MORFOLOGI DAN PERUBAHAN

BIOKIMIA DALAM OTOT UDANG LAUT

LITOPENAEUS VANNAMEI
SELAMA SIKLUS GANTI KULIT
(MOLTING)
 MORFOLOGI UDANG
 Udang termasuk kedalam golongan crustacea dan
dikelompokkan kedalam hewan berkaki sepuluh
(decapoda)
 Semua badan terdiri dari ruas ruas yang tertutup oleh
kulit keras yang mengandung zat khitin
 Tubuh terbagi menjadi 3 bagian : Cephalothorax,
abdomen dan ekor
 MOLTING ( I )
 Molting atau pergantian kulit terjadi secara alamiah pada
udang.
 Proses molting dipengaruhi oleh dua organ yaitu organ X
dan organ Y
 Organ X : menghasilkan MIH (Molt Inhibiting
Hormone)
 Organ Y : menghasilkan hormon molting “ecdysone”

 Proses molting pada udang muda (kecil) frekuensinya

lebih sering dibanding dengan udang dewasa (besar)
 MOLTING ( II )
 Tahap molting
 Proecdysis : Tahappersiapan molting
 Ecdysis : Tahap terjadinya molting
 Metectdysis : Pemindahan mineral kalsium dari
Gastrolith sebagai pembentuk
kerangka luar
 Intermolt : Tahap Antar Molting
 BAHAN DAN METODE
 Bahan dan metode yang digunakan (10) :
 Hewan (animals)
 Molt staging
 Histologi otot
 Kandungan air
 Kelarutan total protein
 Kuantifikasi DNA
 Kuantifikasi RNA
 Pemisahan dan Kuantifikasi protein otot
 Analisis Statistik
 HEWAN (UDANG)
 Udang hidup dan diaklimatisasi kedalam tangki 80 L air
laut yang disaring dengan dilengkapi sistem aerasi dan
biofilter
 Untuk mengamati frekuensi molting, udang dipisahkan
berdasarkan umur (1, 3, dan 6 bulan) dan dimasukkan
kedalam nampan plastik
 Pakan komersial diberikan sehari sekali secara ad
libithum
 Kualitas air dipertahankan pada level suhu 28 +/- 2 C,
salinitas 35%o +/- 3 %o
 MOLT STAGING
 Secara singkat udang dibius dengan ditempatkan pada
air laut dingin (14 C) sekitar 1 menit dan kemudian
dikeringkan
 HISTOLOGI OTOT
 Otot sampel diambil dari udang berumur 3 bulan
 Otot dibekukan dalam nitrogen cair (10 detik) dan
disimpan dalam freezer (-80 C) untuk pemeriksaan lebih
lanjut.
 Dilakukan Cross-sectioning pada suhu (-20 C) dengan
menggunakan (IEC Criostat Microtome)
 Bagian tubuh (6 mikrometer) diletakkan dalam kaca
preparat dan diamati dengan hematosiklin dan eosin.
Diamati diabwah mikroskop dengan perbesaran 100x
 KANDUNGAN AIR
 Jumlah air dihitung berdasarkan perbedaan berat
jaringan masih segar dengan jaringan yang sudah kering
dari proses inkubasi semalam dengan suhu 65 C.
Kandungan air dapat dihitung dengan rumus :

Ww− Dw / Ww x 100
 Dimana :
 Ww = berat basah
 Dw = berat kering
 KELARUTAN TOTAL PROTEIN
 Jaringan polytron-homogenized (500 mikro liter)
dikombinasikan dengan Coomasie Briliant Blue G die
(Biorad). Absorbansi dengan spektrofotometer sebesar
595 nm
 Jumlah protein dihitung berdasarkan perbandingan
konsentrasi ultrapure bovine plasma gama globulin yang
diketahui
 DNA QUANTIFICATION
 Jaringan homogenized-polytron 1 g dimasukkan dalam
TNE buffer (5 ml) dan dicampurkan kedalam 2x Hoecst
33258 dye (BioRad) dan fasa DNA. Kemudian diukur
dengan Fluorescent spektrofotometer (Hitachi F-2500).
 Eksitasi350 nm
 Panjang gelombang 450 nm

