(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Pseudomonas aeruginosa.
SKRIPSI
Oleh : MUFID KHUNAIFI NIM. 03520025
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2010
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Pseudomonas aeruginosa.
SKRIPSI
Diajukan kepada: Universitas Islam Negeri (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang Untuk Memenuhi Salah Satu Persyaratan Dalam Memperoleh Gelar Sarjana Sains (S.Si)
Oleh : MUFID KHUNAIFI NIM. 03520025
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI UNIVERSITAS ISLAM NEGERI (UIN) MAULANA MALIK IBRAHIM MALANG 2010
SURAT PERNYATAAN ORISINALITAS PENELITIAN
Saya yang bertanda tangan di bawah ini: Nama : Mufid Khunaifi NIM : 03520025 Fakultas/Jurusan : Sains dan Teknologi/Biologi Judul Penelitian :Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus Dan Pseudomonas aeruginosa
Menyatakan dengan sebenar-benarnya bahwa hasil penelitian saya ini tidak terdapat unsur-unsur penjiplakan karya penelitian atau karya ilmiah yang pernah dilakukan atau dibuat oleh orang lain, kecuali yang secara tertulis dikutip dalam naskah ini dan disebutkan dalam sumber kutipan dan daftar pustaka. Apabila ternyata hasil penelitian ini terbukti terdapat unsur-unsur jiplakan, maka saya bersedia untuk mempertanggung jawabkan, serta diproses sesuai peraturan yang berlaku.
Malang, 29 April 2010 Yang Membuat Pernyataan,
Mufid Khunaifi NIM: 03520025
UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN BINAHONG (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Pseudomonas aeruginosa.
Setiap hari bertambah ilmu dan bergelimang dengan lautan yang berfaedah
(Talim Mutaalim)
Barang siapa ingin eksis dalam kehidupan global (dunia) maka kuasailah ilmu pengetahuan, dan barang siapa ingin eksis dalam kehidupan akhirat maka kuasailah ilmu pengetahuan, dan barang siapa ingin eksis di dunia dan akhirat maka kuasailah ilmu pengetahuan
(Sayyidina Ali Bin Abi Thalib)
My Society Is My My Society Is My My Society Is My My Society Is My University University University University
(Prof. Dr. KH. Ahmad Mudlor, SH)
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Wr. Wb. Segala puji bagi Allah SWT. Kerena atas Rahmat, Taufiq dan Hidayah- Nya penulis dapat menyelesaikan penulisan skripsi sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar sarjana sains (S.Si). penulis menyadari bahwa banyak pihak yang telah membantu dalam menyelesaikan penulisan skripsi ini. Untuk itu, iringan doa dan ucapan terima kasih yang sebesar-besarnya penulis sampaikan kepada: 1. Prof. Dr. H. Imam Suprayogo selaku Rektor UIN MALIKI Malang. 2. Prof. Dr. Sutiman Bambang Sumitro, SU, Dsc selaku Dekan Fakultas Sains dan Teknologi UIN MALIKI Malang. 3. Dr. Eko Budi Minarno, M.Pd selaku Ketua Jurusan Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN MALIKI Malang 4. Dr. Ulfah Utami, M.Si karena atas bimbingan, pengarahan dan kesabaranya sehingga penulisan skripsi ini dapat terselesaikan. 5. Ach.Nasichuddin, MA. selaku dosen pembimbing agama yang telah menyempatkan waku untuk membimbing dan mengarahkan sehingga penulisan skripsi ini dapat terselesaikan. 6. Ayah dan Ibunda tercinta yang dengan sepenuh hati senantiasa mendoakan dan memberikan dukungan moril maupun spirituil sehingga penulisan skripsi
ini dapat terselesaikan. Adiku (Anik Fitrotin) tersayang yang selalu memberikan dukungan untuk dapat menyelesaikan skripsi. 7. Prof. Dr. KH. Ahmad Muhdlor, SH. Pengasuh Lembaga Tinggi Pesantren Luhur Malang yang dengan kesabaran dan keikhlasanya telah memberikan samudra ilmunya. Semoga Allah SWT selalu memberikan nikmat kesehatan. 8. Seluruh Dosen Jurusan Biologi Fakultas Sains Dan Teknologi yang telah membimbing dan memberikan ilmunya dengan penuh kesabaran dan keihlasan. 9. Laboran Kimia Fakultas Sains dan Teknologi (Abi, Taufik dan Kumala Dewi) 10. Laboran Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya (bapak Selamet Riyanto) 11. Teman-Teman Biologi terutama angkatan 2003, Saudara-saudaraku di KSR PMI unit UIN MALIKI Malang. Teman-teman di Lembaga Tinggi Pesantren Luhur Malang dan kepada semua pihak yang tidak dapat penulis sebutkan satu persatu yang telah memberikan arahan, motivasi dan bantuan dalam menyelesaikan skripsi ini, Semoga Alla SWT menerima amal baik dan memberikan balasan yang setimpal. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat dan dapat menambah khazanah ilmu pengetahuan. Wassalamualaikum Wr. Wb. Malang, April 2010
Penulis
DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR...................................................................................... i DAFTAR ISI .................................................................................................... iii DAFTAR TABEL ............................................................................................ vi DAFTAR GAMBAR........................................................................................ vii DAFTAR LAMPIRAN..................................................................................... viii ABSTRAK....................................................................................................... ix
BAB I PENDAHULUAN 1.1. Latar Belakang........................................................................................... 1 1.2. Rumusan Masalah...................................................................................... 7 1.3. Tujuan Penelitian....................................................................................... 7 1.4. Hipotesis Penelitian ................................................................................... 8 1.5. Manfaat Penelitian ..................................................................................... 8 1.6. Batasan Masalah ........................................................................................ 9 1.7. Penegasan Istilah........................................................................................ 10
BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1. Tanaman Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis.............................. 11 2.1.1. Deskripsi Tanaman Binahong ................................................................. 11 2.1.2. Klasifikasi Tanaman Binahong ................................................................ 13 2.1.3. Kandungan Dan Kegunaan Tanaman Binahong ....................................... 13 2.1.4. Zat Antimikroba Tanaman Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ....................................................................................................... 15 2.2. Ekstraksi Daun Binahong dengan Metode Maserasi ................................... 19 2.3. Tinjauan Tentang Bakteri Uji ..................................................................... 22 2.3.1. Bakteri Staphylococcus aureus ................................................................ 23 2.3.1.1 Morfologi bakteri Staphylococcus aureus ............................................. 23 2.3.1.2 Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus........................................ 24 2.3.1.3 Patogenistas Dan Gambaran Klinis Bakteri Staphylococcus aureus ...... 25 2.3.1.4 Pengobatan .......................................................................................... 26 2.3.2 Bakteri Pseudomonas aeruginosa............................................................. 26 2.3.2.1 Morfologi Bakteri Pseudomonas aeruginosa......................................... 26 2.3.2.2 Pertumbuhan Bakteri Pseudomonas aeruginosa .................................... 26 2.3.2.3 Patogenitas Dan Gambaran Klinis Bakteri Pseudomonas aeruginosa .... 27 2.3.2.4 Pengobatan............................................................................................ 28 2.4. Tinjauan Bahan Antimikroba ..................................................................... 28 2.5. Cara Kerja Zat Antimikroba....................................................................... 30 2.6. Faktor Yang Mempengaruhi Aktifitas Zat Antimikroba.............................. 32 2.7. Mekanisme Resistensi ............................................................................... 34 2.8. Uji Kepekaan Terhadap Antimikroba ........................................................ 34 2.9. Herbal Dalam Perspektif Islam................................................................... 36
BAB III METODE PENELITIAN 3.1. Jenis dan Rancangan Penelitian.................................................................. 43 3.2. Waktu Dan Tempat Penelitian.................................................................... 43 3.3. Variabel Penelitian..................................................................................... 44 3.4. Obyek Penelitian........................................................................................ 44 3.5. Alat dan Bahan Penelitian ......................................................................... 45 3.5.1.Alat Penelitian.......................................................................................... 45 3.5.2 Bahan Penelitian ...................................................................................... 45 3.6. Prosedur Penelitian .................................................................................... 45 3.6.1 Preparasi Sampel...................................................................................... 45 3.6.2 Ekstraksi Daun Binahong Dengan Metode Maserasi ................................ 46 3.6.3 Identifikasi Senyawa Aktif Pada Daun Binahong .................................... 46 3.7. Uji Aktivitas Antibakteri ............................................................................ 49 3.7.1 Sterilisasi Alat ......................................................................................... 49 3.7.2 Pembuatan Media .................................................................................... 49 3.7.2.1 MediA Nutrient Broth (NB) .................................................................. 49 3.7.2.2.Media Nutrient Agar (NA) ................................................................... 49 3.7.3. Peremajaan Biakan Bakteri ..................................................................... 50 3.7.4. Pembuatan Suspensi Bakteri.................................................................... 50 3.8. Uji Aktifitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong ...................................... 51 3.8.1.Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ................................................................................... 51 3.8.2. Penghitungan Data .................................................................................. 54 3.9. Analisa data ............................................................................................... 55
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1. Ekstraksi Sampel ....................................................................................... 56 4.2. Identifikasi Golongan Senyawa Aktif......................................................... 57 4.3. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong...................................... 59 4.3.1.Uji KHM Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aureginosa....................................................... 59 4.3.2.Uji Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus ................................................. 62 4.3.3.Uji Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa............................................. 66 4.4.Daya Antibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordiflia (Ten) Steenis Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa.................................................................................................. 70 4.5.Lingkungan Hidup Bakteri .......................................................................... 76 4.6 Pemanfaatan Daun Binahong Sebagai Antibakteri Dalam Persepektif Islam........................................................................................................... 76 BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1. Kesimpulan................................................................................................ 80 5.2. Saran saran.............................................................................................. 81 DAFTAR PUSTAKA....................................................................................... 82 LAMPIRAN-LAMPIRAN................................................................................ 87
DAFTAR TABEL
Tabel 4.1 : Uji Fitokimia Ekstrak Daun Binahong Secara Kualitatif ................ 58 Tabel 4.2 : Uji Fitokimia Ekstrak Daun Binahong Secara Kuantitatif .............. 59 Tabel 4.3 : Tingkat Kekeruhan Yang Dihasilkan Pada Media Nutrient Agar Oleh Koloni Bakteri Staphylococcus aureus Dalam Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) ......... 60 Tabel 4.4 : Tingkat Kekeruhan Yang Dihasilkan Pada Media Nutrient Agar Oleh Koloni Bakteri Pseudomonas Aureginosa Dalam Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) ......................................................................................... 61 Tabel 4.5 : Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis Terhadap Jumlah Koloni Bakteri Staphylococcus aureus Per ml (10 6 )............................................... 63 Tabel 4.6 : Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis Terhadap Jumlah Koloni Bakteri Pseudomonas aeruginosa Per ml (10 6 ) ........................................ 67
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 : Daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis.................. 12 Gambar 2.2 : Batang,Akar dan Daun Anredera cordifolia (Ten.) Steenis ...... 12 Gambar 2.3 : Morfologi Bakkteri Staphylococcus aureus ............................ 23 Gambar 2.4 : Morfologi Bakkteri Pseudomonas aeruginosa ......................... 26 Gambar 4.1 : Grafik Rerata Jumlah Koloni Bakteri Staphylococcus aureus Per ml (10 6 ) Dengan Perlakuan Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis).......................... 63 Gambar 4.2 : Grafik Rerata Jumlah Koloni Bakteri Pseudomonas aeruginosa Per ml (10 6 ) Dengan Perlakuan Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis).... 67
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 : Diagram alir kerja penelitian.................................................. 87 Lampiran 2 : Skema Kerja ......................................................................... 88 2.1. Preparasi Sampel............................................................. 88 2.2. Ekstraksi Daun Binahong Dengan Metode Maserasi ....... 89 2.3. Identifikasi Senyawa Kimia............................................. 90 2.4. Pengenceran Larutan Ekstrak Daun Binahong ................ 91 Lampiran 3 : Uji Aktivitas Antibakteri ....................................................... 92 3.1. Pembuatan Media............................................................ 92 3.2. Peremajaan Biakan Bakteri Murni ................................... 93 3.3. Pembuatan Suspensi Bakteri............................................ 93 3.4. Uji Aktivitas Antibakteri Dengan Metode Dilusi Tabung 94 Lampiran 4 :1. Data pengaruh pemberian Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis Terhadap penurunan Jumlah Koloni Bakteri Staphylococcus aureus Per ml (10 6 sel/ml)................................................................ 95
2.Data pengaruh pemberian Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis Terhadap penurunan Jumlah Koloni Bakteri Pseudomonas aeruginosa Per ml (10 6 sel/ml) .............................................................. 95 Lampiran 5 : Data Penghitungan Analisa Variansi Dalam RAL ................. 96 Lampiran 6 : Analisis Data Dengan one way ANOVA............................... 100 Lampiran 7 : Perhitungan ANOVA Dengan Menggunakan Spss Versi 15.. 101 Lampiran 8 : Uji Korelasi Dan Regresi Linear .......................................... 107 Lampiran 9 : Kadar Bunuh Minimum per ml (10 6 sel/ml) di kurangi 99,9% asal sub biakan 0%..................................... 111
Lampiran 10 : Gambar Alat Dan Bahan Penelitian ...................................... 112 Lampiran 11 : Ekstraksi Dengan Metode Maserasi ...................................... 114 Lampiran 12 : : A. Hasil Uji Pendahuluan KHM ............................................. 115 : B. Hasil Uji KBM Terhadap Bakteri Staphylococus aureus .... 116 : C.Hasil Uji KBM Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa 117
ABSTRAK
Khunaifi, Mufid. 2010. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus Dan Pseudomonas aeruginosa. Pembimbing Dr Ulfah Utami, M.Si. dan Ach. Nashichuddin, MA
Kata Kunci : Antibakteri, Ekstrak Daun Binahong, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aureginosa.
Penyakit Infeksi merupakan penyebab utama kematian di dunia terutama di daerah tropis, seperti Indonesia. Salah satu penyebab penyakit infeksi adalah bakteri. Pengobatan penyakit akibat infeksi bakteri menggunakan antibiotik banyak menimbulkan resistensi, sehingga hal ini memerlukan produk baru yang memiliki potensi tinggi sebagai antibiotik. Salah satu tanaman yang secara empiris banyak digunakan untuk pengobatan adalah Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis. Tujuan dari Penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas daun Binahong sebagai antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa yang multi resisten obat. dengan mengetahui Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM), serta untuk mengetahui senyawa kimia apa saja yang terkandung di dalam daun binahong Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorik dengan menggunakan metode tube dilution test. Rancangan penelitian yang di gunakan adalah rancangan acak lengkap (RAL) dengan 7 perlakuan dan 3 kali ulangan. Ekstrak daun binahong didapat dengan cara ekstraksi secara maserasi menggunakan pelarut Etil asetat. Konsentrasi ekstrak daun binahong yang digunakan adalah kontrol (0%), 25%, 30%, 35%, 40%, 45% dan 50% untuk bakteri Staphylococcus aureus, sedangkan untuk bakteri Pseudomonas aeruginosa menggunakan konsentrasi kontrol (0%), 50%, 60%, 70%, 80%, 90% dan 100%. Data yang diperoleh di analisis dengan uji one way ANOVA, Korelasi dan Regresi linear. Hasil penelitian didapatkan KHM ekstrak daun binahong terhadap bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 25%, sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa konsentrasi 50%. Pada uji KBM ekstrak daun binahong terhadap bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 50%, sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 100%. Hasil uji one way ANOVA menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna antar perlakuan sig (0,000)<p(0,05). Semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun binahong yang diberikan, semakin besar kemampuan menghambat dan membunuh bakteri Staphylococcus aureus (r-0,860) Pseudomonas aureginosa (r-0,860) Pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong berpengaruh terhadap penurunan jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) (R 2 =0,740) pada bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) (R 2 =0,739). Hasil Uji Fitokimia ekstrak daun Binahong ditemukan senyawa Polifenol, Alkaloid dan Flavanoid.
ABSTRACT Khunaifi, Mufid. 2010. Antibacterials Activity Test Binahong Leaf Extract (Anredera cordifolia (Ten) Steenis Against Bacteria Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa. Advisors: Dr. Ulfah Utami., M.Si and Ach. Nashichuddin, MA Keywords: Antibacterials, Binahong Leaf Extract, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aureginosa. Infectious diseases are the main cause of death in the world, especially in the tropics, such as Indonesia. One cause of disease is a bacterial infection. Treatment of diseases caused by bacterial infection using antibiotics cause a lot of resistance, so this requires a new product that has great potential as antibiotics. One of the many plants that are empirically used for treatment is Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis. The purpose of this study is to determine the antibacterial activity of leaf Binahong against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa which is multi-drug resistant. To know the Minimum Inhibitory Concentration (MIC ) and the Minimum Kill Concentration (MBC), and to detect any chemical compounds contained in the leaves Binahong This research is an experimental research laboratory using the dilution test tube method. The research design used was completely randomized design (CRD) with a seven treatments and three replicates. Binahong leaf extract obtained by maceration by extraction using ethyl acetate solvent. Binahong leaf extract concentration used were control (0%), 25%, 30%, 35%, 40%, 45% and 50% for Staphylococcus aureus, whereas, for Pseudomonas aeruginosa using the control concentration (0%), 50%, 60%, 70%, 80%, 90% and 100%. The data obtained were analyzed by one way ANOVA test, correlation and linear regression. The results obtained MIC Binahong leaf extract against Staphylococcus aureus at concentrations of 25%, while the Pseudomonas aeruginosa bacteria concentration of 50%. In the MBC test Binahong leaf extract against Staphylococcus aureus at concentrations of 50%, while the Pseudomonas aeruginosa at a concentration of 100%. Results of one way ANOVA test showed significant difference among the treatments sig (0.000) <p (0.05). The higher concentration of leaf extract Binahong given, the greater the ability to inhibit and kill bacteria Staphylococcus aureus (r-0, 860) Pseudomonas aeruginosa (r-0, 860) The concentration of leaf extract Binahong effect on decreasing the number of colonies of Staphylococcus aureus per ml (10 6) ( R 2 = 0.740) in Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6) (R 2 = 0.739). Phytochemical test results Binahong leaf extract polyphenol compounds found, alkaloids and Flavanoid.
BAB I PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang Dalam upaya meningkatkan derajat kesehatan masyarakat, dilaksanakan berbagai upaya pembangunan dibidang kesehatan. Upaya tersebut bertujuan untuk mendukung visi Indonesia sehat 2010. Banyak tantangan dan kendala yang dihadapi dalam mencapai visi tersebut, salah satu kendalanya adalah masih tingginya angka penyakit infeksi di masyarakat, lebih dari 4,5% kematian di Negara ASEAN adalah penyakit infeksi (WHO 1998) Penyakit infeksi masih menempati urutan teratas penyebab penyakit dan kematian di Negara berkembang, termasuk Indonesia. Bagi penderita selain menyebabkan penderitaan fisik, infeksi juga menyebabkan penurunan kinerja dan produktifitas, yang pada giliranya akan mengakibatkan kerugian materiil yang berlipat-lipat. Bagi negara, tingginya kejadian infeksi di masyarakat akan menyebabkan penurunan produktifitas nasional secara umum, sedangkan dilain pihak menyebabkan peningkatan pengeluaran yang berhubungan dengan upaya pengobatanya (Wahyono, 2007) Gibson (1991), menjelaskan bahwa Infeksi karena bakteri masih mendominasi potensi terjadinya infeksi berat, sepsis, syok septic, dan disfungsi multiorgan. Kematian di ruang perawatan intensif di Amerika sebanyak 40% disebabkan oleh bakteri gram positif dan 60% oleh bakteri gram negatif. (Nasronuddin, 2007)
Nasronudin (2007) menambahkan, bahwa untuk mengatasi infeksi karena bakteri, antibiotika mempunyai peranan penting, antibiotika diharapkan mampu mengeliminasi bakteri penyebab infeksi. Tetapi perlu disadari bahwa upaya mengeliminasi bakteri penyebab saja ternyata tidak cukup memadai, hal tersebut antara lain dimungkinkan akibat kurang tepatnya pemilihan antibiotika, munculnya resistensi, efek dari berbagai mediator, sitokin, yang ikut mempengaruhi laju perjalanan infeksi. Pemilihan antibiotika untuk mengatasi infeksi perlu mempertimbangkan beberapa hal termasuk antibiotika yang mempunyai spectrum luas, mampu bekerja lebih awal, potensi menginduksi resistensi minimal dan dapat dikombinasikan dengan antibiotika lain. Lisa (2007) menyatakan bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa merupakan patogen terpenting dan berbahaya di antara marga Staphylococcus dan Pseudomonas. Keduanya sering resisten terhadap berbagai jenis obat, sehingga mempersulit pemilihan antimikroba yang sesuai untuk terapi. Resistensi terhadap beberapa antimikroba umumnya terjadi di rumah sakit, tempat yang paling banyak menggunakan antimikroba. Hasil uji kepekaan terhadap antimikroba yang digunakan di RSU Dr. Soetomo Surabaya selama bulan Agustus 2005 sampai dengan Februari 2006 menunjukan bahwa sebesar 74,1 % isolat Staphylococcus aureus mengalami resistensi multiobat dan sebanyak 95,9% isolat Pseudomonas aeruginosa mengalami resistensi multiobat. Dalam hal ini, resistensi multiobat didefinisikan sebagai resistensi terhadap dua atau lebih jenis antimikroba yang berbeda.
