7.modul KK G Kultur Jaringana ATPH OK

MODUL
KEAHLIAN GANDA
PEMBIAKAN TANAMAN SECARA KULTUR JARINGAN

KELOMPOK KOMPETENSI G
SEKOLAH MENENGAH KEJURUAN (SMK)
PAKET KEAHLIAN AGRIBISNIS TANAMAN PANGAN DAN

HORTIKULTURA
Penulis: Ir.Susilowati EW, MP

Revisi: Sukamto, SP., MP
DIREKTORAT JENDERAL GURU DAN TENAGA KEPENDIDIKAN

KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN KEBUDAYAAN
TAHUN 2017
Penulis:
Ir. SusilowatiEW, MP
Penelaah:
Ir. Erina Sulistiani, MSi
Ilustration
-----------------
Copyright @2016
Pusat Pengembangan dan Pemberdayaan Pendidik dan Tenaga Kependidikan
Bidang Pertanian, Direktorat Jenderal Guru dan Tenaga Kependidikan
Hak Cipta Dilindungi Undang-Undang
Dilarang mengcopy sebagian atau keseluruhan isi buku untuk kepentingan
komersial tanpa izin tertulis dari Kementrian Pendidikan Kebudayaan
Modul Keahlian Ganda- Paket Keahlian Pembiakan Tanaman Secara Kultur Jaringan
KATA PENGANTAR
Peran guru profesional dalam proses pembelajaran sangat penting sebagai kunci
keberhasilan belajar siswa. Guru professional adalah guru yang kompeten
membangun proses pembelajaran yang baik sehingga dapat menghasilkan
pendidikan yang berkualitas. Hal tersebut menjadikan guru sebagai komponen
yang menjadi fokus perhatian pemerintah pusat maupun pemerintah daerah
dalam peningkatan mutu pendidikan terutama menyangkut kompetensi guru.
Dalam rangka meningkatkan daya saing regional dan melaksanakan Instruksi

Presiden Nomor 9 Tahun 2016 tentang Revitalisasi Sekolah Menengah Kejuruan
(SMK), Direktorat Jenderal Guru dan Tenaga Kependidikan (Ditjen GTK)
Kementerian Pendidikan dan Kebudayaan berupaya meningkatkan jumlah dan
komposisi guru SMK. Untuk itu, Ditjen GTK telah melakukan analisis kebutuhan
guru produktif SMK. Salah satu upaya pemerintah, untuk memenuhi guru
produktif di SMK adalah dengan memberikan pembekalan pengetahuan dan
keterampilan kompetensi keahlian baru. Penambahan pembekalan pengetahuan
dan keterampilan produktif baru yang dibutuhkan SMK diberikan kepada guru-
guru normatif, adaptif dan produktif dengan tingkat kejenuhan sangat tinggi
(jumlah lebih) melalui Program Sertifikasi Keahlian dan Sertifikasi Pendidik bagi
Guru SMK/SMA (Keahlian Ganda).
Pusat Pengembangan dan Pemberdayaan Pendidik dan Tenaga Kependidikan

(PPPPTK), Lembaga Pengembangan dan Pemberdayaan Pendidik dan Tenaga
Kependidikan Kelautan Perikanan Teknologi Informasi dan Komunikasi (LP3TK
KPTK), dan Lembaga Pengembangan dan Pemberdayaan Kepala Sekolah (LP2KS)
merupakan Unit Pelaksana Teknis di Lingkungan Direktorat Jendral Guru dan
Tenaga Kependidikan yang bertanggung jawab dalam mengembangkan perangkat
dan melaksanakan peningkatan kompetensi guru sesuai bidangnya. Adapun
perangkat pembelajaran yang dikembangkan tersebut adalah modul untuk
Program Guru Keahlian Ganda untuk semua mata pelajaran dan kelompok
kompetensi. Dengan modul ini diharapkan dapat memberikan sumbangan yang
2017 i
sangat besar dalam peningkatan kualitas kompetensi produktif Guru Keahlian

Ganda.
Mari kita sukseskan program Guru Keahlian Ganda ini untuk mewujudkan Guru
Mulia Karena Karya
Jakarta, Pebruari 2017

Direktorat Jenderal
Guru dan Tenaga Kependidikan
Sumarna Surapranata, Ph.D

Nip. 195908111985032001
2017 ii
DAFTAR ISI
Hal
KATA PENGANTAR ………………………………………………………………………………….. i

DAFTAR ISI ………………………………………………………………………..……………………. ii
DAFTAR GAMBAR …………………………………………………………………………………… vi
DAFTAR TABEL ……………………………………………………………………………………… vii
PENDAHULUAN ………………………………………………………………………………………. 1
A Latar Belakang ………………………………………………………………………………… 1
B Tujuan …………………………………………………………………………………………….. 3
C Peta Kompetensi ……………………………………………………………………………… 3
D Ruang Lingkup ………………………………………………………………………………… 3
E Cara Penggunaan Modul ………………………………………………………………….. 4
KEGIATAN PEMBELAJARAN 1 5
KONSEP KULTUR JARINGAN TANAMAN

A Tujuan ……………………………………………………………………………………………. 5
B Indikator Pencapaian Kompetensi …………………………………………………… 5

C Uraian Materi ……………………………..……………………………………… 5
1 Pengertian kultur jaringan dan terminologi dalam kultur jaringan 5
……
2 Sejarah kultur jaringan ……………………………………………………………. 7
3 Manfaat kultur jaringan …………………………………………………………… 10
4 Lingkup kegiatan kultur jaringan …………………………………………….. 12
5 Laboratorium kultur jaringan …………………………………..……………… 13
6 Peralatan kultur jaringan ………………………………………………………... 14
7 Keterampilan dan pengetahuan penting dalam kegiatan kultur 18

jaringa
D Aktifitas Pembelajaran …………………………………………………………………….. 21
E Latihan Soal ……………………………………………………………………………………. 24
F Rangkuman ……………………………………………………………………………………. 25
G Umpan Balik dan Tindak Lanjut ………………………………………………………. 27
2017 iii
KEGIATAN PEMBELAJARAN 2
28
MEDIA TANAM KULTUR JARINGAN TANAMAN
A Tujuan …………………………………………………………………………………………… 28
B Indikator Pencapaian Kompetensi …………………………………………..……… 28
C Uraian Materi ………………………………………………………………………………… 28
1. Komponen-komponen dalam media kultur jaringan …………………… 28
2. Komposisi dasar media kultur jaringan ……………………………………… 29

3. Larutan stok ……………..………………………………………………………………. 30
4. Media kultur ……………………………………………………………………………… 36
D Aktifitas Pembelajaran …………………….…………………………………………….. 39
E Latihan Soal ………………………………………………………………………………….. 44
F Rangkuman …………………………………………………………………………………… 46
G Umpan Balik dan Tindak Lanjut ……………………………………………………… 48
KEGIATAN PEMBELAJARAN 3 49
PENANAMAN
A Tujuan ……………………………………………………………………………………………. 49
B Indikator Pencapaian Kompetensi …………………………………………………… 49
C Uraian Materi …………………………………………………………………………………. 49
1. Inisiasi eksplan ………………………..…………………………………………………. 51
2. Subkultur inokulum. ………………………………..…………………………………. 57
3. Penggandakan inokulum. …………………………………………………………… 60
4. Regenerasi inokulum. ………………………………………………………………… 62
5. Induksi perakaran inukulum. ……………………………………………………… 63
6. Pengelolan ruang pertumbuhan………………………..…………………………. 64
7. Aklimatisasi ……………………….……………………………………………………….. 68
8. Keselamatan dan kesehatan kerja (K3) ……………………………………….. 73
D Aktifitas Pembelajaran ……………………………………………………..…………….. 82

E Latihan Soal …………………………………………………………………………………… 88
F Rangkuman …………………………………….……………………………………………… 90
2017 iv
G Umpan Balik dan Tindak Lanjut ……………………………………………..………. 93
GLOSARIUM …………………………………………………………………………………………. 94
PENUTUP …………………………………………………………………………………………….. 96
DAFTAR PUSTAKA …………………………………..…………………………………………… 97
2017 v
DAFTAR GAMBAR
HAL
1. Gambar 1. Ruang penanaman ……………………………………………………………. 17
2. Gambar 2. Ruang pertumbuhan ………………………………………………………… 17
3. Gambar 3. Ruang pertumbuhan ………………………………………………………… 17
4. Gambar 4. Autoclave …………………………………..…………………………………….. 19
5. Gambar 5. Peralatan gelas ………………………………………………………………… 19
6. Gambar 6. Timbangan analitis …………………………………………………………… 20
7. Gambar 7. Laminar air flow cabinet …………………………………………………… 20
8. Gambar 8. Eksplan pucuk/ daun ……………………………………………………….. 52
9. Gambar 9. Pemotongan eksplan pisang ……………………………………………… 55
10. Gambar 10. Layout meja penanaman ………………………………….…………….. 57
11. Gambar 11. Layout meja penanaman ………………………………….….…………. 57
12. Gambar 12. Kegiatan subkultur ………………..……………………….…….………… 60
13. Gambar 13. Ruang pertumbuhan ………………………………………….………….. 65
14. Gambar 14. Penataan botol kultur panjang ………………………………..……… 65
15. Gambar 15. Penataan botol kultur pendek ……………………………..………… 66
16. Gambar 16. Pisau scalpel dan gagang scalpel ……………………………………. 77
17. Gambar 17. Bahan kimia ………………………………………….………………………. 77
18. Gambar 18. Kegiatan subkultur …………………………………….…………………. 78
2017 vi
DAFTAR TABEL
HAL
1. Tabel 1. Formulasi media kultur jaringan (NN, MS, B5) ………………………… 30
2. Tabel 2. Kebutuhan larutan stok untuk media MS …………….………………….. 33
3. Tabel 3. Bahan sterilisasi eksplan dan penggunaannya ……….………………… 54
2017 vii
I. PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Seperti yang diamanahkan dalam Undang Undang Republik Indonesia

Nomor 20 Tahun 2003 tentang Sistem Pendidikan Nasional bahwa
pendidikan nasional berfungsi mengembangkan kemampuan dan
membentuk watak serta peradaban bangsa yang bermartabat dalam
rangka mencerdaskan kehidupan bangsa, bertujuan untuk
mengembangkan potensi peserta didik agar menjadi manusia yang
beriman dan bertakwa kepada Tuhan Yang Maha Esa, berakhlak
mulia, sehat, berilmu, cakap, kreatif, mandiri, dan menjadi warga
negara yang demokratis serta bertanggung jawab.
Pendidikan sebagai sebuah sistem merupakan keseluruhan komponen

pendidikan yang saling terkait secara terpadu untuk mencapai tujuan
pendidikan nasional. Komponen-komponen dalam sistem pendidikan
antara lain adalah tujuan pendidikan, peserta didik, pendidik, sarana
prasarana pendidikan, dan metode pendidikan. Berbicara tentang
pendidikan tentunya tidak akan terlepas dari pendidik yang salah satu
unsurnya adalah guru. Guru adalah pendidik profesional dengan tugas
utama mendidik, mengajar, membimbing, mengarahkan, melatih,
menilai, dan mengevaluasi peserta didik pada pendidikan anak usia
dini jalur pendidikan formal, pendidikan dasar, dan pendidikan
menengah. Dalam menjalankan tugasnya guru wajib memiliki
kualifikasi akademik, kompetensi, sertifikat pendidik, sehat jasmani
dan rohani, serta memiliki kemampuan untuk mewujudkan tujuan
pendidikan nasional. Adapun kompetensi guru berdasarkan
Permendiknas no 16 tahun 2007 tentang standar kompetensi dan
2017 1
kualifikasi guru, meliputi dimensi kompetensi pedagogi, kepribadian,

sosial, dan profesional.
Di sisi lain masih terdapat berbagai masalah yang berkaitan dengan

kondisi guru yaitu antara lain adalah 1. Adanya keberagaman kondisi
kemampuan guru dalam proses pembelajaran, 2. Belum sempurnanya
alat ukur untuk mengetahui kemampuan guru, 3. Pelatihan dan
pembinaan yang diberikan kepada guru belum sepenuhnya sesuai
dengan kebutuhan guru.
Berkaitan dengan peningkatan kompetensi guru pada tahun 2015 ini

pemerintah akan melakukan pemetaan kompetensi guru melalui uji
kompetensi guru. Berdasarkan hasil uji kompetensi guru tersebut
diharapkan dapat menunjukkan data peta kompetensi guru terletak
pada grade yang mana sehingga dari data tersebut akan
ditindaklanjuti peningkatan kompetensinya melalui modul-modul dan
pelatihan-pelatihan yang sesuai.
Pusat Pengembangan dan Pemberdayaan Pendidik dan Tenaga

Kependidikan (PPPPTK) adalah unit pelaksana teknis Kementerian
Pendidikan dan Kebudayaan di bidang pengembangan dan
pemberdayaan pendidik dan tenaga kependidikan yang mempunyai
tugas melaksanakan pengembangan dan pemberdayaan pendidik dan
tenaga kependidikan sesuai dengan bidangnya. Atas dasar kebutuhan
peningkatan kompetensi guru tersebut maka pada tahun anggaran
2015 ini PPPPTK Pertanian melaksanakan penyusunan 10 grade
Modul Diklat PKB bagi Guru Agribisnis Tanaman Pangan dan
Hortikultura. Dalam modul ini difokuskan pada Modul Diklat PKB
Agribisnis Tanaman Pangan dan Hortikultura Grade 7 (Kelompok
2017 2
Kompetensi G) yang difokuskan pada Pembiakan Tanaman secara

Kultur Jaringan.
Adapaun lingkup materi yang dibahas dalam Modul Diklat PKB

Agribisnis Tanaman Pangan dan Hortikultura Kelompok Kompetensi
G (KK G) yang difokuskan pada Pembiakan Tanaman secara Kultur
Jaringan ini meliputi konsep pembiakan tanaman secara kultur
jaringan, media tanam kultur jaringan, cara inokulasi eksplan,
menumbuhkan eksplan, mengaklimatisasikan plantlet, dan
keselamatan kerja dalam kultur jaringan. Modul ini diharapkan dapat
mengobati kompetensi guru yang masih lemah dalam bidang
pembiakan tanaman secara kultur jaringan sehingga jika pada
kesempatan yang akan datang dilakukan uji kompetensi lagi
diharapkan hasil nilai uji kompetensi guru dalam bidang pembiakan
tanaman secara kultur jaringan dapat meningkat sesuai dengan yang
ditargetkan oleh pemerintah.
B. Tujuan
Melalui kegiatan pengamatan, diskusi, dan pengumpulan informasi,

pengguna modul ini akan mampu:
1. Menganalisis konsep dasar pembiakan tanaman secara kultur
jaringan dengan benar secara keilmuan.
2. Membuat media kultur jaringan tanaman sesuai dengan jenis dan
fase pertumbuhan tanaman.
3. Melakukan penanaman sesuai prosedur yang benar.
4. Memelihara eksplan yang telah ditanam di ruang pertumbuhan
yang sesuai.
2017 3
A. Peta Kompetensi
KELOMPOK JUDUL
KOMPETENSI
A Dasar-dasar Pembiakan Tanaman Pangan dan
Hortikultura
B Pembiakan Tanaman Pangan dan Hortikultura
C Agribisnis Tanaman Pangan dan Palawija
D Agribisnis Tanaman Sayuran dan Buah
Semusim
E Agribisnis Tanaman Hias
F Agribisnis Tanaman Buah Tahunan
G Pembiakan Tanaman Hortikultura Secara
Kultur Jaringan
H Pengelolaan lahan tanaman pangan dan
hortikultura
I Pengelolaan Agribisnis Tanaman Pangan dan
Hortikultura
J Pengembangan Agroteknologi Tanaman
Pangan dan Hortikultura
C. Ruang Lingkup
Sesuai dengan tujuan yang diharapkan dapat dicapai maka ruang

lingkup modul ini meliputi:
1. Konsep dasar pembiakan tanaman secara kultur jaringan.
2. Fasilitas laboratorium dan peralatan kultur jaringan tanaman
3. Media kultur jaringan tanaman.
4. Penanaman.
5. Pemeliharaan eksplan.
6. Aklimatisasi plantlet.
7. Keselamatan dan kesehatan kerja di laboratorium kultur jaringan.
2017 4
D. Cara Penggunaan Modul
Modul ini berisi materi-materi yang mendukung tentang pembiakan

tanaman secara kultur jaringan yang terkait dengan mata pelajaran
pembiakan tanaman pada kelompok dasar program keahlian
agribisnis tanaman. Agar bapak/ibu dapat menguasai isi modul
dengan baik maka berikut adalah langkah-langkah penggunaan modul
yang harus diterapkan:
1. Bacalah isi modul ini dengan seksama secara berurutan dari
halaman ke halaman.
2. Kerjakan dengan teliti dan lengkap secara berurutan semua
latihan/ tugas/ kasus yang disajikan pada setiap kegiatan
pembelajaran dalam modul ini.
3. Bapak/ ibu tidak diperbolehkan mempelajari kegiatan
pembelajaran berikutnya jika bapak/ ibu belum menguasai bab
sebelumnya.
2017 5
KONSEP KULTUR JARINGAN TANAMAN
A. Tujuan
Setelah mempelajari materi dan berdiskusi peserta pelatihan dapat

menganalisis konsep dasar dan tahapan pembiakan tanaman secara
kultur jaringan dengan teliti sesuai dengan struktur dan konsep keilmuan
bidang kultur jaringan tanaman.
B. Indikator Pencapaian Kompetensi

Melalui kegiatan pengamatan, pengumpulan informasi, dan diskusi
bapak/ibu dapat:
1. Menjelaskan terminologi yang digunakan dalam kultur jaringan
tanaman dengan benar.
2. Menjelaskan manfaat kultur jaringan dalam bidang pertanian
dengan benar.
3. Menjelaskan tahapan kultur jaringan dengan benar
4. Menjelaskan lingkup kegiatan kultur jaringan sesuai tahapan-
tahapan kerja pembiakan tanaman secara kultur jaringan.
5. Pengetahuan dan keterampilan penting dalam kegiatan kultur
jaringan
6. Menjelaskan persyaratan laboratorium kultur jaringan tanaman
dengan benar.
7. Mengidentifikasi peralatan kultur jaringan sesuai dengan
fungsinya.
2017 6
C. Uraian Materi.
1. Pengertian kultur jaringan dan terminologi dalam kultur

jaringan.
Kultur jaringan tanaman adalah suatu metode atau teknik
mengisolasi bagian tanaman (protoplasma, sel, jaringan, dan
organ) dan menumbuhkannya pada media buatan dalam
kondisi aseptik di dalam ruang yang terkontrol sehingga
bagian-bagian tanaman tersebut dapat tumbuh dan
berkembang menjadi tanaman lengkap. Penggunaan teknik
kultur jaringan pada awalnya hanya untuk membuktikan teori
“totipotensi” (“total genetic potential”) yang dikemukakan oleh
Schleiden dan Schwann (1838) yang menyatakan bahwa sel
tanaman sebagai unit terkecil dapat tumbuh dan berkembang
apabila dipelihara dalam kondisi yang sesuai.
Dalam pembiakan tanaman secara kultur jaringan ada

beberapa terminologi yang perlu diketahui yaitu:
a. Eksplan adalah bagian dari tanaman yang digunakan
sebagai bahan tanaman yang diinisiasi dalam kultur
jaringan.
b. Subkultur adalah pemindahan inokulum dari suatu media
ke media lain, baik media yang sama atau berbeda.
c. Inokulum adalah bahan tanam yang diambil pada setiap
subkultur.
d. Plantlet adalah tanaman lengkap hasil regenerasi dalam
kultur jaringan yang belum diaklimatisasikan.
e. Masa aklimatisasi adalah masa adaptasi plantlet dari
lingkungan in vitro ke lingkungan ex vitro
2017 7
f. Organogenesis adalah proses terbentuknya organ-organ

seperti pucuk dan akar dari jaringan eksplan yang tidak
memiliki jaringan meristematik
g. Embriogenesis somatik adalah proses terbentuknya
embrio somatik.
h. Embrio somatik adalah embrio yang berasal bukan dari
zygot tetapi dari sel biasa dari tubuh tanaman.
i. Regenerasi adalah kemampuan untuk memperbaiki diri
pada jaringan atau organ yang rusak.
Perkembangan teknik kultur jaringan diawali ketika pada

tahun 1838 Schwann dan Schleiden mengemukakan teori
totipotensi yang menyatakan bahwa sel-sel bersifat otonom
dan mampu melakukan regenerasi. Kemudian pada awal abad
20 Haberlandt menyatakan bahwa jaringan tanaman dapat
diisolasi dan dikulturkan hingga berkembang menjadi tanaman
sempurna dengan cara melakukan manipulasi terhadap
keadaan lingkungan maupun nutrisinya. Pada tahun 1934
White berhasil melakukan perbanyakan tanaman secara
vegetatif melalui kultur akar tanaman tomat. Tahun 1939
Gautheret, Nobecourt, dan White berhasil menumbuhkan kalus
tembakau dan wortel secara in vitro.
Sejalan dengan teknik pembiakan secara in vitro tersebut pada

tahun 1934 Kogl dan Haagen-Smith telah menemukan auksin
IAA. Tahun 1955 Miller dan koleganya berhasil menemukan
cytokinin (kinetin). Penemuan-penemuan hormon tersebut
merupakan peluang besar bagi perkembangan kultur jaringan
selanjutnya.
2017 8
Pada tahun 1960 Morel telah menemukan prosedur

perbanyakan tanaman anggrek Cymbidium secara in vitro,
kemudian tahun 1962 Murashige and Skoog telah
memformulasikan komposisi medium dengan konsentrasi
garam mineral yang tinggi. Meningkatnya penelitian tentang
kultur jaringan sampai sat ini telah memberikan sumbangan
yang tak ternilai di bidang perkembangan pertanian khususnya
untuk perbanyakan tanaman dan perbaikan gen.
Perkembangan yang pesat tentang teknik kultur jaringan di
seluruh penjuru dunia mulai terjadi sejak 1980 sampai
sekarang.
2. Manfaat kultur jaringan.

Sampai saat ini sudah terbukti banyak sekali manfaat teknik kultur
jaringan dalam bidang pertanian seperti berikut ini.
a. Dapat dihasilkan bibit dalam jumlah besar.

Melalui teknik kultur jaringan, sel/jaringan/ bagian kecil dari
tanaman dapat diinduksi agar beregenerasi menjadi tanaman
lengkap lagi sehingga dari bagian tanaman yang sangat
kecilpun dapat dihasilkan banyak sekali bibit.
b. Dapat dihasilkan bibit yang memiliki sifat seperti induknya.

