Nilai klinis dari Treponema pallidum Real-Time PCR untuk Diagnosis

Sifilis [bawah-menunjuk segitiga terbuka kecil]

Abstrak
Diagnosis sifilis dapat menjadi rumit ketika itu didasarkan pada manifestasi
klinis yang beragam, gelap-bidang mikroskopi, dan serologi. Dalam penelitian
ini, karena itu, kami memeriksa nilai klinis tambahan dari Treponema pallidum
real-time PCR TaqMan untuk mendeteksi sifilis primer dan sekunder. Nilai
tambahan dari T. pallidum real-time PCR untuk diagnosis sifilis primer
dievaluasi dengan penggunaan tiga algoritma yang berbeda: (i) perbandingan
head-to-head dari hasil mikroskop medan-gelap dan T. pallidum real-time
PCR hasil, (ii) perbandingan diagnosis klinis dibuat di klinik infeksi menular
seksual (IMS) (termasuk dengan mikroskop medan gelap) dan T. pallidum
real-time hasil PCR, dan (iii) perbandingan klinis diagnosis dilakukan di
kantor dokter umum itu (tanpa mikroskop medan-gelap) dan T. pallidum realtime hasil PCR. Algoritma keempat digunakan untuk menentukan kinerja T.
pallidum real-time PCR mengenai deteksi sifilis sekunder. Dari Desember
2006 sampai April 2008, 716 pasien dengan dugaan kasus sifilis primer dan
133 pasien dengan dugaan kasus sifilis sekunder dilibatkan dalam penelitian.
Sebuah nilai kappa 0,601 ditemukan untuk perjanjian antara gelap-bidang
mikroskop dan T. pallidum real-time PCR. Perjanjian baik yang ditemukan
antara T. pallidum real-time PCR dan kedua diagnosis dari dokter umum
(kappa = 0,745) dan diagnosis klinik IMS (kappa = 0,769). Sensitivitas
terhadap diagnosis klinik IMS adalah 72,8%, spesifisitas 95,5% itu, nilai
prediksi positif adalah 89,2%, dan nilai prediktif negatif adalah 95,0%. T.
pallidum real-time PCR adalah tes cepat, efisien, dan dapat diandalkan untuk
diagnosis sifilis primer di klinik rawat jalan IMS dan pengaturan dokter umum,
tetapi tidak memiliki nilai diagnostik tambahan untuk diagnosis sifilis

sekunder.
Bagian lain
Para agen etiologi sifilis, Treponema pallidum subsp. pallidum, menyebabkan
multistage infeksi menular seksual (IMS). Selama dekade terakhir, telah
terjadi peningkatan insiden sifilis dilaporkan di negara industri, menekankan
kebutuhan untuk diagnostik yang handal untuk sifilis. Waktu generasi lambat
dan ketidakmampuan untuk bertahan hidup dan berkembang biak di luar
tubuh mamalia membuat T. pallidum tidak cocok untuk dalam kultur in vitro
(11). Diagnosis handal dan cepat sifilis dan pengobatan dini dapat
meningkatkan

kesehatan

masyarakat.

Sampai

saat

ini,

diagnosis

laboratorium sifilis didasarkan pada gelap-bidang mikroskop dan / atau

serologi sifilis. Gelap-bidang mikroskop ini terutama digunakan untuk
diagnosis sifilis primer. Untuk interpretasi yang optimal dari hasil tes, gelapbidang mikroskop membutuhkan teknisi laboratorium melakukan mikroskop
untuk memiliki banyak pengalaman dan keahlian. Di banyak rangkaian di
mana pasien dengan (ano) ulserasi genital terlihat, seperti kantor dokter
umum (GP), gelap-bidang mikroskop tidak tersedia dan diagnosis pasti sifilis
semata-mata tergantung pada gambaran klinis dalam kombinasi dengan
sifilis serologi. Dalam kasus sifilis primer, hasil negatif palsu serologis spesifik
mungkin terjadi karena periode jendela. Akibatnya, kunjungan tindak lanjut
dengan uji serologis berulang akan diperlukan untuk jangka waktu 3 bulan. Ini
mungkin, namun, mengakibatkan penundaan pengobatan, perkembangan
penyakit menyebabkan yang mengakibatkan komplikasi kesehatan yang
serius dan transmisi lanjutan. Di sisi lain, hasil positif palsu serologis dapat
terjadi

karena

masih

adanya

antibodi

dari

infeksi

di

masa

lalu.

