Nama Kelompok : 1.

Nura Khoiriyah (18123577A)

2. Monica Shely Mahardika (18123587A)

3. Dian Fitriyana Ulfah (18123633A)

Bioproduction of diosgenin in callus cultures of Trigonella

foenum-graecum L.
Bahan tanaman

Benih Trigonella foenum-graecum yang disediakan oleh Plantaforma, Leo n

(Spanyol), dan disterilkan dengan merendam etanol 100 % selama 1 menit dan
kemudian dalam larutan domestos 20% v / v selama 15 menit. Dibilas beberapa
kali dalam air steril sebelum ditanamkan pada 0,7% b / v
media agar. Dipertahankan pada suhu 25 C dengan cahaya kontinyu. Setelah 2
atau 3 hari benih berkecambah dipindahkan ke medium Murashige dan Skoog.

Metode :

1. Kultur kalus dan pengukuran pertumbuhan

Menggunakan enam media kultur yang berbeda untuk menumbuhkan eksplan.
Tipe I terdiri dari dasar Murashige dan Skoog (1962) dilengkapi dengan media
santan (dikumpulkan dari kelapa tua segar) (150 ml l-1).
Tipe II terdapat medium dasar yang sama tetapi dilengkapi dengan ekstrak malt
(Sigma) (500 mg l-1).
Tipe III digunakan media basal Whites (Putih, 1943) suplementasi diimbangi
dengan santan (150ml l-1).
Tipe IV digunakan White media basal dilengkapi dengan ekstrak malt (500 mg l-
1
).
Tipe V digunakan media Gamborgs (Gamborg & Wetter, 1975) dengan santan
(150 ml l-1).
Tipe VI digunakan media Gamborgs dilengkapi dengan ekstrak malt (500 mg l-
1
).
Agar (0,7%) dan NAA (3 x 10-6 M) ditambahkan dalam semua kasus dan pH
disesuaikan dengan 5,8. Semua jenis media disterilisasi pada suhu 121 C selama
20 menit. Jaringan disubkultur pada interval 3 minggu.

2. Isolasi dan pengukuran diosgenin

Pada waktu yang berbeda, 2 g kalus digunakan untuk isolasi dioscin, yang
kemudian dihidrolisis untuk dios-Genin mengikuti metode Sauvaire dan Baccou
(1978) dan dioptimalkan untuk kondisi pengerjaan. Analisis dilakukan dengan
Hew-lett Packard kromatografi cair (Model HP 1050)
dengan detektor diode-array (kisaran scan: 190 500 nm). Fase balik pemisahan
kromatografi adalah dilakukan pada mBondapak C18 (5 mm, 250x 4,6 mm id)
kolom isocratically, menggunakan campuran asetonitril: air (90:10 v / v) pada 1
ml / menit pada 35C. Perubahan dalam absorbansi pada 214 nm dicatat.
Diosgenin dibandingkan dengan standar eksternal.
3. Bahan kimia
Diosgenin dibeli dari Sigma.