Timbulnya strain bakteri yang resisten terhadap antibiotik pada penyakit infeksi merupakan masalah penting. Kekebalan bakteri terhadap antibiotik menyebabkan angka kematian semakin meningkat. Sedangkan penurunan infeksi oleh bakteri-bakteri yang patogen dapat menurunkan angka kematian. Selain itu cara pengobatan dengan menggunakan kombinasi berbagai antibiotik juga dapat menimbulkan masalah resistensi (Jawetz et al.,1991) Pengobatan penyakit infeksi yang disebabkan bakteri yang resisten terhadap antibiotik memerlukan produk baru yang memiliki potensi tinggi. Penelitian zat yang berkhasiat sebagai antibakteri perlu dilakukan untuk menemukan produk antibiotik baru yang berpotensi untuk menghambat atau membunuh bakteri yang resisten antibiotik dengan harga yang terjangkau. Salah satu alternatif yang dapat ditempuh adalah memanfaatkan zat aktif pembunuh bakteri yang terkandung dalam tanaman obat .Widjayanti (1999) dalam Nur Iman (2009) menjelaskan salah satu tanaman yang secara empiris digunakan sebagai obat antibakteri adalah tanaman binahong. Dalam perkembangan ilmu pengetahuan seperti saat ini, ternyata memang banyak tumbuhan yang terbukti secara ilmiah bisa mengobati berbagai penyakit. Dalam kisah nabi Yunus AS, juga dikisahkan bahwasannya Nabi Yunus pada waktu dalam keadaan sakit (setelah ditelan ikan) diperintahkan oleh Allah SWT untuk memulihkan kondisi tubuhnya dengan memakan tumbuhan dari sejenis labu. Kisah ini terdapat dalam surat Ash-Shaaffat ayat 145-146 yang berbunyi:
, -9!, ') !., =s >: L) Kemudian kami lemparkan dia ke daerah yang tandus, sedang ia dalam keadaan sakit. Dan kami tumbuhkan untuk dia sebatang pohon dari jenis labu. (QS. Ash- Shaaffat [37]: 145-146)
Dari ayat tersebut, manusia bisa mengambil suatu pelajaran bahwasanya di dalam suatu tumbuhan selain mengandung sifat estetika juga terdapat manfaat tertentu. Selain itu, antara tumbuhan yang satu dengan yang lainya tidaklah mempunyai manfaat yang sama (Jauhari,1984). Tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) adalah tanaman obat potensial yang dapat mengatasi berbagai jenis penyakit. Tanaman ini berasal dari dataran Cina dengan nama asalnya adalah Dheng shan chi, dikenal dengan sebutan Madeira Vine. (Manoi, 2009) Bagian tanaman binahong yang bermanfaat sebagai obat pada umumnya adalah rhizome, akar dan daun. Penelitian mengenai aktivitas antibakteri daun binahong dan kandungan metabolit sekundernya pernah dilakukan, bahwa dalam simplisia daun binahong terkandung senyawa alkaloid, polifenol, dan saponin (Annisa dan nurul, 2007) Menurut Tshikalange et al., (2005) ekstrak air akar binahong dengan dosis 50 mg/ml memiliki daya hambat terhadap bakteri Gram-positif (B.pumilus,B.subtilis dan S.aureus) serta bakteri Gram-negatif (Enterobacter cloacae, E.coli, Klebsiella pneumonia, Serratia marcescens, dan Enterobacter aerogenes) pada dosis 60 mg/ml, tetapi tidak pada bakteri B.sereus.
Rachmawati (2007) telah melakukan skrining fitokimia daun Binahong (Anredera Cordifolia (Ten ) Steenis dengan melakukan maserasi terhadap serbuk kering daun dengan menggunakan pelarut n-heksana dan metanol didapatkan kandungan kimia berupa Saponin triterpenoid, flavanoid dan minyak atsiri. Rochani (2009), melakukan ekstraksi dengan cara maserasi daun binahong dengan menggunakan pelarut petroleum eter, etil asetat dan etanol, setelah dilakukan uji tabung ditemukan kandungan alkaloid, saponin dan flavanoid, sedangkan pada analisis secara KLT ditemukan senyawa alkaloid, saponin dan flavanoid. Setiaji (2009) telah melakukan ekstraksi pada rhizome binahong dengan pelarut etil asetat, petroleum eter, dan etanol 70% di dapatkan senyawa alkaloid, saponin flavonoid dan polifenol Etil asetat merupakan pelarut semi polar dan dapat melarutkan senyawa semipolar pada dinding sel seperti aglikon flavanoid (Harbone, 1987) etil asetat sering digunakan sebagai pelarut karena etil asetat dapat menyari senyawa-senyawa yang dapat memberikan aktivitas antibakteri diantaranya flavonoid pilohidroksi dan fenol yang lain (Anonymous,2005). Telah diujikan bahwa ekstrak etil asetat daun ceremai mempunyai aktivitas sebagai antibakteri terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dan mempunyai aktivitas antijamur terhadap Candida albicans dengan zona hambatan 20 mm, 15 mm dan 18 mm (Jagessar et al., 2008). Berdasarkan latar belakang diatas maka penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas antibakteri dengan berbagai konsentrasi ektsrak daun binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis dengan menggunakan pelarut etil asetat dan
konsentrasi efektif ekstrak daun binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis terhadap bakteri Staphylococcus aureus multiresisten antiboitik yang mewakili gram positif dan Pseudomonas aeruginosa multiresisten antibiotik yang mewakili gram negatif. dengan demikian penelitian ini kami beri judul "Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa
1.2. Rumusan Masalah Berdasarkan latar belakang di atas maka dapat diambil rumusan masalah sebagai berikut: 1. Apakah ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) mempunyai aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa? 2. Berapa konsentrasi hambat minimum (KHM) dan konsentrasi bunuh minimum (KBM) ekstrak daun binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa? 3. Senyawa kimia apa yang terkandung di dalam ekstrak daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri? 1.3. Tujuan Penelitian Berdasarkan rumusan masalah di atas, maka penelitian ini bertujuan untuk: 1. Mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa 2. Mengetahui konsentrasi hambat minimum (KHM) dan konsentrasi bunuh minimum (KBM) ekstrak daun binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa. 3. Mengetahui senyawa kimia yang terkandung di dalam ekstrak daun binahong yang mempunyai aktivitas sebagai antibakteri.
1.4. Hipotesis Penelitian Hipotesis yang melandasi penelitian ini adalah: 1. Adanya aktivitas antibakteri ekstrak daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa 2. Terdapat konsentrasi tertentu dari ekstrak daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis yang mampu menghambat dan membunuh Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa 3. Ada senyawa kimia yang terkandung di dalam ekstrak daun binahong yang mempunyai aktivitas sebagai antibakteri.
1.5. Manfaat Penelitian Hasil penelitian ini diharapkan bermanfaat untuk: 1. Memperkaya ilmu pengetahuan, khususnya yang berkaitan dengan adanya daya antibakteri suatu tanaman. 2. Memberikan informasi bahwa ekstrak daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis dapat digunakan sebagai zat antibakteri. 3. Memberikan motivasi pada masyarakat untuk menggunakan zat antibakteri dari bahan alam.
1.6. Batasan Masalah 1. Bakteri uji yang digunakan adalah bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa multi resisten antibiotik yang di dapatkan dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang 2. Daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun binahong campuran tua dan muda yang sudah dikeringkan dan tidak terserang penyakit didapatkan dari Balai Materia Medika Batu Malang 3. Penelitian ini hanya dilakukan pada konsentrasi hambat minimum dan konsentrasi bunuh minimum ekstrak daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis yang ditunjukkan dengan adanya penghambatan pertumbuhan bakteri ditunjukan dengan kejernihan media uji dan penurunan jumlah koloni bakteri setelah pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong. 4. Konsentrasi ekstrak daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) yang digunakan dalam penelitian ini adalah konsentrasi ekstrak daun binahong yang telah diencerkan sesuai dengan konsentrasi untuk masing-masing bakteri.
1.7. Penegasan Istilah 1. Daya antibakteri adalah kemampuan suatu zat untuk mencegah pertumbuhan atau aktivitas metabolisme mikroba. 2. Daya hambat adalah kemampuan suatu substansi untuk menghambat pertumbuhan suatu mikroorganisme. 4. Konsentrasi efektif adalah konsentrasi terkecil yang mempunyai daya hambat terbesar. 5. KHM (kadar hambat minimum) adalah konsentrasi ekstrak daun binahong terendah yang mampu menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa yang ditandai dengan kejernihan dalam media tabung atau cawan agar. 6. KBM (Kadar bunuh minimum) adalah konsentrasi ekstrak daun binahong terendah yang mampu membunuh bakteri yang dibiakkan pada media Natrium Agar atau kadar agen antibakteri terendah yang tidak menunjukkan pertumbuhan atau ada penurunan 99,9% dari inokulum asal sub kultur (Shulman et al.,1994) setelah dilakukan penggoresan 1 ml biakan bakteri dengan ekstrak daun binahong konsentrasi tertentu dan diinkubasi pada suhu 37C selama 18-24 jam. 7. Pengamatan kuantitatif digunakan untuk menentukan pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa secara kuantitatif dengan cara menghitung koloni bakteri dengan menggunakan colony counter.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1.Tanaman Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis 2.1.1. Deskripsi Tanaman Binahong Tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) adalah tanaman obat potensial yang dapat mengatasi berbagai jenis penyakit. Tanaman ini berasal dari dataran Cina dengan nama asalnya adalah Dheng shan chi, di Inggris disebut madeira vine. Sinonim Boussingaulatia gracilis Miers. Boussingaultia cordifolia Boussingaultia basselloides. Tanaman binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) termasuk dalam famili Basellaceae merupakan salah satu tanaman obat yang mempunyai potensi besar ke depan untuk diteliti, karena dari tanaman ini masih banyak yang perlu digali sebagai bahan fitofarmaka. Tanaman ini berasal dari Cina dan menyebar ke Asia Tenggara. Di Indonesia tanaman ini dikenal sebagai gendola yang sering digunakan sebagai gapura yang melingkar di atas jalan taman. Tanaman merambat ini perlu dikembangkan dan diteliti lebih jauh. Terutama untuk mengungkapkan khasiat dari bahan aktif yang dikandungnya. Berbagai pengalaman yang ditemui di masyarakat, binahong dapat dimanfaatkan untuk membantu proses penyembuhan penyakit-penyakit berat (Manoi, 2009) Tanaman binahong berupa tumbuhan menjalar, berumur panjang (perenial), bisa mencapai panjang +/- 5 m. Akar berbentuk rimpang, berdaging lunak. Batang lunak, silindris, saling membelit, berwarna merah, bagian dalam solid, permukaan halus, kadang membentuk semacam umbi yang melekat di
ketiak daun dengan bentuk tak beraturan dan bertekstur kasar. Daun tunggal, bertangkai sangat pendek (subsessile), tersusun berseling, berwarna hijau, bentuk jantung (cordata), panjang 5 - 10 cm, lebar 3 - 7 cm, helaian daun tipis lemas, ujung runcing, pangkal berlekuk (emerginatus), tepi rata, permukaan licin, bisa dimakan. (Gambar 2.1) Bunga majemuk berbentuk tandan, bertangkai panjang, muncul di ketiak daun, mahkota berwarna krem keputih-putihan berjumlah lima helai tidak berlekatan, panjang helai mahkota 0,5-1 cm, berbau harum. Perbanyakan generatif (biji), namun lebih sering berkembang atau dikembangbiakan secara vegetatif melalui akar rimpangnya (Gambar 2.2) (Mus, 2009)
Gambar 2.1. Daun Binahong Anredera cordifolia(Ten.) Steenis.
Gambar 2.2. Batang,Akar dan Daun Anredera cordifolia(Ten.) Steenis (Mus 2008) http://www.plantamor.com.
2.1.2. Klasifikasi Tanaman Binahong Klasifikasi tanaman binahong Anredera cordifolia(Ten.) Steenis. Menurut situs http://www.plantamor.com.adalah : Kingdom : Plantae (Tumbuhan) Subkingdom : Tracheobionta (Tumbuhan berpembuluh) Super Divisi : Spermatophyta (Menghasilkan biji) Divisi : Magnoliophyta (Tumbuhan berbunga) Kelas : Magnoliopsida (berkeping dua / dikotil) Sub Kelas : Hamamelidae Ordo : Caryophyllales Famili : Basellaceae Genus : Anredera Spesies : Anredera cordifolia (Ten.) Steenis
2.1.3. Kandungan Dan Kegunaan Tanaman Binahong Manfaat tanaman ini sangat besar dalam dunia pengobatan, secara empiris binahong dapat menyembuhkan berbagai jenis penyakit. Dalam pengobatan, bagian tanaman yang digunakan dapat berasal dari akar, batang, daun, dan bunga maupun umbi yang menempel pada ketiak daun. Tanaman ini dikenal dengan sebutan Madeira Vine dipercaya memiliki kandungan antioksidan tinggi dan antivirus. Tanaman ini masih diteliti meski dalam lingkup terbatas. Percobaan pada tikus yang disuntik dengan bahan ekstrak dari binahong dapat meningkatkan daya tahan tubuh, peningkatan agresivitas tikus dan tidak mudah sakit. Beberapa
penyakit yang dapat disembuhkan dengan menggunakan tanaman ini adalah: kerusakan ginjal, diabetes, pembengkakan jantung, muntah darah, tifus, stroke, wasir, rhematik, pemulihan pasca operasi, pemulihan pasca melahirkan, menyembuhkan segala luka dalam dan khitanan, radang usus, melancarkan dan menormalkan peredaran dan tekanan darah, sembelit, sesak napas, sariawan berat, pusing-pusing, sakit perut, menurunkan panas tinggi, menyuburkan kandungan, maag, asam urat, keputihan, pembengkakan hati, meningkatkan vitalitas dan daya tahan tubuh, (Manoi, 2009) Menurut Tshikalange et al., (2005). ekstrak air akar binahong dengan dosis 50 mg/ml memiliki daya hambat terhadap bakteri Gram-positif (B.pumilus,B.subtilis dan S.aureus) serta pada bakteri Gram-negatif (Enterobacter cloacae, E.coli, Klebsiella pneumonia, Serratia marcescens, dan Enterobacter aerogenes) pada dosis 60 mg/ml, tetapi tidak pada bakteri B.sereus. Rachmawati (2007) telah melakukan skrining fitokimia daun Binahong (Anredera Cordifolia (Ten ) Steenis dengan melakukan maserasi terhadap serbuk kering daun dengan menggunakan pelarut n-heksana dan metanol didapatkan kandungan kimia berupa saponin triterpenoid, flavanoiod dan minyak atsiri. Rochani (2009). melakukan ekstraksi dengan cara maserasi daun binahong dengan menggunakan pelarut petroleum eter, etil asetat dan etanol, setelah dilakukan uji tabung ditemukan kandungan alkaloid, saponin dan flavanoid, sedangkan pada analisisa secara KLT ditemukan senyawa alkaloid, saponin dan flavanoid. Setiaji (2009) telah melakukan ekstraksi pada rhizome binahong dengan pelarut etil asetat, petroleum eter, dan etanol 70% di dapatkan senyawa alkaloid, saponin,
flavonoid dan polifenol. Pada ekstrak dengan pelarut etil asetat pada konsentrasi 2 % dapat membunuh bakteri Staphylococcus aureus. Selain itu juga dijelaskan (Uchida, et al.,2003) bahwa di dalam daun binahong terdapat aktifitas antioksidan, asam askorbat dan total fenol yang cukup tinggi.
2.1.4. Zat Antimikroba Tanaman Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis 2.1.4.1. Flavanoid Flavanoid merupakan senyawa polar yang umumnya mudah larut dalam pelarut polar seperti etanol, menthanol, butanol, aseton, dan lain-lain. (Markham,1988). Flavanoid dalam tumbuhan terikat pada gula sebagai glikosida dan aglikon flavanoid, Gula yang terikat pada flavanoid mudah larut dalam air (Harbone,1996). Flavanoid merupakan golongan terbesar dari senyawa fenol, senyawa fenol mempunyai sifat efektif menghambat pertumbuhan virus, bakteri dan jamur. Nurachman (2002) menambahkan bahwa senyawa-senyawa flavanoid umumnya bersifat antioksidan dan banyak yang telah digunakan sebagai salah satu komponen bahan baku obat-obatan. bahwa Senyawa flavanoid dan turunanya memilki dua fungsi fisiologi tertentu, yaitu sebagai bahan kimia untuk mengatasi serangan penyakit (sebagai antimikroba) dan anti virus bagi tanaman. Ditambahkan oleh De Padua, et al., (1999) bahwa flavanoid mempunyai bermacam-macam efek yaitu, efek anti tumor, anti HIV, immunostimulant, analgesik, antiradang, antifungal, antidiare, antihepatotoksik, antihiperglikemik dan sebagai vasolidator.
2.1.4.2. Saponin Saponin dibedakan sebagai saponin triterpenoid dan saponin steroid. Saponin triterpenoid umumnya tersusun dari sistem cincin oleanana atau ursana. Glikosidanya mengandung 1-6 unit monosakarida (Glukosa, Galaktosa, Ramnosa) dan aglikonnya disebut sapogenin, mengandung satu atau dua gugus karboksil. (Louis, 2004). Robinson (1995) menyatakan saponin merupakan senyawa aktif permukaan yang kuat yang menimbulkan busa jika dikocok dalam air dan pada konsentrasi yang rendah sering menyebabkan hemolisis sel darah merah. Beberapa saponin bekerja sebagai antimikroba dan saponin tertentu menjadi penting karena dapat diperoleh dari beberapa tumbuhan dengan hasil yang baik dan digunakan sebagai bahan baku untuk sintesis hormon steroid yang digunakan dalam bidang kesehatan. Saponin merupakan glukosida yang larut dalam air dan etanol, tetapi tidak larut dalam eter. 2.1.4.3. Alkaloid Alkaloid merupakan golongan zat tumbuhan sekunder yang terbesar. Alkaloid mencakup senyawa bersifat basa yang mengandung satu atau lebih atom nitrogen, biasanya dalam gabungan, sebagai bagian dari sistem siklik. Alkaloid sering bersifat racun bagi manusia dan banyak yang mempunyai kegiatan fisiologi yang menonjol, jadi digunakan secara luas dalam bidang pengobatan. Alkaloid biasanya terwarna, sering kali bersifat optis aktif, kebanyakan berbentuk kristal tetapi hanya sedikit yang berupa cairan (misalnya nikotina) pada suhu kamar (Harbone,1987)
Alkaloid memiliki kemampuan sebagai antibakteri. Mekanisme yang diduga adalah dengan cara mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut (Robinson, 1995) 2.1.4.4. Terpenoid Terpenoid atau isoprenoid merupakan salah satu senyawa organik yang hanya tersebar di alam, yang terbentuk dari satuan isoprena ( CH3=C(CH3)- CH=CH2). Senyawa terpenoid merupakan senyawa hidrokarbon yang dibedakan berdasarkan jumlah satuan isoprena penyusunnya, group metil dan atom oksigen yang diikatnya (Robinson, 1995) Terpenoid banyak ditemukan dalam tumbuhan tingkat tinggi sebagai minyak atsiri yang memberi bau harum dan bau khas pada tumbuhan dan bunga. Selain itu terpenoid juga terdapat dalam jamur, invertebrata laut dan feromon serangga. Sebagian besar terpenoid ditemukan dalam bentuk glikosida atau glikosil ester (Thomson,1993) Terpenoid dari tumbuhan biasanya digunakan sebagai senyawa aromatik yang menyebabkan bau pada eucalyptus, pemberi rasa pada kayu manis, cengkeh, jahe dan pemberi warna kuning pada bunga. Terpenoid tumbuhan mempunyai manfaat penting sebagai obat tradisional, anti bakteri, anti jamur dan gangguan kesehatan (Thomson, 2004) 2.1.4.5. Minyak Atsiri Minyak atsiri merupakan senyawa volatil yang dihasilkan oleh jaringan tertentu suatu tanaman, baik berasal dari akar, batang, daun, kulit, bunga, biji-
bijian. bahkan putik bunga (Rahmawati, 2000). Pada umumnya minyak atsiri mempunyai ciri-ciri mudah menguap pada suhu kamar, mudah mengalami dekomposisi, memiliki bau harum sesuai dengan bau tanaman penghasilnya, larut dalam pelarut organik dan tidak larut dalam air (Guenther, 1987). Sedangkan menurut Nurhayati (2004) minyak atsiri merupakan komponen campuran dari bahan-bahan yang wangi atau campuran dari bahan wangi dengan bahan yang tidak berbau. Komponen yang wangi merupakan senyawa kimia murni yang menguap pada kondisi normal. Ajizah (2004) menjelaskan, minyak atsiri berperan sebagai antibakteri dengan cara menggangu proses terbentuknya membran atau dinding sel sehingga tidak terbentuk atau terbentuk tidak sempurna. Minyak atsiri yang aktif sebagai antibakteri pada umumnya mengandung gugus fungsi hidroksil (-OH) dan karbonil. Turunan fenol berinteraksi dengan sel bakteri melalui proses adsorpsi yang melibatkan ikatan hidrogen. Pada kadar rendah terbentuk kompleks protein fenol dengan ikatan yang lemah dan segera mengalami penguraian, diikuti penetrasi fenol kedalam sel dan menyebabkan presipitasi serta denaturasi protein. Pada kadar tinggi fenol menyebabkan koagulasi protein dan sel membran mengalami lisis.(Parwata, et al., 2008). 2.1.4.6. Tanin Tanin adalah senyawa polifenol yang memiliki berat molekul antara 500- 3000 dalton yang diduga berperan sebagai antibakteri, karena dapat membentuk kompleks dengan protein dan interaksi hidrofobik (Makkar,1991)
Tanin merupakan golongan senyawa aktif tumbuhan yang bersifat fenol, mempunyai rasa sepat dan mempunyai kemampuan menyamak kulit. Secara kimia tanin dibagi menjadi dua golongan, yaitu tanin terkondensasi atau tanin katekin dan tanin terhidrolisis (Robinson,1995). Tanin terkondensasi terdapat dalam paku-pakuan, gimnospermae dan angiospermae, terutama pada jenis tumbuh-tumbuhan berkayu. Tanin terhidrolisis penyebaranya terbatas pada tumbuhan berkeping dua (Harbone, 1984) Tanin memiliki aktivitas antibakteri, secara garis besar mekanismenya adalah dengan merusak membran sel bakteri, senyawa astringent tanin dapat menginduksi pembentukan ikatan senyawa kompleks terhadap enzim atau substrat mikroba dan pembentukan suatu ikatan kompleks tanin terhadap ion logam yang dapat menambah daya toksisitas tanin itu sendiri. (Akiyama, et al., 2001). Ajizah, (2004) menjelaskan, aktivitas antibakteri senyawa tanin adalah dengan cara mengkerutkan dinding sel atau membran sel, sehingga mengganggu permeabilitas sel itu sendiri. Akibat terganggunya permeabilitas, sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhanya terhambat atau bahkan mati.