Melalui teknik kultur jaringan tanaman dapat dilakukan
pembiakan melalui bagian vegetatif tanaman sehingga bibit
yang dihasilkan memiliki sifat genetik yang sama dengan
induknya.
c. Dapat dihasilkan bibit yang seragam.

Melalui teknik kultur jaringan dapat dihasilkan bibit yang
secara genotip seragam karena dapat dibiakkan secara
vegetatif sehingga bibit yang dihasilkan memiliki sifat
2017 9
seperti induknya dengan catatan tidak ada penyimpangan

akibat terjadinya mutasi. Selain itu melalui teknik kultur
jaringan juga dapat dihasilkan bibit dengan ukuran
morfologis yang sama. Sebagai contoh jika kita
memerlukan bibit pisang dalam jumlah yang banyak pasti
kalau mencari anakan pisang sulit diperoleh yang
ukurannya sama, sedangkan melalui teknik kultur jaringan
dapat diperoleh bibit pisang yang ukurannya sama.
d. Dapat dihasilkan bibit bebas virus.

Melalui kultur meristem dapat dihasilkan bibit tanaman
yang bebas virus. Jaringan meristem adalah jaringan pada
tanaman yang sel-selnya bersifat embrional yang mampu
terus menerus membelah diri untuk menambah jumlah sel
tubuhnya. Suatu tanaman yang sudah terserang virus maka
seluruh jaringan tanaman tersebut biasanya sudah
terkontaminasi oleh virus kecuali bagian meristemnya.
Oleh karena itu jika bagian meristem tersebut dikulturkan
maka dapat menghasilkan bibit baru yang bebas dari virus.
Seorang ahli mengatakan bahwa bagian meristem tersebut
belum terkena virus karena pertumbuhan sel meristem
lebih cepat dibandingkan pertumbuhan virusnya.
e. Dapat dihasilkan bibit sepanjang waktu.

Pembiakan tanaman melalui teknik kultur jaringan dapat
dilakukan sepanjang waktu karena dilakukan di
laboratorium, dimana cahaya, suhu, dan kelembaban yang
diperlukan tanaman dapat dikendalikan sehingga tidak
tergantung dengan musim.
2017 10
f. Dapat untuk memperbanyak tanaman yang sulit

dikembangkan secara vegetatif atau generatif.
Teknik kultur jaringan dapat digunakan untuk
memperbanyak tanaman-tanaman yang sulit
dikembangkan secara vegetatif atau generatif karena
sehingga memiliki sifat sama dengan induknya.
g. Dapat dihasilkan tanaman poliploid.

Melalui kultur anter atau ovul dapat dihasilkan tanaman
haploid yang akhirnya dengan perlakuan suatu mutagen
akan dapat diperoleh tanaman poliploid.
h. Dapat digunakan untuk penyimpanan plasma nutfah.

Dalam laboratorium kultur jaringan dapat digunakan untuk
menyimpan berbagai tanaman dengan genotip berbeda,
yang dapat digunakan sebagai sumber plasma nutfah.
Walaupun memiliki manfaat atau keunggulan yang banyak

namun pembiakan tanaman secara kultur jaringan juga
memiliki beberapa kelemahan yaitu:
a. Sarana prasarana yang diperlukan lebih mahal
dibandingkan pembiakan tanaman secara konvensional.
Pelaksanaan kultur jaringan menuntut adanya
laboratorium, peralatan-peralatan elektrik, dan bahan-
bahan yang relatif lebih mahal dibandingan pembiakan
tanaman secara konvensional.
b. Keterampilan pelaksana pada kegiatan pembiakan secara
kultur jaringan lebih kompleks dibandingkan pembiakan
secara konvensional.
2017 11
c. Produk kultur jaringan berupa plantlet dimana planltet ini

tidak dapat langsung ditanam di lapangan tetapi
memerlukan waktu untuk diadaptasikan lebih dahulu agar
dapat ditanam di lapangan. Plantlet berasal dari tempat
pertumbuhan yang serba terkendali sehingga jika akan
ditanam di lapangan yang tidak terkendali harus
diadaptasikan lebih dulu. Masa adaptasi plantlet disebut
sebagai masa aklimatisasi.
3. Tahapan pembiakan tanaman melalui teknik kultur jaringan

a. Penyediaan sumber eksplan
Bahan eksplan dapat diambil dari tanaman dewasa yaitu
pada bagian pucuk tanaman, daun atau umbi bahkan
bijinya. Bahan eksplan dari daun dipilih daun yang tidak
terlalu muda dan juga tidak terlalu tua. Pemotongan
eksplan dilakukan dengan mengikutkan ibu tulang daun
karena pada bagian ini lebih cepat tumbuh menjadi kalus.
Apabila bahan eskplan berasal dari umbi biasanya umbi
ditumbuhkan terlebih dahulu tunasnya. Bagian tunas yang
tumbuh dari umbi tersebut kemudian dijadikan sebagai
bahan eksplan, contohnya umbi batang tanaman kentang,
umbi batang tanaman talas dan umbi lapis bawang merah.
Biji dapat dijadikan sebagai eksplan dan sebaiknya dipilih

biji yang bersertifikat atau dipetik langsung dari tanaman
induknya yang sudah diketahui keunggulan fenotif dan
genotifnya. Bagian-bagian biji, seperti embrio atau
kotiledon dapat dijadikan sbagai bahan eksplan, misalnya
pada tanaman jagung, kedelai, jarak, paprika dan lain-lain.
Biji juga dapat langsung ditanam atau dikecambahkan pada
2017 12
media agar-agar, contohnya pada kasus biji anggrek yang

tidak memiliki cadangan makanan.
b. Sterilisasi eksplan
Sterilisasi eksplan merupakan bagian yang sangat
menentukan keberhasilan inisiasi eksplan. Sterilisasi
eksplan merupakan salah satu prosedur yang digunakan
untuk menghilangkan kontaminan mikroorganisme pada
eksplan. Kontaminan pada eksplan dapat berupa
cendawan, bakteri, tungau, serangga dan telurnya. Apabila
kontaminan tersebut tidak dihilangkan maka pada media
yang mengandung gula, vitamin dan mineral dalam waktu
singkat akan dipenuhi kontaminan sehingga
mengakibatkan eksplan menjadi mati.
c. Inisiasi tunas
Inisiasi tunas adalah salah satu tahapan dalam kegiatan
perbanyakan tanaman secara kultur jaringan. Pengetahuan
berbagai eksplan dan penggunaannya sangat penting untuk
diketahui agar dalam penentuan eksplan yang digunakan
sesuai dengan tujuan perbanyakan tanaman yang
diinginkan.
d. Penggandaan tunas
Tahap penggandaan tunas bertujuan untuk menggandakan
bahan eksplan hasil inokulasi yang hidup dengan cara
diperbanyak untuk penumbuhan tunas atau embrio serta
memeliharanya dalam keadaan tertentu sehingga sewaktu-
waktu dapat dilanjutkan untuk tahap berikutnya.
2017 13
e. Induksi perakaran
Tunas-tunas yang telah dilakukan tahap regenerasi
kemudian dilakukan sub kultur atau dipindahkan ke media
lain untuk tahap selanjutnya yaitu tahap induksi perakaran
inokulum. Prosedur induksi perakaran inokulum secara in
vitro dilakukan dengan pemindahan atau sub kultur tunas
hasil tahap regenerasi yang sudah cukup panjang (4 cm
atau lebih) ke media dengan zat pengatur tumbuh auksin
berupa NAA atau IBA atau kombinasi keduanya. Kegiatan
tersebut bertujuan untuk merangsang pertumbuhan akar
pada tunas ketika masih berada dalam botol kultur (secara
in vitro).
f. Aklimatisasi
Aklimatisasi planlet adalah suatu usaha untuk
mengadaptasikan planlet (bibit hasil kultur jaringan) dari
lingkungan yang terkendali ke lingkungan baru yang tidak
terkendali. Kondisi lingkungan yang diadaptasikan
meliputi intensitas cahaya, kelembaban, temperatur
lingkungan, serta keberadaan mikroorganisme pengganggu
tanaman. Proses adaptasi dari lingkungan terkendali ke
lingkungan yang tidak terkendali ini memerlukan waktu
yang bervariasi tergantung pada perbedaan kondisi
perubahannya dan ketahanan jenis tanamannya.
4. Lingkup kegiatan dalam kultur jaringan.

Jika sekolah bapak/ ibu sudah memiliki laboratorium untuk
kegiatan kultur jaringan, maka lingkup kegiatan yang mesti
dilalui supaya bapak/ ibu dapat melakukan pembiakan
tanaman dengan teknik kultur jaringan adalah:
2017 14
a. Membuat media kultur jaringan

b. Menyiapkan bahan tanam (eksplan)
c. Melakukan inokulasi (penanaman bahan tanam)
d. Memelihara kultur
e. Melakukan aklimatisasi
Kegiatan-kegiatan tersebut tentunya disesuaikan dengan

sarana prasarana yang telah dimiliki. Jika sarana prasarananya
masih terbatas maka dapat dipilih kegiatan yang sederhana
tetapi dapat memberikan wawasan dan meningkatkan
keterampilan dalam bidang kultur jaringan. Dalam
melaksanakan pekerjaan-pekerjaan dalam kultur jaringan
tersebut harus diterapkan juga tentang prosedur kesehatan
dan keselamatan kerja dalam semua kegiatan kultur jaringan
tanaman.
Faktor utama yang berpengaruh terhadap keberhasilan pembiakan

tanaman secara kultur jaringan ditentukan oleh:
a. Ketepatan komposisi media
Ketepatan komposisi media memegang peran yang sangat
penting dalam keberhasilan pertumbuhan tanaman secara
kultur jaringan. Tanaman adalah benda hidup yang
membutuhkan nutrisi bagi pertumbuhannya dimana
keberadaan nutrisi ini dipengaruhi oleh ketersediaan unsur
dalam media tumbuhnya dan didukung oleh ketepatan pH
(potential of Hidrogen) media tumbuhnya. Keberadaan unsur
hara dalam media tumbuh harus dipenuhi sesuai dengan
kebutuhan tanaman tersebut. Setiap jenis tanaman dan setiap
fase pertumbuhan tanaman membutuhkan unsur hara yang
2017 15
berbeda sehingga komposisi media kultur jaringan harus

disesuaikan dengan kebutuhan tersebut.
b. Kesterilan lingkungan kerja

Lingkungan kerja yang dimaksud disini meliputi lingkungan dan
segala isinya. Dalam laboratorium kultur jaringan malam
lingkungan kerja meliputi laboratorium, peralatan, dan petugas
yang menangani pekerjaan di laboratorium kultur jaringan.
Pembiakan secara kultur jaringan menggunakan media tumbuh
berupa agar-agar yang berisi unsur hara yang diperlukan oleh
tanaman. Agar-agar merupakan media yang mudah sekali
terkontaminasi oleh mikroorganisme. Jika media
terkontaminasi maka eksplan yang ditanam otomatis akan ikut
terkontaminasi juga dan akhirnya pertumbuhannya terganggu
bahkan akhirnya akan mati.
Adapun faktor-faktor yang dapat menyebabkan terjadinya

kontaminasi adalah kebersihan dan kesterilan lingkungan
kerja/ baik lingkungan kerja makro maupun mikro, kebersihan
dan kesterilan peralatan yang digunakan, serta kebersihan
petugas yang melakukan kegiatan.
c. Keterampilan pelaksana
Keterampilan pelaksana dalam melakukan pekerjaan baik
keterampilan abstrak maupun keterampilan kongkrit sangat
berpengaruh pada keberhasilan kultur jaringan. Sebagai contoh
misalnya dalam melakukan inokulasi jika sudah terampil maka
dapat dilakukan dalam waktu yang cepat sedangkan jika belum
terampil akan diperlukan waktu yang lebih lama. Sementara
2017 16
pelaksanaan inokulasi semakin cepat dilakukan maka resiko

kontaminasinya juga semakin kecil.
5. Pengetahuan dan keterampilan penting dalam kegiatan

kultur jaringan.
Dalam melakukan pekerjaan kultur jaringan, pelaksana harus
mempunyai dasar pengetahuan tentang ilmu botani, fisiologi
tanaman, kimia, dan fisika. Pelaksana juga dituntut memiliki
sikap sabar, tekun, teliti, serius, dan disiplin pada setiap
tahapan pekerjaan dalam kultur jaringan. Pekerjaan-pekerjaan
dalam kultur jaringan meliputi persiapan media, isolasi eksplan
(bahan tanaman), sterilisasi eksplan, inokulasi eksplan,
kulturisasi dan aklimatisasi.
Adapun keterampilan-keterampilan penting dalam kegiatan

kultur jaringan meliputi keterampilan abstrak dan
keterampilan kongkrit.
a. Keterampilan abstrak.
Keterampilan abstrak yang diperlukan dalam kegiatan kultur
jaringan misalnya:
1) Keterampilan dalam menghitung dan atau
mengkonversi resep media tanam, bahan sterilisasi
laboratorium, dan bahan sterilisasi eksplan.
2) Keterampilan dalam mengidentifikasi keberadaan
kontaminan pada media atau pada kultur di ruang
pertumbuhan.
b. Keterampilan kongkrit.
Keterampilan kongkrit yang diperlukan dalam kegiatan
kultur jaringan misalnya:
2017 17
1) Keterampilan mengoperasikan dan merawat peralatan

kultur jaringan
2) Keterampilan dalam menimbang bahan
3) Keterampilan dalam mengukur dan memipet larutan
4) Keterampilan menuang media dalam botol kultur
5) Keterampilan memotong eksplan
6) Keterampilan membuat larutan
7) Keterampilan melakukan penanaman eksplan
8) Keterampilan melakukan subkultur
6. Laboratorium kultur jaringan.

Bahan tanam yang ditumbuhkan/ dibiakkan melalui teknik
kultur jaringan harus selalu dalam keadaan bebas
mikroorganisme dan tercukupi kebutuhan hidupnya agar
bahan tanaman dapat tumbuh dengan baik menjadi tanaman
lengkap, oleh karena itu pelaksanaan teknik kultur jaringan
idealnya dilakukan dalam ruangan/ laboratorium yang dapat
dikendalikan kondisinya. Kondisi tersebut mencakup
kebersihan dan kesterilan, intensitas dan lama penyinaran,
temperatur, dan kelembaban ruangan yang sesuai
peruntukannya.
Desain dan ukuran laboratorium kultur jaringan sangat

beragam dan tidak selalu harus sama karena mesti disesuaikan
dengan tujuannya, apakah untuk tujuan pendidikan, atau
produksi, atau untuk penelitian, dan tentunya juga disesuaikan
dengan potensi yang dimiliki. Demikian juga jenis, jumlah, dan
spesifikasi peralatan yang harus ada dalam laboratorium kultur
jaringan juga disesuaikan potensi dan kebutuhannya.
2017 18
Namun demikian karena karakteristik teknik kultur jaringan

menghendaki sterilitas yang tinggi maka ada beberapa
persyaratan minimal yang harus dipenuhi dari sebuah
ruangan/ laboratorium kultur jaringan.
Ruang-ruang utama dalam lab kultur jaringan adalah:

a. Ruang persiapan digunakan untuk penyimpanan bahan
dan alat pembuatan media, pembuatan media, dan
penyiapan eksplan. Didalam ruang ini minimal terdapat
alat-alat glassware (alat-alat gelas untuk lab), karet
penyedot larutan, timbangan analitis, hot stirrer, autoclave.
b. Ruang transfer digunakan untuk melakukan kegiatan
penanaman, baik penanaman eksplan maupun subkultur.
Ruang ini harus selalu bersih dan steril. Dalam ruangan ini
minimal terdapat alat-alat laminar air flow cabinet, alat
diseksi, bunsen burner, air conditioner, rak plastik beroda.
c. Ruang pertumbuhan digunakan untuk menumbuhkan
eksplan dimana dalam ruangan ini dikondisikan agar
cahaya, temperatur, dan kelembaban dapat diatur. Ruang
ini juga harus selalu bersih dan steril. Dalam ruangan ini
minimal terdapat air conditioner, pengukur suhu ruangan,
pengukur kelembaban udara dalam ruangan, timer, lampu
neon (TL).
d. Green house atau shading house untuk melakukan
aklimatisasi plantlet. Dalam green house atau shading
house ini minimal terdapat pot-pot atau wadah tanaman
yang diaklimatisasi, alat penyiraman, sumber air
penyiraman, sprayer, pengatur cahaya matahari.
2017 19
Kendala utama dalam kultur jaringan adalah adanya resiko

kontaminasi. Jika eksplan dan atau media terkena kotaminan
pada umumnya peluang untuk berhasil sangat rendah.
Kontaminasi dapat berasal dari bahan, alat, lingkungan, dan
pelaksana. Oleh karena itu ruangan-ruangan dalam
laboratorium kultur jaringan harus dijaga kebersihan dan
kesterilannya. Benda-benda yang tidak bermanfaat dan benda-
benda yang mudah dihinggapi mikroorganisme sebaiknya tidak
disimpan di laboratorium.
Persyaratan tata letak laboratorium kultur jaringan tanaman

adalah sebagai berikut:
a. Bangunan laboratorium harus mudah dijangkau oleh
konsumen dan instansi yangterkait
b. Tidak terletak diarah angin, yaitu untuk menghindari
polusi terhadap ruang lain
c. Mempunyai saluran pembuangan limbah tersendiri untuk
menghindari pencemaran lingkungan sekitar/penduduk.
d. Mempunyai jarak cukup jauh terhadap bangunan lain
untuk memberikan ventilasi yang cukup dan penerangan
alami yang optimum.
e. Terletak pada bagian yang mudah dikontrol
Lokasi yang baik untuk laboratorium harus di daerah yang

berlingkungan bersih, bebas polusi, tanpa keterbatasan air
bersih, dan yang penting dilengkapi dengan prasarana
transportasi, dan utilities air, gas dan listrik) yang memadai.
Sanitasi dan sterilisasi secara berkala perlu dilakukan untuk
menjaga keberihan dan tingkat kesterilan ruangan.
2017 20
Gambar 1. Tata Letak Laboratorium Kultur Jaringan
Gambar 2. Ruang Penanaman
Gambar 3. Ruang Pertumbuhan
2017 21
7. Peralatan kultur jaringan.

Berikut ini adalah peralatan pokok yang digunakan untuk
kegiatan kultur jaringan tanaman.
a. Timbangan analitis. Timbangan analitis digunakan untuk
menimbang bahan. Timbangan analitis dapat berupa
timbangan biasa atau digital, yang terpneting adalah yang
spesifikasinya dapat digunakan untuk menimbang dalam
satuan miligram hingga 3 digit di belakang koma.
b. Laminar flow cabinet, digunakan untuk melakukan
penanaman (inisisasi dan subkultur). Laminar flow dapat
diganti dengan entkas biasa asal tingkat sterilitasnya dapat
dijamin.
c. Autoclave, digunakan untuk mensterilkan media kultur.
d. Hot stirrer, digunakan untuk memanaskan sambil
mengaduk media media pada saat proses pemasakan
media.
e. pH meter, digunakan untuk mengukur pH media.
f. Kulkas, digunakan untuk menyimpan bahan-bahan yang
harus disimpan pada suhu dingin.
g. Rak pertumbuhan, digunakan untuk menempatkan dan
menumbuhkan kultur yang telah ditanam.
h. Alat-alat gelas (glassware), antara lain pipet tetes, pipet
ukur dengan berbagai ukuran, gelas ukur dengan berbagai
ukuran, gelas piala dengan berbagai ukuran, erlenmeyer
dengan berbagai ukuran, corong, bunsen burner, gelas
pengaduk, cawan petri. Glassware digunakan untuk untuk
pembuatan media dan sebagian digunakan juga untuk
penanaman.
2017 22
i. Alat-alat diseksi, antara lain scalpel, pisau scalpel, pinset,

gunting. Alat-alat diseksi ini digunakan untuk melakukan
penyiapan eksplan dan penanaman (inisiasi dan
subkultur).
j. Botol kultur. Botol kultur digunakan untuk menanam
eksplan dan subkultur. Bentuk botol kultur ada beraneka
ragam yang penggunaannya dapat disesuaikan dengan
kebutuhan.
k. Karet pengisap. Karet pengisap digunakan untuk memipet
larutan pada saat pembuatan media kultur.
l. Air conditioner, digunakan untuk mendinginkan ruangan.
m. Lampu penerangan.
n. Termometer ruangan
o. Higrometer
p. Sumber air bersih (PAM/ sumur)
Gambar 4. Autoclave
2017 23
Gambar 5. Peralatan Gelas
Gambar 6. Timbangan Analitis
2017 24
Gambar 7. Laminar Air Flow Cabinet
Penataan peralatan di laboratorium kultur jaringan harus

memperhatikan keamanan dan kelancaran dalam bekerja. Misalnya
timbangan analitis agar dapat digunakan dengan hasil yang valid
harus diletakkan di meja yang datar, tidak dipindah-pindah, dan
berada di ruang yang tidak ada memungkinkan terjadi hembusan
angin. Rak untuk menyimpan bahan sebaiknya diletakkan dekat
dengan tempat penimbangan. Autoclave diletakkan di ruang
pembuatan media.
D. Aktivitas Pembelajaran
Fasilitator mengarahkan aktifitas kegiatan pembelajaran pada

peserta pelatihan melalui beberapa kegiatan berikut ini:
1. Mengamati
 Membaca modul, melihat dan atau mendengarkan tayangan,
melihat alat peraga atau benda sesungguhnya yang ada
dalam laboratorium.
 Mencatat hasil pengamatan
2. Menanyakan
 Menanyakan hal-hal yang menarik dan atau yang ingin
diketahui lebih lanjut tentang hasil pengamatan yang telah
dilakukan.
 Melakukan diskusi kelompok,
2017 25
3. Mencoba
Lakukan kegiatan obsevasi dengan menggunakan lembar kerja
1 dan 2
4. Menalar
Lakukan analisis dan buat simpulan dengan merangkum hasil bacaan
tentang tentang konsep kultur jaringan
5. Mengkomunikasikan
Buat laporan hasil diskusi, hail praktik kemudian presentasikan
LEMBAR KERJA 1
Observasi Bahan dan Alat Laboratorium Kultur Jaringan
Pendahuluan
Perbanyakan tanaman dengan teknik kultur jaringan diperlukan
lingkungan yang steril dan terkendali. Oleh karena itu kultur jaringan
memerlukan laboratorium yang dapat dikendalikan kondisinya. Kondisi
tersebut mencakup temperatur, kelembaban intensitas dan lama
penyinaran yang sesuai peruntukannya. Selain itu ruang dan alat harus
terjamin kebersihan dan kesterilannya.
Tujuan
Bila disediakan fasilitas laboratorium kultur jaringan peserta dapat
mengidentifikasi jenis dan fungsi secara tepat ruangan laboratorium,
peralatan dan bahan-bahan kultur jaringan dengan tepat.
Alat dan bahan