Sebuah PCR cepat dan handal oleh karena itu nilai potensi besar untuk
diagnosis sifilis primer, khususnya dalam pengaturan di mana tidak mungkin

untuk melakukan gelap-bidang mikroskop (3). Keuntungan dari real-time PCR

adalah kemampuan untuk mendeteksi patogen secara langsung, waktu
penyelesaian yang singkat, dan kemudahan kinerja. Sebelumnya, kami telah
mengembangkan real-time PCR yang menargetkan gen POLA dan yang
dilakukan

dengan

swab

dari

ulserasi

(ano)

kelamin

(s)

(10).

Dalam penelitian ini, kami meneliti nilai klinis dari T. pallidum real-time PCR
berkaitan dengan lesi sifilis primer dan sekunder. Sensitivitas, spesifisitas,
nilai duga positif (PPV), dan nilai prediksi negatif (NPV) dari T. pallidum realtime PCR ditentukan dalam pengaturan klinis dari sebuah klinik, sangat besar
rendah ambang IMS rawat jalan di Amsterdam, Belanda.

Bagian lain

BAHAN DAN METODE

Studi populasi. Klinik IMS rawat jalan dari Dinas Kesehatan Amsterdam di
Amsterdam, Belanda, adalah klinik rendah ambang melayani sekitar 27.000
pelanggan per tahun. Klien dapat mengunjungi klinik IMS anonim, gratis, dan
tanpa rujukan oleh seorang dokter. Semua berisiko tinggi klien secara rutin
diskrining untuk Treponema pallidum, Chlamydia trachomatis, dan Neisseria
gonorrhoeae. Diagnostik untuk IMS lain, seperti (ano) genital herpes simplex
virus (HSV) infeksi, didasarkan juga pada gejala klinis. Sejumlah besar klien
membuat beberapa kunjungan per tahun; beberapa klien didiagnosa dengan
satu

atau

lebih

IMS

pada

suatu

waktu.

Klien dilibatkan secara berurutan dalam studi memiliki dugaan kasus sifilis
primer jika mereka disajikan dengan ulkus (ano) kelamin atau dimasukkan

sebagai memiliki dugaan kasus sifilis sekunder jika mereka disajikan dengan
manifestasi kulit kemungkinan berhubungan dengan sifilis sekunder, seperti
makula atau papular ruam, lesi kondiloma latum, roseolas, patch lendir, atau
alopecia.
Pemeriksaan

diagnostik.

(I)

gelap-bidang

mikroskop.

Gelap-bidang mikroskop dilakukan untuk semua klien yang disajikan dengan

ulkus (ano) kelamin. Sebuah mikroskop dilengkapi dengan kondensor gelapbidang yang mencerminkan dan tujuan 40 yang digunakan. Tergantung
pada kualitas sampel ulkus dikumpulkan (tidak ada sel epitel, sedikit eritrosit),
minimal dua slide dan maksimum empat slide disiapkan untuk diperiksa.
Seorang dokter kulit yang terlatih atau penduduk terlatih dalam dermatologi
memeriksa gelap medan-slide, dan hasil bagi mereka ditemukan positif untuk
T.

pallidum

(Ii)

dikonfirmasi

oleh

pemeriksa

Sifilis

lain.
serologi.

Sera semua klien diuji di Laboratorium Kesehatan Masyarakat Dinas

Kesehatan Amsterdam. The serologi sifilis termasuk T. pallidum kuantitatif
aglutinasi partikel (TPPA) tes (Serodia-TP.PA; Fujirebio Europe BV) sebagai
tes skrining primer dan baik kuantitatif cepat plasma reagin (RPR) uji flokulasi
(RPR-Nosticon II; bioMerieux , Boxtel, Belanda) dan antibodi treponema
fluoresen (FTA) tes (Trepo-Spot JIKA; bioMerieux) sebagai tes konfirmasi.
Tes FTA dan RPR dilakukan dengan uji TPPA-positif sera. Untuk
menyingkirkan hasil positif palsu, titer uji TPPA dari <1:1,000 juga
dikonfirmasi oleh immunoassay garis tambahan (Inno-LIA skor sifilis). Semua
tes diagnostik untuk sifilis nontreponemal treponemal dan dilakukan sesuai
dengan
(Iii)

instruksi
T.

pallidum

produsen.
real-time

PCR.