2.2. Ekstraksi Daun Binahong Dengan Metode Maserasi Ekstraksi merupakan penarikan zat pokok yang diinginkan dari bahan mentah obat dengan menggunakan pelarut yang dipilih dimana zat yang akan diinginkan larut (Ansel, 2005). Faktor-faktor yang menentukan hasil ekstraksi adalah jangka waktu sampel kontak dengan cairan pengekstraksi (waktu ekstraksi), perbandingan antara jumlah sampel terhadap jumlah cairan
pengekstraksi (jumlah bahan pengekstraksi), ukuran bahan dan suhu ekstraksi. Semakin lama waktu ekstraksi, kesempatan untuk bersentuhan makin besar sehingga hasilnya juga bertambah sampai titik jenuh larutan. Perbandingan jumlah pelarut dengan jumlah bahan berpengaruh terhadap efisiensi ekstraksi, jumlah pelarut yang berlebihan tidak akan mengekstrak lebih banyak, namun dalam jumlah tertentu pelarut dapat bekerja optimal. Ekstraksi akan lebih cepat dilakukan pada suhu tinggi, tetapi hal ini dapat mengakibatkan beberapa komponen mengalami kerusakan. Penggunaan suhu 50 C menghasilkan ekstrak yang optimum dibandingkan suhu 40C dan 60 C. (Voight, 1994) Salah satu metode ekstraksi bahan alam, yaitu metode maserasi. Maserasi adalah metode perendaman. Penekanan utama pada maserasi adalah tersedianya waktu kontak yang cukup antara pelarut dan jaringan yang diektraksi (Guenter, 1987). Maserasi merupakan cara yang sederhana, maserasi dilakukan dengan cara merendam serbuk simplisia dalam pelarut. Pelarut akan menembus dinding sel dan masuk kedalam rongga sel yang mengandung zat-zat aktif sehingga zat aktif akan larut. Karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel, maka larutan yang pekat didesak keluar. Pelarut yang digunakan dapat berupa air, etanol, air-etanol atau pelarut lain. (Ahmad, 2006) dan untuk mendapatkan ekstrak dalam waktu yang relatif cepat dapat dilakukan pengadukan dengan menggunakan shaker berkekuatan 120 rpm selama 24 jam (Yustina, et al., 2008) Pelarut merupakan salah satu faktor yang menentukan dalam proses ekstraksi, sehingga banyak faktor yang harus diperhatikan dalam pemilihan pelarut (Guenther, 2006). Terdapat dua pertimbangan utama dalam memilih jenis
pelarut, yaitu pelarut harus mempunyai daya larut yang tinggi dan pelarut tidak berbahaya atau tidak beracun. Pelarut yang digunakan dalam ekstraksi harus dapat melarutkan ekstrak yang diinginkan saja, mempunyai kelarutan yang besar, tidak menyebabkan perubahan secara kimia pada komponen ekstrak, dan titik didih kedua bahan tidak boleh terlalu dekat (Bernasconi, 1995). Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini berdasarkan tingkat kepolaranya yaitu pelarut etil asetat. Etil asetat merupakan pelarut semi polar dan dapat melarutkan senyawa semipolar pada dinding sel seperti aglikon flavanoid (Harbone, 1987) Etil asetat adalah senyawa organik yang merupakan ester dari etanol dan asam asetat. Etil asetat adalah pelarut polar menengah yang volatil, tidak beracun, dan tidak higroskokopis. Etil asetat sering digunakan sebagai pelarut karena etil asetat dapat menyaring senyawa-senyawa yang dapat memberikan aktivitas antibakteri diantaranya flavonoid polyhidroksi dan fenol yang lain (Anonymous, 2005). Telah diujikan bahwa ekstrak etil asetat daun ceremai mempunyai aktivitas sebagai antibakteri terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dan mempunyai aktivitas antijamur terhadap Candida albicans dengan zona hambatan 20 mm, 15 mm dan 18 mm (Jagessar et al., 2008). (Pambayun, et al., 2007) telah melakukan maserasi pada bubuk gambir dengan menggunakan berbagai pelarut didapatkan senyawa fenolat total yang tertinggi dengan menggunakan pelarut etil asetat. Setiaji (2009) telah melakukan ekstraksi pada rhizome binahong dengan pelarut etil asetat di dapatkan senyawa alkaloid, saponin, flavonoid dan polifenol.
2.3.Tinjauan Tentang Bakteri Uji Bakteri uji dapat dibedakan antara bakteri gram positif dan gram negatif. Atas dasar teknik pewarnaan diferensiasial yang disebut pewarnaan gram, kedua kelompok bakteri ini di bedakan terutama mengenai dinding selnya (Volk dan weller,1993). Perbedaan nyata dalam komposisi dan struktur di dinding sel antara bakteri gram positif dan bakteri gram negatif penting untuk dipahami karena diyakini bahwa dinding sel itulah yang menyebabkan perbedaan kedua kelompok bakteri ini memberikan respons. Bakteri gram negatif mengandung lipid, lemak atau substansi seperti lemak dalam persentase lebih tinggi daripada yang dikandung bakteri gram positif. Dinding sel bakteri gram negatif juga lebih tipis daripada dinding sel bakteri gram positif. Dinding sel bakteri gram negatif mengandung peptidoglikan jauh lebih sedikit, dan peptidoglikan ini mempunyai ikatan silang yang kurang efektif dibandingkan dengan yang dijumpai pada dinding bakteri gram positif. Pada saat pewarnaan dengan ungu kristal pertumbuhan bakteri gram positif lebih dihambat dengan nyata daripada bakteri gram negatif , demikian juga dengan kerentanan terhadap antibiotik, bakteri gram positif lebih rentan terhadap penisilin daripada bakteri gram negatif (Pelczar dan Chan,1986)
2.3.1. Bakteri Staphylococcus aureus
Gambar 2.3. Morfologi Bakkteri Staphylococcus aureus (Wikipedia,2008)
2.3.1.1. Morfologi Bakteri Staphylococcus aureus Nama Staphylococcus aureus berasal dari kata Staphele yang berarti kumpulan dari anggur dan kata Aureus dalam bahasa latin yang berarti emas. Nama tersebut berdasarkan bentuk dari sel-sel bakteri yang berwarna keemasan. Ciri-ciri bakteri ini adalah merupakan bakteri gram positif yang berbentuk bulat (cocus) dengan ukuran diameter sekitar 1 m dan tersusun dalam kelompok yang tidak beraturan, tidak membentuk spora dan tidak bergerak. Sel-selnya terdapat dalam kelompok seperti buah anggur, akan tetapi pada biakkan cair mungkin terdapat secara terpisah (tunggal), berpasangan berbentuk tetrad (jumlahnya 4 sel) dan berbentuk rantai dan koloninya berwarna abu-abu sampai kuning emas tua (Jawetz, 1996). Sedangkan menurut Bonang (1982) metabolisme bakteri ini adalah aerob dan anaerob, katabolisme positif membentuk asam dari hidrat arang tanpa gas, fakultatif anaerob dan koloninya berwarna abu-abu sampai kuning emas tua.
2.3.1.2. Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus Bakteri Staphylococcus aureus mudah tumbuh pada berbagai pembenihan dan mempunyai metabolisme aktif, meragikan karbohidrat, serta menghasilkan pigmen yang berfariasi dari putih sampai kuning tua. Bakteri ini dapat tumbuh dengan baik pada suhu 37C, tapi membentuk pigmen yang paling baik pada suhu kamar (20C). Koloni pada pembenihan padat berbentuk bulat, halus, menonjol dan berkilau-kilauan, membentuk barbagai pigmen. Staphylococcus aureus berwarna kuning emas. (Jawetz, 1996). Beberapa media yang dapat digunakan untuk penanaman Staphylococcus aureus antara lain Mueller Hinton Agar, Gliseril Monostearat Agar, Msa, dan Nutrient Agar (Jawetz, 1989) Staphylococcus aureus dapat tumbuh pada kisaran pH 4,0-9,8 dengan pH optimum sekitar 7,0-7,5. Pertumbuhan pada pH 9,8 hanya mungkin bila substratnya mempunyai komposisi yang baik untuk pertumbuhannya. Bakteri ini membutuhkan asam nikotinat untuk tumbuh dan akan distimulir pertumbuhanya dengan adanya tiamin. Untuk pertumbuhan optimum diperlukan 11 asam amino. Bakteri ini tidak dapat tumbuh pada media sintetik yang tidak mengandung asam amino atau protein (Supardi,1999). Menurut Jawetz (1996) Staphylococcus aureus relatif resisten terhadap pengeringan panas (bakteri ini tahan terhadap suhu 50C selama 30 menit), dan terhadap natrium klorida 9% tetapi dengan mudah dihambat oleh zat-zat kimia tertentu seperti heksaklorofen 3%.
2.3.1.3. Patogenitas Dan Gambaran Klinis Bakteri Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus menginfeksi manusia terutama pada membran mukosa daerah nasal, saluran pernafasan bagian atas dan saluran pencernaan. Sifat khas infeksi Staphylococcus aureus yang bersifat patogen adalah penahanan lokal. Infeksi ini antara lain, meningitis, endokarditis, perikarditis dan bisul. Infeksi yang disertai penanahan akan sembuh dengan cepat bila nanah dikeluarkan. Staphylococcus aureus membentuk enterotoksin yang stabil pada pemanasan. Enterotiksin dapat menyebabkan gejala keracunan makanan seperti mual, diare, dan muntah-muntah (Jawetz, 1996) Sebagai penyebab penting keracunan makanan, enterotoksin khususnya dihasilkan bila bakteri ini tumbuh pada makanan karbohidrat dan protein. Enterotoksin mengakibatkan muntah-muntah dan diare pada manusia. Keracunan makanan yang disebabkan oleh enterotoksin Staphylococcus aureus ditandai oleh masa inkubasi yang pendek (1-8) jam, nausea hebat, muntah-muntah, diare dan konvalesen yang cepat (Jawetz,1986) Infeksi lokal Staphylococcus auereus muncul sebagai suatu pimple, infeksi folikel rambut, atau abses. Biasanya reaksi peradangan berlangsung hebat, terlokalisasi, dan nyeri yang mengalami pernanahan sentral. Infeksi Staphylococcus aureus juga dapat disebabkan oleh kontaminasi langsung pada luka, misalnya pada infeksi luka pasca bedah atau infeksi setelah trauma.(fraktur terbuka, meningitis setelah fraktur tengkorak). Bila Staphylococcus aureus menyebar dan terjadi bakterimia, dapat terjadi endokarditis, osteomielitis akut hematogen, meningitis, atau infeksi paru-paru (Jawetz dkk,1996)
2.3.1.4. Pengobatan Untuk terapi infeksi Staphylococcus aureus digunakan antibiotika. Selama pengobatan umumnya cepat terjadi resistensi, sehingga menimbulkan kesulitan untuk memberantasnya. Antibiotika yang sering digunakan yaitu sefalosporin, vankomisin dan tetrasiklin (Jawetz, 2001)
Gambar 2.4. Morfologi Bakkteri Pseudomonas aeruginosa (Wikipedia, 2008)
2.3.2.2. Pertumbuhan Baksteri Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aureginosa tersebar luas di alam dan biasanya terdapat di lingkungan yang lembab di rumah sakit. Ciri khas Pseudomons aeruginosa bergerak dan berbentuk batang, berukuran 0,6 x 2 m. Bakteri ini gram negatif dan terlihat sebagai bakteri tunggal, berpasangan, dan kadang-kadang membentuk rantai yang pendek. Tumbuh baik pada suhu 37C-42C. Pertumbuhan pada suhu
42 C membedakan spesies ini dari jenis lain. Bakteri ini adalah aerob obligat yang tumbuh dengan mudah pada banyak jenis pembenihan biakan, kadang- kadang menghasilkan bau yang manis menyerupai anggur membentuk koloni halus bulat dengan warna berfluoresensi kehijauan. Semua spesies Pseudomonas dapat tumbuh baik dalam sample nutrient agar dan dalam kebanyakan media selektif seperti Eosin Methylen Blue (EMB) dan Mc Conkey Agar (Jawetz, 1996).
2.3.2.3. Patogenesis Dan Gambaran Klinis Bakteri Pseudomonas aeruginosa Bakteri Pseudomonas aeruginosa menimbulkan infeksi pada luka dan luka bakar, menimbulkan nanah hijau kebiruan, meningitis, bila masuk bersama funksi lumbal, dan infeksi saluran kemih, bila masuk bersama kateter dan instrumen lain atau dalam larutan untuk irigasi. Keterlibatan saluran nafas karena larutan irigasi. Penyerangan pada saluran nafas, khususnya respirator yang tercemar, mengakibatkan Pneumonia netrotika, menyebakna infeksi mada mata, yang mengakibatkan kerusakan mata secara cepat, biasanya terjadi setelah luka atau operasi mata. Jawetz, et al., (2001) Anasrullah (2002) menyatakan bahwa bakteri Pseudomonas aureginosa merupakan mikroorganisme etiologi infeksi luka bakar di RSUD Dr. Saiful Anwar Malang selama periode 1998-2001. Menurut Yuke (2002) infeksi dari kuman Pseudomonas aeruginosa dapat menyebabkan berbagai macam penyakit, seperti Endokarditis, dimana Pseudomonas aeruginosa menyerang katup jantung terutama pada pemakai obat- obatan per intravena dan pengguna katup jantung buatan. Kuman ini dapat
menyebabkan Endokarditis melalui penyebaran secara langsung dalam aliran darah.
2.3.2.4. Pengobatan Infeksi Pseudomonas aureginosa yang penting dalam klinik tidak boleh diobati dengan terapi obat tunggal, karena keberhasilan terapi semacam itu rendah dan bakteri dapat dengan cepat menjadi resisten. Penisilin yang bekerja aktif terhadap bakteri Pseudomonas aureginosa, tikarsilin, mezlosilin, dan piperasilin digunakan dalam kombinasi dengan aminoglikosida, biasanya gentamisin, tobramisin atau amikasin. Obat lain yang aktif terhadap Pseudomonas aureginosa antara lain azreonam, imipenem, kuinolon baru, termasuk siprofloksasin. Sefalosporin generasi baru, seftazidim dan sefeperakson aktif melawan Pseudomonas aeruginosa, seftazidim digunakan secara primer pada terapi infeksi Pseudomonas aureginosa. Pola kepekaan Pseudomonas aureginosa bervariasi secara geografik, dan tes kepekaan harus dilakukan sebagai pedoman untuk pemilihan terapi antimikroba (Jawetz,1996)
2.4. Tinjauan Bahan Antimikroba Bahan antimikroba adalah senyawa biologis atau kimia yang dapat mengganggu pertumbuhan dan aktivitas mikroba, khususnya mikroba yang merugikan manusia. Antimikroba merupakan komponen kimia yang mempunyai kemampuan dalam menghambat atau mematikan mikroorganisme. Antimikroba yang
mempunyai kemampuan membunuh mikroba misalnya bakterisidal, fungisidial. Sedangkan antimikroba yang mempunyai kemampuan hanya menghambat pertumbuhan mikroba misalnya bakteristatik, fungistatik (Volk and Welher,1998). Pemakaian bahan antimikroba merupakan suatu usaha untuk mengendalikan mikroorganisme. Pengendalian adalah segala kegiatan yang dapat menghambat. membasmi atau menyingkirkan mikroorganisme. Menurut Pelczar (1988) tujuan utama pengendalian adalah: 1. Mencegah penyakit dan infeksi. 2. Membasmi mikroorganisme pada inang yang terinfeksi 3. Mencegah pembusukan dan kerusakan bahan oleh mikroorganisme. Menurut Pelczar (1986). Obat antimikroba sebaiknya mempunyai sifat- sifat sebagai berikut: 1. Menghambat atau membunuh pathogen tanpa merusak hospes. 2. Bersifat bakterisidal dan bukan bakteriostatik. 3. Tidak menyebabkan resistensi pada kuman 4. Berspektrum luas 5. Tidak bersifat alergenik atau tidak menimbulkan efek samping bila digunakan dalam jangka waktu yang lama 6. Tetap aktif dalam plasma,cairan tubuh 7. Larut di dalam air dan stabil 8. Kadar bakterisidal di dalam tubuh cepat tercapai dan bertahan dalam waktu lama.
2.5. Cara Kerja Zat Antimikroba. Zat antimikroba dalam melakukan efeknya, harus dapat mempengaruhi bagian-bagian vital sel seperti membran sel, enzim-enzim dan protein struktural. Pelczar (1988) menyatakan bahwa mekanisme kerja zat antimikroba dalam melakukan efeknya terhadap mikroorganisme adalah sebagai berikut: 1. Merusak Dinding Sel Pada umumnya bakteri memiliki suatu lapisan luar yang kaku disebut dinding sel (peptidoglikan). Sintesis dinding sel ini melibatkan sejumlah langkah enzimatik yang banyak diantaranya dihalangi oleh antimikroba. Rusaknya dinding sel bakteri misalnya karena pemberian enzimlisosim atau hambatan pembentukanya oleh karena obat antimikroba, dapat menyebabkan sel bakteri lisis. Kerusakan dinding sel akan berakibat terjadinya perubahan-perubahan yang mengarah pada kematian sel karena dinding sel berfungsi sebagai pengatur pertukaran zat-zat dari luar dan kedalam sel, serta memberi bentuk sel. 2. Mengubah Permeabilitas Membran sel. Sitoplasma semua sel hidup dibatasi oleh selaput yang disebut membrane sel yang mempunyai permeabilitas selektif, membran ini tersusun atas fosfolipid dan protein. Membran sel berfungsi untuk mengatur keluar masuknya zat antar sel dengan lingkungan luar, melakukan pengangkutan zat-zat yang diperlukan aktif dan mengendalikan susunan dalam diri sel. Proses pengangkutan zat-zat yang diperlukan baik kedalam maupun keluar
sel dimungkinkan karena didalam membran sel terdapat enzim protein untuk mensintesis peptidoglikan komponen membran luar. Dengan rusaknya dinding sel, bakteri secara otomatis akan berpengaruh pada membrane sitoplasma, beberapa bahan antimikroba seperti fenol, kresol, detergen dan beberapa antibiotik dapat menyebabkan kerusakan pada membrane sel, bahan-bahan ini akan menyerang dan merusak membran sel sehingga fungsi semi permeabilitas membran mengalami kerusakan. Kerusakan pada membran sel ini akan mengakibatkan terhambatnya sel atau matinya sel. 3. Kerusakan Sitoplasma. Sitoplasma atau cairan sel terdiri atas 80% air, asam nukleat, protein, karbohidrat, lipid, ion anorganik dan berbagai senyawa dengan bobot molekul rendah. kehidupan suatu sel tergantung pada terpeliharanya molekul-molekul protein dan asam nukleat dalam keadaan alamiahnya. Konsentrasi tinggi beberapa zat kimia dapat mengakibatkan kuagulasi dan denaturasi komponen-komponen seluler yang vital. 4. Menghambat Kerja Enzim. Didalam sel terdapat enzim dan protein yang membantu kelangsungan proses-proses metabolisme, banyak zat kimia telah diketahui dapat mengganggu reaksi biokimia misalnya logam-logam berat, golongan tembaga, perak, air raksa dan senyawa logam berat lainnya umumnya efektif sebagai bahan antimikroba pada konsentrasi relatif rendah. Logam- logam ini akan mengikat gugus enzim sulfihidril yang berakibat terhadap
perubahan protein yang terbentuk. penghambatan ini dapat mengakibatkan terganggunya metabolisme atau matinya sel. 5. Menghambat Sintesis Asam Nukleat Dan Protein DNA, RNA dan protein memegang peranan amat penting dalam sel, beberapa bahan antimikroba dalam bentuk antibiotik misalnya cloramfenikol, tetrasiline, prumysin menghambat sintesis protein. Sedangkan sintesis asam nukleat dapat dihambat oleh senyawa antibiotik misalnya mitosimin. Bila terjadi gangguan pada pembentukan atau pada fungsi zat-zat tersebut dapat mengakibatkan kerusakan total pada sel.
2.6. Faktor Yang Mempengaruhi Aktifitas Zat Antimikroba Banyak faktor dan keadaan yang mempengaruhi kerja zat antimikroba dalam menghambat atau membasmi organisme pathogen. Semuanya harus dipertimbangkan agar zat antimikroba tersebut dapat bekerja secara efektif. Beberapa hal yang dapat mempengaruhi kerja zat antimikroba menurut Pelczar (1988), adalah sebagai berikut: 1. Konsentrasi Atau Intensitas Zat Antimikroba. Semakin tinggi konsentrasi suatu zat antimikroba semakin tinggi daya antimikrobanya, artinya banyak bakteri akan terbunuh lebih cepat bila konsentrasi zat tersebut lebih tinggi. 2. Jumlah Organisme Semakin banyak jumlah organisme yang ada maka makin banyak pula waktu yang diperlukan untuk membunuhnya.
