ISOLASI DNA

(tanggal 05 April 2018)

No. Langkah Kerja Foto

PREPARASI JARINGAN HEWAN
1. Masing-masing daging segar (sapi dan babi) Daging Babi:
dihancurkan dengan lumpang dan alu

Daging Sapi:

Daging tersebut dihancurkan:

2. Ditimbang daging tersebut masing-masing 20 mg

3. Dimasukkan ke microsentrifuge tube 1.5 ml dan
ditambahkan 600 µm Nucleic Lysis Solution

4. Dihomogenkan dengan vortex selama 10 detik

5. Diinkubasi dengan suhu 650 C selama 30 menit

PELISISAN SEL DAN PRESIPITASI PROTEIN

1. Diambil campuran larutan yang telah diinkubasi
2. Ditambahkan 3 µl RNAse dan diinkubasi pada lemari es
dengan suhu 370C selama 30 menit

3. Ditambahkan 200 µl protein presipitation solution

4. Divortex selama 10 detik dan dimasukkan di dalam

lemari es selama 5 menit

5. Disentrifugasi dengan microsentrifuge dengan

kecepatan 6000 rpm selama 4 menit
 PRESIPITATION DAN REHIDRATION DNA
1. Diambil supernatant yang terbentuk

2. Ditambahkan 600 µl isopropanol

3. Divortex selama 10 detik

4. Disentrifugasi dengan kecepatan 16.000 rpm selama 1

menit
5. Supernatan dibuang

6. Ditambahkan etanol 70% sebanyak 600 µl

7. Disentrifuge kembali dengan kecepatan 16.000 rpm

selama 1 menit

8. Dibuang supernatant lalu dikeringkan dengan hydryer

 9. Ditambahkan 100 µl DNA Rehidration Solution

10. Didiamkan selama 1 jam pada suhu 650 C atau

dimasukkan ke dalam lemari es bersuhu 40C

Tanggal 12 April 2018

NO. LANGKAH KERJA

1. Ditambahkan primer BL atau primer refresh sebanyak 0.4 µl untuk masing-masing sampel
sehingga jumlah total untuk 2 sampel (sapi dan babi) adalah 0.8 µl
2. Ditambahkan BR atau primer forward sebanyak 0.4 ml untuk masing-masing sampel
sehingga jumlah total untuk 2 sampel (sapi dan babi) adalah 0.8 µl
3. Ditambahkan UPL sebanyak 0.4 µl untuk masing-masing sampel sehingga jumlah total
untuk 2 sampel (sapi dan babi) adalah 0.8 µl
4. Ditambahkan Probmaster sebanyak 10 µl untuk masing-masing sampel sehingga jumlah
total untuk 2 sampel (sapi dan babi) adalah 20 µl
5. Ditambahkan aquabidest sebanyak 3.8 µl untuk masing-masing sampel sehingga jumlah
total untuk 2 sampel (sapi dan babi) adalah 7.6 µl
6. Semua bahan tadi ditambahkan di dalam mikrotube lalu diaduk hingga homogen
7. Campuran tersebut dimasukkan ke dalam multiwellplate (tempat meletakkan sampel
untuk di PCR) sebanyak 15 µl untuk masing-masing sampel
8. Ditambahkan DNA template (sampel yang dibuat pada minggu lalu) sebanyak 5 µl, lau
diletakkan dengan alat sillingwell