Untuk pengujian oleh T. pallidum real-time PCR, dua spesimen usap kering
diperoleh dari ulkus (ano) kelamin atau menggores kulit. Dalam waktu 24
jam, ini penyeka diangkut ke Laboratorium Kesehatan Masyarakat pada suhu

kamar. Semua ulserasi juga diperiksa untuk infeksi HSV oleh real-time PCR
(lihat di bawah). Para penyeka digabungkan dan dielusi dalam larutan 600-ml
fosfat-buffer garam. Bagian dari eluat pallidum T. (100 ml) yang segaris
dengan menambahkan 600 ml buffer 5 tiosianat guanidin M (L6; bioMerieux)
yang mengandung 0,04 mg / ml glikogen (Roche, Almere, Belanda) dan
diinkubasi pada 65 C selama 30 menit. T. pallidum DNA kromosom
diendapkan dengan menambahkan 700 ml isopropanol (-20 C; Merck,
Darmstadt, Jerman), dan pelet kemudian dicuci dua kali dengan 500 ml
etanol 70%. Total DNA endapan dilarutkan dalam 50 ml 10 mM Tris-HCl (pH
8,0)

dan

langsung

diperkuat

(10).

A real-time PCR assay penargetan gen POLA T. pallidum dilakukan (10).

Urutan primer maju adalah 5'-GGTAGAAGGGAGGGCTAGTA, dan urutan
terbalik primer adalah 5'-CTAAGATCTCTATTTTCTATAGGTATGG. Urutan
TaqMan penyelidikan adalah 5'-FAM-ACACAGCACTCGTCTTCAACTCCBHQ1 (di mana FAM adalah 6-carboxyfluorescein dan BHQ1 adalah
pemadam Black Hole). Setelah siklus denaturasi dari 5 menit pada 93 C,
profil amplifikasi terdiri dari 50 siklus 30 detik pada 95 C, 30 detik pada 55
C, dan 30 detik pada 72 C Siklus cutoff ambang positif (CT) adalah <36.
Nilai CT 36-40 dianggap di zona abu-abu. Sampel ini diuji ulang dan
dianggap positif jika nilai CT adalah <40. Amplifikasi ini dilakukan dalam alat
Rotor-Gene3000

(Corbett,

Westburg,

Belanda).

T. pallidum real-time PCR ditunjukkan untuk lebih spesifik, karena tidak ada
reaktivitas silang dengan patogen nontreponemal terjadi (10). Sampel DNA
dari T. pertenue dan T. endemicum, bagaimanapun, berhasil dapat diperkuat
oleh
HSV-1

T.
dan

pallidum
HSV-2

real-time

PCR.

real-time

PCR.

Dua spesimen usap dielusi kering dari ulkus (ano) kelamin atau kulit Scraping
diperoleh untuk T. pallidum real-time PCR juga digunakan untuk HSV realtime PCR. HSV DNA dirilis dengan ekstraksi panas: a 30-ml usap eluat

diinkubasi

pada

95

selama

15

menit.

A real-time PCR assay menargetkan gen GG HSV-1 dan gen GD HSV-2

dilakukan

(20).

Untuk

HSV-1,

urutan

primer

maju

adalah

5'-

GGTTCCGACGCCTCAACATAC dan urutan terbalik primer adalah 5'GGTGTGGATGACGGTGCTG. Urutan pemeriksaan TaqMan adalah 5'-HEXCCGCTGTTCTCGTTCCTCACTGCCTC-Tamra (dimana HEX adalah 4,4,7,2
',

4',

',

7'-hexachloro-6-carboxyfluorescein

dan

Tamra

adalah

6-

carboxytetramethylrhodamine). Untuk HSV-2, urutan primer maju adalah 5'CGCCAAATACGCCTTAGCA,

urutan

terbalik

primer

adalah

5'-

GAAGTTCTTCCCGCGAAAT, dan urutan TaqMan penyelidikan adalah 5'FAM-CTCGCTTAAGATGGCCGATCCCAATC-Tamra

(20).

Setelah

siklus

denaturasi dari 2 menit pada 95 C, profil amplifikasi terdiri dari 45 siklus 15

detik pada 95 C dan 60 detik pada 45 C Nilai cutoff positif CT <36.
Amplifikasi

ini

dilakukan

dalam

alat

Rotor-Gene3000

Kriteria

(Corbett).
diagnostik.