3.Suhu Kenaikkan suhu dapat meningkatkan keefektifan suatu disinfektan atau bahan microbial. Hal ini disebabkan zat kimia merusak mikroorganisme melalui reaksi kimia. Reaksi kimia bisa dipercepat dengan meninggikan suhu. 4. Spesies Mikroorganisme. Spesies mikroorganisme menunjukkan ketahanan yang berbeda-beda terhadap suatu bahan kimia tertentu. 5. Adanya Bahan Organik. Adanya bahan organik asing dapat menurunkan keefektifan zat kimia antimicrobial dengan cara menonaktifkan bahan kimia tersebut. Adanya bahan organik dalam campuran zat antimikrobial dapat mengakibatkan: a. Penggabungan zat antimikrobial dengan bahan organik membentuk produk yang tidak bersifat antimikrobial. b. Penggabungan zat antimikrobial dengan bahan organik menghasilkan suatu endapan sehingga antimikrobial tidak mungkin lagi mengikat mikroorganisme. c. Akumulasi bahan organik pada permukaan sel mikroba menjadi suatu pelindung yang akan menganggu kontak antar zat antimikrobial dengan sel.
6. Keasaman (pH) Atau Kebasaan (pOH). Mikroorgasnisme yang hidup pada pH asam akan lebih mudah dibasmi pada suhu rendah dan dalam waktu yang singkat bila dibandingkan dengan mikroorganisme yang hidup pada pH basa.
2.7. Mekanisme Resistensi Pemakaian antibakteri yang berlebihan menyebabkan mikroba yang semula sensitif terhadap antibiotik menjadi resisten. Oleh karena itu, senyawa antibakteri diperlukan untuk mengatasi bakteri resisten tersebut (Lenny, 2006) Resistensi sel mikroba ialah suatu sifat tidak terganggunya kehidupan sel mikroba oleh antimikroba. Sifat ini merupakan suatu mekanisme alamiah untuk bertahan hidup. Resistensi dibagi dalam kelompok resistensi genetik, resistensi nongenetik dan resistensi silang. Mekanisme resistensi terhadap antimikroba antara lain: perubahan tempat kerja (target site) obat pada mikroba; mikroba menurunkan permeabilitasnya hingga obat sulit masuk kedalam sel; inaktivasi obat oleh mikroba; mikroba membentuk jalan pintas untuk menghindari tahap yang dihambat oleh antimikroba; dan meningkatkan produksi enzim yang dihambat oleh antimikroba (Ganiswara, 2003)
2.8. Uji Kepekaan Terhadap Antimikroba Sebelum zat antimikroba digunakan untuk keperluan pengobatan maka perlu diuji dahulu efeknya terhadap spesies bakteri tertentu. Aktifitas antijasad renik diukur secara in vitro agar dapat ditentukan potensinya suatu zat sebagai anti
jasad renik dalam larutan, konsentrasi zat terhadap jasad renik serta kepekaan suatu jasad renik terhadap konsentrasi-konsentrasi bahan antimikroba yang diberikan (Jawetz,1986) Menurut Lay (1994) Bahan antimikroba bersifat menghambat bila digunakan dalam konsentrasi kecil, namun bila digunakan dalam konsentrasi tinggi dapat mematikan, untuk itu perlu diketahui MIC (Minimum Inhibitori Consentration) dan MKC (Minimum Killing Concentration) bahan antimicrobial terhadap mikroorganisme. 1. Metode Dilusi Tabung Cara ini digunakan untuk menentukan konsentrasi hambat minimum (KHM) dan konsentrasi bunuh minimum (KBM) dari obat antimikroba. Prinsip dari metode dilusi yaitu menggunakan satu seri tabung reaksi yang diisi media cair dan sejumlah tertentu sel mikroba yang di uji. Kemudian masing-masing tabung diisi dengan obat yang telah diencerkan secara serial. Selanjutnya, seri tabung diinkubasikan pada suhu 37C selama 18-24 jam dan diamati kekeruhanya pada tabung. Konsentrasi terendah obat pada tabung yang ditunjukkan dengan hasil biakan yang mulai nampak jernih (tidak ada pertumbuhan mikroba) adalah KHM dari obat. Selanjutnya biakan dari semua tabung yang jernih diinokulasikan pada media agar padat, diinkubasikan dan keesokan harinya diamati ada tidaknya koloni mikroba yang tumbuh. Konsentrasi terendah obat pada biakan padat yang ditunjukkan dengan tidak adanya pertumbuhan koloni bakteri adalah KBM dari obat terhadap bakteri uji (Dzen dkk, 2003)
Menurut Bonang dan Koeswandoro (1982) konsentrasi ekstrak terkecil yang menunjukan hambatan pertumbuhan mikroskopis disebut konsentrasi penghambat minimum/MIC. Uji ini dilakukan dengan mengamati kekeruhan campuran Nutrient broth yang sudah diinokulasi bakteri dengan konsentrasi ekstrak sesuai dengan perlakuan, lalu diinkubasi selama 24 jam dan diamati pertumbuhan bakterinya.
2.9. Herbal Dalam Perspektif Islam. Allah SWT berfirman dalam Al-Quran surat Ali-Imran ayat 190-191: | ,=> ,.9 _{ #=.> 9 !]9 <`{ ,9{ %! `. < !% `-% ?s ,``> `6. ,=> ,.9 _{ !, ! )=> L, 7>, !) ,s !9 Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi, dan silih bergantinya malam dan siang terdapat tanda-tanda bagi orang-orang yang berakal, (yaitu) orang- orang yang mengingat Allah sambil berdiri atau duduk atau dalam keadan berbaring dan mereka memikirkan tentang penciptaan langit dan bumi (seraya berkata): "Ya Tuhan kami, tiadalah Engkau menciptakan Ini dengan sia-sia, Maha Suci Engkau, Maka peliharalah kami dari siksa neraka. (QS. Ali-Imran [3]: 190-191:) Dari firman Allah ini, terdapat perintah Allah SWT kepada manusia yang telah diberi kelebihan akal untuk meneliti dan mengkaji segala sesuatu yang ada di langit dan bumi, karena tidak ada hasil ciptaan Allah SWT yang sia-sia. Semua ciptaan Allah memiliki manfaat dan harus dimanfaatkan. Allah menciptakan manusia dan memuliakannya sebagai makhluk yang paling istimewa. Oleh karena itu dengan akal dan pikiran diharapkan manusia dapat hidup seimbang dunia dan
akhirat, sehat jasmani dan rohani dengan cara memanfaatkan apa yang ada (bahan alam) dan mencari rahasia yang terkandung di dalamnya. Allah SWT menciptakan suatu penyakit, dan Allah pula telah memberikan obatnya. Dalam sabda Nabi yang diriwayatkan jabir R.A.menyebutkan: : ,
Setiap penyakit ada obatnya, apabila obat suatu penyakit telah tepat, sembuhlah dia dengan izin Allah Azza wa jalla )
Hadist diatas merupakan hadist riwayat Jabir. R.A yang terdapat dalam kitab Shahih Imam Bukhari (Al-Din, 2002). Oleh karena itu, jika ada penyakit, manusia hendaknya berobat. Apabila penyakit tersebut belum ada obatnya, maka manusia hendaknya mencari sesuatu yang bisa mengobati penyakitnya. Manusia haruslah yakin bahwa semua penyakit pasti ada obatnya. Sesungguhnya Nabi SAW merupakan contoh teladan yang baik dalam memberikan petunjuk menuju kedokteran yang benar yang berdiri diatas ilmu dan uji coba, bukan diatas khayalan dan omong kosong (Qordhawi,1998). Oleh karena itu, hendaknya manusia selalu berusaha mencari obat suatu penyakit dengan ilmu yang dia miliki, dalam hal ini ilmu yang di maksud adalah ilmu yang berkaitan dengan kesehatan Tanaman obat dalam sunnah Nabi sangat banyak, diantaranya adalah jinten hitam, biji seladri, lidah buaya, bidara, biji sawi, seladri air dan masih banyak yang lainnya. Beberapa tanaman yang telah digunakan Rasulullah sebagai tanaman obat adalah (Faroqi, 2005):
a. Jinten Hitam Jinten hitam (al-habbat as-auda) merupakan obat untuk banyak penyakit. Nabi Muhammad SAW bersabda Jinten hitam adalah obat bagi segala penyakit kecuali sam, dan sam adalah kematian (HR Bukhari, Muslim, Ibnu Majah dan Ahmad). Jinten hitam juga digunakan sebagai bumbu makanan, sedangkan pada pengobatan digunakan sebagai peluruh kentut, peluruh kencing, panas, demam, batuk, asma, antibakteri dan masih banyak khasiat lain. Kandungan senyawa dalam jinten hitam adalah saponin, minyak esensial dan lemak jenuh yang memiliki fungsi obat yang sangat tinggi. b. Lidah Buaya Lidah buaya dapat dimanfaatkan sebagai penutup (bagian yang terluka/terjangkit). Nabi Muhammad SAW bersabda kepada orang yang mengeluh kondisi matanya ketika melaksanakan ibadah haji, Tutupi dengan lidah buaya (HR As-Suyuthi). Istilah medis lidah buaya digunakan untuk saripati yang keluar dari potongan melingkar daunya yang banyak mengandung air. Beberapa lidah buaya yang berbau harum penuh digunakan untuk mengurapi mayat (mumi) orang mesir. Lidah buaya dapat berfungsi sebagai obat pencahar, obat kuat, peningkat gairah seks, pembunuh cacing parasit, radang mata, tumor dan beberapa penyakit lain. Kandungan senyawa dalam lidah buaya berupa minyak esensial. c. Bidara Beberapa hadist yang disampaikan oleh Imam Jafar Shadiq dalam Syarai al-Islam dan buku lainya mengindasikan bahwa daun sidr adalah dedaunan yang mengandung zat antibakteri dan zat pembersih. Hadist Shahih Bukhari, Sunan
Tirmidzi dan kitab hadist lainya memberikan saran untuk mencampurkan duan bidara (sidr) dengan air hangat yang dipakai untuk memandikan jenazah. Daunya paling cocok untuk desinfektan karena mengandung minyak esensial yang sangat manjur sebagai deodoran dan desinfektan. Pada kenyataanya beliau juga memberikan nasihat serupa mengenai beberapa obat lainya. Hal ini menunjukkan bahwa Rasulullah SAW menegaskan pentingnya penggunaan tanaman obat, sehingga suri teladan Rasulullah ini perlu diteladani oleh umat-umatnya (Faroqi, 2005) Pada saat ini, para ilmuwan banyak yang meneliti berbagai bahan alam untuk dijadikan obat untuk suatu penyakit, salah satu bahan alam yang digunakan tersebut adalah tumbuhan.Tanaman obat banyak digunakan masyarakat menengah kebawah terutama dalam upaya pencegahan dan pengobatan suatu penyakit. Hal ini dikarenakan, banyak orang beranggapan bahwa penggunaan tanaman obat relatif lebih aman dibandingkan obat sintetis (Maheswari, 2002) Menurut pengertian umum obat dapat didefenesikan sebagai bahan yang menyebabkan perubahan dalam fungsi biologis melalui proses kimia (Katzung, 1990). Dalam perkembanganya terdapat obat kimia (sintetis) dan obat alami yang dewasa ini lebih dikenal sebagai obat alternatif. Kita tahu cikal bakal obat kimia (sintetis) berawal dari obat alami. Dari obat alam dilakukan isolasi untuk mengetahui senyawa akttif yang terkandung di dalamnya, kemudian dilakukan sintetis dengan menggunakan bahan kimia untuk menghasilkan senyawa yang sama dalam jumlah yang lebih besar, sehingga lebih
menguntungkan dari segi ekonomi. Akan tetapi obat kimia ini kadang menghasilkan dampak yang negatif bagi kesehatan.(Hayati, 2007) Dalam perkembangan ilmu pengetahuan seperti saat ini, ternyata memang banyak tumbuhan yang terbukti secara ilmiah bisa mengobati berbagai penyakit Dalam kisah nabi Yunus AS, juga dikisahkan bahwasannya Nabi Yunus pada waktu dalam keadaan sakit (setelah ditelan ikan) diperintahkan oleh Allah untuk memulihkan kondisi tubuhnya dengan memakan tumbuhan dari sejenis labu. kisah ini terdapat dalam surat Ash-Shaaffat ayat 145-146 yang berbunyi: , -9!, ') !., =s >: L)
Kemudian kami lemparkan dia ke daerah yang tandus, sedang ia dalam keadaan sakit. Dan kami tumbuhkan untuk dia sebatang pohon dari jenis labu (QS. Ash- Shaaffat [37]: 145-146)
Dari ayat tersebut, manusia bisa mengambil suatu pelajaran bahwasanya di dalam suatu tumbuhan selain mengandung sifat estetika juga terdapat manfaat tertentu. selain itu, antara tumbuhan yang satu dengan yang lainya tidaklah mempunyai manfaat yang sama (Jauhari,1984). Hal ini sebagaimana firman Allah SWT yang terdapat dalam surat Ar-Radu ayat 4 yang berbunyi : _{ _L% ,>. > s _ . s . +`. !, > `. !.-, ?s _-, 2{ | 9 )9 =)-
Dan di bumi ini terdapat bagian-bagian yang berdampingan, dan kebun-kebun anggur, tanaman-tanaman dan pohon korma yang bercabang dan yang tidak bercabang, disirami dengan air yang sama. Kami melebihkan sebagian tanam- tanaman itu atas sebagian yang lain tentang rasanya (dan bentuknya).Sesungguhnya pada yang demikian itu terdapat tanda-tanda bagi kaum yang berfikir (QS. Ar-Radu [13]: 4)
Menurut Shihab (2002) sebagai insan Ulul Albab harus mampu mengejewantahkan semua yang telah diperoleh di bangku pendidikan dalam kehidupan sehari-hari, mau berfikir dan memikirkan bahwa semua yang diciptakan Allah SWT tidak akan sia-sia. Berkaitan dengan hal tersebut muncul kebutuhan melakukan penelitian tentang manfaat suatu tanaman untuk digunakan sebagai alternatif alami pengobatan sebuah penyakit. Dalam Al-Quran telah dijelaskan tumbuhan yang sangat bermanfaat; %! !: > :- s :'- 9 _9 !=. ` .9 !9 !,:.` s ,:.` =2 . | . . )> !.> . | > .9 Dan dialah yang menjadikan kebun-kebun yang berjunjung dan yang tidak berjunjung, pohon korma, tanam-tanaman yang bermacam-macam buahnya, zaitun dan delima yang serupa (bentuk dan warnanya) dan tidak sama (rasanya). makanlah dari buahnya (yang bermacam-macam itu) bila dia berbuah, dan tunaikanlah haknya di hari memetik hasilnya (dengan disedekahkan kepada fakir miskin); dan janganlah kamu berlebih-lebihan. Sesungguhnya Allah tidak menyukai orang yang berlebih-lebihan (QS Al-Anam [6]:141)
Selain itu firman Allah yang menyebutkan tumbuhan atau hewan sebagai obat; . ?. . ,.9 5=`! , 7, 9 _` !L, ',. #=. 9 "!: _!=9 | 79 )9 `3.
"Kemudian makanlah dari tiap-tiap (macam) buah-buahan dan tempuhlah jalan Tuhanmu yang Telah dimudahkan (bagimu). dari perut lebah itu ke luar minuman (madu) yang bermacam-macam warnanya, di dalamnya terdapat obat yang menyembuhkan bagi manusia. Sesungguhnya pada yang demikian itu benar- benar terdapat tanda (kebesaran Tuhan) bagi orang-orang yang memikirkan. (QS. An-Nahl [16]: 69)
Ayat ayat tersebut, membuktikan sesungguhnya pada zaman para nabi pun telah Dikenal obat-obatan alami dengan penggunaan ukuran yang sesuai, hal ini membuktikan bahwa Al-Quran adalah kitab yang didalamnya berisi berita dan informasi yang semuanya terbukti kebenarannya. Al-Quraan dijadikan petunjuk bagi manusia, sebagai sumber yang hakiki agar manusia selamat dunia dan akhirat. Seiring dengan perkembangan zaman, obat-obatan alami ini mengalami kemunduran dan diganti dengan obat-obatan kimia. Akan tetapi seruan untuk back to nature kembali bergaung guna mengurangi dampak negatif yang disebabkan oleh obat-obatan kimia. Supriadi (2001) menyatakan Pemanfaatan tumbuhan dan hewan sebagi alternatif pengobatan alami dewasa ini berkembang cukup pesat. Sekitar 25 obat-obatan yang diresepkan negara industri maju mengandung bahan senyawa aktif hasil ekstraksi tanaman obat. Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Adalah salah satu bahan alam yang sangat banyak sekali manfaatnya dan sebagai bahan alternatif alami sebagai bahan Anti Mikroba. Dengan terungkapnya rahasia-rahasia alam melalui hasil penelitian, selain mempertebal kayakinan akan kebesaran Allah sebagai pencipta-Nya, juga menambah khasanah pengetahuan tentang alam untuk dimanfaatkan bagi kesejahteraan umat manusia.
BAB III METODE PENELITIAN
3.1. Jenis Dan Rancangan Penelitian Dalam penelitian ini metode yang digunakan adalah metode eksperiment. Rancangan penelitian ini yaitu menguji konsentrasi ekstrak daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis, dengan variasi konsentrasi terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa. Untuk mengetahui daya antibakteri. semua kondisi perlakuan dibuat sama, kecuali pemberian konsentrasi ekstrak daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis yang dibuat berbeda. Rancangan penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah rancangan acak lengkap (RAL), dengan 7 perlakuan konsentrasi ekstrak daun binahong konsentrasi (0%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% dan 50%) untuk bakteri Staphylococcus aureus, dan konsentrasi (0%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% dan 100%) untuk bakteri Pseudomonas aeruginosa, dan 3 ulangan pada masing- masing bakteri.
3.2. Waktu Dan Tempat Penelitian. Penelitian ini akan dilaksanakan di Laboratorium Kimia Organik Jurusan Kimia UIN MALIKI Malang dan Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran UNIBRAW Malang. Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Februari- April 2010.
3.3. Variabel Penelitian Variabel-variabel dalam penelitian ini meliputi: 1. Variabel Bebas. Variabel bebas yang digunakan dalam penelitian ini adalah ekstrak daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) steenis dengan berbagai konsentrasi 2. Variabel Terikat. Variabel terikat dalam penelitian ini adalah tingkat kekeruhan yang dihasilkan pada media nutrient broth (KHM) dan jumlah koloni bakteri yang dihasilkan pada media agar (KBM) 3. Variabel Terkendali Variabel terkendali dalam penelitian ini adalah variabel yang diusahakan sama untuk setiap perlakuan meliputi, suhu inkubasi, waktu, pH dan media. 3.4. Obyek Penelitian Obyek penelitian adalah bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa Multiresisten obat biakan murni yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang dan Daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis yang didapat dari Balai Materia Medika Batu Malang
3.5. Alat Dan Bahan Penelitian 3.5.1. Alat Penelitian Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat untuk ekstraksi maserasi dan uji fitokimia: Timbangan analitik, oven, blender, shaker, rotary evaporator vakum, penyaring buchner, gelas ukur 10 ml, erlenmeyer 500 ml, erlenmeyer 1 L, beacker glas 100 ml, tabung reaksi, mikro pipet, pengaduk kaca, kertas saring/whatman, aluminium foil. Alat-alat untuk uji antibakteri: Autoklaf, incubator, lampu bunsen, labu erlenmeyer 250 ml, cawan petri, tabung reaksi, paper disk, gelas ukur, mikro pipet, pinset, ent-kas, jangka sorong, koloni counter, jarum ose, stirer, kertas label, kertas cakram, kapas dan kertas coklat, mikroskop, colony counter
3.5.2. Bahan Penelitian Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis dan biakkan murni bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa, media Nutrien Agar (NA), media cair Nutrient Broth (NB), aquades, tween 80, Etil asetat dan Alkohol 70%.
3.6. Prosedur Penelitian 3.6.1. Preparasi Sampel Daun binahong sebanyak 2 kg dicuci bersih dan ditiriskan, kemudian dikeringkan dengan cara diangin-anginkan dan tidak terkena sinar matahari secara langsung. Pengeringan dilanjutkan dengan cara menjemur daun binahong di
dalam screen house selama 5 hari tidak terkena sinar matahari secara langsung dengan suhu di ruangan 35-37C, kemudian dihaluskan menggunakan blender sampai terbentuk serbuk. Serbuk daun binahong ini disebut dengan sampel.
3.6.2. Ekstraksi Daun Binahong Dengan Metode Maserasi Sebanyak 200 gram serbuk daun binahong yang telah dihaluskan dimasukkan kedalam erlenmeyer dan ditambahkan pelarut etil asetat sebanyak 500 ml, kemudian digoyang selama satu jam untuk mencapai kondisi homogen dalam shaker water bath dengan kecepatan 120 rpm (rotation per minutes) selama 1 jam. Selanjutnya larutan dimaserasi selama 24 jam pada suhu kamar, setelah 24 jam, larutan difiltrasi atau dipisahkan dengan menggunakan penyaring Buchner. Kemudian residu penyaringan di angin-anginkan dan dilakukan remaserasi ulang selama 24 jam, maserasi di ulang sampai 3 kali. Hasil saringan 1-3 dicampur dan dipekatkan dengan Rotary vakum evaporator dengan suhu 50C sampai didapatkan ekstrak pekat. Ekstrak pekat yang diperoleh digunakan untuk identifikasi golongan senyawa aktif dalam daun binahong dan untuk uji antibakteri.