1. ATK
2. Laboratorium, bahan dan peralatan kultur jaringan
3. Shading house
2017 26
Keselamatan kerja
Selama melakukan kegiatan ini diharapkan Anda selalu bertindak secara
hati-hati, teliti, dan cermat serta mengenakan perlengkapan K3.
Langkah kerja
1. Amati laboratorium kultur jaringan yang meliputi ruang persiapan,
ruang penanaman, ruang pertumbuhan, dan shading house untuk
aklimatisasi plantlet dengan cermat dan teliti! Catatlah hal-hal
penting dan karaketristik dari masing-masing ruangan tersebut!
2. Amati peralatan kultur jaringan yang meliputi peralatan pembuatan
media, peralatan penanaman, peralatan penumbuhan/ pemeliharaan
kultur, dan peralatan aklimatisasi dengan cermat dan teliti! Catat
nama dan fungsi alat, serta cara mengoperasikannya!
3. Amati bahan-bahan kultur jaringan yang meliputi bahan pembuat
media dan bahan sterilisasi!
LEMBAR KERJA 2
Sterilisasi Alat
Pendahuluan
Peralatan yang terbuat dari metal, gelas, aluminium foil, dll. dapat disterilsasi
dengan cara pengeringan dalam oven pada suhu 130o-170oC selama 2-4 jam.
Semua peralatan tersebut harus dibungkus dengan alinium foil/kertas
sebelum di oven. Untuk bahan yang terbuat dari metal tidak anjurkan
sterilisasi dengan menggunakan autoclave karena akan menyebabkan karat.
Untuk peralatan diseksi yang akan digunakan pada ruang transfer atau
2017 27
laminar, setelah disterilisasi dalam oven harus direndam dahulu dalam

alkohol 96% kemudian dibakar di atas lampu bunsen.
Tujuan
Apabila disediakan alat dan bahan yang sesuai peserta diklat dapat
melakukan sterilisasi alat-alat laboratorium kultur jaringan tanaman sesuai
dengan tahapan-tahapan yang benar.
Alat dan bahan

1. Oven
2. Sabun, peralatan diseksi, petridish, kain lap, kertas dan glassware
Keselamatan kerja
hati-hati, teliti dan cermat serta mengenakan perlengkapan K3.
Langkah kerja
1. Cucilah secara hati-hati peralatan diseksi, petridish, kain lap, dan
glassware dengan sabun sampai bersih, lalu bungkus peralatan tersebut
menggunakan kertas.
2. Masukkan alat ke dalam oven dengan hati-hati disterilisasi pada suhu
130oC selama 2-4 jam.
3. Simpanlah alat yang sudah steril di dalam oven bersuhu 80o C hingga akan
digunakan.
4. Rendam dahulu dalam alkohol 96% kemudian bakar di atas lampu bunsen
secara hati-hati peralatan diseksi yang akan digunakan pada ruang
transfer atau laminar.
2017 28
E. Latihan Soal
Jawablah soal-soal berikut dengan benar dengan cara memberi tanda

silang (X) huruf a,b,c atau d pada salah satu pilihan jawaban!
1. Teknik kultur jaringan merupakan metode untuk memperoleh

bibit tanaman secara cepat. Yang dimaksud dengan kultur
jaringan adalah?
a. teknik mengisolasi bagian tanaman dan menumbuhkannya
pada media buatan dalam kondisi aseptik di dalam ruang
yang terkontrol.
b. teknik mengisolasi tanaman dengan menggunakan bagian
jaringan tanaman dan menumbuhkannya pada media buatan
di dalam ruang yang tidak terkontrol.
c. teknik memperbanyak tanaman dengan menggunakan pucuk
tanaman dan menumbuhkannya pada media buatan dalam
kondisi aseptik di dalam ruang yang terkontrol.
d. teknik memperbanyak tanaman dengan menggunakan tunas
muda dan menumbuhkannya pada media buatan dalam
kondisi tidak aseptik di dalam ruang yang terkontrol.
2. Bagian tanaman yang digunakan sebagai bahan tanaman yang

diinisiasi dalam kultur jaringan sehingga bagian-bagian tanaman
tersebut dapat tumbuh dan berkembang menjadi tanaman
lengkap disebut.
a. plantlet
b. inokulum
c. eksplan
d. aklimatisasi
2017 29
3. Tanaman lengkap hasil regenerasi dalam kultur jaringan yang

belum diaklimatisasikan disebut.
a. plantlet
b. eksplan
c. inokulum
d. aklimatisasi
4. Faktor terpenting yang berpengaruh terhadap keberhasilan

perbanyakan tanaman secara kultur jaringan tersebut adlah:
a. jumlah subkultur
b. jumlah media
c. jumlah sumber eksplan
d. komposisi media
5. Ruangan dalam laboratorium kultur jaringan yang berfungsi

untuk penyimpanan bahan dan alat pembuatan media dan
penyiapan eksplan adalah ruang..
a. transfer
b. persiapan
c. inisiasi
d. pertumbuhan
6. Inisisasi dan subkultur pada perbanyakan tanaman secara kultur

jaringan dilakukan di dalam:
a. laminar flow cabinet
b. autoclave
c. hot stirrer
d. higrometer
2017 30
7. Alat dibawah ini yang tidak diperlukan dalam ruang pertumbuhan

adalah:
a. lampu neon (TL)
b. higometer
c. hotplate
d. termometer
F. Rangkuman
Kultur jaringan tanaman adalah suatu metode atau teknik mengisolasi

bagian tanaman dan menumbuhkannya pada media buatan dalam
kondisi aseptik di dalam ruang yang terkontrol sehingga bagian-
bagian tanaman tersebut dapat tumbuh dan berkembang menjadi
tanaman lengkap. Sejarah perkembangan kultur jaringan diawali
dengan adanya teori totipotensi sel yang menyatakan bahwa sel-sel
bersifat otonom dan mampu melakukan regenerasi. Manfaat dari
kultur jaringan adalah dapat dihasilkan bibit yang seragam dalam
jumlah yang besar, dapat dihasilkan bibit bebas virus, dapat
dihasilkan bibit sepanjang waktu karena pelaksanaannya tidak
tergantung musim, dapat memperbanyak tanaman yang sulit
dibiakkan secara vegetatif, dapat dihasilkan tanaman poliploid, dan
dapat digunakan sebagai plasma nutfah.
Lingkup kegiatan kultur jaringan meliputi pembuatan media,

penyiapan bahan tanam, penanaman, pemeliharaan kultur, dan
aklimatisasi. Untuk dapat melaksanakan kegiatan tersebut maka
diperlukan laboratorium kultur jaringan yang idealnya terdiri dari
ruang persiapan, ruang penanaman (ruang transfer), ruang
pertumbuhan, dan green house/ shading house untuk aklimatisasi.
Adapun peralatan yang diperlukan meliputi peralatan gelas
2017 31
laboratorium, peralatan diseksi, botol kultur, timbangan analitis, karet

pengisap, autoclave, hot stirer, pH meter, kulkas, laminar air flow
cabinet, rak pertumbuhan, air conditioner, lampu penerangan,
dehumifier, termometer ruangan, higrometer, sumberair bersih.
Agar kegiatan dapat berjalan dengan lancar maka sumber daya

manusia yang bekerja di laboratorium kultur jaringan harus memiliki
pengetahuan, keterampilan, dan sikap tertentu.
Fasilitas laboratorium kultur jaringan minimla terdiri dari ruang

persiapan, runag tanaman, ruang pertumbuhan, dan shading house.
Dalam ruang persiapan jika memungkinkan dapat dibuat sebuah
ruang kecil khusus untuk ruang timbang. Agar kegiatan dapat berjalan
dengan lancar maka sumber daya manusia yang bekerja di
laboratorium kultur jaringan harus memiliki pengetahuan,
keterampilan, dan sikap tertentu.
G. Umpan Balik dan Tindak Lanjut.
Setelah saudara mempelajari konsep kultur jaringan dengan metode

pembelajaran mengamati (mengenal fakta lapangan, membaca
modul), diskusi, mencoba tahap-tahap pengembangan, melakukan
tugas, apakah anda bisa mengembangkan kultur jaringan di sekolah
anda? Apa yang akan saudara lakukan ?
2017 32
MEDIA KULTUR JARINGAN TANAMAN
A. Tujuan
Setelah mempelajari materi dan melakukan praktik dengan cermat,

teliti dan hati-hati peserta pelatihan mampu membuat larutan stok
dan media kultur jaringan tanaman dengan komposisi yang sesuai,
steril dan memiliki kepadatan yang cukup.
Melalui kegiatan pengamatan, diskusi, dan pengumpulan informasi

bapak/ ibu dapat:
1. Menjelaskan komponen-komponen dalam media kultur jaringan
dengan benar
2. Menjelaskan komposisi dasar media kultur jaringan dengan benar
3. Membuat larutan stok
4. Membuat media kultur
C. Uraian Materi
1. Komponen-komponen media kultur jaringan

Media kultur jaringan tanaman merupakan salah satu faktor
penentu keberhasilan dalam pembiakan tanaman secara kultur
jaringan, oleh karena itu dalam modul ini akan dibahas tentang
persiapan media khususnya cara pembuatan larutan stok.
Pekerjaan pembuatan media dilakukan di ruang persiapan, yang
pada prinsipnya dilakukan dengan cara melarutkan semua
2017 33
komponen media dalam air sesuai dengan konsentrasi pada

formulasi yang dikehendaki.
Komponen dalam media kultur jaringan meliputi:
a. Unsur hara makro yang meliputi nitrogen (N), fosfor (P),
kalium (K), kalsium (Ca), magnesium (Mg), dan sulfur (S).
b. Unsur mikro yang meliputi boron (B), cobalt (Co), tembaga
(Cu), Iodium (I), besi (Fe), mangan (Mn), molybdenum (Mo),
dan seng (Zn).
c. Vitamin (vitamin B1) dan Myo-inositol.Untuk beberapa
formula media ada juga yang ditambahkan niasin dan
piridoksin (B6).
d. Gula (sukrosa) berfungsi sebagai sumber energi.
e. Zat pengatur tumbuh berfungsi untuk merangsang dan
mengontrol pertumbuhan.
f. Agar-agar berfungsi sebagai pemadat media.
g. Arang aktif berfungsi sebagai penyerap senyawa racun (jika
diperlukan).
h. Air suling (aquades) berfungsi sebagai pelarut.
2. Komposisi dasar media kultur jaringan

Terdapat banyak formula/resep komposisi dasar media tanam
kultur jaringan yang pada umumnya diberi nama sesuai dengan
nama penemunya, antara lain:
a. Murashige dan Skoog (MS), memiliki kisaran pemakaian
yang paling luas.
b. Gamborg atau B-5, cocok untuk kultur suspensi sel kedelai
dan legume.
c. Vacin dan Went (VW), cocok digunakan untuk media kultur
jaringan anggrek
2017 34
d. Nitsch dan Nitsch (NN), cocok digunakan untuk media kultur

tepung sari dan kultur sel.
e. Schenk dan Hildebrandt (SH) cocok digunakan untuk media
tanaman dikotil.
f. Woody Plant Medium (WPM) cocok digunakan untuk media
tanaman berkayu.
Detail komposisi dasar media kultur jaringan diatas terdapat
pada Tabel1.
Tabel 1. Formulasi media kultur jaringan (NN, MS, B5)
NN MS B5
NO SENYAWA KIMIA
mg/liter mg/liter mg/liter
1 (NH4)2SO4 - - 134
2 NH4NO3 720 1650 -
3 KNO3 950 1900 2500
4 CaCl2.2H2O 166 440 150
7 MgSO4.7H2O 185 370 250
6 KH2PO4 68 170 -
7 NaH2PO4.H2O - - 150
8 FeSO4.7H2O 27,8 27,8 27,8
9 Na2EDTA 37,3 37,3 37,3
10 MnSO4.H2O 18,9 16,9 10,0
11 ZnSO4.7H2O 10,0 8,6 2,0
12 H3BO3 10,0 6,2 3,0
13 KI - 0,83 0,75
14 Na2MoO4.2H2O 0,25 0,25 0,25
15 CuSO4.5H2O 0,025 0,025 0,025
16 CoCl2.6H2O - 0,025 0,025
17 Biotin 0,05 - -
2017 35
18 Myo-inositol 100 100 100

19 Niacin 5,0 0,5 1,0
20 Pyridoxin-HCl 0,5 0,5 1,0
21 Thiamine-HCl 0,5 0,1 10,0
22 Glycine 2,0 2,0 -
23 Folic acid 0,5 - -
24 Sucrose 20.000 30.000 20.000
3. Pembuatan larutan stok

Pekerjaan pembuatan media dilakukan di ruang persiapan, yang
pada prinsipnya dilakukan dengan cara melarutkan semua
komponen media dalam air sesuai dengan konsentrasi pada
formulasi yang dikehendaki. Akan tetapi penimbangan bahan
kimia satu per satu secara berkali-kali pada setiap pembuatan
media menjadi tidak praktis, disamping itu akan terjadi kesulitan
dalam penimbangan bila bahan yang ditimbang hanya diperlukan
dalam berat/ jumlah yang terlalu sedikit. Untuk mengatasi
permasalahan ini maka perlu dibuat larutan stok dengan
konsentrasi lebih pekat, sehingga bila akan membuat media cukup
mengambil larutan stok dengan volume sesuai dengan
perhitungan konsentrasi yang dikehendaki, dengan demikian
pembuatan media menjadi lebih praktis dan tidak menyita waktu
penimbangan yang terlalu lama.
Larutan stok adalah larutan yang berisi satu atau lebih komponen
media yang konsentrasinya lebih tinggi daripada konsentrasi
komponen tersebut dalam formulasi media yang akan dibuat.
Larutan stok dapat dibuat dengan konsentrasi 10 kali hingga 100
kali lipat lebih pekat. Pembuatan media dapat dilakukan dengan
2017 36
cara mengambil sejumlah larutan stok sehingga konsentrasinya

sesuai dengan yang terdapat dalam formulasi media yang
dikehendaki.
Dalam membuat larutan stok, hal yang penting untuk

diperhatikan adalah penyatuan beberapa komponen media
sekaligus dalam satu larutan supaya memperhatikan kecocokan
dan kestabilan sifat kimianya, disamping itu dalam larutan stok
tidak boleh terjadi endapan.
Umumnya media kultur jaringan dibedakan menjadi media dasar

dan media perlakuan dimana media dasar berisi komposisi dasar
kombinasi zat yang mengandung hara esensial (makro & mikro),
sumber energi, dan vitamin.
Untuk membuat media dasar MS (Murashige & Skoog) dengan
formulasi seperti pada tabel tersebut maka larutan stok dapat
dikelompokkan menjadi stok hara makro, stok hara mikro, stok
besi, stok vitamin, stok ZPT/ hormon.
Kebutuhan bahan yang diperlukan untuk membuat larutan stok

dihitung berdasarkan kelipatan konsentrasi yang terdapat pada
formulasi media yang diinginkan. Berikut adalah contoh cara
perhitungan kebutuhan stok untuk senyawa NH4NO3 :
Kebutuhan senyawa NH4NO3 untuk media MS : 1.650 mg/liter.
Untuk membuat stok NH4NO3 10x konsentrasi, maka diperlukan
16.500 mg NH4NO3 dilarutkan dalam 1000 ml aquades.
Bila telah tersedia stok NH4NO3 dengan konsentrasi 16.500
mg/liter, maka jumlah stok NH4NO3 yang diperlukan untuk
membuat 1 liter media MS dapat dihitung dengan rumus berikut:
V1 x N1 = V2 x N2
V1 : volume media yang akan dibuat
2017 37
N1 : konsentrasi NH4NO3 yang diperlukan dalam media

V2 : volume larutan stok yang diperlukan untuk membuat 1 liter
media
N2 : konsentrasi NH4NO3 dalam larutan stok
V2 = V1 x N1
N2
= 1000 ml x 1650 mg/liter
16.500 mg/liter
= 100 ml
Jadi untuk membuat 1 liter media MS, volume stok NH4NO3 yang
diperlukan adalah 100 ml. Cara perhitungan untuk jenis stok yang
lain dapat dianalogikan.
Berikut adalah tabel kebutuhan senyawa kimia pada setiap jenis

larutan stok yang diperlukan untuk membuat media dasar MS
(Murashige & Skoog).
Tabel 2. Kebutuhan larutan stok untuk media MS
VOL STOK
KONSENTR KONSENTRAS
SENYAWA YANG
NAMA ASI DALAM I DALAM
DALAM DIPERLUKAN
STOK MEDIA MS STOK
STOK DALAM 1 LT
(mg/liter) (mg/liter)
MEDIA MS (ml)
A (10x) NH4NO3 1.650 16.500 100
B (10X) KNO3 1.900 19.000 100
C (10X) CaCl2.2H2O 440 4.400 100
D (10X) MgSO4.7H2O 370 3.700 100
KH2PO4 170 1.700
E (100X) FeSO4.7H2O 27,8 2.780 10
2017 38
Na2EDTA 37,3 3.730

F (100x) MnSO4.H2O 16,9 1.690 10
ZnSO4.7H2O 8,6 860
H3BO3 6,2 620
KI 0,83 83
Na2MoO4.2H 0,25 25
2O
CuSO4.5H2O 0,025 2,5

CoCl2.6H2O 0,025 2,5
Vitamin Thiamine- 1,0 10 mg/100ml 10
(100x) HCl
Nicotinic 0,5 5 mg/100ml
acid
Pyridoxin- 0,5 5 mg/100ml
HCl
Glycine 2,0 20 mg/100ml
Keterangan: Bila volume larutan stok dan media yang akan dibuat ada
perubahan, maka perhitungan tinggal dikonversikan saja.
Selain perhitungan kelipatan konsentrasi, maka pembuatan

larutan stok juga harus mempertimbangkan kebutuhan media dan
masa kadaluwarsa larutan stok. Misalnya masa kadaluwarsa stok
adalah 1 bulan, sedangkan untuk membuat media dalam 1 bulan
menghabiskan stok masing-masing sebanyak 1 liter dengan
kelipatan konsentrasi 100x, maka larutan stok yang dibuat dalam
1 bulan masing-masing sebanyak 1 liter dengan konsentrasi 100 x.
Dengan demikian larutan stok yang dibuat tidak pernah mubadzir
karena kadaluwarsa.
2017 39
Larutan stok merupakan bahan yang mudah terkontaminasi

sehingga setelah selesai dibuat harus segera ditutup rapat dan
disimpan di lemari es. Khusus untuk stok besi harus disimpan
dalam botol yang gelap atau kalau botolnya bening dapat
dibungkus dengan alumunium foil. Stok besi ini bila terkena sinar
matahari akan mudah ditumbuhi plankton sehingga tidak dapat
digunakan lagi karena selain telah terkontaminasi maka
efektifitasnya juga telah berkurang. Berikut adalah hal-hal yang
penting untuk diperhatikan dalam membuat larutan stok:
a. Larutan stok sebaiknya disimpan tidak lebih dari dua bulan.

Stok vitamin dan ZPT lebih baik kalau digunakan dalam
keadaan segar atau kurang dari dua minggu setelah dibuat.
Oleh karena itu berapa volume larutan stok yang akan dibuat,
sebaiknya ditentukan dahulu berapa kebutuhan media dan
kapan media akan dibuat.
b. Larutan stok yang telah mengalami pengendapan dan yang
sudah ditumbuhi mikroorganisme tidak boleh digunakan lagi.
c. Semua peralatan gelas untuk membuat stok dan media harus
dibilas dengan aquades dulu baik sebelum maupun setelah
digunakan.
d. Kebutuhan larutan stok untuk membuat media dapat
digunakan rumus V1 x N1 = V2 x N2.
Untuk memudahkan pada saat pembuatan media kultur jaringan

maka larutan stok untuk media MS dapat dikelompokkan menjadi
beberapa kelompok berikut:
a. Larutan stok A
Berdasarkan komposisi nutrisi yang diperlukan maka
kebutuhan HN4NO3 untuk larutan stok A sebanyak 1 liter
2017 40
untuk 50 x konsentrasi adalah 83,50 gram NH4 NO3/ 1 liter

aquades.
b. Larutan stok B
kebutuhan KNO3 untuk larutan stok B sebanyak 1 liter untuk
50 x konsentrasi adalah 95 gram KNO3/ 1 liter aquades.
c. Larutan stok C
kebutuhan CaCl2.Ha2O untuk larutan stok C sebanyak 1 liter
untuk 100 x konsentrasi adalah 44 gram CaCl2.Ha2O/ liter
aquades.
d. Larutan stok D
kebutuhan untuk larutan stok D sebanyak 1 liter untuk 100 x
konsentrasi adalah 37 gram MgSO4.H2O dan 17 gram
KH2PO4 dilarutkan dalam 1 liter aquades. Prosedur
melarutkan kedua jenis bahan ini disesuaikan dengan
ketentuan.
e. Larutan stok E
Berdasarkan komposisi nutrisi yang diperlukan maka kebutuhan
untuk larutan stok E sebanyak 1 liter untuk 200 x konsentrasi
adalah 5,57 gram FeSO4.7H2O dan 7,45 gram Na2EDTA
dilarutkan dalam 1 liter aquades. Prosedur melarutkan kedua
jenis bahan ini disesuaikan dengan ketentuan.
2017 41
f. Larutan stok F (hara mikro)

Larutan stok hara mikro biasanya dibuat dengan kepekatan 200x
konsentrasi. Bahan untuk membuat 1 liter stok mikro adalah
sebagai berikut:
1) MnSO4.H2O : 3380,0 mg
2) ZnSO4.7H2O : 1720,0 mg
3) H3BO3 : 1240,0 mg
4) KI : 166,0 mg
5) Na2MoO4.2H2O : 50,0 mg
6) CoCl2.6H2O : 5,0 mg
7) CuSO4.5H2O : 5,0 mg
g. Larutan stok vitamin

Larutan stok vitamin dibuat dengan kepekatan 100x konsentrasi.
Bahan untuk membuat 1 liter stok mikro adalah sebagai berikut:
1) Thiamine HCl : 10,0 mg
2) Nicotinic acid : 50,0 mg
3) Pyridoxin HCl : 50,0 mg
4) Glycine : 200,0 mg
4. Pembuatan media kultur jaringan

Sebelum media tanam dibuat, sebaiknya beberapa zat komponen
media perlu ditimbang seperti myo inositol, agar-agar dan gula serta
alat dan bahan yang diperlukan sudah disiapkan. Semua komponen
media baik dalam bentuk larutan stok maupun bahan yang ditimbang
dimasukkan satu demi satu ke dalam gelas piala, volume akhir dibuat
menjadi 1 liter dengan menambahkan aquades, pengukuran volume
akhir dilakukan dengan menggunakan labu ukur. Larutan diaduk
sampai homogen kemudian pHnya diukur, apabila pHnya lebih tinggi
dari pH yang diinginkan larutan ditetesi dengan HCl sedangkan
2017 42
apabila lebih rendah ditetesi KOH. Setelah pH larutan diukur, pemadat

media (agar-agar 7 g/l atau gelrite 2 g/l) ditambahkan, media dimasak
sampai mendidih untuk melarutkan pemadat medianya. Media
dimasukkan ke dalam botol-botol kultur dan ditutup dengan plastik
atau aluminum foil, media dalam botol disterilisasi menggunakan
autoklaf pada tekanan 1,1-1,5 kg/cm2 dengan suhu 121°C selama 15-
30 menit tergantung spesifikasi autoklaf. Setelah dingin, media
sebaiknya disimpan di ruang ber-AC (suhu 24-26°C) selama 3 hari
sebelum digunakan dengan tujuan untuk melihat kesterilan media
yang ditandai dengan tidak adanya kontaminasi dalam media
tersebut.
a. Pembuatan media MS
Berdasarkan kepekatan larutan stok yang telah dibuat di atas
maka untuk membuat media MS sebanyak 1 liter tidak harus
menimbang bahan semuanya tetapi cukup mengambil dari larutan
stok yang telah tersedia seperti berikut ini.
1) Larutkan 30 gram gula pasir kedalam ± 700 ml aquades.
2) Tambahkan 20 ml larutan stok A dan 20 ml larutan stok B.
3) Tambahkan 10 ml larutan stok C dan 10 ml larutan stok D.
4) Tambahkan 5 ml larutan stok E dan 5 ml larutan stok F.
5) Tambahkan 1 ml stok vitamin.
6) Tambahkan 100 mg myo-inositol (Myo inositol tidak perlu
dibuat larutan stoknya tapi langsung ditimbang saat
pembuatan media)
7) Tambahkan zat pengatur tumbuh sesuai kebutuhan.
8) Tambahkan aquades hingga volume mendekati 1000 ml, ukur
pH media antara 5,6 sd 5,8.
9) Tepatkan volume hingga 1000 ml.
10)Tambahkan ± 8 gram agar-agar.
11)Panaskan sambil diaduk hingga agar-agar larut.
2017 43
12)Angkat media dari pemanas ketika hampir mendidih.