Untuk mengevaluasi nilai klinis dari T. pallidum real-time PCR untuk diagnosis
sifilis primer, kami menggunakan tiga algoritma diagnostik yang berbeda.
Yang pertama adalah perbandingan head-to-head dari hasil gelap-bidang
mikroskop dan orang-orang dari T. pallidum real-time PCR (terlepas dari
episode sifilis sebelumnya atau hasil serologi sifilis test), karena keduanya
adalah

tes

treponemal

langsung.

Algoritma kedua, yang kita sebut sebagai diagnosis klinis IMS berbasis klinik,
didasarkan pada algoritma yang mungkin untuk digunakan di klinik rawat
jalan IMS lengkap dan mencakup perbandingan hasil gelap-bidang mikroskop
dari sampel maag, episode sifilis sebelumnya , dan hasil serologi sifilis
dengan

hasil

T.

pallidum

real-time

PCR

(Gambar

(Gbr.11).

Gambar.

1.

Gambar.

1.

Representasi dari prosedur yang digunakan untuk mendiagnosis sifilis primer

di

luar

pasien

IMS.

Sejak T. pallidum real-time PCR juga memiliki potensi besar untuk GP,
algoritma ketiga, yang kita sebut sebagai diagnosis klinis dalam pengaturan
GP, mensimulasikan pengaturan GP tanpa ketersediaan gelap-bidang
mikroskop dan didasarkan hanya pada perbandingan dari adanya ulkus (ano)
genital, episode sifilis sebelumnya, dan hasil serologi sifilis dengan hasil T.
pallidum

real-time

PCR

(Gambar

(Gbr.22).

Gambar.

2.

Gambar.

2.

Representasi dari prosedur yang digunakan untuk mendiagnosis sifilis primer

dalam

pengaturan

GP

simulasi.

Untuk mengevaluasi nilai klinis dari T. pallidum real-time PCR sehubungan

dengan diagnosis sifilis sekunder, kriteria diagnostik berikut digunakan:
manifestasi kulit kemungkinan berhubungan dengan sifilis sekunder,
sebagaimana tercantum dalam kriteria inklusi atas bawah "populasi studi ,
"dan

tes

RPR

reaktif

kuantitatif

Analisis

(titer

1:8).
statistik.

Evaluasi keakuratan klinis dari T. pallidum real-time PCR dilakukan dengan

menentukan sensitivitas, spesifisitas, PPV, NPV, dan nilai kappa (ukuran
perjanjian). Wilcoxon sign-rank test digunakan untuk menggambarkan
perbedaan usia antara T. real-time PCR pallidum-positif dan-negatif kasus.
The Pearson 2 test digunakan untuk menguji perbedaan proporsi kasus
dengan infeksi HSV-1 dan / atau HSV-2 antara kelompok. Analisis dilakukan
dengan menggunakan SPSS (versi 15,0) software (SPSS Inc, Chicago, IL).
Bagian

lain

HASIL
Selama periode dari Desember 2006 hingga April 2008, sebanyak 716 kasus
dugaan sifilis primer dan satu lagi 133 kasus yang diduga sifilis sekunder
berurutan disertakan. Untuk sifilis primer dan sekunder, kami termasuk 40%
dan 87% laki-laki yang berhubungan seks dengan pria (MSM), masingmasing; 30% dan 9% laki-laki yang berhubungan seks dengan wanita,
masing-masing; dan 30% dan 4% wanita yang berhubungan seks dengan
laki-laki, masing-masing (Tabel (Table1) .1). Kami mengidentifikasi 93 T.
pallidum real-time PCR-positif kasus sifilis primer, dan median usia adalah 42
tahun (interkuartil rasio [IQR], 36 47 tahun) (Tabel (Table1) .1). Infeksi dengan
herpes simplex virus tipe 1 (17%) atau tipe 2 (28%) dan infeksi dengan
Chlamydia trachomatis (7%) dan Neisseria gonorrhoeae (4%) sering terjadi,
yang mencerminkan risiko tinggi untuk IMS pada populasi ini. T. pallidum realtime PCR-positif adalah kasus MSM 91%, laki-laki heteroseksual 7%, dan
wanita 2%. Pasien dengan hasil positif T. pallidum real-time PCR secara
signifikan lebih tua (P <0,001) dibandingkan mereka yang diuji T. pallidum
real-time PCR negatif. Karakteristik dugaan kasus sifilis primer dan sekunder
dan T. pallidum real-time PCR hasil Untuk sifilis sekunder, 34 kasus yang
ditemukan menjadi positif oleh T. pallidum real-time PCR. Semua kasus
adalah MSM, dan usia rata-rata mereka adalah 39 tahun (IQR, 32-47 tahun).
Karakteristik dari semua pasien dirangkum pada Tabel 1 T Evaluasi T.
pallidum

real-time

PCR

untuk

sifilis

primer.

