Uji Kualitatif dan

Uji Kuantitatif
DNA
Rizka Oktafiani (0402518040)
Content
• DNA dapat dianalisis dengan dua metode yang berbeda,

• keberadaan DNA dalam suatu sampel

Uji • urutan DNA (DNA Sequences )
• kandungan basa nitrogen atau basa
Kualitatif nukleotida, ukuran DNA, maupun adanya
mutasi

• Konsentrasi DNA
Uji • kemurnian DNA dalam sampel

Kuantitatif
Uji Kuanlitatif
Uji kuantitatif DNA/RNA dengan menggunakan nanodrop
spektrofotometer yang mempunyai teknologi nano atau
spektrofotometer sederhana. DNA murni dapat menyerap cahaya
ultraviolet, karena adanya basa purin dan pirimidin.

Serta untuk mengukur konsentrasi DNA digunakan

rumus sebagai berikut:

[DNA] = Å260 x 50 x faktor pengenceran

Å260 = Nilai absorbansi pada  260 nm
50 = larutan dengan nilai absorbansi 1.0 sebanding
dengan 50 ug untai ganda DNA per ml (dsDNA) NanoDrop
 Uji Kuantitatif

Pita ganda DNA/RNA dapat menyerap cahaya UV pada 260 nm sedangkan

kontaminan protein atau fenol akan menyerap cahaya pada 280 nm sehingga
kemurnian DNA/RNA dapat diukur dengan menghitung nilai absorbansinya 260
nm dibagi dengan nilai absorbansi 280 (A260/280) dan nilai kemurnian DNA dan
RNA berkisar 1,8-2,0.

Serta untuk mengukur konsentrasi DNA digunakan

rumus sebagai berikut:

[DNA] = Å260 x 50 x faktor pengenceran

Å260 = Nilai absorbansi pada  260 nm
50 = larutan dengan nilai absorbansi 1.0 sebanding
dengan 50 ug untai ganda DNA per ml (dsDNA)
 Uji Kualitatif
faktor ukuran dan
konformasi molekul
DNA

Metode standar yang digunakan untuk Migrasi elektroforesis

identifikasi, pemisahan dan purifikasi fragmen DNA melalui gel konsentrasi bubuk
agarosa dipengaruhi agarosa
DNA dilakukan dengan menggunakan gel
oleh
agarosa.

arus listrik dan suhu

 Elektroforesis DNA merupakan teknik untuk
memisahkan sampel DNA berdasarkan ukuran
(berat molekul) dan struktur fisik molekulnya.
Gel yang biasa digunakan antara lain agarosa.
Elektroforesis gel agarosa dapat dilakukan
untuk memisahkan sampel DNA dengan
ukuran dari beberapa ratus hingga 20.000
pasang basa. Molekul DNA bermuatan
negative sehingga didalam medan listrik akan
bermigrasi melalui matriks gel menuju kutub
positif (anode). Makin besar ukuran
molekulnya, makin rendah laju migrasinya.
Cara lain untuk melihat visualisasi DNA
adalah gel direndam didalam larutan
etidium bromide sebelum dipaparkan
diatas sinar ultraviolet
proses elektroforesis gel agarosa

Proses elektroforesis sel agarosa sebagai

berikut (Nugroho dan Rahayu, 2016):
1. menyiapakn gel agarosa dengan
sumuran sampel
2. dimasukkan penanda DNA,
3. Memasukkan sampel DNA kedalam
sumuran sampel
4. Menjalankan elektroforesis
5. Sampel DNA terseparasi sesuai dengan
molekulnya
6. Sampel DNA sesuai dengan berat
molekulnya