13)Tuangkan ke dalam botol kultur ± 25 ml.
14)Sterilkan dalam autoclave pada tekanan 17,5 psi selama 30
menit.
b. Pembuatan media anggrek

1) Media tabur biji anggrek
Bahan-bahan yang digunakan untuk membuat media tabur biji
anggrek adalah:
 Pupuk growmore/ gaviota netral (21:21:21) sebanyak 1,5
gram
 Air kelapa 150 ml
 Gula putih/ gula pasir 20 gram
 Agar-agar (batangan 1 buah atau agar bubuk swallow 7-8
gram)
 Tomat diblender 50 gram
 Thiamine 1 ml
Cara membuat media tabur biji anggrek adalah sebagai berikut:

a) Bahan-bahan dicampur menjadi satu dan ditambah
aquades sedikit demi sedikit sambil diaduk hingga volume
1 liter
b) Campuran bahan direbus hingga hampir mendidih
c) pH diukur = 5,1. Bila kurang ditambah larutan NaOH 1 N
setetes demi setetes hingga pH = 5,1. Bila terlalu tinggi
ditambah larutan HCl 1 N setetes demi setetes hingga pH =
5,1.
d) Media dimasukkan dalam botol dan disterilkan dalam
autoclave pada suhu 1200 C selama 30 menit
2017 44
2) Media sapih anggrek

Bahan-bahan yang digunakan untuk membuat media sapih
anggrek adalah:
 Pupuk growmore/ gaviota netral (21:21:21) sebanyak 1,5
gram
 Air kelapa 150 ml
 Gula putih/ gula pasir 20 gram
 Agar-agar (batangan 1 buah atau agar bubuk swallow 7-8
gram)
 Pisang raja diblender 50 gram
 Charcoal/ arang aktif 1 gram
 NAA 1 ml
 Thiamine 1 ml
Adapun cara membuat media sapih anggrek sama persis
dengan cara membuat media tabur biji anggrek.
Media kultur jaringan yang telah disterilkan harus diinkubasikan lebih

dahulu selama 3 sampai 4 hari sebelum digunakan atau ditanami.
Tujuan dari inkubasi tersebut adalah untuk memastikan bahwa media
sudah betul-betul steril. Jika media tidak steril maka setelah 4 sampai
5 hari di permukaan media akan tumbuh mikroorganisme, dapat
berupa jamur atau bakteri.
Media kultur yang baik untuk ditanami setelah 4 sampai 5 hari

diinkubasikan memiliki ciri-ciri bersih tidak terkontaminasi
mikroorganisme dan memiliki tingkat kepadatan agar-agar yang
sedang (tidak terlalu padat dan tidak terlalu cair).
Dalam membuat media kultur jaringan ada beberapa sikap minimal yang
harus dikembangkan oleh pelaksana yaitu:
2017 45
a. Teliti
Dalam membuat media pelaksana harus memiliki sikap teliti
dimana sikap teliti ini diterapkan pada saat menghitung komposisi
media, menimbang bahan kimia, memipet larutan, mengukur pH
media, mengecek media untuk memastikan bahwa media betul-
betul steril.
b. Tekun
Dalam membuat media pelaksana harus memiliki sikap tekun
dimana sikap tekun ini diterapkan pada saat mengidentifikasi
bahan-bahan untuk pembuatan media, mengkondisikan pH media,
menuangkan media ke dalam botol kultur, membersihkan
peralatan yang telah digunakan, mengecek media untuk
memastikan sterilitasnya, menyimpan kembali bahan dan alat
yang telah selesai digunakan.
c. Disiplin
Dalam membuat media pelaksana harus memiliki sikap disiplin
dimana sikap disiplin ini diterapkan pada saat menerapkan
kesehatan dan keselamatan kerja, menerapkan prosedur
pengoperasian peralatan, memasak media, mensterilkan media.
Fasilitator mengarahkan aktifitas kegiatan pembelajaran pada peserta
pelatihan melalui beberapa kegiatan berikut ini:
1. Mengamati
 Membaca modul, melihat dan atau mendengarkan tayangan, melihat
alat peraga atau benda sesungguhnya yang ada dalam laboratorium.
2017 46
2. Menanyakan
 Menanyakan hal-hal yang menarik dan atau yang ingin diketahui lebih
lanjut tentang hasil pengamatan yang telah dilakukan.
3. Mencoba
Melakukan kegiatan praktik dengan menggunakan lembar kerja 3 dan 4
4. Menalar
Melakukan analisis dan buat simpulan dg merangkum hasil bacaan
tentang tentang konsep kultur jaringan
Membuat laporan hasil diskusi, hail praktik kemudian presentasikan
LEMBAR KERJA 3
Membuat Larutan Stok
Pendahuluan
Bahan-bahan kimia yang diperlukan dalam pembuatan media kultur dalam
jumlah yang sedikit, maka dalam pelaksanaan penimbangan bahan kimia
diperlukan tingkat ketelitian dan ketepatan yang tinggi. Untuk menghindari
penimbangan bahan kimia yang berulang-ulang setiap kali membuat media kultur
maka perlu dibuat larutan stok terlebih dahulu sebelum membuat media kultur
tersebit.
Tujuan
Apabila disediakan alat dan bahan yang sesuai peserta diklat dapat membuat
larutan stok media kultur jaringan secara teliti dan hati-hati sesuai dengan
tahapan-tahapan yang benar.
Bahan dan Alat

1. Bahan-bahan kimia komponen larutan stok A – H
- Stok makro A-E
2017 47
- Stok mikro
- Stok Fe
- Stok vitamin
2. Aquades
3. Timbangan analitik
4. Hot plate dan stirer
5. Sendok bahan dan spatula
6. Labu takar atau gelas ukur 100 ml, 500 ml, 1000 ml
7. Gelas piala
Keselamatan kerja
hati-hati, teliti, cermat dan taat azas, hindari kontak langsung (mencium atau
memegang) dengan bahan-bahan kimia. Patuhi tatatertip yang berlaku di
laboraturium serta mengenakan perlengkapan K3.
Langkah kerja
1. Timbanglah bahan-bahan komponen yang terdapat pada setiap larutan stok
dengan menggunakan timbangan analitik sesuai hasil perhitungan di atas
2. Simpanlah hasil setiap penimbangan pada wadah yang berbeda dan diberi
identitas sesuai nama bahan
3. Kelompokkanlah bahan-bahan hasil penimbangan tersebut menurut jenis
stoknya
4. Buatlah masing-masing larutan stok sebagai berikut:
a. Stok makro NH4NO3
b. Isilah gelas piala ± 500 ml dengan aquades
c. Masukkanlah bahan NH4NO3 kedalam gelas piala
d. Aduk sampai larut merata dengan menggunakan hot plate dan magnetic
stirer jangan sampai terdapat endapan
e. Pindahkan larutan ke labu takar 1 liter dan tepatkanlah volume labu
sampai tanda tera 1000 ml dengan menambah aquades
f. Berilah label: nama bahan, tanggal pembuatan, konsentrasi stok, dan
nama pembuat
2017 48
g. Stok makro KNO3, KH2PO4, CaCl2.2H2O caranya sama dengan di atas

(langkah a-f)
h. Stok mikro
 Masukkanlah satu persatu bahan-bahan stok mikro kedalam gelas
piala 1 liter yang berisi ±700 ml aquades, setiap memasukkan bahan
diikuti dengan pengadukan agar larut baru diikuti oleh bahan
berikutnya
 Setelah semua bahan larut, dipindahkan ke labu takar 1 liter dan
ditepatkan volumenya dengan menambah aquades kemudian tutup
rapat
i. Stok vitamin
 Semua bahan dimasukkan kedalam labu takar 100 ml yang telah
berisi aquades kira-kira 25 ml, hati-hati dalam membilas bahan yang
masuk ke labu
 Labu takar dikocok hingga semua bahan larut, kemudian volume labu
takar ditepatkan 1 liter dengan menambah aquades dan kemudian
tutup rapat.
5. Pindahkanlah larutan stok dari labu takar ke wadah yang sudah disediakan,
untuk stok Fe diwadahi pada wadah yang berwarna gelap atau wadah yang
ditutupi kertas aluminium foil
6. Berilah identitas/label pada wadah larutan stok yang memuat tentang:
a. nama stok
b. konsentrasi stok (... x Cm, mg/l, ppm, M)
c. tanggal pembuatan
d. nama pembuat
7. Tempatkanlah larutan-larutan stok tersebut pada kulkas
LEMBAR KERJA 4
Membuat Media Kultur Jaringan (MS)
2017 49
Pendahuluan
Media kultur jaringan tanaman merupakan salah satu faktor penentu
keberhasilan dalam pembiakan tanaman secara kultur jaringan. Oleh karena itu
perlu kehati-hatian, ketelitian, ketepatan dan kecermatan dalam bekerja, agar
diperoleh media kultur yang memiliki formulasi dan konsentrasi yang tepat.
Berdasarkan kepekatan larutan stok yang telah dibuat di atas maka untuk
membuat media MS tidak harus menimbang bahan semuanya tetapi cukup
mengambil dari larutan stok yang telah tersedia.
Tujuan
Apabila disediakan alat dan bahan yang sesuai peserta diklat dapat membuat
media MS secara teliti dan hati-hati sesuai dengan jenis tanaman yang akan
dikulturkan
Bahan dan Alat

1. larutan stok:
2. Komponen media yang lain:
a. gula pasir
b. agar-agar
c. mio-inositol
d. aquades
3. Botol-botol kultur
4. Timbangan
5. Hot plate dengan pengaduk magnet (magnetic stirer)
6. pH meter atau kertas indikator
7. Alat-alat gelas:
- Erlenmeyer, wadah untuk melarutkan dan mencampur bahan, gelas piala,
tempat aquades
- Labu takar atau gelas ukur, untuk menepatkan volume larutan
- Pipet tetes dan botol semprot untuk mengambil larutan stok dan membilas
pipet yang telah digunakan untuk mengambil bahan/larutan stok yang
lainya
2017 50
Keselamatan kerja
Selama melakukan kegiatan ini diharapkan Anda selalu bertindak secara hati-
hati, teliti, cermat dan taat azas serta mengenakan perlengkapan K3.
Langkah kerja
1. Timbang gula 30 g, agar-agar 8 g, mio-inositol 100 mg dengan tepat
2. Larutkan 30 gram gula pasir kedalam ± 700 ml aquades dengan tepat.
3. Tambahkan 20 ml larutan stok A dan 20 ml larutan stok B dengan tepat.
4. Tambahkan 10 ml larutan stok C dan 10 ml larutan stok D dengan tepat.
5. Tambahkan 5 ml larutan stok E dan 5 ml larutan stok F dengan tepat.
6. Tambahkan 1 ml stok vitamin dengan tepat.
7. Tambahkan 100 mg myo-inositol dengan tepat.
8. Tambahkan zat pengatur tumbuh sesuai kebutuhan.
9. Tambahkan aquades hingga volume mendekati 1000 ml dengan tepat, ukur
pH media antara 5,6 sd 5,8.
10. Tambahkan ± 8 gram agar-agar.
11. Panaskan sambil diaduk hingga agar-agar larut.
12. Angkat media dari pemanas ketika hampir mendidih.
13. Tuangkan ke dalam botol kultur ± 25 ml.
14. Sterilkan dalam autoclave pada tekanan 17,5 psi selama 30 menit dengan
tepat.
E. Latihan Soal
Jawablah soal-soal berikut dengan benar dengan cara memberi tanda silang
(X) huruf a,b,c atau d pada salah satu pilihan jawaban!
1. Larutan stok besi (Fe) harus disimpan dalam botol yang gelap karena:
a. bila terkena sinar matahari akan mudah menguap sehingga cepat habis
b. bila terkena sinar matahari akan mudah mengendap sehingga tidak dapat
digunakan lagi
c. bila terkena sinar matahari akan mudah ditumbuhi plankton sehingga
tidak dapat digunakan lagi
2017 51
d. bila terkena sinar matahari akan mudah berubah warna sehingga

efektifitasnya mudah berkurang
2. Komposisi dan konsentrasi unsur hara pada formulasi media kultur harus
tepat baik unsur hara makro maupun unsur hara mikronya. Yang termasuk
unsur hara mikro adalah:
a. nitrogen (N), fosfor (P), kalium (K), niasin dan peredoksin
b. boron (B), cobalt (Co), tembaga (Cu), magnesium (Mg), dan sulfur (S).
c. nitrogen (N), fosfor (P), kalium (K), kalsium (Ca), magnesium (Mg), dan
sulfur (S).
d. boron (B), cobalt (Co), tembaga (Cu), Iodium (I), besi(Fe), mangan (Mn),
molybdenum (Mo), dan seng (Zn).
3. Media kultur yang telah dibuat jika akan digunakan harus diinkubasikan dulu
selama 3-4 hari dengan tujuan ....
a. untuk memastikan bahwa media kultur sudah betul-betul steril
b. untuk memastikan bahwa media kultur sudah memadat dengan baik
c. untuk memastikan bahwa media kultur tidak terjadi perubahan volume
d. untuk memastikan bahwa volume media kultur sudah cukup untuk
ditanami
4. Kriteria media kultur yang baik adalah ....

a. tidak ada tanda-tanda terkontaminasi dan tingkat kepadatan agar-agarnya
sedang
b. volumenya sekitar 25 ml, sudah betul-betul dingin, dan berwarna bening
c. sudah diinkubasikan selama 3-4 hari dan sudah betul-betul dingin
d. sudah betul-betul dingin dan agar-agarnya sudah memadat
5. Sikap yang harus diterapkan pada saat membuat media kultur jaringan agar
keberhasilannya tinggi adalah ....
a. tanggung jawab, tekun, dan kerjasama
b. tanggung jawab, disiplin, dan sabar
c. kerjasama, tanggung jawab, dan sabar
d. teliti, tekun, dan disiplin
2017 52
F. Rangkuman
Komponen dalam media kultur jaringan meliputi unsur hara makro, unsur
mikro, vitamin (vitamin B1) dan Myo-inositol, niasin dan piridoksin (B6), gula
(sukrosa), zat pengatur tumbuh, agar-agar, arang aktif, dan air suling
(aquades).
Jenis-jenis media kultur jaringan antara lain Murashige dan Skoog (MS),
memiliki kisaran pemakaian yang paling luas. Gamborg atau B-5, cocok
untuk kultur suspensi sel kedelai dan legume. Vacin dan Went (VW), cocok
digunakan untuk media kultur jaringan anggrek. Nitsch dan Nitsch, cocok
digunakan untuk media kultur tepung sari dan kultur sel. Schenk dan
Hildebrandt (SH) cocok digunakan untuk media tanaman dikotil. Woody
Plant Medium (WPM) cocok digunakan untuk media tanaman berkayu.
Larutan stok adalah larutan yang berisi satu atau lebih komponen media yang
konsentrasinya lebih tinggi daripada konsentrasi komponen tersebut dalam
formulasi media yang akan dibuat. Larutan stok dapat dibuat dengan
konsentrasi 10 kali hingga 100 kali lipat lebih pekat. Pembuatan media dapat
dilakukan dengan cara mengambil sejumlah larutan stok sehingga
konsentrasinya sesuai dengan yang terdapat dalam formulasi media yang
dikehendaki.
Pembuatan larutan stok juga harus mempertimbangkan kebutuhan media

dan masa kadaluwarsa larutan stok. Misalnya masa kadaluwarsa stok adalah
1 bulan, sedangkan untuk membuat media dalam 1 bulan menghabiskan stok
masing-masing sebanyak 1 liter dengan kelipatan konsentrasi 100x, maka
larutan stok yang dibuat dalam 1 bulan masing-masing sebanyak 1 liter
dengan konsentrasi 100 x. Dengan demikian larutan stok yang dibuat tidak
pernah mubadzir karena kadaluwarsa.
2017 53
Pertimbanganyang harus diperhatikan dalam membuat larutan stok adalah:

1. Larutan stok sebaiknya disimpan tidak lebih dari dua bulan. Stok vitamin
dan ZPT lebih baik kalau digunakan dalam keadaan segar atau kurang
dari dua minggu setelah dibuat. Oleh karena itu berapa volume larutan
stok yang akan dibuat, sebaiknya ditentukan dahulu berapa kebutuhan
media dan kapan media akan dibuat.
2. Larutan stok yang telah mengalami pengendapan dan yang sudah
ditumbuhi mikroorganisme tidak boleh digunakan lagi.
3. Semua peralatan gelas untuk membuat stok dan media harus dibilas
dengan aquades dulu baik sebelum maupun setelah digunakan.
4. Kebutuhan larutan stok untuk membuat media dapat digunakan
rumus V1 x N1 = V2 x N2.
Sebelum media tanam dibuat, sebaiknya beberapa zat komponen media

perlu ditimbang seperti agar-agar dan gula serta alat dan bahan yang
diperlukan sudah disiapkan. Semua komponen media baik dalam bentuk
larutan stok maupun bahan yang ditimbang dimasukkan satu demi satu ke
dalam gelas piala, volume akhir dibuat menjadi 1 liter dengan menambahkan
aquades, pengukuran dilakukan dengan menggunakan gelas ukur. Larutan
diaduk sampai homogen kemudian pHnya diukur, apabila pHnya lebih tinggi
dari pH yang diinginkan larutan ditetesi dengan HCl sedangkan apabila lebih
rendah ditetesi KOH. Setelah pH larutan diukur, pemadat media (agar-agar 7
g/l atau gelrite 2 g/l) ditambahkan, media dimasak sampai mendidih untuk
melarutkan pemadat medianya. Media dimasukkan ke dalam botol-botol
kultur dan ditutup dengan plastik atau aluminum foil, media dalam botol
disterilisasi menggunakan autoklaf pada tekanan 1,1-1,5 kg/cm2 dengan suhu
121°C selama 20 menit. Setelah dingin, media sebaiknya disimpan di ruang
ber-AC (suhu24-26°C) selama 3 hari sebelum digunakan dengan tujuan
untuk melihat kesterilan media yang ditandai dengan tidak adanya
kontaminasi dalam media tersebut.
Kriteria media tanam yang baik untuk ditanami adalah:

1. Tidak terjadi kontaminasi setelah diinkubasikan selama 4 sd 5 hari
2017 54
2. Kepadatan agarnya cukup/ sedang (tidak terlalu keras dan tidak terlalu
encer)
G. Umpan Balik dan Tindak Lanjut

Setelah saudara mempelajari media kultur jaringan dengan metode
pembelajaran mengamati (mengenal fakta lapangan, membaca modul),
diskusi, mencoba tahap-tahap pengembangan, melakukan tugas, apakah
Anda bisa membuat media kultur jaringan di sekolah anda? Apa yang akan
saudara lakukan ?
2017 55
PENANAMAN
A. Tujuan
Setelah mempelajari materi dan melakukan praktik peserta pelatihan mampu
melakukan penanaman eksplan dengan hati-hati dan teliti sehingga eksplan
tumbuh dengan baik dan tidak terkontaminasi.