Dalam perbandingan gelap-bidang mikroskop dan T. pallidum real-time PCR

hasil, 47 kasus dinyatakan positif sifilis primer oleh kedua mikroskop medangelap dan T. pallidum real-time PCR (Tabel 2) . Kami menemukan 53 hasil
discrepant antara gelap-bidang mikroskop dan T. pallidum real-time PCR; 7
kasus diuji gelap-bidang mikroskop positif dan T. pallidum real-time PCR
negatif, sementara 46 kasus diuji gelap-bidang mikroskop negatif dan T.
pallidum real-time PCR positif. Nilai kappa adalah 0,601, menunjukkan

perjanjian yang adil dalam perbandingan head-to-head antara gelap-bidang

mikroskop

dan

T.

pallidum

real-time

PCR.

TABEL

2.

TABEL

2.

Diagnosis

sifilis

dibandingkan

primer

yang

diperoleh

diperoleh

dengan

oleh

T.

mikroskop
pallidum

medan

real-time

gelap
PCRa

Berdasarkan diagnosis dibuat dengan menggunakan kriteria klinis untuk sifilis

primer digunakan dalam pengaturan klinik IMS, kami menemukan hasil untuk
83 kasus menjadi Menurut hitungan positif dengan orang-orang dari T.
pallidum real-time PCR, sementara hasil untuk 41 kasus yang ditemukan
menjadi sumbang (Tabel (Tabel 3) .3). Dari jumlah tersebut, 31 kasus positif
berdasarkan kriteria klinis tetapi T. pallidum real-time PCR negatif, sementara
10 kasus negatif berdasarkan kriteria klinis tetapi T. pallidum real-time PCR
positif. Nilai kappa adalah 0,769, yang menunjukkan kesesuaian antara
diagnosis dibuat dengan menggunakan algoritma klinik IMS dan hasil dari T.
pallidum real-time PCR. Nilai prediksi positif dan negatif 89,2% dan 95%
masing-masing, menunjukkan kegunaan klinis dari T. pallidum real-time PCR
untuk

diagnosis

sifilis

primer.

Tabel

3.

Tabel

3.

Klinis diagnosis sifilis primer dibuat di klinik rawat jalan IMS dibandingkan
yang

dibuat

oleh

T.

pallidum

real-time

PCRa

Berdasarkan diagnosis dibuat dengan menggunakan kriteria klinis untuk sifilis

primer digunakan dalam pengaturan GP, kami menemukan temuan untuk 76
kasus menjadi Menurut hitungan positif dengan orang-orang dari T. pallidum
real-time PCR (Tabel (Table4) .4). Dari 43 hasil discrepant, 26 kasus positif
berdasarkan diagnosis klinis dalam pengaturan GP dan T. pallidum real-time

PCR negatif, sementara 17 kasus negatif berdasarkan diagnosis klinis dalam

pengaturan GP simulasi dan T pallidum real-time. positif PCR. Nilai kappa
antara hasil ditemukan dengan menggunakan kriteria dalam pengaturan GP
simulasi dan mereka T. pallidum real-time PCR 0,745, yang merupakan
kesepakatan

yang

baik.

TABEL

4.

TABEL

4.

Klinis diagnosis sifilis primer dibuat dengan menggunakan serologi sifilis dan
riwayat pasien sebagai model untuk pengaturan dokter umum versus hasil
dari

T.

