TIARA DWI NURMALITA (120342400172/G-GE)

ESSAY: MOLECULAR CLONING

Kloning DNA merupakan proses penggandaan organisme inang yang
didalamnya terdapat DNA rekombinan dan membentuk organisme yang
memiliki seperangkat genetik DNA yang identik. Organisme inang yang
digunakan hampir selalu menggunakan bakteri E.coli. vektor yang digunakan
secara normal harus dapat direplikasi dan diisolasi secara bebas. Enzim yang
digunakan dalam kloning DNA : alkaline phosphatase, DNA ligase, DNA
polymerase

I,

Exonuclease

III,

mung

bean

nuclease,

nuclease

S1,

Polinucleotide kinase, enzim retriksi, reverse transcriptase, RNase A, RNase H,

T7, T3, dan SP6 RNA polymerase, Taq DNA polymerase, dan terminal
transferase.
Kloning DNA ada yang berupa subkloning (transfer DNA yang telah di
klon dari satu vektor ke vektor lainnya). Tahap subkloning yang pertama yaitu
isolasi plasmid DNA yang berisi sekuen yang diklon . tahap kedua yaitu digesti
(pemotongan) plasmid dalam fragmen yang terpisah dengan endonuclease
restriksi, ketiga yaitu pemisahan fragmen-fragmen dengan elektroforesis gel
agarose, keempat yaitu ligase (penyambungan) fragmen ke dalam vektor
plasmid baru, untuk membentuk molekul rekombinan, kelima yaitu transfer
plasmid yang sudah ada sambungannya ke dalam strain E.coli (transformasi),
keenam yaitu seleksi bakteri yang tertransformasi, terakhir yaitu analisis
plasmid rekombinan.
Kloning gen dapat menggunakan DNA libraries. Caranya, pertama
mRNA total diekstrak dari jaringan khusus dan hibridisasi dengan primer poli-T,
kedua yaitu pembentukan komlementer DNA copy

dengan reverse

transcriptase, ketiga yaitu degradasi RNA dengan menggunakan enzim RNase

H, keempat yaitu menyintesis untai cNDA kedua menggunakan fragmen RNA
sebagai primer.
Jurnal yang ditemukan metode kloningnya perpaduan antara DNA
libraries dengan subkloning: isolasi A.niger, persiapan cDNA, ligase dan
identifikasi DNA yang masuk, ligase produk PCR, persiapan cell line yang
kompeten, transformasi E.coli, dan isolasi dan identifikasi plasmid rekombinan.

DAFTAR PUSTAKA
Alberts, Bruce., Johnson, Alexander., Lewis, Julian., Raff, Martin., Roberts,
Keith., dan Walter, Peter. Molecular Biology of the Cell fifth Edition. 2008.
New York : Garland Science Taylor & Francis Group.
Mukadam, D.S., Chavan, A.M., Taware, dan D.S, Taware, S.D. 2010. Isolation,
Cloning, and Molecular Characterization of Polygalacturonase I (pgaI)
Gene from Aspergillus niger Isolate from Mango. Indian Journal of
Biotechnology, 9: 153159.
Turner, P.C., McLennan, A.G., bates, A.D., dam White, M.R.H. 1998. Instant
Notes in Molecular Biology. Liverpool : Bios Scientific Publishers.