3.6.3. Identifikasi Senyawa Aktif Pada Daun Binahong Uji fitokimia kandungan senyawa aktif secara kualitatif dan kuantitatif. Uji kualitatif dengan uji reagen dari ekstrak etil asetat daun binahong dilarutkan dengan sedikit pelarut. Kemudian dilakukan uji alkaloid, flavonoid dan polifenol. Untuk uji secara kuantitatif menggunakan Spektrofotometer dengan
membandingkan pada senyawa standar. Pengujian dilakukan di Laboratorium Kimia Universitas Muhammadiyah Malang a. Uji Alkaloid Ekstrak pekat sebanyak 0.5 gram ditambahkan 0,5 HCL 2%. Larutan dibagi dalam 2 tabung. Tabung 1 ditambahkan 2-3 tetes reagen Dragendrof, tabung 2 ditambahkan 2-3 tetes reagen Mayer. Terbentuknya endapan jingga pada tabung 1 dan endapan putih pada tabung 2 menunjukkan adanya alkaloid. b. Uji Flavanoid Ekstrak tanaman binahong dimasukkan dalam tabung reaksi kemudian dilarutkan dalam 1-2 ml methanol panas 50%. Setelah itu ditambah logam Mg dan 4-5 tetes HCL pekat. Larutan berwarna merah atau jingga yang terbentuk, menunjukkan adanya flavanoid. c. Uji Senyawa Polifenol Dua ratus mg ekstrak dilarutkan dalam 10 mL air lalu dipanaskan selama 10 menit, larutan didinginkan, setelah dingin larutan disaring. Filtrate ditetesi dengan FeCl3 sebanyak 3 tetes. Lalu diamati perubahan warnanya. Hasil positif polifenol adalah terbentuknya larutan berwarna hijau kehitaman atau biru tua, naka bahan tersebut mengandung polifenol. d. Penentuan Flavonoid (Metode Spektrofotometer) Ambil 0,2 0,5 g sampel ekstrak, lakukan hidrolisis dengan 25% HCl dalam aseton selama 30 menit dengan suhu 100C dengan menggunakan pendingin balik. Setelah itu tambahkan dengan larutan AlCl3 1% dalam metanol gojog dengan vortex untuk melarutkan aglikon hasil hidrolisis. Ukur absorbansi
dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 425 nm. Gunakan quercetin sebagai standar.
Absorbansi standar :0,233 Konsentrasi standar: 5,6 mg/10ml Fp= 20 (0,2 g dilarutkan dalam 4 ml etanol) e. Penentuan Polifenol (Metode Spektrofotometer)
Untuk bahan padat, terlebih dahulu dilarutkan dengan etanol lalu disentrifuge pada kecepatan 6000 rpm selama 10 menit kemudian diambil supernatannya. Untuk bahan cair dapat langsung diproses. Ambil 1 ml larutan supernatan atau cairan sampel. Tambahkan 5 ml aquades dan 2 ml Folin C lalu di homogenkan dan tunggu selama 5 menit. Tambahkan 2 ml Na 2 CO3 jenuh lalu biarkan 1 jam. Amati absorbansi larutan pada panjang gelombang 646 nm. Untuk standar gunakan asam galat.
Konsentrasi standar = 0,5 ppm Absorbansi standar = 0.247 Fp = 25 (0,2 g dilarutkan dalam 5 ml metanol)
3.7. Uji Aktivitas Antibakteri 3.7.1. Sterilisasi Alat Sterilisasi alat dilakukan sebelum semua peralatan digunakan, yaitu dengan cara membungkus semua peralatan dengan menggunakan kertas coklat kemudian dimasukan dalam Autoklaf pada suhu 121 C dengan tekanan 15 Psi (Per Square Inchi) selama 15 menit.Alat yang tidak tahan panas tinngi disterilisasi dengan alkohol 70 %.
3.7.2. Pembuatan Media. 3.7.2.1. Media Nutrient Broth (NB) Pembuatan media cair nutrient broth (NB) dengan cara menyiapkan bahan- bahan yaitu menimbang media NB sebanyak 6,5 gram kemudian dilarutkan dilarutkan dengan aquadest sebanyak 500 mL dalam Erlenmeyer kemudian ditutup dengan alumunium foil. Suspensi dipanaskan hingga mendidih lalu dimasukkan kedalam tabung reaksi, masing-masing 5 ml kemudian ditutup dengan kapas. Proses ini dilakukan secara aseptik,kemudian di sterilkan dalam autoklaf pada suhu 121C dengan tekanan 15 psi selama 15 menit. Kemudian diletakkan dalam posisi miring selama 1x 24 jam pada suhu ruang.
3.7.2.2. Media Nutrient Agar (NA) Pembuatan media dilakukan dengan cara menyiapkan bahan-bahan untuk medium yaitu dengan menimbang media Nutrient Agar (NA) sebanyak 14,5 gram kemudian dilarutkan dengan aquadest sebanyak 500 mL dalam erlenmeyer
kemudian ditutup dengan alumunium foil. Suspensi dipanaskan hingga mendidih lalu dimasukkan kedalam tabung reaksi, masing-masing 10 ml dan 5 ml kemudian ditutup dengan kapas. Proses ini dilakukan secara aseptik, kemudian di sterilkan Dalam utoklaf pada suhu 121C dengan tekanan 15 psi selama 15 menit. Kemudian diletakkan dalam posisi miring selama 1 x 24 jam pada suhu ruang.
3.7.2.3. Peremajaan Biakan Bakteri Biakan murni bakteri diremajakan pada media agar padat dengan cara bakteri diambil 1 ose lalu jarum ose yang mengandung bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa digoreskan secara aseptis pada media nutrient agar pada cawan yaitu dengan mendekatkan cawan pada nyala api saat menggoreskan jarum ose. Kemudian cawan petri ditutup kembali dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 27C dalam inkubator, kemudian diambil 1 koloni dan di tanam pada media NB, kemudian divortek supaya homogen, kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 27C dalam inkubator, ada pertumbuhan bakteri jika media keruh, kemudian dibandingkan dengan media NB tanpa bakteri.
3.7.2.4. Pembuatan Suspensi Bakteri Diambil 1 ml dari hasil peremajaan biakan murni bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa dimasukkan tabung reaksi yang berisi 5 ml NaCl fisiologis 0,9% Kemudian di vortek supaya homogen, kemudian dibandingkan dengan standart Mc Farland dengan kepadatan bakteri sebanyak
10 8 sel/ml. Kemudian diencerkan 100x pada media NaCl fisiologis 0,9% dan media NB. didapatkan suspensi bakteri sebanyak 10 6 bakteri sel/ml, bakteri siap diujikan (Murray, et al., 1999)
3.8. Uji Aktifitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong. Uji kepekaan kuman terhadap antimikroba dilakukan dengan menggunakan metode dilusi tabung (tube dilution test) untuk mengetahui konsentrasi hambat minimum (KHM) dan konsentrasi bunuh minimum (KBM) dengan melakukan penanaman bakteri pada media Nutrient Broht (NB) dan media Nutrient Agar (NA) pada cawan petri dengan pemberian konsentrasi ekstrak daun Binahong sesuai dengan perlakuan perhitungan konsentrasi ekstrak daun Binahong pada (Lampiran 2.2.4).
3.8.1.Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Dan Konsentrasi Bunuh Minimu (KBM)
Uji KHM adalah konsentrasi terkecil obat yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri secara makroskopik (Edberg, 1983). langkah-langkah uji KHM adalah: 1. Menyiapkan larutan ekstrak sebanyak 1 gram kemudian diencerkan dengan aquades 10 ml dan ditambahkan larutan tween 80 sebanyak 100 L.(b/v) 2. Menyiapkan tabung reaksi sebanyak 8 tabung. 6 untuk perlakuan dan 2 kontrol.
3. Tabung reaksi 1 diisi dengan 1 ml bakteri uji dengan konsentrasi 10 6 bakteri/ml tanpa pencampuran dengan ekstrak daun binahong, tabung ini sebagai kontrol bakteri (original inoculum) 4. Memasukkan media NB sebanyak 1 ml kedalam tabung 2 s/d 8, kemudian larutan ekstrak dimasukkan pada tabung 2 dan 3 sebanyak 1 ml, 5. Pada tabung 3 di campur hingga rata, kemudian dipindahkan sebanyak 1 ml kedalam tabung 4 dan diencerkan secara berseri sampai tabung ke-7 6. Pada tabung ke-7 setelah tercampur rata , larutan dibuang sebanyak 1 ml. 7. Pada tabung 3-7 ditambahkan perbenihan bakteri sebanyak 1 ml dari 10 8 bakteri/ml yang diencerkan 100 kali. Sehingga konsentrasinya menjadi 10 6 bakteri/ml. Maka didapat pengenceran dengan konsentrasi 100%,50%, 25%, 12,5%, 6,25% dan 3,125% .proses pengenceran sebagai berikut:
K(+) . 100% 50% 25% 12,5% 6,25% 3,125% K (-) - Pada konsentrasi 100% bakteri yang disuspensikan adalah bakteri dari media yang nutrisinya diperbanyak 2 kali - Kontrol positif Tabung ke-1 berisi larutan NB dan inokulum - Kontrol Negatif Tabung ke-8 yang berisi NB dan ekstrak. K K
2
3
4
5
6
7
8
- Seluruh tabung reaksi tersebut dinkubasi dalam inkubator pada suhu 37C selama18-24 jam. Kemudian dilakukan pengamatan keseluruhan tabung terhadap kejernihan tabung dengan melihat kontrol positif dan negatif. Dari hasil pengamatan kemudian dilakukan pengujian ulang untuk mengetahui KHM dan KBM dengan melakukan penurunan konsentrasi ekstrak (untuk merapatkan dosis) diambil dari konsentrasi hasil uji dilusi tabung yang menampakkan kejernihan. Pada bakteri Staphylococcus aureus diambil konsentrasi 25%-50% (25%,30%,35%,40%,45% dan 50%) Pada bakteri Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 50%-100% (50%,60%,70%,80%,90% dan 100%) dengan cara: 1. Menyiapkan tabung reaksi, kemudian diisi dengan media NB sebanyak 1 ml, ditambahkan ekstrak sesuai dengan konsentrasi 1 ml, kemudian ditambahkan suspensi bakteri sebanyak 1 ml, dan diinkubasi pada suhu 37C selama 18-24 jam. 2. Uji konsentrasi hambat minimum (KHM). adalah konsentrasi antimikroba terendah yang mampu menghambat pertumbuhan bakteri. ditandai dengan adanya kejernihan (tidak ada bakteri yang tumbuh) pada media tabung setelah pemberian ektrak pada masing-masing bakteri. 3. Uji konsentrasi bunuh minimum (KBM) sampel di Streak pada media nutrient agar plate (NAP), sebelum di Streaking atau digores, sampel diencerkan. Pengenceran di lakukan dengan melihat terlebih dahulu kepadatan sel bakteri pada kamar hitung (Haemocytometer) dan diamati dengan menggunakan Mikroskop.
4. Sampel diencerkan sebanyak 10 1 10 2 10 3 sampai 10 5 dengan cara mengambil 1 ml sampel kemudian dicampur kedalam larutan NaCL fisiologis 09% sebanyak 9 ml, kemudian divortek. 5. Hasil pengenceran kemudian di Streaking (penggoresan) pada media NAP dan diinkubasi pada suhu 37C selama 18-24 jam. 6. Diamati ada tidaknya pertumbuhan (koloni) bakteri dan dilakukan penghitungan koloni bakteri dengan menggunakan colony counter
3.8.2. Penghitungan Data Setelah biakan di inkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37C lalu dilakukan pengamatan biakan bakteri dan dihitung dengan menggunakan Colony Counter. Biakan yang dihitung Diambil koloni yang tumbuh sesuai dengan standar plat count yaitu 30-300 koloni per cawan.Adapun cara menghitung koloni adalah sebagai berikut: a. Satu koloni dihitung 1 koloni b. Dua koloni yang bertumpuk dihitung 1 koloni c. Beberapa koloni yang berhubungan dihitung 1 koloni d. Dua koloni yang berhimpitan dan masih dapat dibedakan dihitung 2 koloni. e. Satu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan, dihitung sebagai 1 koloni f. Satu koloni yang membentuk satu deretan atau rantai dan terlihat sebagai satu garis tebal dihitung sebagai 1 koloni
g. Dari hasil penghitungan yang dilakukan, kemudian dihitung jumlah koloni per ml dengan cara sebagai berikut:
Faktor pengenceran= pengenceran jumlah yang diencerkan.
3.9 Analisa data Data yang diperoleh yaitu data konsentrasi ekstrak daun Binahong dan jumlah koloni bakteri. Analisis yang digunakan adalah uji statistik one way ANOVA, Uji Korelasi dan Uji Regresi Linear sederhana. Uji one way ANOVA digunakan untuk mengetahui adanya pengaruh pemberian berbagai konsentrasi ekstrak daun Binahong terhadap pertumbuhan jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa. Jika ada pengaruh, maka dilanjutkan dengan menggunakan uji lanjut LSD (Least Significant Differences). Sedangkan untuk mengetahui hubungan antara peningkatan konsentrasi ekstrak daun Binahong terhadap jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa maka digunakan uji Korelasi. Sedangkan untuk mencari kekuatan hubungan yang ada antara peningkatan konsentrasi ekstrak daun Binahong dengan penurunan jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa digunakn uji Regresi linear. Analisis data dilakukan dengan menggunakan program SPSS for windows versi15.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Ekstraksi Sampel Ekstraksi merupakan proses penarikan komponen aktif menggunakan pelarut tertentu. Komponen aktif yang diambil adalah senyawa aktif dalam daun binahong Anredera cordifolia (Ten) steenis. Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah maserasi. Maserasi adalah metode perendaman, dilakukan dengan cara merendam serbuk sampel dalam pelarut. Pemilihan metode maserasi dikarenakan senyawa polifenol rentan terhadap panas sehingga tidak bagus menggunakan metode soxhlet. Penggunaan ekstraksi dengan metode soxhlet dapat merusak senyawa polifenol dalam daun binahong. Proses ekstraksi dilakukan dengan menggunakan pelarut etil asetat, kerena etil asetat merupakan pelarut semi polar dan dapat melarutkan senyawa semipolar pada dinding sel seperti aglikon flavanoid (Harbone, 1987). Etil asetat juga adalah pelarut polar menengah yang volatil, tidak beracun, dan tidak higroskokopis. Etil asetat dapat menyaring senyawa-senyawa yang dapat memberikan aktivitas antibakteri diantaranya flavonoid pilohidroksi dan fenol yang lain, (Anonymous, 2005) berdasarkan penelitian Setiaji (2009) telah melakukan ekstraksi pada rhizome binahong dengan pelarut etil asetat di dapatkan senyawa alkaloid, saponin, flavonoid dan polifenol. Masersi dilakukan selama 1x24 jam dan di ulang 3 kali dengan pengadukan menggunakan Shaker water bath pada kecepatan 120 rpm (rotation
per minutes). Pengadukan ini bertujuan untuk mempercepat kontak antara sampel dengan pelarut. Larutan kemudian di saring menggunakan penyaring buchner dan diperoleh filtrat dengan warna hijau tua kehitaman. Filtrat hasil penyaringan dipekatkan dengan menggunakan rotary vakum evaporator. Tujuanya adalah untuk memekatkan ekstrak dan memisahkan antara pelarut dengan senyawa aktif dalam daun binahong. Hasil dari pemekatan adalah ekstrak pekat yang berbau seperti jamu, dengan warna hijau kehitaman sebagaimana pada (lampiran 9)
4.2 Identifikasi Golongan Senyawa Aktif. Uji fitokimia adalah uji kualitatif kandungan senyawa aktif dalam suatu sampel. Analisis kandungan kimia daun binahong dilakukan Laboratorium Kimia Universitas Muhammadiyah Malang, dengan melihat ada tidaknya reaksi pengendapan dan perubahan warna yang terjadi pada uji tabung. Uji fitokimia dengan metode tabung serta pendeteksian dengan menggunakan Spectrofotometer, dari hasil uji didapatkan hasil bahwa ekstrak etil asetat daun binahong mengandung senyawa Flavanoid, Alkaloid dan Polifenol. Tabel 4.1. Hasil Uji Fitokimia Secara Kualitatif Pereaksi Golongan senyawa Mayer Dragendrof Mg HCL pekat feCl 3 1%. Alkaloid + + flavonoid + + Polifenol +
Keterangan: (+) Menunjukkan Positif
Hasil uji kualitatif alkaloid dilakukan dengan menggunakan reagen mayer memberikan hasil positif. Ekstrak yang mengandung alkaloid menurut Harbone (1995) akan membentuk endapan jingga dengan reagen dragendroff membentuk endapan putih dengan reagen mayer. Endapan terbentuk karena terjadi pembentukan kompleks antara ion logam dari reagen dengan senyawa alkaloid. Hasil uji kualitatif golongan senyawa flavanoid dilakukan dengan menggunakan reagen atau pereaksi. Terjadinya perubahan warna berarti ekstrak positif mengandung senyawa yang termasuk dalam golongan flavanoid. Reduksi dengan Mg dan HCL pekat ini menghasilkan senyawa kompleks yang berwarna merah atau jingga pada flavonol, flavanon, flavanonol dan xanton (Robinson, 1985) sedangkan uji fitokimia positif menunjukkan adanya senyawa polifenol ditunjukkan dengan terbentuknya larutan berwarna hijau kehitaman ketika ditambahkan FeCl 3 1 %. Tabel 4.2 Uji Fitokimia Ekstrak Etil Asetat Daun Binahong secara Kuantitatif a. Uji Flavanoid Sampel Ul m smpl abs Flavonoid (ppm) Flavonoid (%) Ekstrak Daun binahong 1 0,213 0,426 96137,33906 9,614 2 0,211 0,422 96137,33906 9,614
b. Alkaloid Sampel Ul m smpl abs Alkaloid (ppm) Alkaloid (%) Ekstrak Daun Binahong 1 0,203 0,362 31283,000 3,128 2 0,205 0,357 30501,614 3,050
c. Uji Polifenol
Sampel Ul m smpl abs Total Polifenolat (ppm) Total Polifenolat (%) Ekstrak Daun Binahong 1 0,213 0,463 110005,512 11,001 2 0,207 0,466 113927,517 11,393
4.3. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong 4.3.1 Uji Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa
Hasil uji pendahuluan penentuan konsentrasi hambat minimum (KHM) ekstrak daun binahong metode dilusi tabung secara serial dengan perlakuan konsentrasi yang telah ditambahkan suspensi bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa dan ekstrak daun binahong setelah diinkubasikan pada suhu 37C selama 18-24 jam dan dibandingkan dengan kontrol bakteri dan kontrol media dengan melihat kekeruhan sampel uji, setelah dilakukan pengamatan secara kualitatif didapatkan hasil (lihat lampiran 12A) sebagai berikut: Tabel. 4.3. Tingkat kekeruhan yang dihasilkan pada media Nutrient Agar oleh koloni bakteri Staphylococcus aureus dalam konsentrasi ekstrak daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis)
Konsentrasi Tingkat Kekeruhan Media Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus 100% Bening/ Tidak ada bakteri yang tumbuh 50% Bening/ Tidak ada bakteri yang tumbuh 25% Bening/ Tidak ada bakteri yang tumbuh 12.5% Keruh/ Ada bakteri yang tumbuh 6,25% Keruh/ Ada bakteri yang tumbuh 3,125% Keruh/ Ada bakteri yang tumbuh
Tabel 4.4 Tingkat kekeruhan yang dihasilkan pada media Nutrient Agar oleh koloni bakteri Pseudomonas aureginosa dalam konsentrasi ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis)
Konsentrasi Tingkat Kekeruhan Media Pertumbuhan Bakteri Pseudomonas aureginosa 100% Bening/ Tidak ada bakteri yang tumbuh 50% Bening/ Tidak ada bakteri yang tumbuh 25% Agak keruh/ Ada bakteri yang tumbuh 12.5% Keruh/ Ada bakteri yang tumbuh 6,25% Keruh/ Ada bakteri yang tumbuh 3,125% Keruh/ Ada bakteri yang tumbuh
Hasil pengamatan ini sulit untuk dievaluasi, karena hasil dari pengenceran secara dilusi tabung pada konsentrasi 100% sampai dengan 3,125%, menunjukkan tingkat kekeruhan yang sama pada semua tabung, hal ini dikarenakan warna dasar dari ekstrak daun binahong adalah hijau kehitaman. Maka Untuk mengetahui pengaruh pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap bakteri Staphylocoocus aureus dan Pseudomonas aeruginosa dilakukan Streaking (penggoresan) pada media Nutrient Agar dengan menanamkan I Ose dari hasil uji dilusi tabung. Setelah dilakukan Streaking didapatkan konsentrasi hambat minimum (KHM) ekstrak daun binahong Anredera cordifolia (Ten) Steenis terhadap bakteri Staphylococcus aureus yaitu pada konsentrasi 25%(250mg/ml), sedangkan konsentrasi hambat minimum (KHM) pada bakteri Pseudomonas aureginosa pada konsentrasi 50% (500mg/ml) yang ditandai dengan tidak adanya kekeruhan pada cawan. Menurut Taslihan (1986) bahwa pada medium yang keruh berarti bakteri masih dapat tumbuh, berarti antibiotik tidak efektif, sedangkan bila medium jernih berarti antibiotik efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri.
