ABSTRAK

1. Phyllanthus amarus , ramuan obat yang umum digunakan , diselidiki untuk kemungkinan interaksi
ramuan obat .
Efek pada metabolisme obat CYP3A - dimediasi pada tikus setelah pemberian dosis tunggal ekstrak P.
amarus diselidiki menggunakan midazolam ( MDZ ) sebagai probe substrat . Pengaruh pemberian dosis
ganda dari P. amarus ekstrak pada aktivitas dan ekspresi berbagai isoform CYP dipelajari .
2 . Oral P. amarus ekstrak ( 800 mg / kg ) 1 jam sebelum lisan MDZ meningkatkan Cmax dan AUC0 -
dari MDZ sebesar 3,9 dan 9,6 - kali lipat dan penurunan clearance sebesar 12 % , tetapi tidak mengubah
farmakokinetik MDZ intravena .
3 . Administrasi harian dari P. amarus ekstrak ( 200 atau 800 mg / kg / hari ) selama 15 hari pada tikus
meningkatkan aktivitas dan ekspresi CYP3A dan CYP2B1 / 2 . Sebaliknya , kegiatan dan ekspresi CYP1A ,
CYP2C dan CYP2E1 tidak berubah secara signifikan .
4 . Efek ganda P. amarus ekstrak pada CYP enzim yang ditunjukkan . Pemberian dosis tunggal ekstrak
peningkatan bioavailabilitas oral MDZ melalui penghambatan CYP3A usus sedangkan pemberian
berulang ekstrak sedikit diinduksi CYP3A hati dan CYP2B1 / 2 pada tikus , yang menunjukkan bahwa
interaksi ramuan obat oleh P. amarus berpotensi terjadi melalui CYP3A dan 2B .
Pengaruh P. amarus ekstrak pada midazolam farmakokinetik
Dua puluh tikus secara acak dibagi menjadi empat kelompok . Kelompok pretreatment yang gavaged
dengan 800 mg / kg ekstrak P.amarus sedangkan kelompok kontrol gavaged dengan volume setara
dengan kendaraan . Satu jam kemudian , MDZ yang diadministrasikan secara intravena ( 5 mg / kg ) atau
secara oral ( 20 mg / kg ) untuk kedua pretreatment dan kelompok kontrol .
Sampel darah ( sekitar 200 uL ) dikumpulkan dari vena jugularis pada 0 , 3 , 5 , 10 , 15 , 20 , 30 , 60 , 120
dan 240 menit setelah pemberian intravena MDZ atau 0 , 5 , 10 , 15 , 30 , 60 , 90 , 120 dan 240 menit
setelah pemberian oral MDZ . Sampel darah disentrifugasi pada 2500 g selama 10 menit pada 4 C.
Plasma kemudian dipisahkan dan disimpan pada -80 C sampai dianalisis .
Tingkat plasma MDZ dan metabolitnya ditentukan sesuai dengan metode sebelumnya ( Hamdy & Brocks
2010, Nakajima et al . 1999) dengan sedikit modifikasi .
Secara singkat , sampel plasma ( 100 uL ) yang alkalinized dengan 200 uL 0,1 M natrium hidroksida .
Setelah penambahan 50 ng clonazepam sebagai standar internal , campuran
diekstraksi dengan 4 mL dietil eter . Fraksi organik diuapkan di bawah aliran nitrogen pada 40 C.
Residu dilarutkan dalam 100 uL 50 % metanol dan sebagian 20 uL sampel kemudian disuntikkan ke
dalam kolom Zorbax SB - C18 ( 2.1 50 mm , 3,5 m , Agilent Technologies ) yang terhubung ke
kromatografi cair - tandem massspectrometry ( LC - MS / MS ) sistem ( HP 1100 sistem , AB SCIEX , Tokyo
, Jepang ) .
Suhu kolom diatur pada 20 C dan laju alir 0,2 mL / menit . Fase gerak 0,1 % asam format dalam air ( A )
dan 0,1 % asam format dalam metanol ( B ) .
Sebuah gradien linier digunakan dari 20 % sampai 90 % B B selama 2-3 menit diikuti dengan 90 % B
selama 7 menit dan kemudian kolom diizinkan untuk menyeimbangkan kembali pada kondisi awal
selama 8 menit . Detektor itu adalah PE SCIEX API 2000 spektrometer massa tandem ( AB SCIEX )
dioperasikan dalam mode ionisasi elektrospray positif . Massa / muatan ( m / z ) transisi ion tercatat
dalam modus beberapa pemantauan reaksi : m / z 326,0 dan 291,0 untuk midazolam , m / z 342,0 dan
203,2 untuk 1' - OH MDZ , m / z 342.0 dan 234.0 untuk 4 - OH MDZ , m / z 315,9 dan 270,1 untuk
clonazepam . Kurva kalibrasi berkisar 1-5000 ng / mL untuk MDZ dan 1 sampai 500 ng / mL untuk 1' - OH
MDZ dan 4 - OH MDZ .
Akurasi dan presisi assay ditentukan pada 10 , 500 , dan 2500 ng / mL untuk MDZ dan 10 , 100 dan 500
ng / mL untuk metabolitnya . Dalam waktu - hari dan antara hari akurasi berkisar 97,1-109,0 % untuk
MDZ , 98,0-110,7 % untuk 1' - OH MDZ dan 99,7 % sampai 114,2 % selama 4 - OH MDZ . Dalam waktu -
hari dan antara hari presisi adalah 8,8-13,7 % untuk MDZ , 1,9-9,8 % untuk 1' - OH MDZ dan 2,7 -
8,9 % untuk 4 - OH MDZ .