 Konsentrasi DNA dihitung dengan membandingkan

konsentrasi DNA sperma salmon sonicated standar.
 RNA QUANTIFICATION
 Total RNA diekstrak menggunakan TRIZOL tm
(Invitrogen) dan diukur dengan spektrofotometer
dengan absorbansi 260 nm
 Perbandingan RNA / protein digunakan sebagai indikator
kemampuan hewan dalam mensintesis protein.
 PEMISAHAN SDS – PAGE DAN PROTEIN
OTOT QUANTIFICATION
 Sampel disentrifuge selama 15 menit dengan suhu 25 C
(1500 rpm) kemudian dilarutkan dengan 3 x Laemli
Loading Buffer dan diencerkan dengan konsentrasi akhir
10 mg / ml.
 Sampel ditempatkan dalam dalam air mendidih selam 90
sec, diikuti dengan pendinginan secara cepat diatas es.
 Aliquots (30 mikroliter) dimasukkan kedalam Tris –
HCL pre casted Gel 4-20 %. Lalu di running pada 30 mA
selama 4 jam.
 Identifikasi Myosin Heavy Chain (MHC) dan actin
berdasarkan ukuran actual band.
 ANALISIS STATISTIK
 Data dianalisis dengan one – way ANOVA menggunakan
paket statistik perangkat lunak Excel dengan alfa 5%
HASIL
Molt Stagging
GAMBAR 1.
 Panah pada gambar udang poin kiri atas wilayah dari
endopodite dari uropod digunakan untuk setogenesis.
Dari A ke E:
 Tahap A (postmolt awal), panah menunjuk ke lumen
setal diisi dengan matriks setal;
 Tahap B (postmolt terlambat), panah menunjukkan
pencabutan dari matriks setal dan awal pembentukan
kerucut internal;
 Tahap C (intermolt), arrow mengungkapkan lumen setal
kosong, catatan kromatofora diperluas;
 Tahap D0 (onset premolt), panah menunjukkan
terjadinya pemisahan kutikula dan epidermis;
 Tahap D1 (awal premolt), panah menunjuk ke
peningkatan ruang antara kutikula dan epidermis;
 Tahap D2 (premolt intermediate), anak panah
menunjukkan besar ruang gelap antara kutikula dan
epidermis, panah putih menunjukkan rincian yang baru
terbentuk setae;
 D3 Stage (premolt terlambat), setae baru benar-benar
membentuk dan melipat di bawah karapas tua;
 Tahap E (meranggas), karapas tua menumpahkan
mengungkapkan karapas baru dan setae baru.
PERTUMBUHAN DAN FREKUENSI
MOLTING
GAMBAR 2.
 siklus ganti kulit yang lebih cepat adalah diamati pada
udang yang berumur 1 bulan (4,6 ± 0,5 hari / siklus).
Udang menunjukkan siklus molting lambat pada tiga
bulan dengan 11,8 ± 1,7 hari / siklus, mencapai frekuensi
terendah pada usia enam bulan (17,2 ± 2,7 hari / siklus)
 seperti ditunjukkan pada Gambar. 2. Variasi pada
frekuensi meranggas dalam kelompok juga meningkat
dengan usia.
HISTOLOGI OTOT
GAMBAR 3.
 Cross-sectional area (CSA) berubah tampak atas siklus
molting.
 Selama postmolt, CSA berkurang dan dinding serat
kontrak dalam tahap A.
 Pada fase molting B, CSA meningkat seiring dengan
diperluas dan serat dinding menggelembung.
 Sepanjang intermolt (tahap C), serat sepenuhnya
diperluas dan dinding serat sama sekali bengkak.
LANJUT…
 Pada awal premolt (D0 panggung), CSA menunjukkan
sedikit penurunan pada serat otot dan serat dinding
disajikan dengan menyusut terdeteksi.
 Di seluruh awal dan menengah premolt (tahap D1 dan
D2), CSA terus berkurang, serat mengungkapkan
perataan.
 Pada akhir premolt (D3 panggung), volume internal serat
adalah berkurang secara dramatis dan dinding serat yang
kusut.
WATER CONTENT, TOTAL KELARUTAN
PROTEIN, DNA DAN RNA QUANTIFICATION
 Kadar air, Total Kelarutan Protein tidak berfluktuasi
secara signifikan terhadap molting. Dapat dilihat pada
tabel 1 di jurnal.
PERUBAHAN PROTEIN OTOT SELAMA
SIKLUS MOLTING
Actin dan Myosin
GAMBAR 4.
 tingkat aktin mencapai nilai maksimum pada tahap
intermolt (C), semakin menurun terhadap premolt (D0,
D1, D2) dan meningkatkan terus di postmolt (A, B).
Myosin tingkat meningkat dari postmolt untuk intermolt,
dan penurunan selama premolt