Dari hasil uji pendahuluan kemudian dilakukan uji lanjut untuk mengetahui konsentrasi bunuh minimum (KBM). Dengan menggunakan Konsentrasi ekstrak daun binahong dari hasil uji KHM yaitu pada konsentrasi 25% (250 mg/ml) sampai dengan 50% (500mg/ml) untuk bakteri Staphylococcus aureus. Sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa dimulai dari konsentrasi 50%(500mg/ml) sampai dengan konsentrasi 100% (1000mg/ml). Untuk pengenceran konsentrasi ekstrak daun binahong (lihat lampiran 2.2.4). Shulman, et al.,(1994) menjelaskan konsentrasi bunuh minimum (KBM) ditentukan jika pada plate didapatkan penurunan jumlah koloni bakteri sampai 99,9% dari bakteri asal sub-biakan Pada uji konsentrasi bunuh minimum (KBM) perlakuan konsentrasi ekstrak diberi suspensi bakteri sebanyak 1 ml (10 6 ) dan diinkubasi pada suhu 37C selama 18-24 jam. Kemudian diencerkan, Pengenceran di lakukan dengan melihat terlebih dahulu kepadatan sel bakteri pada kamar hitung (Haemocytometer) dan diamati dengan menggunakan Mikroskop. Sampel diencerkan sebanyak 10 1 10 2 10 3 sampai 10 5 dengan cara mengambil 1 ml sampel kemudian dicampur kedalam larutan NaCL fisiologis 09% sebanyak 9 ml, kemudian divortek. Hasil pengenceran di Streaking (gores) pada media NAP dan diinkubasi pada suhu 37C selama 18-24 jam, kemudian dihitung jumlah koloniya dengan menggunakan colony counter.
4.3.2.Uji Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
Hasil pengamatan pengaruh konsentrasi ekstrak daun Binahong terhadap pertumbuhan koloni bakteri Staphylococcus aureus pada media Nutrien Agar plate (NAP) pada tiap perlakuan konsentrasi ekstrak daun binahong (lihat lampiran 12B). Sedangkan pengaruh konsentrasi ekstrak daun Binahong terhadap jumlah koloni bakteri Staphylococcus auereus per ml (10 6 ) ditunjukkan pada tabel 4.5. sebagai berikut: Tabel 4.5 Pengaruh konsentrasi ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis terhadap jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) Replikasi/Ulangan Rerata Cfu/ml Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong I II III Kontrol Positif(0%) 301.10 5 311.10 5 305.10 5 305.7717 3,0.10 7
25% 300.10 3 303.10 3 294.10 3 299.103 3,0.10 5
30% 297.10 2 285.10 2 290.10 2 290.7687 2,9.10 4
35% 186.10 1 179.10 1 155.10 1 173.4343 1,7.10 3
40% 144 129 138 137 1,4.10 2
45% 37 51 43 43.66667 4,4.10 1
50% 0 0 0 0 0 Kontrol Negatif 0 0 0 0 0
Dari tabel 4.5 dapat dilihat bahwa rata-rata jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) yang dihasilkan pada media NAP berbeda pada tiap perlakuan konsentrasi. Pada konsentrasi 0% rata-rata jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) adalah sebesar 305.7717. jumlah rata- rata koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) terus mengalami penurunan. Mulai dari konsentrasi 25%, 30%, 35%, 40%, 45% sampai pada konsentrasi 50%. Pada konsentrasi 50% tidak didapatkan pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus per ml (10 6 ), ditunjukkan pada media NAP tidak ada bakteri yang tumbuh.. Pada penelitian ini KBM ekstrak daun Binahong terhadap bakteri Staphylococcus aureus ditentukan pada konsentrasi 50%. Shulman, et al., (1994) menyatakan bahwa konsentrasi bunuh minimum (KBM) ditentukan jika pada plate tidak menunjukkan pertumbuhan koloni bakteri atau ada penurunan 99,9% dari inokulum asal pada sub-biakan.
Gambar 4.1 Grafik rerata jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus Per ml (10 6 ) dengan perlakuan konsentrasi ekstrak daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis)
Gambar 4.1 menunjukkan variasi konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap jumlah koloni bakteri yang terbunuh memberikan pengaruh yang berbeda. Pada konsentrasi 30%(300 mg/ml) sampai dengan konsentrasi 50% (500mg/ml) terjadi penurunan jumlah koloni, dengan rata-rata 29066,670 CFU/ml sampai dengan 0,000 CFU/ml. Sedangkan pada konsentrasi 25% (250 mg/ml) terjadi perbedaan dengan konsentrasi 30% sampai dengan konsentrasi
50%, jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada konsentrasi 25% rata-rata 299.103 CFU/ml, mendekati jumlah koloni pada kontrol (0%). Untuk mengetahui adanya pengaruh perbedaan konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap penurunan jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus maka digunakan uji satatistik parametric one way ANOVA, tetapi sebelum dilakukan analisa data dengan uji one way ANOVA, maka data terlebih dahulu harus di lakukan uji kenormalan data dan homogenitas data. Dari hasil uji normalitas menggunakan uji Kolmogorov-Sminornov (lampiran7A) didapatkan nilai signifikansi 0,901>p(0,05) yang artinya data berdistribusi normal, setelah itu dilakukan uji homogenitas menggunakan uji Lavene (lampiran 7A) didapatkan nilai signifikansi (0,076>p(0,05) yang artinya bahwa varian data homogen, dengan hasil tersebut maka dapat dilakukan pengujian lebih lanjut dengan menggunakan uji one way ANOVA, Kerelasi dan Regresi. Berdasarkan uji one way ANOVA (lampiran 7A) diketahui bahwa pada variabel terikat jumlah koloni per ml (10 6 ) nilai sig (0,000)<p(0,05) yang berarti terdapat perbedaan yang bermakna atau ada pengaruh perlakuan konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per (10 6 ) yang dihasilkan pada media agar plate (NAP) Setelah mengetahui bahwa ada perbedaan yang bermakna pada jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) yang dihasilkan pada media nutrient agar plate (NAP) akibat pengaruh perlakuan dari ke-7 variasi konsentrasi ekstrak daun binahong yang diberikan, kemudian untuk mengetahui konsentrasi ekstrak daun binahong mana saja yang berbeda dan tidak berbeda pengaruhnya
terhadap pertumbuhan koloni bakteri Staphylococcus aureus tersebut maka dilakukan uji LSD/BNT (Lampiran7A) dari hasil uji LSD/BNT didapatkan hasil bahwa ekstrak daun binahong dengan perlakuan kontrol konsentrasi (0%) berbeda nyata dengan perlakuan konsentrasi 30%, 35%, 40%, 45% dan 50%. Sedangkan pada konsentrasi 25% berbeda nyata dengan konsentrasi perlakuan yang lain tetapi tidak berbeda dengan konsentrasi kontrol (0%) Untuk mengetahui adanya arah, kuat, dan pola hubungan antara pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong dengan jumlah koloni bakteri per ml (10 6 ), maka dilakukan uji Korelasi-Regresi. Dari hasil uji Korelasi-Regresi didaptakan (r = -0,860) yang artinya terdapat hubungan/korelasi negatif yang kuat antara ke-7 konsentrasi ekstrak daun binahong dengan pertumbuhan koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ). Artinya semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun binahong maka jumlah koloni bakteri akan semakin rendah. Besarnya pengaruh konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) didapat nilai koefisien determinasi (R 2 ) sebesar 0,740 artinya kontribusi pemberian ekstrak daun binahong dalam menurunkan jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus adalah sebesar 74% sedangkan 26% disebabkan oleh faktor-faktor lain yang dapat mempengaruhi hasil penelitian, kemungkinan dapat berasal dari jumlah mikroorganisme, suhu, keasaman (pH) dan bahan-bahan organik lain.
4.3.3.Hasil Uji Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa
Hasil pengamatan pengaruh konsentrasi ekstrak daun Binahong terhadap pertumbuhan koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa pada media Nutrien Agar plate (NAP) pada tiap perlakuan konsentrasi ekstrak daun binahong (lihat lampiran 12C). Sedangkan pengaruh konsentrasi ekstrak daun Binahong terhadap jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) ditunjukkan pada tabel 4.6. sebagai berikut: Tabel 4.6.Pengaruh konsentrasi ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis terhadap jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) REPLIKASI/ ULANGAN RERATA CFU/ml Konsentrasi Ekstrak Daun Binahong I II III Kontrol Positif(0%) 308.10 5 333.10 5 301.10 5 314.10 5 3,1.10 7
50% 295.10 3 273.10 3 257.10 3 275.10 3 2,8.10 5
60% 253.10 2 257.10 2 283.10 2 264.435 2,6.10 4
70% 162.10 1 169.10 1 176.10 1 169.10 1 1,7.10 3
80% 121.10 1 118.10 1 135.10 1 124.7677 1,2.10 3
90% 56 61 77 64.66667 6,5.10 1
100% 0 0 0 0 0 Kontrol Negatif 0 0 0 0 0 Dari tabel 4.6 dapat dilihat bahwa rata-rata jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) yang dihasilkan pada media NAP berbeda pada tiap perlakuan konsentrasi. Pada konsentrasi 0% rata-rata jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) adalah sebesar 314.10 5 CFU/ml. jumlah rata-rata koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) terus mengalami penurunan. Mulai dari konsentrasi 50%, 60%, 70%, 80%, 90% sampai dengan konsentrasi 100%. Pada konsentrasi 100% tidak didapatkan pertumbuhan koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) pada media NAP. ditunjukkan
dengan jumlah bakteri yang tumbuh adalah (0). Pada penelitian ini KBM ekstrak daun Binahong terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa ditentukan pada konsentrasi 100%, dimana pada konsentrasi ini jumlah koloni bakteri sebanyak 0 (tidak ada bakteri yang tumbuh). KBM ditentukan jika pada media nutrient agar plate tidak menunjukkan pertumbuhan koloni bakteri atau ada penurunan 99,9% dari inokulum asal pada sub-biakan (Shulman et al, 1994)
Gambar 4.2 Grafik rerata jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa Per ml (10 6 ) dengan perlakuan konsentrasi ekstrak daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) Gambar 4.2 menunjukkan variasi konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap jumlah koloni bakteri yang terbunuh memberikan pengaruh yang berbeda . Pada konsentrasi 60%(600 mg/ml) sampai dengan konsentrasi 100% (1000mg/ml) terjadi penurunan jumlah koloni, dengan rata-rata 264.435 CFU/ml sampai dengan 0 CFU/ml. Sedangkan pada konsentrasi 50% (500mg/ml) rata-rata jumlah koloninya adalah 275.10 3 CFU/ml. mendekati jumlah koloni pada kontrol (0%).
Untuk mengetahui adanya pengaruh perbedaan konsentrasi ekstrak daun Binahong terhadap penurunan jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa maka digunakan uji satatistik parametric one way ANOVA, tetapi sebelum dilakukan analisa data dengan uji one way ANOVA, maka data terlebih dahulu harus di lakukan uji kenormalan data dan homogenitas data. Dari hasil uji normalitas menggunakan uji Kolmogorov-Sminornov (lampiran7B) didapatkan nilai signifikansi 0,904>p(0,05) yang artinya data berdistribusi normal, setelah itu dilakukan uji homogenitas menggunakan uji Lavene (lampiran7B) didapatkan nilai sig (0,096>p(0,05) yang artinya bahwa varian data homogen, dengan hasil tersebut maka data jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa tersebut dapat dilakukan pengujian lebih lanjut dengan menggunakan uji one way ANOVA, Korelasi dan Regresi. Berdasarkan uji one way ANOVA (lampiran 7B) diketahui bahwa pada variabel terikat jumlah koloni per ml (10 6 ) nilai signifikansi (0,000)<p(0,05) dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan yang bermakna pada jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per (10 6 ) yang dihasilkan pada media agar plate (NAP) akibat pengaruh perlakuan dari beberapa konsentrasi ekstrak daun Binahong yang diberikan. Setelah mengetahui bahwa ada perbedaan yang bermakna pada jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) yang dihasilkan pada media Nutrient Agar Plate (NAP) akibat pengaruh perlakuan dari ke-7 variasi konsentrasi ekstrak daun Binahong yang diberikan, kemudian untuk mengetahui konsentrasi ekstrak daun Binahong mana saja yang berbeda dan tidak berbeda
pengaruhnya terhadap pertumbuhan koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa tersebut maka dilakukan uji LSD/BNT (Lampiran 7) dari hasil uji LSD/BNT, didapatkan bahwa ekstrak daun Binahong dengan perlakuan kontrol (0%) berbeda nyata dengan perlakuan konsentrasi 60%, 70%, 80%, 90% dan 100% Sedangkan pada konsentrasi 50% berbeda nyata dengan konsentrasi perlakuan yang lain tetapi tidak berbeda nyata dengan konsentrasi kontrol (0%) Untuk mengetahui adanya arah, kuat, dan pola hubungan antara pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong dengan jumlah koloni bakteri per ml (10 6 ), maka dilakukan uji Korelasi-Regresi. Dari hasil uji Korelasi-Regresi didaptakan (r = -0,860) yang artinya terdapat hubungan/korelasi negatif yang kuat antara ke-7 konsentrasi ekstrak daun binahong dengan pertumbuhan koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ). artinya semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun binahong maka jumlah koloni bakteri akan semakin rendah. Besarnya pengaruh konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) didapat nilai koefisien determinasi (R 2 ) sebesar 0,739 artinya kontribusi pemberian ekstrak daun Binahong dalam menurunkan jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa adalah sebesar 73% sedangkan 27% disebabkan oleh faktor-faktor lain yang dapat mempengaruhi hasil penelitian, kemungkinan dapat berasal dari jumlah mikroorganisme, suhu, keasaman (pH) dan bahan-bahan organik lain.
4.4 Daya Antibakteri Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordiflia (Ten) Steenis Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa
Berdasarkan hasil penelitian dan pengolahan data diketahui bahwa ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) sangat berpengaruh sebagai zat antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa hal ini dapat dilihat dengan adanya tingkat kekeruhan (KHM) dan jumlah koloni (KBM) sehubungan dengan adanya peningkatan konsentrasi ekstrak daun binahong. KHM pada bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 25% sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 50%. Untuk KBM pada bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 50% sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 100% yang ditunjukkan dengan adanya penurunan pertumbuhan koloni bakteri 99,9% dari inokulum asal sub biakan. Hasil analisa data menggunakan oneway ANOVA pada bakteri Staphylococcus aureus didapatkan hasil yang signifikan sebesar 0,000 (p<0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat pengaruh perlakuan konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ). Sedangkan dari hasil uji dengan LSD/BNT dapat diketahui bahwa pada perbandingan perlakuan ekstrak antara konsentrasi 0% (kontrol) dengan semua konsentrasi lain didapatkan nilai signifikansi <0,05 yang berarti terdapat perbedaan yang signifikan. Berdasarkan pengamatan dan analisa data, maka dapat disimpulkan semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun binahong maka jumlah
koloni bakteri Staphylococcus aureus makin berkurang. Hasil uji Korelasi- Regresi diperoleh r sebesar -0,860 yang ditandai dengan semakin sedikitnya jumlah koloni bakteri Staphylococcus aures pada media NAP, artinya terdapat hubungan/korelasi negatif yang kuat antara ke-7 konsentrasi ekstrak daun binahong dengan pertumbuhan koloni bakter per ml (10 6 ). Hasil penelitian menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) yang diberikan, maka semakin besar kemampuan menghambat dan membunuh bakteri Staphylococcus aureus. Hasil uji Korelasi-Regresi juga didapatkan (R 2 ) sebesar 0,740 artinya kontribusi pemberian ekstrak daun binahong dalam menurunkan jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus adalah sebesar 74% sedangkan 26% disebabkan oleh faktor-faktor lain yang dapat mempengaruhi hasil penelitian, kemungkinan dapat berasal dari jumlah mikroorganisme, suhu, keasaman (pH) dan bahan-bahan organik lain (Pelczar,1998) Sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa Hasil analisa data menggunakan oneway ANOVA pada bakteri didapatkan hasil yang signifikan sebesar 0,000 (p<0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat pengaruh perlakuan konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ). Sedangkan hasil dari uji LSD/BNT dapat diketahui bahwa pada perbandingan perlakuan ekstrak antara konsentrasi 0% (kontrol) dengan semua konsentrasi lain didapatkan nilai signifikansi <0,05 yang berarti terdapat perbedaan yang signifikan. Berdasarkan pengamatan dan analisa data, maka dapat disimpulkan semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun binahong maka
jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa semakin berkurang. Hasil uji Korelasi- Regresi diperoleh r sebesar (r = -0,860) yang ditandai dengan semakin sedikitnya jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa pada media NAP, artinya terdapat hubungan/korelasi negatif yang kuat antara ke-7 konsentrasi ekstrak daun binahong dengan pertumbuhan koloni bakter per ml (10 6 ). Hasil penelitian menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) yang diberikan, maka semakin besar kemampuan menghambat dan membunuh bakteri Pseudomonas aeruginosa Hasil uji Korelasi-Regresi juga didapatkan (R 2 ) sebesar 0,739 artinya kontribusi pemberian ekstrak daun binahong dalam menurunkan jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa adalah sebesar 73% sedangkan 27% disebabkan oleh faktor-faktor lain yang dapat mempengaruhi hasil penelitian, kemungkinan dapat berasal dari jumlah mikroorganisme, suhu, keasaman (pH) dan bahan-bahan organik lain (Pelczar,1998) Dari hasil pengamatan dan analisa data pada kedua bakteri menunjukkan bahwa ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) mampu menghambat dan membunuh kedua bakteri ditunjukkan dengan adanya kekeruhan dan penurunan jumlah koloni bakteri per ml (10 6 ) setelah pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong. Hal ini diduga karena adanya senyawa kimia yang terkandung dalam ekstrak daun binahong yaitu flavanoid, alkaloid, dan senyawa polifenol. Berdasarkan hasil uji fitokimia yang dilakukan dengan metode uji tabung dengan pemberian reagen dan uji kuantitatif dengan spectrophotometer ditemukan senyawa flavanoid, alkaloid dan flavanoid. Rachmawati (2007) Telah
melakukan skrining fitokimia daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten ) Steenis didapatkan kandungan kimia berupa Saponin Triterpenoid, Flavanoid Dan Minyak Atsiri. Setiaji (2009) juga telah melakukan ekstraksi pada rhizome binahong dengan pelarut Etil asetat, petroleum eter, dan etanol 70% di dapatkan senyawa alkaloid, saponin flavonoid dan polifenol. Dzen dkk, (2003) menjelaskan bahwa mekanisme ketiga bahan aktif ini adalah bekerja pada bakteri dengan cara merusak membran sitoplasma. Membran sitoplasma bakteri sendiri berfungsi mengatur masuknya bahan-bahan makanan atau nutrisi, apabila membran sitoplasma rusak maka metabolit penting dalam bakteri akan keluar dan bahan makanan untuk menghasilkan energi tidak dapat masuk sehingga terjadi ketidakmampuan sel bakteri untuk tumbuh dan pada akhirnya terjadi kematian. Challem,(1995) juga menjelaskan bahwa senyawa flavanoid bekerja dengan cara merusak membran sitoplasma kuman dan mencegah pembelahan sel kuman. Setiaji (2009) Menjelaskan bahwa ekstrak Etil asetat rhizoma binahong memiliki aktivitas membunuh terhadap bakteri Staphylococus aureus. aktivitas antibakteri diduga karena adanya senyawa fenol dalam rhizoma. Fenol merupakan suatu alkohol yang bersifat asam sehingga disebut juga asam karbolat. Pertumbuhan kedua bakteri dapat terganggu disebabkan adanya suatu senyawa fenol yang terkandung dalam ekstrak daun binahong. Kondisi asam oleh senyawa fenol dapat berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri. Senyawa fenol bekerja dengan cara mendenaturasi protein sel dan merusak dinding sel bakteri tanpa dapat diperbaiki lagi sehingga pertumbuhan bakteri terhambat. Senyawa fenol
juga dapat mempresipitasikan protein secara aktif dan merusak membran sel melalui mekanisme penurunan tegangan permukaan membran sel (Pelzhar dan chan,1998) adanya senyawa alkaloid dalam ekstrak daun binahong ini diduga yang menyebabkan memiliki kemampuan sebagai antibakteri. Mekanisme yang diduga adalah dengan cara mengganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut.(Robinson, 1991) Berdarsarkan uji fitokimia ditemukan senyawa polifenol, yang salah satunya adalah tanin. Tanin memiliki aktivitas antibakteri, secara garis besar mekanisme toksisitas tanin adalah dapat merusak membran sel bakteri, senyawa astringent tanin dapat menginduksi pembentukan suatu ikatan kompleks terhadap enzim atau substrat mikroba dan pembentukan suatu iktan kompleks tanin terhadap ion logam yang dapat menambah daya toksisitas tanin itu sendiri (Akiyama, et al., 2001) sementara Ajizah, (2004) menjelaskan, aktivitas antibakteri senyawa tanin adalah dengan cara mengkerutkan dinding sel atau membran sel, sehingga mengganggu permeabilitas sel itu sendiri. Akibat terganggunya permeabilitas, sel tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhanya terhambat atau bahkan mati. Masduki (1996) menyatakan bahwa tanin juga mempunyai daya antibakteri dengan cara mempresipitasi proten, karena diduga tanin mempunyai efek yang sama dengan senyawa fenolik. Efek antibakteri tanin antara lain: reaksi dengan membran sel, inaktivasi enzim, dan destruksi atau inaktivasi fungsi genetik.