Melalui kegiatan pengamatan, diskusi, dan pengumpulan informasi bapak/
ibu dapat:
1. Melakukan inisiasi eksplan
2. Melakukan subkultur inokulum.
3. Menggandakan inokulum.
4. Meregenerasikan inokulum.
5. Menginduksi perakaran inukulum.
6. Mengelola ruang pertumbuhan
7. Melakukan aklimatisasi
8. Menerapkan keselamatan dan kesehatan kerja
C. Uraian Materi
Penanaman dalam kultur jaringan meliputi 2 jenis kegiatan yang prosesnya
hampir sama tetapi ada perbedaan-perbedaan yaitu dalam hal sterilisasi
bahan tanamnya maupun komposisi media yang digunakan. Kedua jenis
penanaman tersebut adalah 1. inisiasi eksplan dan 2. subkultur inokulum.
2017 56
Yang pertama adalah inisiasi yaitu penanaman dalam kultur jaringan yang
menggunakan bahan tanaman (eksplan) yang berasal dari tanaman yang
tumbuh secara ex vitro dari lapangan. Oleh karena bahan tanam berasal dari
lapangan maka sebelum dilakukan penanaman harus dilakukan pemotongan
dan sterilisasi terlebih dahulu, agar ukuran dan sterilisasinya memenuhi
syarat untuk ditanam di botol kultur yang berisi media. Prosedur sterilisasi
bahan tanam dari lapangan sangat dipengaruhi dari mana bahan tanam
tersebut berasal dan jenis mikroorganisme yang ada di lingkungan dimana
bahan tanam tersebut berasal.
Yang kedua adalah subkultur yaitu penanaman yang menggunakan bahan

tanam (inokulum) yang berasal dari dalam botol kultur. Oleh karena bahan
tanamnya berasal dari botol kultur (in vitro) yang sudah steril maka dalam
melakukan subkultur tidak dilakukan sterilisasi lagi. Subkultur akan dilakukan
apabila tanaman sudah memenuhi botol atau tanaman memerlukan media
baru.
Penanaman dalam kultur jaringan baik inisiasi maupun subkultur tingkat

keberhasilannya dipengaruhi oleh kecepatan dalam melakukan penanaman
dan sterilitas dari ruang tanam dan peralatan inokulasi, dan sterilitas bahan
tanamnya. Semakin terampil pelaksana maka dia akan semakin cepat dalam
melakukan inokulasi/ penanaman. Semakin cepat inokulasi/ penanaman
dilakukan maka resiko kontaminasi semakin sedikit karena eksplan dan
media semakin sebentar bersinggungan dengan udara luar. Sterilitas ruang
tanam dan peralatan inokulasi juga berpengaruh terhadap keberhasilan
penanaman. Ruang tanam dan peralatan inokulasi yang kurang steril akan
mengakibatkan eksplan dan media terkontaminasi sehingga tidak dapat
tumbuh dengan baik bahkan dapat mati. Sterilitas eksplan juga berpengaruh
terhadap keberhasilan penanaman karena eksplan yang kurang steril akan
mengakibatkan kontaminasi yang akhirnya dapat mengakibatkan eksplan
tidak dapat tumbuh dengan baik dan akhirnya mati.
Dalam melakukan penanaman/ inokulasi di ruang tanam resiko bahaya yang

penting untuk diperhatikan adalah timbulnya kebakaran. Di dalam ruang
2017 57
tanam terdapat api bunsen dan alkohol atau spiritus yang mudah sekali
tersulut api sehingga harus berhati-hati dan tidak boleh gugup. Menggunakan
api bunsen juga harus berhati-hati, untuk mematikan api bunsen supaya
aman dengan cara ditutup dengan penutupnya. Jika api ditiup sangat
berbahaya karena api akan menyulut pada alkohol atau spiritusnya.
1. Inisiasi Eksplan.
Inisiasi eksplan adalah salah satu tahapan dalam kegiatan perbanyakan
tanaman secara kultur jaringan. Pengetahuan berbagai eksplan dan
penggunaannya sangat penting untuk diketahui agar dalam penentuan
eksplan yang digunakan sesuai dengan tujuan perbanyakan tanaman
yang diinginkan. Selain itu, juga perlu didukung dengan pengetahuan
tentang kriteria penentuan eksplan agar bibit tanaman hasil perbanyakan
secara kultur jaringan memenuhi standar mutu sesuai yang diinginkan
konsumen.
Keberhasilan inisiasi eksplan juga ditentukan oleh kegiatan sterilisasi

eksplan tersebut. Penggunaan bahan sterilan dan teknik sterilisasi
eksplan yang sesuai juga sangat menentukan aseptisitas dan tumbuh
atau tidaknya eksplan yang dikulturkan. Hal lainnya yang mendukung
keberhasilan inisiasi eksplan adalah kegiatan inokulasi eksplan. Inokulasi
eksplan perlu didukung pengetahuan peralatan dan bahan yang
digunakannya berserta fungsinya. Selain itu, juga harus dikuasai
keterampilan tentang teknik inokulasi eksplannya secara aseptis dalam
media kultur sehingga eksplan yang dikuturkan dapat tumbuh dan
berkembang menjadi inokulum.
Eksplan adalah bagian kecil jaringan atau organ yang diambil atau
dipisahkan dari tanaman induknya sebagai bahan tanam in vivo kemudian
dikulturkan secara in vitro dalam kondisi aseptis. Ada beberapa jenis
eksplan yang dapat digunakan sebagai bahan tanam in vitro, yaitu:
a. Eksplan biji biasanya digunakan untuk kultur biji (seed culture). Kultur
ini biasanya dilakukan pada biji tanaman yang bersertifikat dan dipetik
2017 58
dari tanaman induk yang sudah diketahui keunggulan sifatnya. Hal ini
umumnya pada tanaman semusim yang organ tanamannya sangat
sensitif terhadap bahan sterilan kimia. Selain itu biji juga dapat
langsung dikecambahkan pada media agar-agar, contoh : biji anggrek
yang tidak memiliki cadangan makanan.
b. Eksplan organ, seperti : ujung akar, pucuk aksilar, tangkai daun,

helaian daun, bunga, buah muda, dan buku batang, biasanya
digunakan untuk kultur organ (organ culture). Eksplan organ tersebut
biasanya digunakan untuk penanaman kultur melalui organogenesis
(pembentukan organ tanaman secara langsung maupun tidak
langsung) dan embriogenesis somatik (pembentukan embrio tanaman
secara langsung maupun tidak langsung dari jaringan somatik). Selain
itu akar biasanya digunakan dalam hairy root culture yaitu kultur dari
eksplan akar untuk memproduksi bahan metabolit sekunder dari akar
tanaman.
Gambar 8. Eksplan pucuk/ daun
c. Eksplan bagian reproduktif tanaman, seperti : kepala sari (anther),

tepungsari (pollen), dan bakal buah (ovule) biasanya digunakan untuk
kultur haploid (haploid culture). Eksplan tersebut digunakan dalam
kultur untuk menghasilkan tanaman haploid (haploid culture), melalui
kultur eksplan anter (anther culture), kultur eksplan polen (pollen
culture), dan kultur eksplan ovul (ovule culture).
2017 59
d. Eksplan protoplas tanaman yang digunakan untuk kultur protoplasma

(protoplast culture). Eksplan tersebut berupa sel yang telah dilepas
bagian dinding selnya menggunakan bantuan enzim. Protoplas
diletakkan pada media padat dibiarkan agar membelah diri dan
membentuk dinding selnya kembali. Kultur protoplas biasanya untuk
keperluan hibridisasi somatik atau fusi sel soma (fusi 2 protoplas baik
intraspesifik maupun interspesifik).
Agar eksplan yang ditanam/ diinokulasi memiliki keberhasilan yang tinggi

maka eksplan harus baik dan memenuhi persyaratan tertentu yaitu:
a. Tanaman yang dijadikan sumber eksplan harus dari tanaman induk
yang sehat, tumbuh baik atau normal dan memiliki keunggulan sifat.
b. Tanaman yang dijadikan sebagai sumber eksplan juga harus berasal
dari tanaman induk yang memiliki nilai ekonomis tinggi. Hal ini
berkaitan dengan biaya investasi alat dan biaya produksi bibit secara
kultur jaringan yang cukup tinggi.
c. Ukuran eksplan dapat berpengaruh terhadap daya tahan eksplan
selama pertumbuhannya untuk tumbuh membentuk tunas atau kalus.
Ukuran eksplan yang terlalu kecil mempunyai daya tahan yang kurang
baik dibandingkan dengan ukuran eksplan yang lebih besar. Ukuran
eksplan yang baik adalah antara 0,5 sampai 1 cm, tetapi hal ini tidak
mutlak karena masih tergantung pada jenis tanamannya.
d. Umur fisiologiseksplan sangat berpengaruh terhadap kemampuan
untuk beregenerasi. Jaringan tanaman yang masih muda dan bersifat
meristematik (sel-selnya masih aktif membelah) lebih mudah
beregenerasi dibandingkan dengan jaringan yang sudah tua. Oleh
karena itu bagian tanaman yang meristematik tingkat keberhasilan
pengkulturannya lebih tinggi apabila dijadikan sebagai eksplan.
Bagian tanaman yang termasuk jaringan meristematik adalah pucuk
apikal, pucuk lateral dan pucuk aksial.
e. Kandungan cadangan makanan eksplan. Bagian tanaman yang
banyak mengandung persediaan makanan serta bahan-bahan lain
untuk pertumbuhan tersebut mudah untuk beregenerasi dibandingkan
dengan bagian tanaman yang kurang mengandung bahan makanan.
2017 60
f. Tingkat kontaminasi eksplan. Bagian-bagian tanaman seperti akar

dan umbi yang tumbuh di dalam tanah tingkat kontaminasinya lebih
tinggi dibandingkan dengan bagian-bagian tanaman yang ada di atas
permukaan tanah seperti tunas pucuk, daun serta biji.
Sterilisasi eksplan merupakan bagian yang sangat menentukan

keberhasilan inisiasi eksplan. Sterilisasi eksplan merupakan salah satu
prosedur yang digunakan untuk menghilangkan kontaminan
mikroorganisme pada eksplan. Kontaminan pada eksplan dapat berupa
cendawan, bakteri, tungau, serangga dan telurnya. Apabila kontaminan
tersebut tidak dihilangkan maka pada media yang mengandung gula,
vitamin dan mineral dalam waktu singkat akan dipenuhi kontaminan
sehingga mengakibatkan eksplan menjadi mati.
Bahan-bahan untuk sterilisasi eksplan dapat berupa antibiotika, fungisida,

baketrisida, desinfektan lainnya. Berikut ini adalah beberapa contoh
bahan sterilisasi eksplan.
Tabel 3. Bahan Sterilisasi Eksplan dan Penggunaannya.
BAHAN WAKTU
PENGGUNAAN FUNGSI
STERILISASI STERILISASI
Detergen Secukupnya Secukupnya Membersihkan

kotoran dan
getah eksplan
Fungisida 2 gram/liter 30 menit Sterilisasi eksplan
dari cendawan
Bakterisida 2 gram/liter 30 menit Sterilisasi eksplan
dari bakteri
Alkohol 70 - 95 % 1-5 menit Desinfektan
Sodium hipoklorit 5 - 30 % 5-30 menit Desinfektan
(Clorox)
Mercury khlorida 0,01 - 0,1 % 2-10 menit Desinfektan
(Sublimat)
Tween-20 1 - 3 tetes Secukupnya Agen pembasah
Antibiotik Sesuai dosis Secukupnya Anti bakteri dan
jamur
Iodine 5 -10 tetes Secukupnya Antiseptik
2017 61
Teknik sterilisasi eksplan secara umum dapat dilakukan dengan 2 cara

yaitu sterilisasi secara fisik (dibakar) dan sterilisasi secara kimia
(direndam dalam larutan kimia).
Teknik sterilisasi secara fisik (dibakar) tidak dapat diterapkan pada semua
jenis eksplan. Eksplan yang dapat disterilisasi secara fisik adalah eksplan
yang terbungkus oleh jaringan luar misalnya pelepah, daging buah, atau
kulit luar yang sangat tebal sehingga eksplan yang dibakar bagian
dalamnya tidak rusak atau mati. Contoh eksplan yang dapat disterilisasi
secara fisik yaitu : buah anggrek, bonggol pisang, biji jarak, keiki anggrek
dan lain-lain. Proses pembakaran jaringan eksplan yang dilakukan jangan
sampai merusak titik tumbuh eksplan yang akan dikulturkan.
Prosedur sterilisasi eksplan secara fisik dimulai dengan pencucian bagian

permukaan eksplan dari kotoran atau getah menggunakan detergen.
Eksplan kemudian dicelupkan ke dalam alkohol absolut dan dibakar pada
api lampu bunsen lalu dibiarkan sampai nyala api yang membakar
eksplan padam. Eksplan selanjutnya dilakukan inokulasi di media kultur
dengan mengecilkan ukurannya terlebih dahulu menggunakan skalpel.
Gambar 9. Pemotongan Eksplan Pisang
2017 62
Sedangkan teknik sterilisasi eksplan secara kimia dengan direndam

dalam bahan kimia dimulai dengan mencuci bagian permukaan eksplan
dari kotoran atau getah menggunakan detergen dan dibilas menggunakan
air bersih. Eksplan kemudian direndam dan digojok dalam larutan
fungisida 2 gram/liter selama 30 menit dan dalam larutan bakterisida 2
gram/liter selama 30 menit. Eksplan dapat juga langsung direndam dan
digojok dalam larutan fungisida+bakterisida dengan konsentrasi masing-
masing 2 gram/liter selama 1 jam. Proses sterilisasi kemudian dilanjutkan
di dalam Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) dimulai dengan membilas sisa
larutan fungisida dan bakterisida pada eksplan menggunakan akuades
steril. Eksplan selanjutnya dapat direndam dan digojok dalam berbagai
larutan desinfektan mulai dengan alkohol 70 atau 95 % dan larutan
sodium hipoklorit (Bayclin) dengan konsentrasi 10-30 % secara bertahap.
Eksplan lalu dibilas dengan akuades steril sebanyak 3 kali dan direndam
dalam larutan antiseptik sampai akhirnya siap untuk dilakukan inokulasi.
Inokulasi eksplan adalah kegiatan penanaman bahan tanam (eksplan) ke

dalam media inisiasi baik berupa media padat/cair dalam botol kultur di
Laminar Air Flow Cabinet dengan kondisi aseptik. Kondisi aseptik
diperlukan untuk keberhasilan inokulasi eksplan sehingga kegiatan
inokulasi memerlukan peralatan dan bahan yang mendukung terciptanya
kondisi yang aseptik. Laminar atau entkas merupakan meja kerja steril
tempat inokulasi eksplan maka untuk menciptakan kondisi aseptik laminar
atau entkas perlu disterilisasi terlebih dahulu dengan cara menyalakan
lampu ultra violet (UV) minimal 30 menit sebelum dioperasikan. Apabila
pada entkas tidak terdapat lampu UV, sterilisasi dapat dilakukan dengan
cara menempatkan larutan formalin 5 % atau formalin tablet pada cawan
petri yang diletakkan di dalam entkas selama 1 malam.
Teknik inokulasi eksplan dimulai dengan mengambil eksplan dari tempat

rendamannya dan dipotong secara aseptis menggunakan skalpel sesuai
dengan jenis eksplannya. Botol kultur berisi media dibuka secara aseptis
dan potongan eksplan ditanam dalam botol kultur secara aseptis sedalam
± 0,5-1 cm. Jumlah eksplan yang ditanam disesuaikan dengan kapasitas
2017 63
media dalam botol. Botol kultur yang telah dilakukan inokulasi eksplan
kemudian ditutup secara aseptis hingga rapat dan diberi identitas
mengenai : jenis tanaman, jenis media, tanggal penanaman, dan kode
kegiatan.
Hasil inokulasi eksplan selanjutnya disimpan dalam ruang pertumbuhan

dengan kondisi lingkungan yang terkendali. Pemberian identitas pada
botol kultur tersebut merupakan hal penting karena identitas awal sangat
menentukan dalam tahapan kultur selanjutnya dan kultur yang tanpa
identitas akan menyulitkan proses selanjutnya.
Keterangan :
5 6 7
1. Botol media kultur
3 2. Kertassteril
3. Tissue steril
4. Petridish
5. Lampu Bunsen
6. Mangkuk stainless steel
2 4 7. Botol rendaman alkohol
Gambar 10. Layout Meja Penanaman
Gambar 11. Layout Meja Penanaman
2017 64
2. Subkultur Inokulum.
Sub kultur dalam perbanyakan tanaman secara kultur jaringan diperlukan
agar diperoleh populasi pucuk atau anakan yang banyak. Satu pucuk
inokulum dapat diperbanyak menjadi 20 pucuk yang dapat dipisahkan
menjadi 20 propagul. Sedangkan 20 propagul tersebut masing-masing
telah membentuk sejumlah pucuk lagi dan seterusnya. Kelebihan kultur
ini adalah pucuk atau hasil perbanyakan pertama dapat langsung
dipergunakan untuk perbanyakan selanjutnya.
Kegiatan sub kultur harus dilakukan terhadap inokulum disebabkan oleh

beberapa hal antara lain :
a. Tumbuhnya eksplan cukup cepat dan telah memadati seluruh botol
kultur.
b. Media tumbuh telah habis dan mulai mengering yang ditandai dengan
berkurangnya volume agar-agar atau cairannya sudah habis.
c. Eksplan perlu diperbanyak lebih lanjut untuk tujuan tahapan
perbanyakan selanjutnya.
d. Eksplan memerlukan media yang susunannya baru agar dapat
mengalami diferensiasi lebih lanjut.
Eksplan atau kalus yang sudah waktunya dipindahkan ke dalam media

kultur yang baru harus segera dilaksanakan dan tidak boleh sampai
terlambat. Sub kultur yang terlambat dapat menyebabkan pertumbuhan
eksplan atau kalus tersebut akan terhenti atau mengalami pencoklatan
atau bahkan terkontaminasi oleh jamur atau bakteri. Keadaan eksplan
yang demikian kemungkinan untuk diselamatkan kecil sekali sebab spora
jamur atau bakteri dapat menyebar dengan cepat sekali.
Tahap sub kultur inokulum untuk tujuan perbanyakan eksplan selanjutnya

dapat dilakukan dengan beberapa cara. Perbanyakan stek satu buku
yang dilanjutkan sub kultur berkali-kali dari buku pada tunas yang
dihasilkan, diikuti dengan pengakaran tunas, misalnya pada tanaman
krisan, kentang atau jati. Metode yang lain dilakukan dengan mendorong
perbanyakan tunas samping dari eksplan tunas pucuk atau stek satu
2017 65
buku untuk membentuk tunas-tunas majemuk seperti pada kultur pisang,

vanili, nenas dan strowberi. Perbanyakan dengan metode percabangan
tunas samping sering digunakan karena relatif sederhana, penyimpangan
genetik relatif kecil, perbanyakannya berlangsung cukup cepat dan
tanaman yang dihasilkan tumbuh dengan baik karena terjadi rejuvenasi.
Selain perbanyakan dengan metode tersebut juga dikenal metode dengan

jalur organogenesis dan embriogenesis somatik. Eksplan pada kedua
metode ini dirangsang pertumbuhannya untuk membentuk tunas atau
embrio secara adventif baik secara langsung (tidak melalui pembentukan
kalus) maupun tidak langsung (melalui pembentukan kalus). Eksplan
yang sebelumnya tidak mempunyai titik tumbuh (meristem) dikondisikan
sedemikan rupa sehingga terbentuk organ atau embrio baru.
Perbanyakan dengan metode ini lebih rentan timbulnya penyimpangan
genetik terutama terbentuknya anakan melalui fase kalus terlebih dahulu.
Perbanyakan eksplan melalui jalur organogenesis atau embriogenesis

somatik akan menghasilkan perkembangan tanaman yang lengkap jika
dikulturkan pada medium yang sesuai. Pola perkembangan dapat
mengikuti salah satu pola berikut :
a. eksplan  organ  tanaman (organogenesis langsung)
b. eksplan  kalus  organ  tanaman (organogenesis tidak langsung)
c. eksplan  embrio  tanaman (embriogenesis somatik langsung)
d. eksplan  kalus  embrio  tanaman (embriogenesis somatik tidak
langsung)
Salah satu contoh proses organogenesis adalah terbentuknya tunas

adventif dari eksplan potongan daun tembakau. Proses embriogenesis
somatik dapat diamati dengan terbentuknya embrio somatik dari eksplan
pule pandak yang dapat dikecambahkan dan diregenerasikan menjadi
tanaman pule pandak.
Kegiatan subkultur dapat meliputi tiga jenis yaitu penggandaan inokulum,

regenerasi inokulum, dan induksi perakaran inokulum.
2017 66
Gambar 12. Kegiatan Subkultur
3. Penggandaan Inokulum.
Tahap penggandaan inokulum bertujuan untuk menggandakan bahan
eksplan hasil inokulasi yang hidup dengan cara diperbanyak untuk
pertumbuhan tunas atau embrio serta memeliharanya dalam keadaan
tertentu sehingga sewaktu-waktu dapat dilanjutkan untuk tahap
berikutnya. Media yang digunakan untuk setiap tahap perbanyakan
secara kultur jaringan khususnya pada tahap penggandaan tunas
umumnya berbeda dalam penggunaan jenis dan konsentrasi zat pengatur
tumbuh. Dua golongan zat pengatur tumbuh yang sangat penting dalam
kultur jaringan adalah auksin dan sitokinin. Kombinasi auksin dan sitokinin
dalam tanaman mendorong pembelahan sel dan menentukan arah
terjadinya diferensiasi sel sehingga terbentuk organ tanaman yang baru.
Tahap penggandaan inokulum dengan mendorong pertumbuhan dan

penggandaan tunas aksilar atau untuk merangsang tunas-tunas adventif
sering digunakan sitokinin atau campuran sitokinin dengan auksin rendah.
Hal ini dikarenakan penggunaan taraf konsentrasi sitokinin yang relatif
tinggi terhadap auksin akan merangsang inisiasi tunas dan sebaliknya
penggunaan taraf konsentrasi sitokinin yang relatif rendah terhadap
auksin akan merangsang inisiasi akar. Jenis sitokinin yang sering dipakai
adalah BA (Benzil Adenine) karena efektifitasnya tinggi dan harganya
relatif murah. Sedangkan salah satu auksin sintetis yang sering dipakai
2017 67
adalah NAA (Napthalene Acetic Acid). NAA mempunyai aktifitas sama

dengan IAA (Indole Acetic Acid) namun NAA lebih stabil sehingga sering
dipakai sebagai pengganti IAA.
Peralatan yang digunakan untuk kegiatan penggandaan inokulum sama

dengan peralatan standar untuk kegiatan inokulasi eksplan. Alat-alat
diseksi yang terdiri dari pinset digunakan untuk menjepit inokulum dan
untuk menanam inokulum serta scalpel beserta mata pisau digunakan
dalam pemotong bagian-bagian inokulum. Cawan petri atau petridish
digunakan untuk alas memotong inokulum atau digunakan untuk
menyimpan sementara potongan inokulum sebelum diinokulasikan ke
dalam media kultur. Lampu bunsen atau lampu spirtus berfungsi untuk
membakar atau mensterilkan alat-alat diseksi (pinset dan pisau scalpel)
dan eksplan. Mangkuk stainless steel digunakan sebagai tempat
meletakkan alat-alat diseksi setelah dibakar di atas api bunsen.
Bahan yang digunakan dalam kegiatan penggandaan inokulum sama

dengan kegiatan inokulasi eksplan yaitu : alkohol 70%, alkohol 95%,
tissue steril, kertas steril dan mata pisau. Alkohol digunakan untuk
mensterilkan laminar/entkas dan mensterilkan tangan pekerja sebelum
melakukan inokulasi dalam laminar/entkas. Tissue steril digunakan untuk
meniriskan inokulum serta untuk membersihkan peralatan diseksi. Kertas
steril digunakan sebagai alas saat dilakukan pemotongan inokulum. Letak
peralatan dan bahan yang digunakan dalam kegiatan penggandaan
inokulum sama dengan pada kegiatan inokulasi bahan eksplan yang
diatur dengan mempertimbangkan keselamatan kerja dan terjaganya
kondisi yang aseptik.
Prosedur penggandaan inokulum dimulai dengan pemindahan atau sub

kultur eksplan yang hidup dan tidak terkontaminasi (aseptis) dari tahap
inisiasi kultur ke media yang mengandung zat pengatur tumbuh sitokinin.
Propagul yang dihasilkan dalam jumlah yang berlipat disubkulturkan terus
secara berulang-ulang sampai dicapai jumlah propagul yang diharapkan.
Tunas mikro atau kalus yang dihasilkan dari tahap ini selanjutnya
2017 68
dilakukan tahap regenerasi sebelum tahap akhir berupa induksi

perakaran inokulum.
4. Regenerasi Inokulum.
Tunas-tunas yang dihasilkan pada tahap penggandaan inokulum
kemudian dilakukan sub kultur atau dipindahkan ke media lain untuk
tahap selanjutnya yaitu tahap regenerasi inokulum. Media yang
digunakan tahap regenerasi inokulum menggunakan zat pengatur tumbuh
sitokinin dengan konsentrasi sangat rendah atau tanpa sitokinin.
Contohnya pada tahap regenerasi atau pemanjangan tunas tanaman jati,
inokulum ditanam pada media dasar MS tanpa penambahan zat pengatur
tumbuh atau dapat ditambahkan sitokinin dengan konsentrasi yang
sangat rendah (0,01-0,05 mg/l) bahkan jika perlu dapat ditambah asam
giberellin (GA3) dengan konsentrasi 0,1-1 mg/l untuk tujuan pemanjangan
buku tanaman.
Peralatan dan bahan yang digunakan dalam kegiatan regenerasi

inokulum sama dengan pada kegiatan penggandaan inokulum. Prosedur
penggandaan inokulum dimulai pemotongan tunas-tunas aksilar atau
tunas-tunas adventif yang terbentuk pada tahap penggandaan inokulum.
Tunas-tunas tersebut dipindahkan atau disubkultur secara individu atau
secara kelompok ke media dengan zat pengatur tumbuh sitokinin dengan
konsentrasi sangat rendah atau tanpa sitokinin. Regenerasi tunas yang
dilakukan secara berkelompok lebih ekonomis daripada secara individu
terutama lebih ekonomis dalam volume penggunaan media dan botol/
wadah kultur. Tunas yang telah tumbuh baik di media regenerasi
selanjutnya dapat dilanjutkan ke tahap berikutnya yaitu tahap induksi
perakaran.
Regenerasi tunas dan induksi perakarannya dapat dilakukan sekaligus

atau secara bertahap, yaitu setelah tunasnya mengalami pemanjangan
baru dilakukan pengakaran. Species-species yang mudah berakar,
seperti pisang, strowberi, dan vanili, pemanjangan tunas pada media
2017 69
regenerasi juga sekaligus merangsang pembentukan akar sehingga tidak

diperlukan pengakaran tunas secara tersendiri.
5. Induksi Perakaran Inokulum.

