor tunggal
Uji Integritas Membran

Uji integritas membran dilakukan dengan

menggunakan Hypoosmotic Swelling Test /
uji HOS, yaitu suatu uji untuk menilai
integritas membran sperma yang terpapar
dalam suatu larutan (medium) hipotonik.
Hasil uji HOS yang menunjukkan
HOS(+) lebih dari 60%
di dalam semen, kelangsungan
hidup sperma akan lebih lama
di banding dengan semen pada hasil uji
HOS (+) kurang dari 60%.
Uji HOS (lanjutan)
 Penetrasi getah serviks
• Alat untuk penetrasi sperma yang terdiri dari tabung
kapiler dan kaca penetrasi
• Ambil satu tetes semen dengan ependorf tipe blue dan
teteskan pada reservoir
• Ambil getah serviks dengan pipet dan masukkan ke
dalam tabung kapiler dengan perlahan
• Tutup/sumbat tabung reservoir yang telah diisi sperma
dengan menggunakan plastisin(lilin) dan taruh
perlahan
• Diinkubasi selama kurang lebih 2 jam
• Setelah cukup waktunya dilihat dengan menggunakan
skala penetrasi akan terlihat pergeseran sperma yang
ada di dalam tabung kapiler
 UJI FUNGSI SPERMA

• Semen/ejakulat akan melewati cervix, kemudian uterus, dan

masuk ke oviduct
• Sperma akan berenang menembus lapisan pada ovum yang
dikelilingi oleh (cumulus dan corona), dan zona pellucida
• Sperma akan bereaksi ketika bagian kepala sperma
menyentuh zona pellusida (“acrosome reaction”)

Enzim pada acrosom :

CPE (corona penetrating enzyme) ---->corona radiata
Acrosin --- zona pelusida
Hyalurronidase -- cumulus oophorus
REAKSI AKROSOM

Spermatozoa dengan pewarnaan simplified triple stain technique.

1.Sperma hidup, rewaksi akrosom
2.Sperma mati akrosom utuh
3. Sperma mati, rekasi akrosom degenerativ
4. Sperma hidup, akrosom utuh
5 dan 6. Sperma hidup akrosom utuh
 Teknik pewarnaan Triple
(Trypan blue, bismark brow, bengal rose)

1. Sperma mati dengan reaksi akrosom (-)

(Post Acrosom kehitaman, acrosom merah muda)
2. Sperma mati dengan reaksi akrosom (+)
(Post Acrosom kehitaman, acrosom putih)
3. Sperma hidup dengan reaksi akrosom (-)
4. Sperma hidup dengan reaksi akrosom (+)
Perhatikan : bagian akrosom
(warna putih/merah muda)
dan post acrosom
(biru kehitaman, coklat muda)
 What increases a man's risk of
infertility?
• High temperature of testicles (testes). Sperm are made
in the testes which are in the scrotum. This is the
body's way of keeping the testes slightly cooler than the
rest of the body, which is best for making sperm.

• Smoking can affect the sperm count. If you smoke, you

should stop completely for optimum sperm production.

• Alcohol: equivalent eight pints of normal strength beer

or sixteen small glasses of wine, may interfere with
optimum fertility.

• Medicines and drugs. Most do not interfere with sperm

production but some may do. These include:
tetracyclines, , colchicine,allopurinol.
• Solusi Infertilitas ? Teknologi Fertilisasi Berbantuan/
assisted reproductive technology (ART)?

The different types of assisted reproductive technology

(ART)?
1. In vitro fertilization (IVF) means fertilization outside of the
body. IVF is the most effective ART. It is often used when a
woman's Fallopian tubes are blocked or when a man produces
too few sperm.
2. Zygote intrafallopian transfer (ZIFT): is similar to IVF.
Fertilization occurs in the laboratory. Then the very young
embryo is transferred to the Fallopian tube instead of the
uterus.
3. Gamete intrafallopian transfer (GIFT) involves transferring
eggs and sperm into the woman's Fallopian tube. So
fertilization occurs in the woman's body.
4. Intracytoplasmic sperm injection (ICSI) is often used for
couples in which there are serious problems with the sperm.
Sometimes it is also used for older couples or for those with
failed IVF attempts. In ICSI, a single sperm is injected into a
mature egg. Then the embryo is transferred to the uterus or
Fallopian tube
ZIFT
ICSI menggunakan Micromanipulator
Sekian, Wassalam