Dari hasil penelitian ini menunjukkan bahwa konsentrasi hambat minimum (KHM) pada bakteri Staphylococcus aureus lebih kecil dari pada bakteri Pseudomonas aureginosa yaitu pada kadar 25% (250mg/ml) dan 50%(500mg/ml). Begitu juga pada konsentrasi bunuh minimum (KBM) konsentrasi yang dibutuhkan untuk membunuh bakteri Staphylococcus aureus yaitu pada kadar 50%(500mg/ml) lebih rendah dari pada pada bakteri Pseudomonas aureginosa yaitu pada kadar 100%(1000mg/ml) perbedaan daya hambat dan daya bunuh ekstrak daun binahong terhadap pertumbuhan koloni bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aureginosa diduga disebabkan karena perbedaan komponen dinding selnya. Bakteri Pseudomonas aureginosa merupakan bakteri gram negatif yang mempunyai struktur dinding sel yang lebih kompleks dan mengandung komponen lipid yang lebih banyak (11-12%) dibandingkan dengan struktur dinding sel pada bakteri Staphylococcus aureus (Gram-positif) dengan demikian, dinding sel bakteri Staphylococcus aureus lebih mudah dirusak oleh senyawa bioaktif yang terdapat pada ekstrak daun Binahong. Penghambatan sintesis dinding sel akan menyebabkan dinding sel bakteri diperlemah dan menjadi lisis, lisisnya sel tersebut dikarenakan tidak berfungsinya lagi dinding sel yang mempertahankan bentuk dan melindungi bakteri yang memiliki tekanan osmotik dalam sel yang tinggi. Selain itu, bakteri Staphylococcus aureus memiliki tekanan osmotik dalam sel 3-5 kali lebih besar daripada bakteri gram negtif, sehingga lebih mudah mengalami lisis (Jawetz, et al., 2005) bakteri Pseudomonas aureginosa merupakan bakteri gram negatif tahan hidup dalam media yang kekurangan zat gizi (Rahayu, 2009).
Selain itu bakteri Pseudomonas aureginosa yang dipakai dalam penelitian ini adalah bakteri Isolate Pseudomonas aeruginosa Multiresisten. Dalam hal ini, resistensi multiobat didefinisikan sebagai resistensi terhadap dua atau lebih jenis antimikroba yang berbeda. Resistensi sel mikroba adalah suatu sifat tidak terganggunya sel mikroba oleh antimikroba (Setiabudy dan Gan, 1995) Bakteri multiresisten obat lebih kuat daripada bakteri yang lain, bakteri multiresten obat memerlukan produk baru dan memilki potensi antibiotik yang tinggi (Nur Iman, 2009)
4.5. Lingkungan Hidup Bakteri Dari hasil pengukuran menggunakan kertas lakmus, pH media padat cairan adalah 7,4. Hal ini berarti pH masih dalam kisaran yang baik untuk pertumbuhan bakteri. Dwijoseputro (1990), Pada umumnya bakteri dapat tumbuh pada PH media 5,00- 8,00 dengan ph optimum sekitar 7,00. untuk bakteri pathogen akan tumbuh baik pada ph netral (Ph7,00). Apabila bakteri itu berada pada kondisi yang asam, maka pertumbuhanya akan terhambat. Bakteri juga peka terhadap pH basa tetapi efek secara umum tidak terlalu merusak dibandingkan dengan PH asam.
4.6. Pemanfaatan Daun Binahong Sebagai Antibakteri Dalam Persepektif Islam
Allah menumbuhkan tumbuh-tumbuhan yang indah, hijau dan banyak memberi manfaat serta kenikmatan kepada manusia. Banyak ayat al-Quran yang mengajak manusia untuk berfikir dan menyelidiki tumbuh-tumbuhan agar
mendapat manfaat yang lebih banyak. Allah berfirman dalam surat An-Nahl ayat 11: , ,, , ` `` ` / // / 3 33 3 9 99 9 , ,, , _ __ _ 9 99 9 . .. . 9 99 9 9 99 9 s ss s { {{ { 2 22 2 , ,, , : :: :9 99 9 | || | 9 99 9 ) )) ) 9 99 9 ` `` ` 6 66 6 . .. .
dia menumbuhkan bagi kamu dengan air hujan itu tanaman-tanaman; zaitun, korma, anggur dan segala macam-macam buah-buahan. Sesungguhnya pada yang demikian itu benar-benar ada tanda (kekuasaan Allah) bagi orang-orang yang memikirkan(Q.S. An-Nahl: Ayat 11)
Ayat ini menyebutkan beberapa tanaman yang ditumbuhkan Allah dari yang paling cepat layu, yang paling panjang usianya dan yang paling banyak manfaatnya seperti zaitun, kurma dan anggur (Shihab, 2002). Kaum yang memikirkan akan tanda-tanda kekuasaan-Nya tentu akan dapat mengambil pelajaran dan manfaat terhadap segala ciptaan-Nya tentu akan dapat mengambil pelajaran dan manfaat terhadap segala ciptaan-Nya. Sebagaimana memanfaatkan tanaman Binahong sebagai tanaman obat. Manusia sebagai makhluk yang berakal mempunyai tugas, kewajiban dan tanggung jawab terhadap alam sekitarnya. Hal ini dijelaskan dalam firman Allah surat Az-zumar ayat 9: .... % .`. %! >- %! =- !| `.. 9` ,9{ ....Katakanlah: "Adakah sama orang-orang yang mengetahui dengan orang- orang yang tidak mengetahui?" Sesungguhnya orang yang berakallah yang dapat menerima pelajaran. (QS. Az-Zumar [39]: 9)
Al-Quran memerintahkan kepada manusia untuk memanfaatkan kekayaan alam dengan cara tidak boleh melakukan pemborosan dan dilarang merusak sumber alam dan lingkungan hidup. Kekayaan alam ini sebagai sumber kehidupan bagi kesejahteraan manusia. Penjelasan lain dalam Al-Quran surat Asy-Syuara ayat 7: 9 <| _{ /. !., ! . _ . Dan apakah mereka tidak memperhatikan bumi, berapakah banyaknya kami tumbuhkan di bumi itu pelbagai macam tumbuh-tumbuhan yang baik?. (QS Asy-Syuara [26]: 7)
Rasulullah SAW telah memberikan petunjuk tentang tata cara mengobati diri beliau sendiri, keluarga dan para sahabat yaitu dengan menggunakan jenis obat yang tidak ada campuran bahan kimia. Pengobatan nabi menggunakan tiga jenis obat yaitu obat alamiah, obat ilahiyah dan kombinasi obat alamiah dan ilahiyah. Pengobatanya berdasarkan wahyu Allah tentang apa yang bermanfaat dan yang tidak berbahaya, misalnya melakukan pengobatan dengan tumbuh- tumbuhan. Pemanfaatan tanaman sebagai obat merupakan salah satu sarana untuk mengambil pelajaran dan memikirkan tentang kekuasaan Allah dan meneladani cara pengobatan Nabi (Al-Jauziah, 2008) Hasil penelitian uji aktivitas antibakteri ekstrak daun binahong (Anredera cordifolia (ten) Steenis) menunjukkan bahwa ekstrak daun binahong mempunyai aktivitas menghambat dan membunuh bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aureginosa. Dari hasil penelitian didapatkan konsentrasi hambat minimum (KHM) ekstrak daun binahong pada bakteri Staphylococcus aureus
pada konsentrasi 25%(250mg/ml). Sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa konsentrasi hambat minimum (KHM) pada konsentrasi 50%(500 mg/ml). Pada konsentrasi bunuh minimum (KBM) ekstrak daun binahong terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi 50% (500mg/ml) sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa konsentrasi bunuh minimum (KBM) pada konsentrasi 100%(1000 mg/ml). Ini menjelaskan bahwa bagian daun tanaman binahong mampu digunakan sebagai bahan alternatif untuk pengobatan penyakit-penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri. Pemanfaatan tanaman binahong sebagai obat merupakan suatu upaya untuk mengikuti sunnah Nabi. Kita dianjurkan untuk mengamalkan pengobatan, sesuai sabda Rasulullah SAW: Dari Usamah Bin Syarik berkata, Bahwa saya pernah berada di sisi Rasulullah SAW, lalu datang sekelompok Arab Badui. Mereka berkata Wahai Rasullullah, apakah kami bisa berobat? Nabi menjawab. Wahai para hamba Allah carilah obat karena sesungguhnya Allah tidak menciptakan sutu penyakit tanpa menciptakan obatnya, selain satu penyakit saja Mereka bertanya; Penyakit apakah itu? jawab beliau; Penyakit usia tua (HR. Ahmad) (Mahmud, 2007) Rasulullah telah bersabda;Sesungguhnya Allah tidak menurunkan satu penyakit, kecuali Dia menurunkan obat penyembuhnya; obat penyakit diketahui bagi yang mengetahuinya dan tidak diketahui bagi orang jahil Hadist-hadist tersebut menunjukkan bahwa untuk mendapatkan obat suatu penyakit maka kita harus selalu berusaha dengan memikirkan apa yang telah diwahyukan oleh Allah sebagai petunjuk bagi kehidupan.
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.1. Kesimpulan Berdasarkan hasil dan pembahasan dalam penelitian ini dapat ditarik kesimpulan sebagai berikut: 1. Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak daun Binahong terhadap bakteri Staphylococcus aureus adalah pada konsentrasi 25 % yang setara dengan 250 mg/ml. Sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa KHM pada konsentrasi 50% setara dengan 500 mg/ml. 2. Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak daun Binahong terhadap bakteri Staphylococcus aureus adalah pada konsentrasi 50% setara dengan 500 mg/ml, sedangkan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa pada konsentrasi 100% setara dengan 1000 mg/ml. 3. Ekstrak daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis memiliki daya antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aureginosa (p=0.000). semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun binahong, semakin menekan pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (r-0,860) dan Pseudomonas aureginosa (r-0,860) hal ini menunjukkan bahwa pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong berpengaruh terhadap penurunan jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) (R 2 =0,740) dan pada bakteri Pseudomonas aeruginosa (R 2 = 0,739)
4. Hasil Uji Fitokimia ekstrak etil asetat daun binahong ditemukan senyawa Polifenol, Alkaloid dan Flavanoid.
5.2. Saran-saran Berdasarkan hasil penelitian dapat ditarik beberapa saran sebagai berikut: 1. Diperlukan penelitian lebih lanjut mengenai bahan aktif yang terdapat dalam ekstrak daun binahong untuk pengujian terhadap bakteri lain yang menyebabkan infeksi. 2. Perlu dilakukan isolasi senyawa yang lebih spesifik yang terkandung dalam ekstrak daun binahong dengan menggunakan pelarut selain Etil asetat dan diujikan pada bakteri lain yang Multiresisten selain bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aureginosa 3. Perlu dilakukan pengujian lebih lanjut secara klinis pada hewan coba untuk mengetahui lebih luas tentang khasiat daun Binahong.
DAFTAR PUSTAKA
Aulia, I.A 2008.Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanolik Daun Arbenan (Duchesnea indica (Andr.) Focke) Terhadap Staphylococcus aureus Dan Pseudomonas aeruginosa Multiresisten Antibiotic Beserta Profil Kromatografi Lapis Tipisnya. Skripsi Tidak Diterbitkan. Surakarta : Fakultas Farmasi UMS Surakarta.
Annisa, N. 2007. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Air Daun Binahong (Anredera scandens (L) Mor) Terhadap Bakteri Klebsiella pneumonia Dan Bacillus substilis ATCC 6633 Beserta Skrining Fitokimia Dengan Uji Tabung. Skripsi Tidak Diterbitkan Yogyakarta : Fakultas Farmasi UGM Yogyakarta.
Anasrullah, 2002.Aspek Mikrobiologi Klinik Pada Infeksi Luka Bakar Di RSUD Dr.Saiful Anwar Malang Periode 1998 -2001.Brawijaya .Fakultas Kedokteran : Skripsi
Anief, M. 1984. Ilmu Farmasi. Jakarta: Ghalia Indonesia
Ansel, C.H.1989. Pengantar bentuk sediaan farmasi. UI Press
Arafah, M. 2008. Pengaruh Ekstrak Buah Adas Pahit (Foeniculum Vulgare Mill Varian Vulgare) Terhadap Pertumbuhan Streptococcus Hemolitik Group A Dengan Metode Broth Dilution Test. Skripsi Tidak Diterbitkan Fakultas Kedokteran UMM Malang.
Akiyama, H. F., K. Iwatsuki, T. 2001. Antibacterial Action Of Several Tennis Agains Staphylococcus aureus. Journal of Antimicrobial Chemoterapy. Vol. 48: 487-91.
Ajizah, A. 2004. Sensitivitas Salmonella Typhimurium Terhadap Ekstrak Daun Psidium Guajava L. Bioscientie, VOL 1 NO.1: 31-8
Bernasconi,G.1995. Teknologi kimia I. Penerjemah; Handojo.L,Jakarta: PT.Prandya Paramitha.
Buchanan, R. E. And Gibson, E.E., 1974. Bergeys manual of determinative of bacteriology, 8 th edition, william and wilkins, baltimore USA.
Bonang, G dan koeswardono, E, S. 1982. Mikrobiologi Kedokteran Untuk Laboratorium Dan Klinik. Jakarta: PT.Gramedia.
De padua. 1999. Senyawa Kimia. Http://www.tempo.co.id/medica/arsip/122002/art-3.htm diakses 30 Mei 2009.
Dwidjoseputro, D.1978. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Penerbit Djambatan: Jakarta.
Fardiaz, S. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan PT. Raja Grafindo Persada: Jakarta.
Faroqi, M.I.H. 2005. Terapi Herbal Cara Islam; Manfaat Tumbuhan Menurut Al- Quran Dan Sunah Nabi. Terjemahan Ahmad Y. Samantho, Jakarta: Penerbit Hikmah (PT Mizan Publika)
Guenther, E.1987. Minyak Atsiri. Jakarta: penerbit UI.
Guenther, E.2006. Minyak Atsiri. Jakarta: penerbit UI.
Harborne, J.B.1996. Metode Fitokimia.Bandung:Institut Teknologi Bandung.
Hayati, E.K. 2007.Tumbuhan dan Hewan: Alternatif Pengobatan Warisan Budaya Islam.Al-Harakah.Vol.9.No 1.:1-12.
Jawetz, E. Melnick, J.L dan Adelberg, E.A.199I. Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiologi) Alih bahasa, Edi Nugroho, R.F.maulani. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC Jakarta.
Jawetz, E. Melnick, J.L dan Adelberg, E.A. 1996. Mikrobiologi Kedokteran. Surabaya: Salemba.
Jawetz, E. Melnick, J.L dan Adelberg, E.A. 1986. Mikrobiologi Untuk Profesi Kesehatan.Jakarta :EGC Penerbit Buku Kedokteran.
Jawetz, E. Melnick, J.L dan Adelberg, E.A. 2001. Medical Microbiology Twenty Second Ed. Buku 1. Terjemahan Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Jakarta :Salemba Medika.
Jauhari, T. 1984. Quran Dan Ilmu Pengetahuan Modern.Surabaya: Al-Ikhlas.
Lisa, N. 2008. Uji Aktivitas In Vitro Levofloksasin Terhadap Isolat Staphylococcus aureus Dan Pseudomonas aeruginosa Resisten Multiobat Di RSU Dr. Soetomo Surabaya: Isolat Dari Pasien Infeksi Kulit Dan Infeksi Saluran Kemih. Skripsi Tidak Diterbitkan Surabaya: Fakultas Kedokteran UNAIR Surabaya.
Louis, F.G. 2004. Saponin Glicosides .Georges luis @friedli.com,http:www.friedli.com.herbsphytochem.glycosides.html. diakses tanggal 7 Juni 2008.
Lutony, R. 2000. Usaha Penyulingan Minyak Daun Cengkeh. Http://www.bi.go.id./sipuk/im/ind/atsiri/pendahuluan.htm. diakses pada tanggal 7 juni 2008.
Lenny, S. 2006. Senyawa flavonoida, fenilflavonoida dan alkaloida. Karya Ilmiah Fakultas MIPA Universitas Sumatera Utara Medan.
Mazni, R. 2008. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Umbi Bidara Upas (Merremia mammosa chois) Terhadap Staphylococcus aureus Dan Escherichia coli Serta Brine Shrimp Lethality Test. Skripsi Tidak Diterbitkan. Surakarta: Fakultas Farmasi UMS Surakarta.
Manoi, F. 2009. Binahong (Anredera cordifolia)(Ten) Steenis Sebagai Obat. Jurnal Warta Penelitian Dan Pengembangan Tanaman Industri.Volume 15 Nomor 1:3.
Mus. 2008. Informasi Spesies Binahong Anredera cordifolia (Ten.) Steenis. http://www.plantamor.com/spcdtail.php?recid=1387. diakses tanggal 20 April 2009)
Markham, K.R.1998. Cara mengidentifikasi flavanoid. Bandung: penerbit ITB.
Maheswari, H. 2002. Pemanfaatan Obat Alami;Potensi Dan Prospek Pengembangan.http://rudact.tripod.com./sem2_012/hera_maheswari. htm, diakses 20 Februari 2008.
Masduki, I. 1996. Efek Antibakterial Ekstrak Biji Pinang (Areca catechu) Terhadap Staphylococcus aureus dan Echerichia coli. Cermin Dunia Kedokteran 109: 21-4.
Nasronuddin. 2007. Penyakit Infeksi Di Indonesia. Solusi Kini Dan Mendatang. Airlangga University Press: Surabaya.
Nur Iman, M. 2009. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol Bunga Pepaya Jantan (Carica Papaya L) Terhadap Echerichia coli Dan Staphylococcus aureus Multiresisten Antibiotik. Skripsi Tidak Diterbitkan Surakarta: Fakultas Farmasi UMS Surakarta.
Nurachman, Z. 2002. Artoindonesianin Untuk Antitumor.http.www.chem-istrri. diakses pada tanggal 1 april 2009.
Pelzhar, M dan Chan. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi 1. Jakarta:Universitas Indonesia (UI-Press).
Pelczar, M dan Chan.1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi (Jilid1) Jakarta:UI Press.
Suntoyo, W. 1990. Percobaan Perancangan Analisis Dan Interpretasinya. Jakarta: Gramedia Pustaka Utama
Qardhawi, Y.1998. Al-Quran Berbicara tentang akal dan ilmu pengetahuan. Jakarta: Gema Insani Press.
Rachmawati, S. 2007. Studi Makroskopi, Dan Skrining Fitokimia Daun Anredera Cordifolia (Ten.) Steenis. Skripsi Tidak Diterbitkan Surabaya: Fakultas Farmasi UNAIR Surabaya.
Rochani, N. 2009.Uji Aktivitas Antijamur Ekstrak Daun Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steenis) Terhadap Candida albicans Serta Skrining Fitokimianya. Skripsi Tidak Diterbitkan. Surabaya :Fakultas Farmasi UMS Surakarta.
Robinson, T. 1991.Kandungan Organik Tumbuhan Tingkat Tinggi, diterjemahkan oleh Prof. Dr. Kosasih Padmawinata, Penerbit ITB: Bandung.
Setiaji, A. 2009. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Petroleum Eter, Etil Asetat Dan Etanol 70% Rhizoma Binahong (Anredera cordifolia (Tenore) Steenis) Terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 Dan Escherichia coli ATCC 11229 Serta Skrining Fitokimianya. Skripsi Tidak Diterbitkan. Surakarta : Fakultas Farmasi UMS Surakarta.
Schmid, K. H.1985.Vitamin C Dan Penggunaanya Dewasa Ini.Jakarta:Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Supardi, I. dan Sukamto.1999. Mikrobiologi Dalam Pengolahan Dan Keamanan Pangan.Bandung: Penerbit Alami.
Shihab, M.Q. 2002. Tafsir Al-Misbah; pesan dan keserasian Al-Quran volume 11 Dan 15. Jakarta: Lentera Hati.
Tshikalange, T.E. 2007. In Vitro Anti-HIV-1 Properties Of Ethnobotanically Selected South African Plants Used In The Treatment Of Sexually Transmitted Diseases. University Of Pretoria. Journal Of Ethnopharmacology, 96,515-519.
Shulman, P. dan Sommers. 1994. Dasar Biologi & Klinis Penyakit Infeksi Edisi IV. Gadjah Mada University Press. Yogyakarta. Hal. 582.
Thomson, R.H. 1993. The Chemistri Of Natural Producst.2 Edition,chapman and hall ltd.glasgow,UK.
Uchida, S. 2003. Production of a digital map of the hazardous conditions of soil erosion for the sloping lands of West Java, Indonesia using geographic information systems (GIS). JIRCAS. Indonesia. Diakses Tanggal 31 Mei 2009. Voight, R.. 1994. Buku Pelajaran Teknologi Farmasi. Penerjemah Soendari, N.S.Yogyakarta: Gadjah Mada University Press.
Volk and Wheeler. 1993. Mikrobilogi Dasar. Jakarta: Erlangga.
Wahyono, H. 2007. Peran Mikrobiologi Klinik Pada Penanganan Penyakit Infeksi.Makalah Pidato Pengukuhan Guru Besar Dalam Ilmu Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro. 28 juli 2007.
Wicaksono, H. 2001. Efek Pemberian Kombinasi Klorokuin dan Asam Askorbat Terhadap Aktifitas Radikal Bebas Jaringan Hepar Mencit Yang Diinduksi Plasmodium Berghei. Fakultas Kedokteran UB.Tugas Akhir
Wardani, A. K. 2008. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi Residu Ekstrak Etanolik Daun Arbenan (Duchesnea indica (Andr) Focke.) Terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aureginosa Multiresisten Antibiotik Beserta Profil Kromatografi Lapis Tipis. Skripsi Tidak Diterbitkan Surakarta : Fakultas Farmasi UMS Surakarta.
Waluyo, L. 2004. Mikrobiologi Umum.UMM Press: Malang
Yustina, S.H. 2008. Daya Antibacteria Campuran Ekstrak Etanol Buah Adas (Foeniculum vulgare.Mill) Dan Kulit Batang Pulasari (Alyxia reindwartii BL).Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Yuke, E.Y.S. 2002.Uji Efek Madu Sebagai Antimikroba Terhadap Pseudomonas Aureginosa Secara In Vitro .Tugas Akhir Tidak Diterbitkan. Malang: Fakultas Kedokteran Unibraw.