Tunas-tunas yang telah dilakukan tahap regenerasi kemudian dilakukan
sub kultur atau dipindahkan ke media lain untuk tahap selanjutnya yaitu
tahap induksi perakaran inokulum. Proses pembentukan akar pada
perbanyakan tanaman secara kultur jaringan belum sepenuhnya
dimengerti. Faktor-faktor yang berpengaruh terhadap pembentukan akar
pada stek telah diketahui memiliki pengaruh hampir sama pada stek
mikro antara lain: pengaruh genetik, umur ontogenetik (masa transisi dari
fase pertumbuhan juvenil menuju fase dewasa), dan pengaruh zat
pengatur tumbuh terutama auksin.
Tahap induksi perakaran tunas seperti yang telah disebutkan di atas

biasanya digunakan zat pengatur tumbuh auksin berupa kombinasi NAA
dan IBA (Indole Butiric Acid). NAA sanggup merangsang pembentukan
akar dan memiliki stabilitas kimia yang tinggi tetapi batas konsentrasi
optimumnya sangat kecil sehingga harus benar-benar diketahui
konsentrasi yang tepat agar tidak meracuni tanaman. IBA bersifat stabil
dan relatif lebih lambat ditranslokasikan dalam tanaman sehingga
memiliki respon yang baik dalam membentuk akar. Selain itu
ditambahkan pula retardan paclobutrazol yang berkemampuan
menghambat biosintesis giberellin. Penambahan paclobutrazol
diharapkan mampu menghasilkan plantlet yang memiliki ketegaran
tumbuh baik dan membantu inisiasi akar.
Peralatan dan bahan yang digunakan dalam kegiatan induksi perakaran

inokulum sama dengan pada kegiatan penggandaan inokulum maupun
regenerasi inokulum. Prosedur induksi perakaran tunas dapat dilakukan
dengan dua cara baik secara in vitro atau ex vitro. Prosedur induksi
perakaran inokulum secara in vitro dilakukan dengan pemindahan atau
sub kultur tunas hasil tahap regenerasi yang sudah cukup panjang ( 4 cm
2017 70
atau lebih) ke media dengan zat pengatur tumbuh auksin berupa NAA
atau IBA atau kombinasi keduanya. Kegiatan tersebut bertujuan untuk
merangsang pertumbuhan akar pada tunas ketika masih berada dalam
botol kultur (secara in vitro).
Pengakaran secara ex vitro dilakukan dengan menginduksi tunas untuk

membentuk akar setelah berada dalam media aklimatisasi yang berupa
campuran tanah, pasir, kompos atau campuran pasir dan kompos.
Induksi pengakaran tunas dapat digunakan bubur pengakaran seperti
Rootone-F yang mengandung auksin IBA, larutan NAA atau IBA yang
cukup pekat. Alternatif lainnya induksi perakaran tunas dapat dilakukan
secara in vitro lalu dilakukan perkembangan akar yang dilakukan secara
ex vitro. Prosedurnya dengan cara tunas dipindahkan atau disubkultur
dalam media kultur dengan auksin konsentrasi relatif tinggi selama  5-7
hari lalu diaklimatisasi dan dibiarkan tumbuh akar dalam kondisi ex vitro.
Prosedur yang digunakan untuk menginduksi perakaran tunas inokulum

dalam skala besar dapat berpengaruh signifikan terhadap biaya produksi
bibit. Induksi perakaran inokulum secara in vitro lebih banyak memerlukan
tenaga kerja dan media dibandingkan dengan induksi perakaran secara
ex vitro, tetapi tingkat keberhasilannya lebih tinggi. Induksi perakaran
secara ex vitro sangat dianjurkan untuk produksi bibit dalam skala besar,
karena sangat menghemat biaya. Plantlet-plantlet dari tunas yang telah
tumbuh organnya secara lengkap terutama telah mengalami induksi
perakaran selanjutnya dapat dilakukan tahap aklimatisasi
6. Mengelola Ruang Pertumbuhan

Eksplan yang dihasilkan dari kegiatan inisiasi kultur atau sub kultur harus
dipelihara agar dapat menjadi plantlet yang tumbuh normal dan sehat.
Pemeliharaan eksplan in vitro dilakukan dengan cara menempatkan
eksplan di ruang inkubasi atau ruang pertumbuhan. Salah satu faktor
yang mempengaruhi pertumbuhan kultur di ruang inkubasi adalah
lingkungan di sekitar ruang inkubasi. Lingkungan di dalam ruang
pertumbuhan perlu diatur agar sesuai dengan kebutuhan tanaman yang
2017 71
dikulturkan sehingga faktor lingkungan seperti suhu, cahaya dan

kelembaban perlu diperhatikan. Penataan botol kultur pada rak kultur dan
seleksi eksplan yang terkontaminasi juga merupakan faktor yang
mendukung terciptanya lingkungan yang sesuai dengan kebutuhan
tanaman yang dikulturkan.
a. Penataan kultur di rak pertumbuhan

Rak-rak di ruang kultur dapat diberi nomor berdasarkan kodefikasi
yang berlaku di masing-masing tempat (laboratorium/perusahaan).
Kodefikasi ini berfungsi untuk memudahkan pengorganisasian data-
data yang dikumpulkan. Penataan botol kultur pada rak diatur
berdasarkan jenis tanaman, kultivar, tahapan kultur, dan perlakuan
khusus lainnya. Pengelompokkan diperlukan agar tidak terjadi
kekeliruan pada tahap selanjutnya. Botol kultur diatur dengan jarak
antar botol tidak terlalu rapat dan jumlah disesuaikan tergantung
kapasitas rak.
Gambar 13. Ruang Pertumbuhan
2017 72
Gambar 14. Penataan Botol Kultur Panjang
Gambar 15. Penataan Botol Kultur Pendek
b. Pengaturan suhu, kelembaban, dan cahaya ruang pertumbuhan

Faktor yang berpengaruh terhadap pertumbuhan eksplan di ruang
kultur adalah suhu, cahaya, dan kelembaban .Suhu yang sesuai untuk
pertumbuhan kultur adalah antara 22–25oC. Untuk mengkondisikan
ruang kultur pada suhu yang diinginkan, maka di dalam ruangan
2017 73
tersebut dipasang air conditioner (AC), alat ini diset pada suhu
maksimum 20oC.
Cahaya mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan eksplan.

Intensitas cahaya yang diperlukan oleh eksplan bervariasi tergantung
pada tahap mana eksplan tersebut berada. Pada tahap inisiasi
memerlukan intentisitas cahaya antara 0–1000 lux, tahap multiplikasi
1000–10.000 lux, tahap pengakaran 10.000–30.000 lux dan tahap
aklimatisasi 30.000 lux.
Cahaya di ruang kultur bersumber dari lampu TL yang dipasang pada

rak kultur. Lamanya pencahayaan perlu diatur sesuai kebutuhan
eksplan. Umumnya lamanya pencahayaan adalah 12-16 jam. Untuk
mengatur lamanya pencahayaan digunakan timer yang diset sesuai
kebutuhan.
Kelembaban ruang inkubasi dijaga pada kisaran 60%-80%. Selain
berpengaruh terhadap pertumbuhan eksplan, kelembaban
berpengaruh terhadap kondisi eksplan yang perlu dijaga agar selalu
dalam keadaan aseptik. Tinggi rendahnya kelembaban dipengaruhi
oleh suhu, yaitu berbanding lurus dengan suhu. Pada suhu yang
rendah kelembaban juga rendah, dan sebaliknya pada suhu yang
lebih tinggi kelembaban juga tinggi.
c. Penanganan kultur yang terkontaminasi

Tanaman di ruang pertumbuhan harus rutin dikontrol dan diperiksa
apakah terdapat kontaminasi atau tidak. Jika ada yang terkontaminasi
maka harus secepatnya ditangani. Jika kontaminasi sudah banyak
maka sebaiknya botol kultur dikeluarkan dari ruang pertumbuhan dan
ditangani lebih lanjut yaitu dengan cara dikukus selama 2 jam dalam
kondisi botol kultur tertutup supaya kontaminan mati dan tidak
tersebar kemana-mana. Setelah itu, kultur dikeluarkan dari botol dan
dibuang sesuai dengan prosedur pembuangan limbah yang aman.
2017 74
Namun jika kontaminasi baru sedikit terkadang kultur tanaman masih

bisa dimanfaatkan untuk diaklimatisasi ke media ex vitro. Kontaminasi
pada kultur dapat disebabkan oleh media, eksplan, dan kondisi
lingkungan, dimana kontaminan dapat berupa jamur atau bakteri.
Ciri-ciri kultur yang terkontaminasi jamur adalah akan terlihat koloni

jamur, biasanya berwarna putih, abu-abu atau hitam, berbentuk
seperti serabut, benang, atau kapas. Apabila kontaminan berupa
bakteri, terlihat cairan berupa lendir berwarna putih, kuning, atau
merah.
d. Sterilisasi ruang kultur dan ruang transfer secara berkala

Sterilisasi laboratorium kultur jaringan khususnya ruang tanam dan
ruang petumbuhan harus dilakukan secara berkala agar sterilitas
ruangan tetap terjaga dengan baik. Sterilisasi dapat dilakukan
menggunakan alkohol.
7. Aklimatisasi
a. Karakteristik plantlet hasil kultur jaringan
Plantlet hasil kultur jaringan lingkungan hidupnya serba terkendali
di dalam laboratorium baik kebersihan/ sterilitas, suhu, cahaya,
dan kelembaban lingkungannya dan ini tentunya sangat berbeda
dengan kondisi di luar laboratorium. Perbedaan kondisi lingkungan
hidup plantlet ini tentunya memberikan karakteristik sendiri
terhadap plantlet hasil kultur jaringan. Berikut ini adalah beberapa
karakteristik plantlet hasil kultur jaringan.
1) Daun.
Lapisan lilin kurang berkembang, memiliki kutikula yang tipis,
daun-daunnya tipis dan lunak. Stomata kurang berfungsi
dengan sempurna.
2) Pembuluh angkut.
Sistem pembuluh angkut antara pucuk dan akar sering tidak
terhubung secara sempurna sehingga transpor air dan nutrisi
kurang optimal.
2017 75
3) Akar.
Sistem perakaran kurang sempurna dan sering mudah rusak.
b. Pengertian dan tujuan aklimatisasi

Tahap aklimatisasi merupakan tahapan kritis karena kondisi iklim
dilapang sangat berbeda dengan kondisi dalam botol yang berada di
dalam laboratorium, sehingga diperlukan penyesuaian. Aklimatisasi
merupakan proses yang penting dalam rangkaian aplikasi teknik
kultur jaringan untuk mendukung pengembangan pertanian.
Aklimatisasi plantlet adalah suatu usaha untuk mengadaptasikan

plantlet (bibit hasil kultur jaringan) dari lingkungan in vitro ke
lingkungan ex vitro, baik secara fisiologis maupun morfologi. Kondisi
lingkungan yang diadaptasikan meliputi intensitas cahaya,
kelembaban, temperatur lingkungan, serta keberadaan
mikroorganisme pengganggu tanaman. Proses aklimatisasi
memerlukan waktu yang bervariasi tergantung pada ketahanan jenis
tanamannya.
Pada saat dipelihara di media kultur yang mengandung gula dan pada
kondisi pencahayaan yang rendah, plantlet hasil kultur jaringan tidak
secara penuh tergantung pada hasil fotosintesisnya sendiri. Sebuah
stimulus yang tidak terdapat dalam lingkungan in vitro tampaknya
diperlukan bagi plantlet untuk berubah menjadi sepenuhnya mampu
memproduksi kebutuhannya sendiri terhadap karbon dan nitrogen.
Perubahan tersebut hanya terjadi setelah tanaman melewati periode
waktu beberapa hari berada dalam lingkungan ex vitro (George,
1993).
Ukuran daun pada tunas in vitro biasanya lebih kecil dibandingkan

ukuran daun pada saat berada dalam lingkungan ex vitro (outdoor).
Pada kondisi in vitro kelembaban udara biasanya tinggi (98-99%),
sehingga daun in vitro biasanya tidak membentuk lapisan lilin
(epicuticular wax) dalam jumlah yang normal. Oleh karena itu daun
2017 76
dari tunas in vitro akan cepat kering atau dehidrasi pada saat
dikeluarkan dari botol. Berdasarkan hal ini maka proses aklimatisasi
plantlet ke lingkungan ex vitro perlu memperhatikan untuk menjaga
perubahan kelembaban udara tidak turun secara drastis tetapi secara
bertahap dan diturunkan secara perlahan-lahan.
Proses adaptasi yang terjadi plantlet pada saat aklimatisasi :

1) Penyesuaian dari kelembaban tinggi ke kelembaban udara yang
rendah dengan mengendalikan kehilangan air melalui perbaikan
fungsi kutila dan stomata dan pembentukan lapisan lilin
(epicuticular wax).
2) Perbaikan fungsi akar untuk menyerap unsur hara dari media non
agar, seperti tanah.
3) Memaksimalkan proses fotosintesis melalui perbaikan struktur
daun menjadi lebih lebar dan pembentukan chloroplast yang lebih
baik, sehingga sifat plantlet yang heterotropik berubah menjadi
autotropik.
4) Beradaptasi dari lingkungan steril ke lingkungan yang terdapat
mikroorganisme.
c. Kriteria plantlet yang siap diaklimatisasi

Plantlet yang dapat diaklimatisasi adalah plantlet yang telah lengkap
organ pentingnya seperti pucuk dan akar, warna pucuknya hijau
(bukan transparan/ tembus pandang)dan akarnya sudah tumbuh
dengan baik sehingga dalam kondisi lingkungan luar plantlet dapat
melanjutkan perumbuhannya dengan baik. Plantlet tampak sehat dan
tidak berjamur, ukuran plantlet seragam, berdaun hijau segar, dan
tidak ada yang menguning. Selain itu plantlet tumbuh normal, tidak
kerdil, komposisi daun dan akar seimbang.
Selain itu aklimatisasi juga memerlukan media yang tepat untuk

pertumbuhan plantlet. Aklimatisasi dilakukan dengan memindahkan
plantlet kedalam polybag yang berisi media dan disungkup dengan
plastik bening. Sungkup digunakan agar kelembaban udara tetap
2017 77
tinggi dan melindungi plantlet dari serangan hama penyakit. Setelah

bibit mampu beradaptasi dengan lingkungan barunya maka secara
bertahap sungkup dilepaskan dan pemeliharaan bibit dilakukan
dengan cara yang sama dengan pemeliharaan bibit generatif.
d. Cara aklimatisasi
Aklimatisasi dilakukan dengan cara sebagai berikut:
1) Persiapan media aklimatisasi
Media aklimatisasi dapat berupa arang, arang sekam, potongan
akar pakis, pasir, atau bahan lain sesuai dengan jenis plantlet
yang akan diaklimatisasikan. Media harus dibuat homogen
(ukuran relatif sama) untuk menghindari kerusakan pada akar.
Media harus bebas dari mikroorganisme yang dapat mengganggu
tanaman sehingga harus disterilkan lebih dulu. Sterilisasi dapat
dilakukan dengan soil sterilizer atau dikukus/ direbus. Media yang
sudah homogen dan steril kemudian dimasukkan ke dalam wadah
yang sesuai dengan jenis plantletnya.
2) Persiapan plantlet
Plantlet yang masih di dalam laboratorium dipilih yang sudah
memiliki organ lengkap (memiliki pucuk dan akar). Plantlet dibawa
keluar laboratorium kemudian dikeluarkan dari dalam botol secara
hati-hati agar tidak rusak.
Plantlet yang sudah dikeluarkan dari dalam botol kemudia dicuci
menggunakan air bersih supaya bebas dari agar-agar yang
menempel pada akar dan atau pucuk. Setelah bersih kemudian
dikeringanginkan sebentar sambil dikelompokkan berdasarkan
ukurannya. Agar plantlet tidak terkena serangan mikroorganisme
maka dicelupkan pada larutan fungisida dan bakterisida,
selanjutnya plantlet siap untuk ditanam.
3) Penanaman plantlet
Plantlet yang sudah bersih, sudah diperlakukan dengan fungisida
dan bakterisida dapat ditanam dan dikelompokkan berdasarkan
2017 78
ukurannya supaya dalam satu kelompok memiliki ukuran yang

sama. Setelah selesai plantlet yang sudah ditanam ditempatkan di
shading house atau green house yang memiliki suhu, intensitas
penyinaran, dan kelembaban yang tidak jauh berbeda dengan
tempat plantlet tersebut berasal. Kemudian secara bertahap
kondisi lingkungan ditingkatkan atau dikurangi sedikit demi sedikit
secara bertahap hingga plantlet dapat beradaptasi dari lingkungan
in vitro ke lingkungan in vivo. Pengaturan intensitas cahaya dapat
dilakukan dengan cara memberikan naungan kemudian sedikit
demi sedikit dibuka.
e. Faktor yang berpengaruh terhadap keberhasilan aklimatisasi

Tahap aklimatisasi mutlak dilakukan pada tanaman hasil perbanyakan
secara in vitro karena plantlet akan mengalami perubahan fisiologis
yang disebabkan oleh faktor lingkungan. Hal ini bisa dipahami karena
pembiakan in vitro (dalam botol) semua faktor lingkungan terkontrol
sedangkan di lapangan faktor lingkungan sulit terkontrol (Herawan,
2006; Yusnita, 2004). Di dalam botol kultur, kelembapan hampir selalu
100%.
Aklimatisasi merupakan tahap kritis karena kondisi iklim mikro di

rumah kaca, rumah plastik, rumah bibit, dan lapangan sangat jauh
berbeda. Kondisi di luar botol berkelembapan nisbi jauh lebih rendah,
tidak aseptik, dan tingkat intensitas cahayanya jauh lebih tinggi
daripada kondisi di dalam botol. Plantlet atau tunas mikro lebih
bersifat heterotrofik karena sudah terbiasa tumbuh dalam kondisi
berkelembaban sangat tinggi, aseptik, serta suplai hara mineral dan
sumber energi berkecukupan.
Untuk meningkatkan keberhasilan aklimatisasi maka berikut ini adalah

faktor-faktor yang perlu diperhatikan dalam pelaksanaan aklimatisasi
(Zulkarnain, 2009):
2017 79
1) Sisa-sisa agar-agar yang menempel pada akar hendaknya dicuci

sampai bersih secara hati-hati jangan sampai merusak akar. Akar
yang bersih dari sisa agar-agar akan terhindar dari serangan
mikroorganisme cendawan atau bakteri karena agar-agar sangat
mudah dihinggapi dan sebagai tempat perkembangan
mikroorganisme. Demikian juga media aklimatisasi sebaiknya
digunakan media yang steril.
2) Dalam rangka menghindari kerusakan perakaran pada saat

penanaman maka sebaiknya digunakan media yang telah diayak
supaya media menjadi homogen.
3) Suhu di lingkungan aklimatisasi harus diatur sedemikian rupa agar

mendekati suhu in vitro kemudian ditingkatkan sedikit demi sedikit
secara bertahap sampai plantlet mampu beradaptasi dengan baik
di lingkungan barunya.
4) Kelembaban di lingkungan aklimatisasi demikian juga harus diatur

sedemikian rupa agar mendekati kelembaban in vitro dengan cara
memberikan sungkup plastik kemudian sungkup dapat dibuka
sedikit demi sedikit secara bertahap sampai plantlet mampu
beradaptasi dengan baik di lingkungan barunya.
5) Intensitas cahaya matahari terkait erat dengan suhu dan

kelembaban. Makin tinggi intensitas cahaya matahari maka suhu
makin tinggi dan kelembaban makin rendah. Intensitas cahaya
matahari di lingkungan aklimatisasi juga harus diatur sedemikian
rupa agar mendekati intensitas in vitro dengan cara memberikan
naungan kemudian naungan dapat dibuka sedikit demi sedikit
secara bertahap sampai plantlet mampu beradaptasi dengan baik
di lingkungan barunya.
2017 80
8. Keselamatan dan Kesehatah Kerja (K3)

a. Pengertian kesehatan dan keselamatan kerja.
Terdapat beberapa pengertian kesehatan dan keselamatan
kerja menurut para ahli yang ditulis dalam web
http://learnmine.blogspot.co.id/2015/04/keselamatan -dan-
kesehatan-kerja.html, diantaranya adalah:
1) Suatu pemikiran dan upaya untuk menjamin keutuhan dan
kesempurnaan jasmani maupun rohani tenaga kerja
khususnya dan manusia pada umumnya serta hasil karya
dan budaya menuju masyarakat adil dan makmur
(Mangkunegara, 2002).
2) Keselamatan kerja adalah kondisi keselamatan yang
bebas dari resiko kecelakaan dan kerusakan dimana kita
bekerja yang mencakup tentang kondisi bangunan,
kondisi mesin, peralatan keselamatan, dan kondisi
pekerja (Simanjuntak, 1994).
3) keselamatan kerja merupakan rangkaian usaha untuk
menciptakan suasana kerja yang aman dan tentram bagi
para karyawan yang bekerja di perusahaan yang
bersangkutan (Suma’mur, 2001).
4) Keselamatan adalah merujuk pada perlindungan terhadap
kesejahteraan fisik seseorang terhadap cedera yang
terkait dengan pekerjaan. Kesehatan adalah merujuk
pada kondisi umum fisik, mental dan stabilitas emosi
secara umum (Mathis dan Jackson, 2002).
5) Kesehatan dan Keselamatan Kerja menunjukkan kepada
kondisi-kondisi fisiologis-fisikal dan psikologis tenaga
kerja yang diakibatkan oleh lingkungan kerja yang
disediakan oleh perusahaan (Jackson, 1999).
b. Tujuan kesehatan dan keselamatan kerja