pallidum

real-time

PCRa

Ulkus kelamin dan dubur kelamin dapat disebabkan oleh infeksi T. pallidum,
tetapi dalam banyak kasus mereka disebabkan oleh infeksi HSV, karena itu,
semua sampel usap juga diperiksa untuk kedua HSV-1 dan HSV-2 oleh
herpes simpleks tipe-virus PCR tertentu. Di antara 716 kasus, 122 (17%)
adalah HSV-1 positif dan 197 (28%) HSV-2 positif (Tabel (Table1) .1). Dalam
satu kasus, infeksi dengan baik HSV-1 dan HSV-2 ditemukan. Kami
subtabulated hasil dari kedua mikroskop lapangan gelap dan diagnosis dibuat
dalam setting klinik IMS dalam kaitannya dengan hasil untuk HSV dan orangorang dari T. pallidum real-time PCR (Tabel (Table5) .5). Di antara kasus yang
dikonfirmasi positif oleh kedua mikroskop medan-gelap dan T. pallidum realtime PCR, hanya satu kasus ditemukan menjadi positif oleh HSV-1 PCR. Di
antara gelap-bidang mikroskop-negatif dan T. pallidum real-time PCR-negatif
kasus, kami menemukan 314/616 (51%) HSV-1 dan -2 infeksi (Tabel (Table5)
.5). Yang paling penting, tidak HSV-1 dan -2 infeksi ditemukan dalam gelapbidang mikroskop-negatif dan T. real-time kelompok pallidum PCR-positif
(0/46). Demikian pula, ketika algoritma klinik IMS digunakan, hanya 1 (dari
83; 1%) HSV-positif kasus tercatat dalam kelompok pallidum T. real-time
PCR-positif, sedangkan 306 (dari 592; 52%) HSV-1 dan HSV-2 infeksi

ditemukan di klinik IMS algoritma-negatif dan T. pallidum real-time PCRnegatif kelompok. Terutama, lagi, tidak satu infeksi HSV (0/10) ditemukan di
klinik IMS algoritma-negatif dan T. pallidum real-time PCR-positif kelompok.
Oleh karena itu, untuk kedua mikroskop lapangan gelap dan algoritma klinik
IMS, kami menemukan infeksi HSV signifikan lebih sering (P <0,001) antara
pallidum T. real-time PCR-negatif kasus dibandingkan pada T. pallidum realtime PCR- positif kasus. Hal ini menunjukkan bahwa sebagian besar bisul
waktu, baik berasal dari herpes atau disebabkan oleh infeksi sifilis dan bukan
oleh infeksi ganda dengan virus herpes simpleks dan Treponema pallidum.
TABEL

5.

TABEL

5.

Distribusi HSV-1 dan / atau HSV-2 infeksi dalam analisis hasil dari gelapbidang mikroskop dibandingkan dengan mereka dari T. pallidum real-time
PCR dan analisis diagnosis klinis oleh klinik IMS dibandingkan hasil T.
pallidum

(more

...)

Evaluasi T. pallidum real-time PCR untuk diagnosis sifilis sekunder.

Untuk mengevaluasi kinerja T. pallidum real-time PCR untuk diagnosis sifilis
sekunder, kasus 133 termasuk dalam penelitian. Sebanyak 33 kasus yang
positif baik untuk diagnosis sifilis sekunder dan oleh T. pallidum real-time
PCR. Dari 45 kasus dengan hasil yang sumbang, 44 adalah T. pallidum realtime PCR negatif dan sifilis sekunder positif, sementara hanya 1 kasus yang
mungkin terlewatkan oleh penggunaan diagnosis sifilis sekunder. Nilai kappa
adalah 0,372, menunjukkan bahwa hanya ada sedikit kesepakatan antara
diagnosis sifilis sekunder dan T. pallidum real-time hasil PCR (Tabel
(Table66).
TABEL

6.

TABEL

6.

Diagnosis sifilis sekunder dilakukan atas dasar kulit yang dicurigai atau
temuan mukosa ditambah titer RPR dari 01:08 versus hasil dari T. pallidum
real-time

PCRa

Bagian

lain

PEMBAHASAN
Sifilis juga dikenal sebagai "peniru besar", dan diagnosis sifilis rumit karena
manifestasi klinis yang beragam atau mungkin sama sekali tidak ada (6, 7).
Meskipun ulserasi genital dapat disebabkan oleh infeksi Treponema pallidum,
di Belanda mereka terutama disebabkan oleh herpes simpleks virus tipe 2
dan 1. Diagnosis tepat dari sifilis karena itu memerlukan penafsiran baik
gambaran klinis dengan mengacu pada hasil laboratorium (temuan serologi
sifilis

dan

gelap-lapangan

mikroskop)

dan

riwayat

pasien

(episode

sebelumnya sifilis dan serologi sifilis sebelumnya) T. pallidum real-time PCR

mudah dilakukan di sebagian besar masa kini pengaturan laboratorium
mikrobiologi Dua kering spesimen swab steril digunakan untuk pengambilan
sampel ulkus dan dapat dikirim, pada suhu kamar, ke laboratorium untuk
pengujian, membuat proses cepat dan efisien. Apalagi bila T. pallidum realtime

