Metabolit M sekunder

Pertemuan 9
13 April 2022 2

Oleh :
tepat. Septi Wulandari., S .
Peternakan. , M.Sc.
 1. Mahasiswa mampu melakukan identifikasi
senyawa dengan kromatografi kolom.
LEARNING 2. Mahasiswa mampu melakukan isolasi
OUTLINE OUTCOME
3.
glikosida flavonoid dari daun ketela pohon
Mahasiswa mampu melakukan identifikasi
senyawa etil pmetoksi sinamat dari
tanaman kencu

1. Identifikasi Senyawa Dengan

Kromatografi Kolom (Review Jurnal,
Topics Video).
2. Isolasi Glikosida Flavonoid (Review Jurnal,
Video).
3. Identifikasi Senyawa Etil Pmetoksi
Sinamat.
IDENTIFIKASI Senyawa Dengan
Kromatografi Kolom
 Prinsip Kromatografi Kolom

Dalam kimia, kromatografi kolom adalah teknik yang digunakan untuk memisahkan senyawa kimia tunggal
dari campuran yang dilarutkan dalam cairan.

Prinsip :
Ketika fase gerak bersama dengan campuran yang perlu dipisahkan dimasukkan dari bagian atas kolom,
pergerakan masing-masing komponen campuran berada pada laju yang berbeda. Komponen dengan
adsorpsi dan afinitas yang lebih rendah terhadap fase diam bergerak lebih cepat jika dibandingkan dengan
adsorpsi dan afinitas yang lebih besar dengan fase diam. Komponen yang bergerak cepat dihilangkan
terlebih dahulu sedangkan komponen yang bergerak lambat dielusi terakhir.

Adsorpsi molekul zat terlarut ke kolom terjadi secara reversibel. Laju pergerakan komponen dinyatakan
sebagai:

Rf = jarak yang ditempuh zat terlarut/jarak yang ditempuh pelarut

Rf adalah faktor penghambat.

Diagram Kromatografi Kolom
 Elusi

Elusi adalah proses kimia yang melibatkan penghilangan ion suatu bahan
melalui pertukaran ion dengan bahan lain. Teknik kromatografi untuk
mengekstraksi zat teradsorpsi dari media penyerap padat menggunakan
pelarut. Eluen adalah pelarut atau fase gerak yang melewati kolom. Ketika
polaritas eluen sesuai dengan polaritas molekul dalam sampel, molekul
terdesorbsi dari adsorben dan larut dalam eluen.

Fraksi fase gerak yang mengangkut komponen sampel dikenal sebagai

eluen. Campuran zat terlarut dan pelarut yang keluar dari kolom disebut
eluat. Eluat terdiri dari fase gerak dan analit. Zat yang memisahkan dan
memindahkan unsur-unsur campuran melalui kolom kromatografi. Eluen
dalam kromatografi cair adalah pelarut cair sedangkan dalam kromatografi
gas adalah gas pembawa.
 Prosedur Kromatografi Kolom

Sebelum memulai Eksperimen Kromatografi Kolom, mari kita pahami berbagai fase yang terlibat.

Fase gerak - Fase ini terdiri dari pelarut dan melakukan fungsi-fungsi berikut:
1. Ini bertindak sebagai pelarut - campuran sampel dapat dimasukkan ke dalam kolom.
2. Ini bertindak sebagai agen berkembang - membantu dalam pemisahan komponen dalam sampel untuk
membentuk pita.
3. Bertindak sebagai agen eluting – komponen yang dipisahkan selama percobaan dikeluarkan dari kolom
4. Beberapa contoh pelarut yang digunakan sebagai fase gerak berdasarkan polaritasnya adalah – etanol,
aseton, air, asam asetat, piridin, dll.

Fase diam - Ini adalah bahan padat yang harus memiliki sifat adsorpsi yang baik dan memenuhi kondisi yang
diberikan di bawah ini:
5. Bentuk dan ukuran partikel: Partikel harus memiliki bentuk dan ukuran yang seragam dalam kisaran
diameter 60 – 200μ.
6. Stabilitas dan kelembaman partikel: stabilitas mekanik yang tinggi dan inert secara kimiawi. Juga, tidak
ada reaksi dengan asam atau basa atau pelarut lain yang digunakan selama percobaan.
7. Itu harus tidak berwarna , murah dan tersedia.
8. Harus memungkinkan aliran bebas fase gerak
9. Itu harus cocok untuk pemisahan campuran berbagai senyawa.
 Percobaan Kromatografi Kolom