Tujuan dari kesehetan dan keselamatan kerja adalah:
1) Agar setiap pegawai mendapat jaminan keselamatan dan
kesehatan kerja baik secara fisik, sosial, dan psikologis.
2017 81
2) Agar setiap perlengkapan dan peralatan kerja digunakan

sebaik-baiknya.
3) Agar semua hasil produksi dipelihara keamanannya.
4) Agar adanya jaminan atas pemeliharaan dan peningkatan
kesehatan gizi pegawai.
5) Agar meningkatkan kegairahan, keserasian kerja, dan
partisipasi kerja.
6) Agar terhindar dari gangguan kesehatan yang disebabkan
oleh lingkungan atau kondisi kerja.
7) Agar setiap pegawai merasa aman dan terlindungi dalam
bekerja
Adapun indikator-indikator penyebab kecelakaan kerja

adalah:
1) Keadaan tempat lingkungan kerja, yang meliputi:
a) Penyusunan dan penyimpanan barang -barang yang
berbahaya yang kurang diperhitungkan keamanannya.
b) Ruang kerja yang terlalu padat dan sesak
c) Pembuangan kotoran dan limbah yang tidak pada
tempatnya.
2) Pemakaian peralatan kerja, yang meliputi:

a) Pengaman peralatan kerja yang sudah usang atau
rusak.
b) Penggunaan mesin, alat elektronik tanpa pengaman
yang baik
c) Pengaturan penerangan
c. Kesehatan dan keselamatan kerja di laboratorium kultur jaringan.

Laboratorium merupakan sarana untuk melaksanakan kegiatan
penelitian ilmiah guna meningkatkan keterampilan pemakaian dan
pemanfaatan alat-alat laboratorium. Tempat dengan segala
kelengkapan peralatannya yang berpotensi menimbulkan bahaya
kepada penggunanya.
2017 82
Keselamatan dan kesehatan kerja (K3) di laboratorium merupakan

perlindungan tenaga kerja dari segala aspek yang berpotensi
membahayakan dan sumber yang berpotensi menimbulkan penyakit
akibat dari jenis pekerjaan tersebut, pencegahan kecelakaan dan
penserasian peralatan kerja, dan karakteristik pekerja serta orang
yang berada di sekelilingnya. Tujuannya agar tenaga kerja mencapai
ketahanan fisik, daya kerja, dan tingkat kesehatan yang tinggi
sehingga menciptakan kesenyamanan kerja dan keselamatan kerja
yang tinggi. Tidak ada sesuatu di tempat kerja yang terjadi secara
kebetulan tetapi karena ada alasan-alasan yang jelas dan dapat
diperkirakan sebelumnya.
Laboratorium kultur jaringan tanaman adalah laboratorium yang

digunakan untuk kegiatan pembiakan tanaman dimana kegiatan-
kegiatannya meliputi pembuatan media kultur jaringan, penyiapan
eksplan, penanaman (inisiasi dan subkultur), pengelolaan ruang
pertumbuhan, dan aklimatisasi plantlet. Dalam laboratorium kultur
jaringan tersebut dapat dilakukan penelitian, produksi, maupun
kegiatan pembelajaran yang berkaitan dengan pembiakan tanaman
secara in vitro. Dalam rangka menjamin tidak adanya resiko
kontaminasi maka laboratorium kultur jaringan memiliki karakteristik
yang bersih dan steril.
Dalam laboratorium terdapat beraneka ragam peralatan dan bahan-

bahan yang harus dirawat dan diperlakukan sesuai dengan
karakteristiknya masing-masing agar peralatan dan bahan-bahan
tersebut tidak rusak dan tidak membahayakan orang, tanaman, dan
lingkungan di sekitarnya.
Peluang-peluang yang memungkinkan terjadinya hal-hal yang tidak

diinginkan di laboratorium kultur jaringan (kecelakaan atau kerusakan)
adalah:
1) Bagi petugas/ pekerja
2017 83
a) Bahaya terkena benda tajam

Bahaya terkena benda tajam dapat terjadi pada saat
memasang pisau scalpel pada gagang scalpel dan pada
saatmelakukan pemotongan eksplan. Pisau scalpel yang
sudah berkarat atau sudah tumpul sebaiknya diganti yang
baru agar eksplan atau inokulum yang dipotong tidak rusak
jaringannya. Pisau yang tumpul dapat merusak jaringan
tanaman dan bagi jenis-jenis eksplan yang mudah terjadi
browning maka jika jaringannya rusak browning akan semakin
parah. Tanyakan kepada fasilitator atau teknisi terlebih dahulu
jika bapak ibu hendak memasang pisau scalpel pada gagang
scalpel, serta berhati hatilah dalam menggunakannya karena
pisau scalpel sangat tajam.
Gambar 16. Pisau scalpel dan gagang scalpel
b) Bahaya terkena bahan kimia

Beberapa bahan kimia ada yang berbahaya jika terkena kulit
atau mata atau terhirup oleh pernapasan sehingga harus
berhati-hati pada saat menimbang, melarutkan, dan memipet.
Mintalah petunjuk sejelas jelasnya pada fasilitator atau teknisi,
gunakan pakaian laboratorium dan masker. Baca dulu dengan
teliti sebelum bapak ibu menggunakan bahan kimia apakah
sudah sesuai dengan yang dikehendaki. Tutup kembali bahan
kimia yang telah bapak ibu gunakan dan kembalikan pada
tempatnya.
2017 84
Gambar 17. Bahan kimia
c) Bahaya kebakaran
Bahaya kebakaran dapat terjadi di ruang penanaman pada saat
bapak ibu melakukan inisiasi atau subkultur di enkas atau di
laminar flow cabinet. Di dalam enkas atau laminar terdapat api,
spiritus, dan alkohol sehingga harus teliti dan hati-hati karena
alkohol dan spiritus merupakan bahan yang sangat mudah
terbakar.
Gambar 18. Kegiatan subkultur
d) Bahaya kesetrum
Di dalam laboratorium kultur jaringan banyak terdapat peralatan
elektrik seperti refrigerator, timbangan analitis, autoclave, hot
2017 85
stirrer, laminar flow cabinet, dll. Kemungkinan peralatan

mengalami konslet pasti ada. Pemasangan steker yang terburu-
buru dapat mengakibatkan kesetrum. Oleh karena itu bapak ibu
harus menggunakan sandal atau alas kaki yang khusus
digunakan di dalam laboratorium. Dengan menggunakan alas
kaki khusus laboratorium bapak ibu terhindar dari kemungkinan
kesetrum dan kebersihan laboratorium tetap terjamin karena
alas kakinya khusus untuk di dalam laboratorium.
2) Bagi produk (media tanaman, eksplan, inokulum, plantlet).

Resiko kerusakan produk yang memungkinkan terjadi jika
peraturan kesehatan dan keselamatan kerja tidak diterapkan
adalah terjadinya kontaminasi pada media tanaman, eksplan,
inokulum, plantlet. Jika media terkontaminasi maka tidak akan
dapat digunakan lagi dan jika eksplan, inokulum, plantlet
terkontaminasi maka akan mati yang artinya ini adalah sebuah
kerugian. Contoh jika meja tanam tidak disterilkan lebih dahulu
atau petugas tidak menyemprot alkohol pada tangan sebelum
bekerja maka dapat terjadi kontaminasi pada eksplan atau
inokulum yang ditanam.
3) Bagi peralatan.
Resiko jika tata tertib kesehatan dan keselamatan kerja tidak
diterapkan di laboratorium kultur jaringan adalah terjadinya
kerusakan pada peralatan yang digunakan. Contoh jika petugas
menggunakan peralatan tanpa membaca prosedur
pengoperasiannya maka dapat menyebabkan kerusakan
peralatan. Disamping itu pengoperasian peralatan yang tidak
sesuai dengan prosedur yang benar dapat memberikan pengaruh
pada ketidaktepatan bahan yang digunakan, misalnya dalam
menggunakan timbangan analitis jika diletakkan di tempat yang
tidak datar atau dipindah-pindah maka jumlah bahan yang
ditimbang menjadi tidak tepat.
2017 86
4) Bagi bahan.
Resiko jika tata tertib kesehatan dan keselamatan kerja tidak
diterapkan di laboratorium kultur jaringan adalah terjadinya
kerusakan pada bahan-bahan yang digunakan.
Berikut ini adalah tata tertib minimal dalam laboratorium kultur jaringan
yang harus diterapkan oleh semua orang yang berada di dalamnya.
Peraturan penting untuk keselamatan kerja di lab dapat dikatakan dengan

dua kata sederhana yaitu selalu dan tidak pernah
Selalu:
1) Mengetahui prosedur keselamatan kerja lab
2) Berpakaian kerja lab
3) Mencuci tangan sebelum meninggalkan lab
4) Membaca instruksi kerja dengan baik sebelum mulai kegiatan
5) Memeriksa peralatan apakah sudah terpasang dengan aman dan
benar
6) Menggunakan semua bahan kimia dengan hati-hati
7) Bertanya pada instruktur bila ada keraguan
Tidak Pernah:
1) Makan dan minum di laboratorium
2) Merokok di laboratorium
3) Menghirup, memegang atau mencicipi bahan kimia
4) Bercanda/ berlari-lari di laboratorium
5) Bekerja sendirian
6) Melaksanakan percobaan iseng yang tidak ada kepentingannya
Prosedur Keselamatan Di Laboratorium:

1) Pastikan bapak ibu mengetahui dimana pintu keluar
2) Pastikan bapak ibu mengetahui letak pemadam kebakaran dan cara
menggunakannya
3) Pastikan bapak ibu mengetahui tempat keran-keran air bersih
2017 87
4) Pastikan bapak ibu telah menggunakan alat pelindung sebagai

berikut:
Pakaian
1) Gunakan pakaian yang rapi sopan dan kenakan pakaian laboratorium
yang sudah disediakan.
2) Lepaskan perhiasan-perhiasan yang dapat rusak oleh bahan kimia,
gunakan alas kaki pendek (bukan berhak tinggi) yang khusus untuk di
dalam laboratorium.
3) Gunakan penutup kepala dan bagi yang rambutnya panjang maka
rambut harus diikat supaya tidak mengganggu.
4) Gunakan masker untuk menutupi mulut dan hidung.
Peralatan
Jangan mencoba peralatan yang belum diketahui dengan pasti prosedur
pengoperasiannya
Menangani Zat Kimia

Zat kimia sangat berbahaya karena bersifat toksik, korosif, mudah
terbakar, atau mrpk senyawa penyebab kanker. Zat kimia yg toksik dan
korosif seperti HgCl2 atau NaOCl supaya dibaca dengan teliti label pada
kemasannya. Alkohol dan spiritus mudah terbakar, jangan terlalu dekat
dengan sumber api.
Prosedur Menangani Kecelakaan

Jika terjadi kecelakaan di lab, laporkan segera kejadian tsb pada
instruktur, atau bila anda yang mengalami pastikan teman anda melapor
ke instruktur.
Kebakaran
Jika terjadi kecelakaan lab hrs segera dikosongkan. Jangan berteriak
kepanikan, tetapi berteriak memberi tahu praktikan lain kejadian tersebut
agar membantu memadamkan api dengan kain basah, bila api agak
2017 88
besar gunakan alat pemadam kebakaran, bila kebakaran meluas segera

hub dinas kebakaran.
Zat Kimia Yang Terbakar

Zat kimia yg mudah terbakar adalah alkohol dan spiritus. Jika alkohol yg
terdapat dalam labu kecil terbakar, tutup dengan labu yang lebih besar
maka api akan padam. Pasir juga dapat untuk mengatasi kebakaran kecil.
Pakaian Terbakar
Jika pakaian terbakar berteriak minta tolong. Berbaring di lantai dan
berguling-guling akan membantu memadamkan api. Jangan mencoba lari
ke tempat air kecuali jaraknya sangat dekat. Jika pakaian teman anda
terbakar, gulingkan gulingkan teman anda di lantai atau bungkus
badannya dengan kain atau selimut basah. Jangan gunakan alat
pemadam kebakaran di tubuh manusia.
Terkena Zat Kimia

Bila bag tubuh atau mata terkena zat kimia, basuh dengan aliran air
bersih selama minial 15 menit atau lebih.
Keselamatan Kerja di Ruang Penanaman

1) Pakailah pakaian dan sandal khusus ruang penanaman
2) Pastikan lampu UV padam sebelum masuk ruang penanaman
3) Pastikan pintu masuk/ keluar tertutup rapat
4) pastikan aliran listrik menyala dan aliran udara (air-flow) dihidupkan
5) pastikan meja, peralatan, dan tangan anda sudah kering dari alkohol
jika akan menyalakan lampu spiritus
6) Jika pada saat anda bekerja di ruang steril tiba-tiba lampu mati dan
aliran udara terhenti, hentikan segera kegiatan anda, matikan api
bunsen dengan cara menutupnya, segera keluar dari ruang steril.
7) Jika keadaan sangat darurat dan sulit dapat bantuan, pecahkan kaca
jendela untuk menyelamatkan diri
2017 89
Fasilitator mengarahkan aktifitas kegiatan pembelajaran pada peserta
pelatihan melalui beberapa kegiatan berikut ini:
1. Mengamati
 Membaca modul, melihat dan atau mendengarkan tayangan,
melihat alat peraga atau benda sesungguhnya yang ada dalam
laboratorium.
2. Menanyakan
 Menanyakan hal-hal yang menarik dan atau yang ingin diketahui
lebih lanjut tentang hasil pengamatan yang telah dilakukan.
3. Mencoba
Melakukan kegiatan praktik dengan menggunakan lembar kerja 5 dan
6
4. Menalar
Melakukan analisis dan buat simpulan dg merangkum hasil bacaan
tentang tentang penanaman eksplan dan aklimatisasi planlet kultur
jaringan
Membuat laporan hasil diskusi, hail praktik kemudian dipresentasikan
LEMBAR KERJA 5
Penanaman Eksplan (Pisang)
Pendahuluan
2017 90
Bahan eksplan adalah bagian kecil jaringan atau organ yang diambil atau
dipisahkan dari tanaman induk kemudian dikulturkan. Tanaman yang dijadikan
sumber eksplan harus dari tanaman induk yang sehat, tumbuh baik atau normal.
Pemilihan bagian tanaman sebagai bahan eksplan harus mempertimbangkan
faktor kemudahan bahan eksplan tersebut untuk beregenerasi dan kemungkinan
tingkat kontaminasinya.
Tujuan
Apabila disediakan alat dan bahan yang sesuai peserta diklat dapat melakukan
penanaman eksplan tanaman pisangi secara telit dan hati-hati sesuai dengan
Bahan dan Alat

1. Bonggol anakan tanaman pisang, aquades, dan air kran, tissue gulung, korek
api, kertas alas timbang, alkohol 70%, alkohol 96%, fungisida Dithane M-45,
detergen, bakterisida Agrept dan keras label.
2. Golok, gelas piala, ember, keranjang plastik, timbangan digital, pinset lurus
panjang, lampu spirtus, gelas ukur, Laminar Air Flow Cabinet, alas kaca, dan
hand sprayer.
Keselamatan kerja
Langkah kerja
1. Persiapan Eksplan
a. Siapkanlah alat dan bahan yang akan digunakan
b. Pilihlah bonggol anakan tanaman pisang yang sehat dari tanaman sehat.
c. Potong bonggol anakan tanaman pisang menggunakan golok secara hati-
hati diusahakan tunas pucuknya tidak mengalami kerusakan
d. Kumpulkan potongan bonggol anakan tanaman pisang dalam wadah
keranjang plastik sesuai asal tanaman induknya
e. Cuci permukaan bonggol anakan tanaman pisang dalam ember berisi air
bersih dan menyikatnya sampai bersih
2017 91
f. Lakukan pengurangan ukuran bonggol anakan tanaman pisang secara

hati-hati dengan cara mengupas pelepah dan memotong-motong bagian
sampingnya secara bertahap di bawah air mengalir sampai berukuran ± 2-
3 cm
g. Usahakan hasil potongan bonggol anakan tanaman pisangnya tidak
mengalami kerusakan pada tunas pucuknya
h. Masukkan hasil potongan bonggol anakan tanaman pisang dalam air
bersih untuk menghindari pencoklatan akibat kontak dengan udara
i. Bawa bahan eksplan untuk proses sterilisasi baik dengan cara dibakar
(celup bakar) atau dengan cara direndam larutan kimia (secara kimiawi)
2. Sterilisasi eksplan
a. Timbang detergen, fungisida, dan bakterisida masing-masing 2 gr/liter
b. Buat larutan detergen, fungisida, dan bakterisida sesuai kebutuhan
c. Rendam dan gojok potongan eksplan pisang dalam larutan detergen
selama 5 menit untuk menghilangkan getah yang masih menempel di
permukaan eksplan dan bilas menggunakan air bersih
d. Rendam dan gojok potongan eksplan pisang dalam larutan fungisida dan
bakterisida dengan konsentrasi masing-masing 2 gram/liter selama 1 jam
e. Bawa eksplan ke dalam Laminar Air Flow Cabinet untuk proses sterilisasi
berikutnya
f. Celupkan eksplan pisang yang telah digojok dengan larutan fungisida dan
bakterisida dalam alkohol 96% dan membakarnya
g. Biarkan api yang membakar eksplan padam lalu lanjutkan dengan proses
inokulasi bahan eksplan
3. Penanaman eksplan
a. Sterilisasi Laminar Air Flow Cabinet (LAFC) dengan menyalakan lampu
UV (ultra violet) selama minimal 30 menit sebelum digunakan
b. Cuci tangan sampai bersih menggunakan sabun dan semprot tangan
menggunakan alkohol 70% sebelum bekerja di dalam LAFC
c. Matikan lampu UV dan semprotkan alkohol 70% secara merata pada
permukanan di sekitar LAFC dan lap dengan tissue.
2017 92
d. Masukkan akuades steril, alat-alat diseksi steril, bahan eksplan pisang,

lampu bunsen, dan media kultur yang telah disemprot alkohol 96% ke
dalam LAFC lalu nyalakan lampu TL dan blower
e. Bukalah pembungkus alat-alat diseksi dan mangkuk stainles serta
petridisk, semprot dengan alkohol 96% lalu bakar dan biarkan sampai
apinya padam
f. Nyalakan lampu spirtus dan buka penutup botol alkohol 96%
g. Ambil kertas steril sebanyak 2 lembar, panaskan sebentar di atas api
bunsen dan letakkan di atas alas kaca steril
h. Ambil bahan eksplan pisang yang telah disterilisasi dengan menggunakan
pinset lalu letakkan di atas potongan kertas steril
i. Kupas pelepah dan bonggol eksplan pisang sampai berukuran kecil sekitar
sebesar ibu jari tangan menggunakan pisau skalpel steril
j. Ambil media MS 0, buka tutupnya, lalu buang air yang berada dalam
media kultur tersebut
k. Tanam potongan eksplan pisang dalam media MS 0 sebanyak 1
eksplan/botol media sedalam ± 0,5-1 cm
l. Tutup penutup botol kultur hasil inokulasi serapat mungkin untuk
meminimalkan resiko terjadinya kontaminasi
m. Beri label (jenis tanaman, bagian tanaman yang diambil, jenis media,
tanggal tanam), kemudian simpanlah di ruang pertumbuhan
n. Bersihkan pinset dan pisau skalpel dengan air aquades steril, celupkan
pada alkohol 96%, bakar dan simpan di atas mangkuk stainles
o. Buang sampah yang ada di dalam LAFC dan matikan lampu TL dan blower
LAFC
p. Cuci alat-alat gelas dan diseksi yang telah digunakan untuk inokulasi
4. Pengelolaan ruang pertumbuhan

a. Lakukan pengecekan terhadap alat pengontrol suhu, kelembaban dan
lamanya pencahayaan
b. Berdasarkan data dari hasil pengecekan, lakukan pengesetan atau
penyetelan terhadap suhu, kelembaban dan lama pencahayaan, sesuai
dengan kebutuhan. Suhu 24–28oC. Kelembaban 60%-80%, lamanya
pencahayaan 12 jam
2017 93
c. Bersihkan tempat ruangan dan simpan peralatan ke masing-masing

tempatnya
d. Tutup pintu ruang inkubasi
LEMBAR KERJA 6
Aklimaatisasi (Anggrek)
Pendahuluan
Rangkaian tahap kegiatan terakhir dalam perbanyakan tanaman secara kultur
jaringan adalah tahap aklimatisasi. Tahap aklimatisasi sangat penting dan tanpa
kegiatan ini metode kultur jaringan tidak ada artinya. Hal ini dikarenakan bibit
hasil perbanyakan secara kultur jaringan tidak dapat hidup dan tumbuh di
lapangan secara langsung tanpa adanya tahap aklimatisasi.
Tujuan
Apabila disediakan alat dan bahan yang sesuai peserta dapat melakukan
aklimatisasi planlet tanaman anggrek dengan teliti dan hati-hati sesuai dengan
Bahan dan Alat

1. Golok, sikat, ember, bak semai, timbangan digital, sendok kecil, pinset
bengkok, gunting, keranjang plastik, dan pot diameter 15 cm.
2. Media pakis, fungisida, planlet anggrek, kertas alas timbang dan air.
Keselamatan kerja
Langkah kerja
1. Menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan
2017 94
2. Menimbang fungisida untuk merendam planlet dan media tanam sebanyak 2

gram/liter
3. Menyiapkan dan membersihkan pot
4. Menyiapkan media pakis dipotong-potong dengan ukuran 3-4 cm
5. Mencuci media potongan pakis dalam bak berisi air yang bersih
6. Merendam potongan pakis dalam larutan fungisida selama 30 menit
7. Mengeluarkan planlet anggrek yang ada dalam botol kultur yang akan
diaklimatisasi dengan menggunakan pinset panjang.
8. Planlet anggrek tersebut direndam dengan larutan fungisida selama 5 menit
9. Mengeringkan planlet tersebut dan ditata dengan rapi di atas koran sambil
diseleksi antara tanaman yang besar dan tanaman yang masih kecil.
10. Memasukan media pakis ke dalam pot besar berdiameter 15 cm
11. Menanam planlet anggrek pada lubang tanam di media potongan pakis
dengan posisi tegak
12. Memberi label pada pot tersebut (tanggal aklim dan nama spesies tanaman)
13. Meletakan planlet anggrek hasil aklimatisasi di dalam green house yang
teduh
E. Latihan Soal
Jawablah soal-soal berikut dengan benar dengan cara memberi tanda silang
(X) huruf a,b,c atau d pada salah satu pilihan jawaban!
1. Hal-hal yang menyebabkan terjadinya kontaminasi pada planlet di ruang

pertumbuhan adalah ....
a. asal eksplan, ukuran eksplan, dan sterilitas eksplan
b. ukuran eksplan dan sterilitas alat diseksi
c. sterilitas eksplan dan alat diseksi yang kurang sesuai
d. kecepatan dalam melakukan inokulasi dan sterilitas ruang tanaman
2. Faktor dibawah ini yang tidak berpengaruh terhadap tingkat keberhasilan

penanaman/inokulasi eksplan di botol kultur adalah:
a. Tanaman sumber eksplan dari tanaman induk yang sehat, tumbuh
baik atau normal.
2017 95
b. Tanaman sumber eksplan memiliki nilai ekonomis tinggi.

c. Ukuran eksplan.
d. Umur fisiologis eksplan.
3. Kegiatan pemeliharaan eksplan di ruang pertumbuhan meliputi:

1) penggantian media
2) pengaturan kebutuhan intensitas cahaya
3) pengaturan rak kultur dan letak lampu
4) pengaturan kelembaban
5) pengaturan suhu
6) pengaturan letak peralatan
Jawaban yang paling tepat adalah....
a. 1,2,4,5
b. 2,3,4,5
c. 2,3,4,6
d. 3,4,5,6
4. Cahaya mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan eksplan.