LAMPIRAN
Lampiran 1. Diagram Alir Kerja
Membuat konsentrasi ekstrak daun binahong : 1 Gram ekstrak ditambah aquades 10 ml kemudian di tambah larutan Twen 80 sebanyak 0,001
- Pengenceran serial larutan ekstrak daun binahong - Penanaman biakan bakteri pada tabung reaksi Di Inkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37 o C mengamati kekeruhan sampel dan dibandingkan dengan kontrol positif, kemudian tentukan KHM (sampel di streak pada media NA) Uji KBM, sampel di encerkan pada media NaCl 0,9 % sebanyak 9 ml. pengenceran sesuai kepadatan sel bakteri (10 6 ) pada kamar hitung (Haemocytometer) pengamatan menggunakan Mikroskop.
Inkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37 o C Hitung Koloni dengan colony counter dan menentukan KBM Preparasi sampel daun binahong Ekstraksi Daun Binahong
Lampiran 2.Skema kerja
2.1 Preparasi Sampel
- Dicuci bersih dan ditiriskan - Dikeringkan dengan cara diangin-anginkan - Dikeringkan di dalam green house selam 5 hari tidak terkena sinar matahari secara langsung pada suhu 35 0 C - Dihaluskan menggunakan blender sampai berbentuk serbuk
Daun Binahong Segar Sampel
2.2 .Ekstraksi Daun Binahong Dengan Metode Maserasi
- Sampel dimasukkan Erlenmeyer - Ditambahkan pelarut Etil asetat sebanyak 500 ml - Direndam sambil di Shaker selama 1 jam - Dimaserasi selama 24 jam pada suhu 50 C - Difiltrasi/dipisahkan dengan kertas saring
- Direndam sambil dishaker selama 1 jam - Dimaserasi selama 24 jam seperti langkah - Difiltrasi/dipisahkan dengan kertas saring
- Direndam sambil dishaker selama 1 jam - Dimaserasi selama 24 jam - Difiltrasi/dipisahkan dengan kertas saring
Dibuang
- Filtrat 1,2,3 digabung kemudian di evaporasi dengan Rotary Evaporator Vakum pada suhu 50 0 C
- Ekstrak siap diujikan
200 gr Sampel Filtrat 1 Residu Filtrat 2 Residu Filtrat 3 Residu Ekstrak Pekat
2.3. Identifikasi Senyawa Kimia
2.3.1 Uji Alkaloid
- ditambahkan 0,5 mL HCL 2% - ditambahkan 2-3 tetes reagen dragendrof dan 2-3 tetes mayer
2.3.2 Uji Flavanoid
-ditambah serbuk Mg. 1 ml HCL pekat dan 2 ml amil alkohol - di kocok kuat-kuat - terjadi perubahan warna, ditunjukkan dengan imbulnya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amilalkohol
2.3.3 Uji Polifenol
-dilarukan dalam 10 ml air -dipanaskan selama 10 menit - laruan didinginkan dan disaring - filtrate di tetesi dengan FeCl3 sebanyak 3 tetes. - lalu diamati perubahan warnanya. - hasil positif polifenol terbentuk warna hijau kehitaman
Uji Fitokimia secara kualitatatif dan kuantitatif Dilakukan di Lab Kimia UIN MALIKI Malang dan Lab Kimia Universitas Muhammadiyah Malang.
0,5 gram ekstrak sampel Hasil 5 ml filtrate Hasil 0,2 Mg Ekstrak Pekat Hasil
2.4 Pengenceran Larutan Ekstrak Daun Binahong
1. Uji Konsentrasi Hambat Minimum (Pendahuluan)
- 1 gram ekstrak pekat daun binahong - diencerkan dengan menggunakan pelarut aquades 10 ml, - kemudian ditambahkan larutan tween 80 sebanyak 100 L - kemudian divortek sampai homogeny - Kemudian di ujikan dengan pengenceran berseri dari konsentrasi 100%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25% dan 3,125% pada masing-masing bakteri.
Untuk Seluruh Pengenceran ditambahkan 1 ml larutan dari (campuran aquades 10 ml dan larutan tween 80 sebanyak 100 L.)
Lampiran 3. Uji Aktivitas Antibakteri
3.1 Pembuatan Media
1. Media Nutrient Agar
- dilarutkan dengan aquades 500 mL dalam Erlenmeyer - dipanaskan sampai mendidih - dimasukkan dalam beberapa tabung reaksi dan ditutup dg kapas - disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 C selama 15 menit. - Diletakkan dalam posisi miring selama 24 jam pada suhu - 37 C
2. Media Nutrient Broth
- dilarutkan dengan aquades 500 mL dalam Erlenmeyer - dipanaskan sampai mendidih - dimasukkan dalam beberapa tabung reaksi dan ditutup dg kapas - disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 C selama 15 menit. - Diletakkan dalam posisi miring selama 24 jam pada suhu - 37 C
Media agar miring Media agar miring 6 gram nutrient agar 14,5 gram nutrient broth
3.2 Peremajaan Biakan Bakteri Murni
- di goreskan pada media agar padat pada cawan secara aseptis - Diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 C dalam incubator. - diambil satu koloni, ditumbuhkan dimedia NB dinkubasi selama 24 Pada suhu 37C kemudian, -kekeruhan bakteri pada media dibandingka dengan NB tanpa bakteri
3.3 Pembuatan Suspensi Bakteri
- diambil 1 ose, kemudian dilarutkan pada media NaCL fisiologis 0,9% sebanyak 5 ml. - di vortek biar homogen - dibandingkan dengan standar Mc Farland 10 8 sel/ml. - diencerkan 100x pada media NaCl fisiologis 0,9% dan media NB - didapatkan suspensi bakteri sebanyak 10 6 bakteri sel/ml,
Biakan Murni Bakteri Peremajaan Bakteri Hasil peremajaan bakteri Bakteri siap di ujikan
3.4 Uji Aktivistas Bakteri Dengan Metode Dilusi Tabung
- Menyiapkan tabung sebanyak 8, 2 kontrol 6 perlakuan - ditambahkan 4 ml media Nutrient Broth - ditambahkan larutan ekstrak dg konsenrasi 100% sebanyak 1 ml - kemudian di encerkan dengam mengambil 1 ml ke setiap tabung - ditambahkan suspensi bakteri sebanya 1 ml pada tiap tabung - diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37 0 C - diamati kejernihan pada media tabung - di streaking/ di gores pada media NA pada cawan petri - di inkubasikan pada suhu 37 C selama 18-24 jam - diamati pertumhan bakteri untuk hasil KHM
- Menyiapkan tabung sebanyak 8, 2 kontrol 6 perlakuan - ditambahkan 1 ml suspensi biakan bakteri aktif dan dihomogenkan - ditambahkan larutan ekstrak sesuai konsenrasi sebanyak 1 ml - diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 37 0 C - diamati kejernihan pada media tabung - diambil suspensi bakteri sebanyak 1 ml (10 6 ) - diencerkan pada media FeCL 0,9% sebanyak 9 ml - di streaking/ di gores pada media NAP pada cawan petri - di inkubasikan pada suhu 37 C selama 18-24 jam - dihitung jumlah koloni menggunakan colony counter
Uji (KHM) HASIL Hasil dari KHM HASIL
Lampiran : 4
Tabel 1. Data pengaruh pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong (Anredera cordifoilia (Ten) Steenis) Terhadap Penurunan Jumlah Koloni bakteri Staphylococcus aureus Per ml (10 6 sel/ml) Ulangan Konsentrasi I II III Total Rerata Kontrol Positif 30100000 31100000 30500000 91700000 30566667 250 mg 300000 303000 294000 897000 299000 300 mg 29700 28500 29000 87200 29066.667 350 mg 1860 1790 1550 5200 1733.3333 400 mg 144 129 138 411 137 450 mg 37 51 43 131 43.666667 500 mg 0 0 0 0 0 Total 30431741 31433470 30824731 92689942 30896647
Tabel 2. Data pengaruh pemberian konsentrasi ekstrak daun binahong (Anredera cordifoilia (Ten) Steenis) Terhadap Penurunan Jumlah Koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa Per ml (10 6 sel/ml) Ulangan Konsentrasi I II III Total Rerata Kontrol Positif 30800000 33300000 30100000 94200000 31400000 500 mg 295000 273000 257000 825000 275000 600 mg 25300 25700 28300 79300 26433.33333 700 mg 1620 1690 1760 5070 1690 800 mg 1210 1180 1350 3740 1246.666667 900 mg 56 61 77 194 64.66666667 1000 mg 0 0 0 0 0 Total 31123186 33601631 30388487 95113304 31704434.67
Lampiran 5.
Data Penghitungan Analisis Variansi dalam RAL
a. Bakteri Staphylococcus aureus
1. Faktor Koreksi (FK) =
=
=
= 4,091 x 10 14
2. Menghitung JK
a. JK Total =
= (30100000 2 + 31100000 2 + ... + 0 2 ) FK
= 2,804 x 10 15 - 4,091 x 10 14
= 2,395 x 10 15
b. JK Perlakuan =
=
= 2,803 x 10 15 - 4,091 x 10 14
= 2,394 x 10 15
c. JK Galat = JK Total JK Perlakuan
= 2,395 x 10 15 - 2,394 x 10 15
= 5,067 x 10 11
3. Menghitung db a. db Total = N -1 = 21 -1= 20
b. db Perlakuan = n 1= 7 1 = 6
c. db Galat = db Total db Perlakuan = 20 6 = 14
4. Menghitung KT
a. KT Perlakuan = = = 3,999 x 10 14
b. KT Galat = = = 3,619 x 10 10
5. Mencari F hitung = = = 11024,615
6. Mencari BNT BNT 5% = t ()(db galat) x
= t (0,05)(14) x
= 2,145 x (155335,19)
= 333.160,847
BNT 1% = t ()(db galat) x
= t (0,01)(14) x
= 2,977 x (155335,19)
= 462.408,432
b. Bakteri Pseudomonas aeruginosa
1. Faktor Koreksi (FK) =
=
=
= 4,308 x 10 14
2. Menghitung JK
a. JK Total =
= (30800000 2 + 33300000 2 + ... + 0 2 ) FK
= 2,964 x 10 15 - 4,308 x 10 14
= 2,533 x 10 15
b. JK Perlakuan =
=
= 2,958 x 10 15 - 4,308 x 10 14
= 2,527 x 10 15
c. JK Galat = JK Total JK Perlakuan
= 2,533 x 10 15 - 2,527 x 10 15
= 5,661 x 10 11
3. Menghitung db
a. db Total = N -1 = 21 -1= 20
b. db Perlakuan = n 1= 7 1 = 6
c. db Galat = db Total db Perlakuan = 20 6 = 14
4. Menghitung KT
a. KT Perlakuan = = =
b. KT Galat = = =
5. Mencari F hitung = = = 1041,753
6. Mencari BNT BNT 5% = t ()(db galat) x
= t (0,05)(16) x
= 2,145 x (519190,46)
= 1113552,776
BNT 1% = t ()(db galat) x
= t (0,01)(16) x
= 2,977 x (519190,46)
= 1545548,338
Lampiran 6. Analisisa Data Dengan One Wey ANOVA
Ringkasan ANOVA Pengaruh Ekstrak Daun Binahong terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
SK db JK KT F hit F 5% F 1% Sig Perlakuan 5 2,394 x 10 15 3,9902 x 10 14 11.024 2,958 4,694 0,000 Galat 12 5,067 x 10 11 3,6194 x 10 10
Total 17 2,395 x 10 15
Ringkasan ANOVA Pengaruh Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa
SK db JK KT F hit F 5% F 1% Sig Perlakuan 5 2,52732 x 10 15 4,2122 x 10 14 1041,7525 2,958 4,694 0,000 Galat 12 5,660732 x 10 12 4,0434 x 10 11
Total 17 2,53298 x 10 15
Lampiran 7:
Perhitungan Analisa Varian dengan menggunakan SPSS versi 15
A. Bakteri Staphylococcus aureus One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test 21 .0000000 .97467943 .124 .124 -.110 .570 .901 N Mean Std. Deviation Normal Parameters a,b Absolute Positive Negative Most Extreme Differences Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) Standardized Residual Test distribution is Normal. a. Calculated from data. b.
Test of Homogeneity of Variances Aktivitas_penghambatan 5.932 6 14 .076 Levene Statistic df1 df2 Sig.
ANOVA Aktivitas_penghambatan 2.4E+015 6 3.990E+014 11024.615 .000 5.1E+011 14 3.619E+010 2.4E+015 20 Between Groups Within Groups Total Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Aktivitas_penghambatan Tukey HSD a 3 .0000 3 43.6667 3 137.0000 3 1733.3333 3 29066.67 3 299000.0 3 3E+007 .497 1.000 Konsentrasi 500 mg 450 mg 400 mg 350 mg 300 mg 250 mg Kontrol Positif Sig. N 1 2 Subset for alpha = .05 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000. a.
Notasi LSD/BNT Pengaruh Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
Konsentrasi ekstrak daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) Rerata Rerata jumlah koloni bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 ) 50 %(500 mg/ml) 45% (450 mg/ml) 40%(400 mg/ml) 35% (350 mg/ml) 30% (300 mg/ml) 25%(250 mg/ml) Kontrol positif 0,000 a 43,667 a 137,000 a 1733,333 a 29066,670 a 299000,000 b 30566667 b
Keterangan: Angka yang diikuti notasi huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji LSD/BNT
B. Bakteri Pseudomonas aeruginosa
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test 21 .0000000 .97467943 .124 .124 -.106 .568 .904 N Mean Std. Deviation Normal Parameters a,b Absolute Positive Negative Most Extreme Differences Kolmogorov-Smirnov Z Asymp. Sig. (2-tailed) Standardized Residual Test distribution is Normal. a. Calculated from data. b.
Test of Homogeneity of Variances Aktivitas_penghambatan 11.325 6 14 .096 Levene Statistic df1 df2 Sig.
ANOVA Aktivitas_penghambatan 2.5E+015 6 4.212E+014 1041.753 .000 5.7E+012 14 4.043E+011 2.5E+015 20 Between Groups Within Groups Total Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Aktivitas_penghambatan Tukey HSD a 3 .0000 3 64.6667 3 1246.6667 3 1690.0000 3 26433.33 3 275000.0 3 3E+007 .998 1.000 Konsentrasi 1000 mg 900 mg 800 mg 700 mg 600 mg 500 mg Kontrol Positif Sig. N 1 2 Subset for alpha = .05 Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Uses Harmonic Mean Sample Size = 3.000. a.
Notasi LSD/BNT Pengaruh Ekstrak Daun Binahong Terhadap Bakteri Pseudomonas aeruginosa
Konsentrasi ekstrak daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten) Steenis) Rerata jumlah koloni bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 ) 100% (1000 mg/ml) 90% (900 mg/ml) 80% (800 mg/ml) 70% (700 mg/ml) 60% (600 mg/ml) 50% (500 mg/ml) Kontrol positif (0%) 0,000 a 64,667 a 1246,667 a 1690,000 a 26433,333 a 275000,000 b 30100000 b
Keterangan: Angka yang diikuti notasi huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji LSD/BNT
Lampiran 8:
Uji Korelasi dan Regresi Linear
Jumlah Koloni Bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 sel/ml)
Regression Descriptive Statistics
Mean Std. Deviation N jumlah koloni per ml 4413806.8096 11532848.35098 7 konsentrasi ekstrak 321.43 165.472 7
Correlations
jumlah koloni per ml konsentrasi ekstrak Jumlah koloni per ml 1.000 -.860 Pearson Correlation Konsentrasi ekstrak -.860 1.000 Jumlah koloni per ml . .007 Sig. (1-tailed) Konsentrasi ekstrak .007 . Jumlah koloni per ml 7 7 N Konsentrasi ekstrak 7 7
Variables Entered/Removed(b)
Model Variables Entered Variables Removed Method 1 konsentrasi ekstrak(a) . Enter
a All requested variables entered. b Dependent Variable: jumlah koloni per ml
Model Summary(b)
Model R R Square Adjusted R Square Std. Error of the Estimate 1 .860(a) .740 .687 6447290.53985
a Predictors: (Constant), konsentrasi ekstrak b Dependent Variable: jumlah koloni per ml
ANOVA(b)
Mode l Sum of Squares df Mean Square F Sig. 1 Regression 59020176999 3654.000 1 59020176999365 4.000 14.199 .013(a) Residual 20783777652 6242.700 5 41567555305248. 540
Total 79803954651 9896.000 6
a Predictors: (Constant), konsentrasi ekstrak b Dependent Variable: jumlah koloni per ml
Coefficients(a)
Model Unstandardized Coefficients Standardized Coefficients t Sig. B Std. Error Beta 1 (Constant) 23679508.515 5663859.902 4.181 .009 konsentra si ekstrak -59937.739 15906.599 -.860 -3.768 .013
a Dependent Variable: jumlah koloni per ml
Jumlah Koloni Bakteri Pseudomonas aeruginosa per ml (10 6 sel/ml)
Regression
Descriptive Statistics
Mean Std. Deviation N jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml 4529204.9524 11849335.04204 7 konsentrasi ekstrak daun binahong 642.86 330.944 7
Correlations
jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml konsentrasi ekstrak daun binahong Pearson Correlation jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml 1.000 -.860 konsentrasi ekstrak daun binahong -.860 1.000 Sig. (1-tailed) jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml . .007 konsentrasi ekstrak daun binahong .007 . N jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml 7 7 konsentrasi ekstrak daun binahong 7 7
Variables Entered/Removed(b)
Model Variables Entered Variables Removed Method 1 konsentrasi ekstrak daun binahong(a) . Enter
a All requested variables entered. b Dependent Variable: jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml
Model Summary(b)
Model R R Square Adjusted R Square Std. Error of the Estimate 1 .860(a) .739 .687 6632064.48501
a Predictors: (Constant), konsentrasi ekstrak daun binahong b Dependent Variable: jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml
ANOVA(b)
Model Sum of Squares df Mean Square F Sig. 1 Regression 62251904896 4475.000 1 6225190489 64475.000 14.153 .013(a) Residual 21992139666 6417.400 5 4398427933 3283.490
Total 84244044563 0892.000 6
a Predictors: (Constant), konsentrasi ekstrak daun binahong b Dependent Variable: jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml
Coefficients(a)
Model Unstandardized Coefficients Standardized Coefficients t Sig. B Std. Error Beta 1 (Constant) 24315336.884 5826181.381 4.173 .009 konsentrasi ekstrak daun binahong -30778.427 8181.235 -.860 -3.762 .013
a Dependent Variable: jumlah koloni bakteri Pseudomonas per ml
Lampiran 9
Pengaruh Konsentrasi Ekstrak daun Binahong dengan Penurunan 99,9% Asal Sub Biakan (0%) Pada Kedua Bakteri Uji 1. Kadar Bunuh Minimum Ekstrak Daun Binahong Anredera cordifolia (Ten) Steenis pada bakteri Staphylococcus aureus per ml (10 6 sel/ml) dengan penurunan 99,9% asal sub biakan 0% (kontrol) Ulangan Konsentrasi I II III Total Rerata % KBM Kontrol Positif 30100000 31100000 30500000 91700000 30566667 100 0 250 mg 300000 303000 294000 897000 299000 0.974277 99.02572 300 mg 29700 28500 29000 87200 29066.67 0.09164 99.90836 350 mg 1860 1790 1550 5200 1733.333 0.005756 99.99424 400 mg 144 129 138 411 137 0.000415 99.99959 450 mg 37 51 43 131 43.66667 0.000164 99.99984 500 mg 0 0 0 0 0 0 100 Total 30431741 31433470 30824731 92689942 30896647 0 0
2. Kadar Bunuh Minimum Ekstrak Daun Binahong Anredera cordifolia (Ten) Steenis pada bakteri Pseudomonas aureginosa per ml (10 6 sel/ml) dengan penurunan 99,9% asal sub biakan 0% (kontrol) Ulangan Konsentrasi I II III Total Rerata % KBM Kontrol Positif 30800000 33300000 30100000 94200000 31400000 100 0 500 mg 295000 273000 257000 825000 275000 0.875796 99.1242 600 mg 25300 25700 28300 79300 26433.33 0.084183 99.91582 700 mg 1620 1690 1760 5070 1690 0.005382 99.99462 800 mg 1210 1180 1350 3740 1246.667 0.00397 99.99603 900 mg 56 61 77 194 64.66667 0.000206 99.99979 1000 mg 0 0 0 0 0 0 100 Total 31123186 33601631 30388487 95113304 31704435 0 0
Lampiran 10: Alat Dan Bahan Penelitian
Timbangan Analitik
Blender
Penyaring Buchner
Rotary Evaporator Vakum
Sheker
oven
Bahan-Bahan Penelitian
Alat-Alat Gelas Penelitian
Inkubator
Autoklaf
Colony Counter
Vortek
Hotplate/Stirrer
Alat Uji Antibakteri
Lampiran 11.
Ekstraksi Secara Maserasi Daun Binahong Anredera cordifolia (Ten) Steenis.
Serbuk Daun Binahong
Maserasi Ekstrak etil Asetat
Ekstrak Daun Binahong di Shaker
Penyaringan Ekstrak Daun Binahong
Ekstrak di Rotary Evaporator vakum
Ekstrak Pekat Etil Asetat Daun Binahong
Lampiran 12 :
A. Hasil Uji KHM (Konsentrasi hambat minimum)
Uji dilusi bakteri S.aureus
Uji dilusi bakteri P.aureginosa
Penanaman bakteri pada media NA
Penanaman bakteri pada media NA
Uji tween pada bakteri S.aureus
Uji tween pada bakteri P.aureginosa
B. Hasil Uji Kadar Bunuh Minimum (KBM) Bakteri Staphylococcus aureus
Uji Dilusi Tabung
Kontrol positif
C.Hasil Uji Kadar bunuh minimum (KBM) Bakteri Pseudomonas aureginosa
Pembedahan Skoliosis Lengkap Buku Panduan bagi Para Pasien: Melihat Secara Mendalam dan Tak Memihak ke dalam Apa yang Diharapkan Sebelum dan Selama Pembedahan Skoliosis