PCR

tersedia,

tidak

ada

kebutuhan

lebih

lanjut

untuk

mempertimbangkan periode jendela serologi sifilis, yang bisa sampai 3 bulan

(8). Analisis kami menunjukkan bahwa, selain keuntungan praktis, ada
perjanjian yang baik antara diagnosis klinis sifilis primer di luar pasien IMS
dan diagnosis klinis sifilis primer dalam pengaturan praktisi simulasi umum
(tanpa
Kedua

ketersediaan
T.

pallidum

real-time

gelap-bidang
PCR

dan

mikroskop
gelap-bidang

).

mikroskop

mengidentifikasi spirochete langsung tanpa menggunakan parameter tidak

langsung, seperti produksi antibodi (serologi sifilis), atau informasi mungkin
bias, seperti riwayat pasien. Oleh karena itu, pertama kita membandingkan T.

pallidum hasil real-time PCR dan gelap-bidang mikroskop dan menemukan

hanya perjanjian yang adil dari hasil dua tes untuk pasien dengan sifilis
primer dicurigai. Jika beban bakteri rendah atau jika kelangsungan hidup
treponema berkurang, seperti dapat terjadi pada lesi yang lebih tua,
kepekaan gelap-bidang mikroskop dapat sangat dikurangi menjadi kurang
dari 80%. Dalam kombinasi dengan sensitivitas biasanya tinggi dari PCR,
kurangnya perjanjian dapat dipertimbangkan (12, 13, 16). Algoritma
diagnostik kedua dan ketiga adalah pendekatan yang lebih baik untuk
diagnosis klinis dari sifilis primer. Perbandingan hasil dari T. pallidum real-time
PCR untuk diagnosis dibuat dengan menggunakan kedua algoritma
diagnostik untuk sifilis primer menunjukkan perjanjian yang baik, seperti yang
dibahas oleh Byrt (5). Mencari secara lebih rinci pada pengaturan dokter
umum, kami menemukan bahwa 7 dari 17 kasus discrepant positif oleh T.
pallidum real-time PCR dan dengan mikroskop medan-gelap, menunjukkan
bahwa T. pallidum real-time hasil PCR benar-benar positif . Dalam tujuh
kasus, infeksi primer awal T. pallidum dalam jendela dari respon serologis
mungkin terjadi. Dalam pengaturan dokter umum, kinerja T. pallidum real-time
PCR, selain serologi sifilis, sehingga dapat mencegah diagnosis negatif palsu
sifilis.
Berdasarkan pengalaman, sejumlah besar pengunjung ke klinik rawat jalan
IMS tidak kembali setelah kunjungan awal untuk hasil tes mereka dan tidak
bisa dilacak karena mereka diuji secara anonim. Oleh karena itu, sebagai
praktek standar, semua pasien dengan lesi sifilis dicurigai dan hasil gelapbidang mikroskop positif menerima pengobatan dugaan, konsekuensinya
adalah bahwa serokonversi untuk antibodi sifilis atau kenaikan titer pada
akhir periode jendela tidak dapat didaftarkan, bahkan meskipun ini akan
membuktikan dengan pasti bahwa individu lebih memiliki sifilis primer.
Karena tidak ada tes laboratorium yang sempurna, ada beberapa penjelasan
untuk negatif palsu pallidum T. Hasil PCR yang kami temukan dalam

perbandingan kita. Selalu ada kemungkinan kesalahan sampling, tapi gelapbidang mikroskop juga dapat memberikan hasil positif palsu, misalnya,
karena