Pengaruh P. amarus ekstrak pada kegiatan CYP
Delapan belas tikus secara acak dibagi menjadi tiga kelompok . P. amarus ekstrak diberikan secara oral
pada dosis 200 mg / kg atau 800 mg / kg sekali sehari selama 15 hari berturut-turut . Tikus pada
kelompok kontrol sama-sama gavaged dengan volume setara dengan kendaraan . Pada hari ke 15 , tikus
eutanasia secara dislokasi leher dan hati yang dipotong cepat , snap- beku di es kering dan disimpan
pada -80 C. Mikrosom hati disusun oleh sentrifugasi diferensial ( Tassaneeyakul et al . 1994) .
Phenacetin O - deethylase , pentoxyresorufin O - dealkylase , diklofenak 4' - hidroksilase , chlorzoxazone
6 - hidroksilase dan testosteron 6 - hidroksilase digunakan sebagai penanda selektif CYP1A2 , CYP2B1 /
2 , CYP2C6 , CYP2E1 dan CYP3A1 / 2 kegiatan , masing-masing. Secara singkat , campuran 500 uL
inkubasi terkandung 0,1 mg tikus mikrosom hati dan substrat CYP selektif ( 20 M untuk phenacetin , 5 M
untuk 7 - pentoxyresorufin , 25 M untuk diklofenak , 50 pM untuk chlorzoxazone atau 50 pM untuk
testosteron ) dan 0,1 M fosfat penyangga pH 7,4 . Inkubasi campuran yang pra - diinkubasi pada suhu 37
C selama 3 menit dalam bak air gemetar . Reaksi dimulai dengan penambahan co - faktor , - NADPH (
1 mM ) dan dilanjutkan pada 37 C untuk jangka waktu tertentu . Kegiatan CYP ditentukan berdasarkan
metode yang dijelaskan sebelumnya ( Tassaneeyakul et al . 2000a ) .

Farmakokinetik dan analisis statistik
Konsentrasi plasma MDZ dan metabolitnya diplotkan terhadap waktu setelah pemberian obat .
Parameter farmakokinetik MDZ dan metabolitnya
ditentukan dengan menggunakan metode non - kompartemen . Daerah di bawah obat konsentrasi -
waktu ( AUC ) kurva dari 0 sampai 4 jam ( AUC0 - 4 ) yang dihitung dengan menggunakan metode
trapesium linear dari waktu 0 sampai 4 jam setelah pemberian MDZ . Daerah di bawah kurva
concentrationtime obat dari nol hingga tak terbatas ( AUC0 - ) dihitung dengan jumlah AUC0 - 4 dan
rasio konsentrasi pada 4 jam dengan konstanta laju eliminasi ( Ke ) . Konsentrasi maksimum plasma (
Cmax ) dan waktu untuk mencapai Cmax ( Tmax ) diperoleh dari data aktual . Jumlah izin
( CL ) dihitung sebagai dose/AUC0- . Tetapan laju eliminasi diperoleh dari kemiringan terminal
loglinier nilai konsentrasi - waktu .
Analisis statistik parameter farmakokinetik antara kedua kelompok dilakukan dengan menggunakan t -
test Student. Ekspresi protein dan aktivitas enzim datanya
dianalisis dengan analisis satu arah varians , dikombinasikan dengan uji Tukey . Perbedaan dianggap
sebagai signifikan secara statistik ketika p value kurang dari 0,05