Pengantar Bioteknologi Pertanian

SISTEM VEKTOR INANG

Plasmid

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Copyright Statement:

Dengan ini dinyatakan, bahwa seluruh material (teks,

gambar, grafik dan seluruh alat bantu penjelas lainnya)
bahan kuliah dalam format .ppt sebagaimana tercantum
disini memiliki hak eksklusif intelektual bagi penyusun.
Penggunaan diluar untuk keperluan pembelajaran
sebagaimana disepakati dalam pemberian material harus
mendapatkan izin tertulis dari penyusun dan pelanggaran
dalam hal ini akan dikenakan sanksi hukum sebagaimana
berlaku di Negara Kesatuan Republik Indonesia.

SISTEM VEKTOR - INANG

?
VEKTOR: Media untuk dan memperbanyak dan mentransformasi fragmen DNA

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

PERSYARATAN SUATU VEKTOR:
1. REPLIKASI AUTONOM DALAM INANG
2. BERPENANDA UNTUK SELEKSI
3. BERPOSISI KLONING TUNGGAL
4. BERBERAT MOLEKUL KECIL
5. MEMILIKI BEBERAPA KOPI PADA SETIAP SEL

6. TIDAK BERKONJUGASI
Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

JENIS VEKTOR:
1. PLASMID
2. FAG (FAG M13)
3. KOSMID
4. P1- (PAC) (Plasmide artificial chrom.)
5. BAC (Bacterial artificial chromosome)

6. YAC (Yeast Artificial Chromosome)

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

KAPASITAS TAMPUNG BEBERAPA VEKTOR
Vektor

Inang

Kapasitas kloning

Plasmid

Escherichia coli

~ 5000 bp

Plasmid

Saccharomyces cerevisiae

~ 5000 bp

Plasmid

Bacillus subtilis

~ 5000 bp

-Phage

Escherichia coli

9 23 kb

Cosmid

Escherichia coli

30 48 kb

P1-(PAC)

Escherichia coli

85 110 kb

BAC

Escherichia coli

30 350 kb

YAC

Saccharomyces cerevisiae

50 kb 2 Mb

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

PLASMID: DNA EKSTRAKROMOSOMAL BERBENTUK
SIRKULAR TERTUTUP, BERPITA GANDA,
UKURAN 1 200 kb.

KROMOSOMAL DNA

PLASMID

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

Kendali replikasi plasmid

- Kontrol ketat (stringed control)

- Kontrol longgar (relaxed control) (10-200

kopi)

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

Eco RI

Kpn I Sma I Bam HI Xba I Sal I Hind III

MCS = Multicloning Site

P O Z
lac

Km

pBin19
10 kb

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

KLONING DALAM PLASMID
Bam HI
Eco RI

Bam HI

Bam HI

Kpn I Sma I Bam HI Xba I Sal I Hind III

MCS = Multicloning Site

DNA Asing
P O Z
lac

Km

pBin19
10 kb

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

DNA Asing

Km

DNA Ligase

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

DNA Asing

Km

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

PENYUSUNAN PUSTAKA DNA

Km

10 11 12

A
B
C
D
E
F
G
H
Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

ISOLASI DNA PLASMID

CENTRIFUSE

Tris, Buffer EDTA

NaOH dan SDS

PELLET

Km

CENTRIFUSE

Km
Km

Km

Km

Km

Km

Km

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

Bioteknologi Tanaman

SISTEM VEKTOR - INANG

Analisis DNA Plasmid dan insersi

Sumber: Jamsari

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA

PENAMPILAN DNA PLASMID STLH DIISOLASI

Bioteknologi Tanaman

SELESAI

Dr. Jamsari, Prog. Studi Pemuliaan Tanaman Jurusan BDP-FPUA