Intensitas cahaya yang diperlukan oleh eksplan pada tahap multiplikasi
adalah:
a. 0–1000 lux
b. 1000–10.000 lux
c. 10.000–30.000 lux
d. 30.000 lux
5. Plantlet hasil kultur jaringan lebih cepat kehilangan air karena ....
a. memiliki jaringan yang masih muda
b. hanya memiliki sedikit jaringan
c. memiliki kutikula yang berlubang
d. memiliki lapisan lilin dalam jumlah yang tidak normal
6. Plantlet hasil kultur jaringan harus diaklimatisasikan sebelum ditanam di

lapangan karena ....
a. plantlet belum memiliki daun sehingga belum mampu berfotosintesis
2017 96
b. ukuran plantlet masih kecil dan rentan terhadap serangan penyakit

c. plantlet belum dapat beradaptasi dari lingkungan ex vitro ke
lingkungan in vitro
d. plantlet masih rentan terhadap penguapan yang tinggi dan belum
mampu berfotosintesis
7. Proses adaptasi yang terjadi terhadap plantlet pada saat aklimatisasi

adalah ....
a. Perbaikan fungsi akar untuk menyerap unsur hara dari media non
agar, seperti tanah.
b. Perubahan sifat plantlet yang autotropik berubah menjadi
heterotropik.
c. Penyesuaian dari kelembaban tinggi ke kelembaban udara yang
rendah dengan perbaikan fungsi akar.
d. Peningkatan proses respirasi melalui perbaikan struktur daun menjadi
lebih lebar.
F. Rangkuman
Kegiatan penanaman dalam kultur jaringan pada dasarnya ada dua hal yaitu
inisisasi dan subkultur. Subkultur dapat meliputi beberapa kegiatan yaitu
penggandaan, regenerasi, dan induksi perakaran. Pada prinsipnya kegiatan
penggandaan, regenerasi, dan induksi perakaran sebetulnya sama yaitu
memindahkan inokulum ke media lain namun dengan tujuan yang berbeda.
Sedangkan inisiasi agak sedikit lebih rumit karena prosesnya diawali dengan
persiapan eksplan lebih dahulu dimana eksplan ini berasal dari habitat luar
sehingga harus dipotong dan disterilkan terlebih dahulu agar pada saat
ditumbuhkan di media kultur jaringan tidak terjadi kontaminasi.
Permasalahan yang paling utaman dalam melakukan inisiasi adalah

sterilisasi eksplan yang pada prinsipnya mematikan mikroorganisme pada
eksplan tersebut tanpa mematikan jaringan eksplannya. Bahan-bahan untuk
sterilisasi eksplan dapat berupa antibiotika, fungisida, baketrisida, desinfektan
lainnya. Sterilisasi eksplan dapat dilakukan dengan dua cara yaitu secara
2017 97
fisik (dibakar) dan secara kimia (menggunakan bahan kimia). Tidak pernah
ada pedoman baku dalam melakukan sterilisasi eksplan karena sangat
tergantung pada jenis dan asal eksplan tersebut.
Inokulasi eksplan adalah kegiatan penanaman bahan tanam (eksplan) ke

dalam media inisiasi baik berupa media padat/cair dalam botol kultur di
Laminar Air Flow Cabinet dengan kondisi aseptik. Kondisi aseptik diperlukan
untuk keberhasilan inokulasi eksplan sehingga kegiatan inokulasi
memerlukan peralatan dan bahan yang mendukung terciptanya kondisi yang
aseptik. Laminar atau entkas merupakan meja kerja steril tempat inokulasi
eksplan maka untuk menciptakan kondisi aseptik laminar atau entkas perlu
disterilisasi terlebih dahulu dengan cara menyalakan lampu ultra violet (UV)
minimal 30 menit sebelum dioperasikan. Teknik inokulasi eksplan dimulai
dengan mengambil eksplan dari tempat rendamannya dan dipotong secara
aseptis menggunakan skalpel sesuai dengan jenis eksplannya. Botol kultur
berisi media dibuka secara aseptis dan potongan eksplan ditanam dalam
botol kultur secara aseptis sedalam ± 0,5-1 cm. Jumlah eksplan yang
ditanam disesuaikan dengan kapasitas media dalam botol.
Eksplan adalah bagian kecil jaringan atau organ yang diambil atau
dipisahkan dari tanaman induknya sebagai bahan tanam in vitro kemudian
dikulturkan secara in vitro dalam kondisi aseptis. Eksplan yang digunakan
untuk inisisasi harus berasal dari jaringan muda yang masih aktif melakukan
pembelahan sel, seperti pucuk, mata tunas, ovul, meristem, dll.
Sub kultur dalam perbanyakan tanaman secara kultur jaringan diperlukan

agar diperoleh populasi pucuk atau anakan yang banyak. Kegiatan sub
kultur harus dilakukan terhadap inokulum disebabkan oleh beberapa hal
antara lain :
1. Tumbuhnya eksplan cukup cepat dan telah memenuhi seluruh botol
kultur.
2. Media tumbuh telah mengering yang ditandai dengan berkurangnya
volume agar-agar atau media cairnya sudah habis.
2017 98
3. Eksplan perlu diperbanyak lebih lanjut untuk tujuan tahapan

perbanyakan selanjutnya.
4. Eksplan memerlukan media yang susunannya baru agar dapat
mengalami diferensiasi lebih lanjut.
Eksplan atau kalus yang sudah waktunya dipindahkan ke dalam media kultur
yang baru harus segera dilaksanakan dan tidak boleh sampai terlambat. Sub
kultur yang terlambat dapat menyebabkan pertumbuhan eksplan atau kalus
tersebut akan terhenti atau mengalami pencoklatan atau bahkan
terkontaminasi oleh jamur atau bakteri. Kegiatan subkultur dapat meliputi
penggandaan, regenerasi, dan induksi perakaran.
Pengelolaan kultur di ruang pertumbuhan meliputi tiga kegiatan yaitu

penataan botol kultur, pengendalian lingkungan ruang pertumbuhan yang
meliputi suhu, intensitas cahaya, dan kelembaban), serta penanganan kultur
yang terkontaminasi. Ketiga hal tersebut jika tidak dilakukan dengan benar
akan mempengaruhi pertumbuhan dan bahkan kematian kultur.
Plantlet yang dipelihara dalam keadaan steril dalam lingkungan (suhu,

intensitas cahaya, dan kelembaban) optimal, sangat rentan terhadap
lingkungan luar. Oleh karena itu plantlet hasil kultur jaringan memiliki
karakteristik daunnya memiliki kutikula yang kurang berkembang, system
pembuluh angkut antara pucuk dan akar kurang terbentuk secara sempurna,
perakaran kurang berkembang dengan baik. Berdasarkan karaketristik
tersebut maka plantlet yang akan dipindah tanam ke lingkungan luar harus
diadaptasikan lebih dahulu.
Aklimatisasi plantlet adalah suatu usaha untuk mengadaptasikan plantlet

(bibit hasil kultur jaringan) dari lingkungan in vitro ke lingkungan ex vitro, baik
secara fisiologis maupun morfologi. Kondisi lingkungan yang diadaptasikan
meliputi intensitas cahaya, kelembaban, temperatur lingkungan, serta
keberadaan mikroorganisme pengganggu tanaman.
2017 99
Plantlet yang dapat diaklimatisasi adalah plantlet yang telah lengkap organ
pentingnya seperti pucuk dan akar, warna pucuknya hijau (bukan transparan/
tembus pandang) dan akarnya sudah tumbuh dengan baik. Cara aklimatisasi
meliputi persiapan media aklimatisasi, persiapan plantlet, dan penamanan
plantlet. Sedangkan factor yang berpengaruh terhadap keberhasilan
aklimatisasi adalah kebersihan plantlet dari sisa agar-agar, media
aklimatisasi yang steril dan homogen, perubahan kondisi lingkungan (suhu,
kelembaban, cahaya) secara bertahap dan perlahan lahan hingga palnlet
dapat beradaptasi di lingkungan barunya.
Terdapat beberapa pengertian tentang kesehatan dan keselamatan kerja

namun pada dasarnya adalah sama yaitu kegiatan yang bertujuan menjamin
kesehatan dan keselamatan kerja petugas dan lingkungannya, keselamatan
peralatan, dan keselamatan bahan. Laboratorium kultur jaringan tanaman
adalah laboratorium yang digunakan untuk kegiatan pembiakan tanaman
dimana kegiatan-kegiatannya meliputi pembuatan media kultur jaringan,
penyiapan eksplan, penanaman (inisiasi dan subkultur), pengelolaan ruang
pertumbuhan, dan aklimatisasi plantlet. Dalam laboratorium terdapat
beraneka ragam peralatan dan bahan-bahan yang harus dirawat dan
diperlakukan sesuai dengan karakteristiknya masing-masing agar peralatan
dan bahan-bahan tersebut tidak rusak dan tidak membahayakan orang,
tanaman, dan lingkungan di sekitarnya.
Kemungkinan-kemungkinan kecelakaaan atau kerusakan dapat terjadi pada

manusia dan lingkungannya, peralatan dan bahan-bahannya, serta produk
yang dihasilkan. Adapun jenis bahaya-bahaya yang mungkin terjadi di
laboratorium kultur jaringan adalah bahaya terkena benda tajam, bahaya
kebakaran, bahaya terkena bahan kimia, bahaya kesetrum.
G. Umpan Balik dan Tindak Lanjut

Setelah saudara mempelajari penanaman eksplan dan aklimatisasi planlet
dengan metode pembelajaran mengamati (mengenal fakta lapangan,
membaca modul), diskusi, mencoba tahap-tahap pengembangan, melakukan
2017 100
tugas, apakah Anda bisa melakukan penanaman eksplan dan aklimatisasi

planlet di sekolah anda? Apa yang akan saudara lakukan ?
GLOSARIUM
Protoplasma : Bagian hidup dari sebuah sel yang dikelilingi oleh

membran plasma. Ini adalah istilah umum
Sitoplasma. Protoplasma terdiri dari campuran
molekul kecil seperti ion, asam amino, monosakarida
dan air, dan makromolekul seperti asam nukleat,
protein, lipid dan polisakarida.
Sel : Unit dasar fungsional dan biologis dari semua
organisme hidup, dapat juga berarti unit terkecil dari
kehidupan yang mampu memperbanyak diri secara
independen dan seringkali sel disebut sebagai
“building blocks of life”.
Jaringan : Kumpulan sel-sel tumbuhan yang memiliki bentuk dan
2017 101
fungsi yang sama.

Organ : Kumpulan jaringan yang secara bersama-sama
melakukan tugas tertentu, yang terdiri dari akar,
batang, daun, bunga dan buah.
Hormon : Molekul-molekul yang kegiatannya mengatur reaksi-
reaksi metabolik penting yang mampu mendorong
ataupun yang menghambat pertumbuhan dan
dihasilkan secara alami (alamiah) baik itu dari
tumbuhan ataupun dari hewan.
Zat pengatur tumbuh : Molekul-molekul yang kegiatannya mengatur reaksi-
reaksi metabolik penting yang mampu mendorong
ataupun yang menghambat pertumbuhan dan
dihasilkan secara buatan (sintetis) dengan campur
tangan manusia ataupun melalui rekayasa dan
biasanya ZPT ini berhubungan dengan kimia.
Poliploid : Kondisi pada suatu organisme yang memiliki
set kromosom (genom) lebih dari sepasang.
Organisme yang memiliki keadaan demikian disebut
sebagai organisme poliploid. Usaha-usaha yang
dilakukan orang untuk menghasilkan organisme
poliploid disebut sebagai poliploidisasi.
Jaringan embrional : Jaringan yang sel-selnya mampu membelah diri
secara terus menerus. Contoh jaringan embrional
adalah mersitem.
Plasma nutfah : Substansi atau zat pembawa sifat keturunan yang
dapat berupa organ utuh atau bagian dari tumbuhan
atau hewan serta mikroorganisme. Plasma nutfah
merupakan kekayaan alam yang sangat berharga
bagi kemajuan ilmu pengetahuan dan teknologi untuk
mendukung pembangunan nasional.
Steril : Suci hama, bebas dari mikroorganisme.
Inisiasi : Tahap pengambilan eksplan dari tanaman induk yang
akan diperbanyak secara kultur jaringan.
2017 102
PENUTUP
Modul Agribisnis Tanaman Pangan dan Hortikultura Grade-7 (KK G) ini disusun
dalam rangka menyediakan kebutuhan bahan ajar pelatihan pengembangan
keprofesionalan berkelanjutan bagi guru-guru Sekolah Menengah Kejuruan
Pertanian Paket Keahlian Agribisnis Tanaman Pangan dan Hortikultura. Modul ini
diperuntukkan bagi guru-guru yang hasil uji kompetensinya masih kurang
khususnya pada grade atau kelompok kompetensi yang ke-7. Keberadaan
dokumen ini akan selalu berkembang sesuai dengan berkembangnya ilmu
pengetahuan dan teknologi serta kebijakan-kebijakan dan peraturan-peraturan
lain yang terkait dengan pelatihan guru kejuruan. Semoga keberadaan modul ini
dapat membantu pihak-pihak yang memerlukannya.
2017 103
DAFTAR PUSTAKA
Gamborg, O.L. and Philips, G.C. 1995. Plant Cell, Tissue and Organ Culture :
Fundamental Methods. Springer-Verlag Berlin Heidelberg. New York.
George, E.F. and Sherrington. 2000. Plant Propagation by Tissue Culture.

Volume 1. 2nd Ed. Exegetic Limited. England.
Gunawan, L.V. 1992. Teknik Kultur Jaringan. Pusat Antar Universitas

Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Pierik. R.L.M. 1997. In Vitro Culture of Higher Plants. Kluwer Academic

Publishers. Dordrecht. Netherlands.
Santoso, U. dan Nursandi, F. 2004. Kultur Jaringan Tanaman. Universitas

Muhammadiyah Malang Press. Malang.
Sukmadjaja. D. dan Mariska, I. 2003. Perbanyakan Bibit Abaka Melalui Kultur

Jaringan. Balai Penelitian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik
Pertanian. Bogor.
_________________________. 2003. Perbanyakan Bibit Jati Melalui Kultur

Jaringan. Balai Penelitian Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik
Pertanian. Bogor.
2017 104
Tim Biotrain. 2001. Produksi Bibit Unggul Tanaman Melalui Kultur Jaringan.
Pusat Antar Universitas Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Trigano, R.N. and Gray, D.J.G. 2000. Plant Tissue Culture Concepts and
Laboratory Exercises. 2nd Ed. CRC Press. Boca Raton. Florida.
Yusnita. 2003. Kultur Jaringan Cara Memperbanyak Tanaman Secara Efisien.

Agromedia Pustaka. Jakarta.
Zulkarnain. 2009. Kultur Jaringan Tanaman. Solusi Perbanyakan Tanaman

Budidaya. Bumi Aksara. Jakarta.
https://id.wikipedia.org/wiki/Aklimatisasi
http://himakesjafkuns.blogspot.co.id/2013/09/info-k3-keselamatan-dan-
kesehatan-kerja.html
http://learnmine.blogspot.co.id/2015/04/keselamatan -dan-kesehatan-
kerja.html
2017 105

7.modul KK G Kultur Jaringana ATPH OK

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

7.modul KK G Kultur Jaringana ATPH OK

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

MODUL

PEMBIAKAN TANAMAN SECARA KULTUR JARINGAN

PAKET KEAHLIAN AGRIBISNIS TANAMAN PANGAN DAN

Penulis: Ir.Susilowati EW, MP

DIREKTORAT JENDERAL GURU DAN TENAGA KEPENDIDIKAN

Dalam rangka meningkatkan daya saing regional dan melaksanakan Instruksi

Pusat Pengembangan dan Pemberdayaan Pendidik dan Tenaga Kependidikan

sangat besar dalam peningkatan kualitas kompetensi produktif Guru Keahlian

Jakarta, Pebruari 2017

Sumarna Surapranata, Ph.D

KATA PENGANTAR ………………………………………………………………………………….. i

DAFTAR GAMBAR …………………………………………………………………………………… vi

DAFTAR TABEL ……………………………………………………………………………………… vii

A Latar Belakang ………………………………………………………………………………… 1

C Peta Kompetensi ……………………………………………………………………………… 3

D Ruang Lingkup ………………………………………………………………………………… 3

E Cara Penggunaan Modul ………………………………………………………………….. 4

KONSEP KULTUR JARINGAN TANAMAN

B Indikator Pencapaian Kompetensi …………………………………………………… 5

1 Pengertian kultur jaringan dan terminologi dalam kultur jaringan 5

3 Manfaat kultur jaringan …………………………………………………………… 10

4 Lingkup kegiatan kultur jaringan …………………………………………….. 12

5 Laboratorium kultur jaringan …………………………………..……………… 13

6 Peralatan kultur jaringan ………………………………………………………... 14

7 Keterampilan dan pengetahuan penting dalam kegiatan kultur 18

E Latihan Soal ……………………………………………………………………………………. 24

G Umpan Balik dan Tindak Lanjut ………………………………………………………. 27

B Indikator Pencapaian Kompetensi …………………………………………..……… 28

C Uraian Materi ………………………………………………………………………………… 28

1. Komponen-komponen dalam media kultur jaringan …………………… 28

2. Komposisi dasar media kultur jaringan ……………………………………… 29

4. Media kultur ……………………………………………………………………………… 36

D Aktifitas Pembelajaran …………………….…………………………………………….. 39

E Latihan Soal ………………………………………………………………………………….. 44

G Umpan Balik dan Tindak Lanjut ……………………………………………………… 48

B Indikator Pencapaian Kompetensi …………………………………………………… 49

C Uraian Materi …………………………………………………………………………………. 49

1. Inisiasi eksplan ………………………..…………………………………………………. 51

2. Subkultur inokulum. ………………………………..…………………………………. 57

3. Penggandakan inokulum. …………………………………………………………… 60

4. Regenerasi inokulum. ………………………………………………………………… 62

5. Induksi perakaran inukulum. ……………………………………………………… 63

6. Pengelolan ruang pertumbuhan………………………..…………………………. 64

8. Keselamatan dan kesehatan kerja (K3) ……………………………………….. 73

D Aktifitas Pembelajaran ……………………………………………………..…………….. 82

G Umpan Balik dan Tindak Lanjut ……………………………………………..………. 93

DAFTAR PUSTAKA …………………………………..…………………………………………… 97

Seperti yang diamanahkan dalam Undang Undang Republik Indonesia

Pendidikan sebagai sebuah sistem merupakan keseluruhan komponen

kualifikasi guru, meliputi dimensi kompetensi pedagogi, kepribadian,

Di sisi lain masih terdapat berbagai masalah yang berkaitan dengan

Berkaitan dengan peningkatan kompetensi guru pada tahun 2015 ini

Pusat Pengembangan dan Pemberdayaan Pendidik dan Tenaga

Kompetensi G) yang difokuskan pada Pembiakan Tanaman secara

Adapaun lingkup materi yang dibahas dalam Modul Diklat PKB

Melalui kegiatan pengamatan, diskusi, dan pengumpulan informasi,

Sesuai dengan tujuan yang diharapkan dapat dicapai maka ruang

D. Cara Penggunaan Modul

Modul ini berisi materi-materi yang mendukung tentang pembiakan

KONSEP KULTUR JARINGAN TANAMAN

Setelah mempelajari materi dan berdiskusi peserta pelatihan dapat

B. Indikator Pencapaian Kompetensi

1. Pengertian kultur jaringan dan terminologi dalam kultur