1. Fase diam dibuat basah dengan bantuan pelarut sebagai tingkat atas fase gerak dan fase
diam harus cocok. Fase gerak atau eluen adalah pelarut atau campuran pelarut. Pada
langkah pertama campuran senyawa yang perlu dipisahkan, ditambahkan dari atas kolom
tanpa mengganggu tingkat atas. Keran dihidupkan dan proses adsorpsi pada permukaan
silika dimulai.
2. Tanpa mengganggu campuran pelarut fase diam ditambahkan perlahan-lahan dengan
menyentuh sisi-sisi kolom kaca. Pelarut ditambahkan selama percobaan sesuai kebutuhan.
3. Keran dihidupkan untuk memulai pergerakan senyawa dalam campuran. Pergerakan ini
didasarkan pada polaritas molekul dalam sampel. Komponen non-polar bergerak pada
kecepatan yang lebih besar jika dibandingkan dengan komponen polar.
4. Misalnya campuran senyawa terdiri dari tiga senyawa yang berbeda yaitu merah, biru, hijau
maka urutannya berdasarkan polaritas adalah sebagai berikut biru>merah>hijau
5. Karena polaritas senyawa hijau kurang, ia akan bergerak lebih dulu. Ketika tiba di ujung
kolom itu dikumpulkan dalam tabung reaksi yang bersih. Setelah ini, senyawa merah
dikumpulkan dan akhirnya senyawa biru dikumpulkan. Semua ini dikumpulkan dalam tabung
reaksi terpisah.
 Aplikasi Kromatografi Kolom

1. Kromatografi Kolom digunakan untuk mengisolasi bahan aktif.

2. Hal ini sangat membantu dalam memisahkan campuran
senyawa.
3. Hal ini digunakan untuk menentukan estimasi obat dari formulasi
obat.
4. Ini digunakan untuk menghilangkan kotoran.
5. Digunakan untuk mengisolasi metabolit dari cairan biologis.
 Percobaan Kromatografi Kolom

1. Fase diam dibuat basah dengan bantuan pelarut sebagai tingkat atas fase gerak dan fase
diam harus cocok. Fase gerak atau eluen adalah pelarut atau campuran pelarut. Pada
langkah pertama campuran senyawa yang perlu dipisahkan, ditambahkan dari atas kolom
tanpa mengganggu tingkat atas. Keran dihidupkan dan proses adsorpsi pada permukaan
silika dimulai.
2. Tanpa mengganggu campuran pelarut fase diam ditambahkan perlahan-lahan dengan
menyentuh sisi-sisi kolom kaca. Pelarut ditambahkan selama percobaan sesuai kebutuhan.
3. Keran dihidupkan untuk memulai pergerakan senyawa dalam campuran. Pergerakan ini
didasarkan pada polaritas molekul dalam sampel. Komponen non-polar bergerak pada
kecepatan yang lebih besar jika dibandingkan dengan komponen polar.
4. Misalnya campuran senyawa terdiri dari tiga senyawa yang berbeda yaitu merah, biru, hijau
maka urutannya berdasarkan polaritas adalah sebagai berikut biru>merah>hijau
5. Karena polaritas senyawa hijau kurang, ia akan bergerak lebih dulu. Ketika tiba di ujung
kolom itu dikumpulkan dalam tabung reaksi yang bersih. Setelah ini, senyawa merah
dikumpulkan dan akhirnya senyawa biru dikumpulkan. Semua ini dikumpulkan dalam tabung
reaksi terpisah.
 Jenis-Jenis Kromatografi Kolom

1. Kromatografi kolom adsorpsi – Kromatografi adsorpsi adalah teknik pemisahan, di mana

komponen-komponen campuran diadsorpsi pada permukaan adsorben.

2. Kromatografi kolom partisi – Fase diam, serta fase gerak, adalah cairan dalam kromatografi
partisi.

3. Kromatografi kolom gel – Dalam metode kromatografi ini, pemisahan terjadi melalui kolom
yang dikemas dengan gel. Fasa diam adalah pelarut yang tertahan di celah pelarut.

4. Kromatografi kolom penukar ion – Teknik kromatografi di mana fase diam selalu berupa
resin penukar ion.
Silahkan Klik Tautan

https://www.youtube.com/watch?v=I9rN-eTC
ugc

https://www.youtube.com/watch?v=lasQRW
REStY
 TUGAS
 Setiap invidu seilahkan belajar dari materi yang sudah diberikan untuk bahan diskusi saat praktikum
 Setiap individu membuat laporan praktikum dari 2 jurnal yang sudah di berikan
 Laporan dalam bentuk ppt dan disiapkan untuk presentasi ( yang presentasi random, jadi semua harus
siap).
 Laporan praktikum terdiri dari :
1. Judul
2. Tujuan
3. Dasar Teori
4. Alat dan Bahan
5. Metode (Jalannya penelitian)
6. Hasil Penelitian
7. Pembahasan
8. Kesimpulan
9. Daftar Pustaka

Nb : Jika ada kecurangan (copas laporan) kesamaan hamper 30 % nilai akan dibagi 2 dan tidak adda
toleransi