spirochetes

komensal

dalam

ulserasi

perianal

yang

salah

diklasifikasikan sebagai Treponema pallidum. Hasil positif palsu serologis

juga diketahui terjadi, bahkan jika sejarah pasien diketahui secara rinci.
Dalam penelitian kami, informasi tambahan mengenai riwayat pasien dan
tindak lanjut data menunjukkan bahwa 21 dari 26 kasus sumbang, di mana
individu adalah positif dengan menggunakan algoritma untuk pengaturan GP
dan T. pallidum real-time PCR negatif, memiliki kasus yang diduga sifilis
sekunder atau laten atau memiliki hasil serologi yang berhubungan dengan
pengobatan sifilis sebelumnya. Dari jumlah tersebut 21 kasus, 12 kasus
mengalami infeksi herpes simpleks virus dan 2 kasus lymphogranuloma
venereum punya, yang merupakan penyebab lebih mungkin dari ulserasi.
Dalam empat kasus lain, data serologi dan sejarah tidak meyakinkan dan
hanya dalam satu kasus hasil mikroskop lapangan gelap positif, mendukung
gagasan bahwa kasus itu meleset oleh T. pallidum real-time PCR.
Menggunakan mikroskop lapangan gelap dan algoritma diagnosis klinis, kami
mengamati sejumlah signifikan lebih tinggi dari infeksi HSV-1 dan -2 pada
kelompok pallidum T. real-time PCR-negatif (> 50%) daripada di T. pallidum
real- time PCR positif kelompok (<1%) (Tabel (Table5) .5). Dengan demikian,
untuk kasus di mana T. pallidum real-time hasil PCR negatif, adalah wajar
untuk menganggap bahwa ulserasi (ano) kelamin disebabkan oleh HSV-1
dan / atau HSV-2 (3, 9). Di Amsterdam, adalah praktek standar untuk
melakukan baik pallidum T. dan herpes simplex virus tipe tertentu PCR
dengan sampel usap sama dari bisul. Dalam penelitian ini, 44% kasus yang
diduga menderita sifilis primer termasuk yang ditemukan memiliki HSV-1 atau
infeksi

HSV-2.

Untuk sejumlah besar individu dengan ulkus kelamin, tidak ada agen
penyebab dapat diisolasi, dan dalam penelitian kami ini adalah kasus untuk

40% dari individu-individu, yang sangat sebanding dengan temuan penelitian

lain

(3,

19).

Sifilis sekunder sering terlewat karena keanekaragaman presentasi klinis (2).

Sebaliknya, laboratorium konfirmasi sifilis sekunder tidak rumit, karena
hampir selalu disertai dengan titer antibodi anticardiolipin sangat reaktif.
Akibatnya, kita dievaluasi kami T. pallidum real-time PCR dengan sampel dari
pasien dengan kulit atau lesi mukosa yang dicurigai sebagai sifilis sekunder.
Diagnosis sifilis sekunder dikonfirmasi dengan titer uji RPR dari 1:8.
Meskipun kami menemukan bahwa T. pallidum real-time PCR memiliki
spesifisitas tinggi (98,0%) untuk mendeteksi sifilis sekunder, sensitivitas
adalah mengecewakan rendah (43,0%). Hal ini dapat dijelaskan oleh adanya
beban rendah bakteri pada lesi sifilis paling sekunder dan / atau dengan
metode yang digunakan untuk mendapatkan bahan untuk PCR (kulit
mengorek lesi terabrasi). Berbeda dengan data kami, sebuah studi yang
langsung beku kulit spesimen biopsi dan PCR yang digunakan gen tp47
sebagai target digunakan untuk mendiagnosa sipilis sekunder melaporkan
sensitivitas 75% (4). Berdasarkan rendahnya tingkat kesepakatan, kami
menyimpulkan bahwa T. pallidum real-time PCR tidak memiliki nilai
tambah

untuk

diagnosis

klinis

kasus

sifilis

sekunder.

Singkatnya, T. pallidum real-time PCR adalah tes cepat dan handal

untuk mendeteksi sifilis primer dalam pengaturan klinik rawat jalan IMS,
serta dalam pengaturan dokter umum. Nilai tambah untuk diagnosis
sifilis sekunder tampaknya menjadi terbatas, namun. Diagnosis awal
sifilis

primer

menyebabkan

dimungkinkan
penanganan

oleh
yang

hasil
tepat

PCR
waktu

yang
dan

cepat

akan

pencegahan

perkembangan penyakit, serta pengurangan panjang paparan pasangan

seksual
Ucapan

pasien.
Terima

Kasih

Kami berterima kasih kepada perawat kesehatan masyarakat dari klinik IMS

(Cluster of Infectious Diseases, Amsterdam Pelayanan Kesehatan) untuk

mengumpulkan sampel dan teknisi laboratorium dari Laboratorium Kesehatan
Masyarakat

(Cluster

of

Infectious

Diseases,

Amsterdam

Pelayanan

Kesehatan) untuk menganalisis mereka. Kami juga berterima kasih T.

Heijman untuk bantuan dengan interpretasi data dan I. Evertse untuk
mengedit

naskah

akhir.

Kami dengan ini menyatakan bahwa kita tidak memiliki hubungan komersial
atau lainnya yang mungkin menimbulkan konflik kepentingan mengenai
penelitian

yang

dipresentasikan

dalam

tulisan

Penelitian ini didukung oleh Pusat RIVM untuk Penyakit Infeksi.

ini.