TEKNIK STERILISASI

Raka Wisnu Wardana1, Nadiya Dwi Rahayu2 dan Hasrul Satria Nur2,3

1. Program studi D3 Analisis Farmasi dan Makanan, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A.
Yani Km 36, Banjarbaru, 70713, Indonesia
2. Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yan Km 36, Banjarbaru,
70713
3. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 35,8
Banjabaru, 70713, Indonesia

E-mail: hadiraka24@gmail.com

Abstrak

Sterilisasi merupakan proses dimana alat dan bahan dipisahkan dari benda asing (organisme,virus,spora) yang dapat
menggangu saat praktikum.Sterilisasi dapat dilakukan baik melalui proses kimia maupun fisika. Terdapat 3 cara untuk
melakukan sterilisasi ini yaitu mekanik, fisik dan kimiawi. Dalam praktikum ini akan dijabarkan mengenai cara fisik
yaitu dengan Uap air panas bertekanan dan mengunakan alat khusus yaitu Autoklaf. Pada umunya, sterilisasi
digolongkan menjadi 2 proses yaitu sterilisasi basah dan sterilisasi kering. Dan pada autoklaf termasuk dalam
pengoperasian sterilisasi basah dimana pada proses sterilisasinya memerlukan air. Tekanan yang digunakan pada
autoklaf ini umumnya 15 Psi atau sekitar 2 atm dan dengan suhu 121oC (250oF). Jadi tekanan yang bekerja ke seluruh
permukaan benda adalah 15 pon tiap inchi2 (15 Psi = 15 pounds per square inch). Lama sterilisasi yang dilakukan
biasanya 15 menit untuk 121oC. Alasan digunakan suhu 121oC atau 249,80oF adalah karena air mendidih pada suhu
tersebut jika digunakan tekanan 15 psi. Untuk tekanan 0 psi pada ketinggian di permukaan laut (sea level) air mendidih
pada suhu 100oC, sedangkan untuk autoklaf yang diletakkan di ketinggian sama, menggunakan tekanan 15 psi maka air
akan mendidih pada suhu 121oC

Kata kunci: sterilisasi, organisme, Mechanical, Physical and Chemical

1. Pendahuluan dan suhu steriliasi autoclave memberikan informasi

Proses yang menghancurkan semua bentuk kehidupan
disebut sterilisasi. Suatu benda yang steril, dipandang
dari sudut mikrobiologi artinya bebas dari mikroba atau
mikroorganisme hidup. Suatu benda atau substansi
hanya dapat steril atau tidak steril, tidak akan pernah
mungkin setengah steril atau hampir steril. Sterilisasi
yaitu proses mematikan semua mikroorganisme dengan
pemanasan, dengan tujuan membebaskan bahan dari
semua mikroba perusak. Untuk meningkatkan
produktifitas dalam sterilisasi, dilakukan penelitian
menggunakan 2 faktor, yaitu suhu dan waktu sterilisasi,
penggunaan suhu dan waktu diharapkan dapat
membunuh mikroorganisme dan mengurangi
denaturasi protein. Manfaat penelitian diharapkan agar
mahasiswa dapat mampu mengetahui pengaruh waktu
kepada perusahaan mengenai mikroorganisme [1].
Pada proses sterilisasi, spora bakteri adalah yang paling
resisten diantara semua organisme hidup. Untuk
mengetahui hal tersebut, diperlukan bakteri berspora
dalam pembuktiannya karena spora bersifat lebih iahan
terhadap pengaruh luar yang tidak sesuai dibandingkan
dengan bakteri biasa (bentuk vegetatif). Efektifitas
sterilisasi tergantung pada jumlah dan jenis
mikroorganisme, jumlah dan jenis kontaminasi oleh zat
lain, serta ada tidaknya tempat-tempat perlindungan
mikroorganisme pada alat (misalnya pada alat yang
bergerigi) [2].
Sterilisasi harus dilakukan pada kisaran suhu sterilisasi
yaitu 121oC pada waktu tertentu, dimana panas yang
diberikan cukup untuk menhancurkan bakteri patogen

1
tetapi tidak cukup untuk menurunkan kualitas gizi dan
organoleptik makanan yang diawetkan. Jumlah panas
yang dperlukan untuk sterilisasi yang memadai
tergantung beberapa faktor yaitu: 1) Ukuran kaleng dan
keadaan isinya, kaleng dengan ukuran besar
memerlukan waktu yang lebih lamadari pada kleng
yang berukuran kecil; 2) Jenis bahan, penetrsi panas
pada bahan cair akan lebih cepat dari pada bahan padat;
3) pH bahan pangan, waktu sterilisasi bahan pangan
berasam rendah dapat diperpendek dengan pemanasan
pada suhu lebih tinggi; 4) Suhu awal bahan, suhu awal
yang cukup (50 sampai 60oC) dapat memperpendek
waktu sterilisasi; 5) Sumber panas, uap air sebagai
medium pemanasan harus merupakan uap air murni,
aehinnga proses perpindahan panas berjalandengan
cepat [3].
Teknik sterilisasi permukaan banyak digunakan untuk
menghilangkan kontaminan yang terdapat pada
permukaan eksplan. Selama proses sterilisasi, eksplan
harus tetap hidup dan hanya kontaminan yang
dieliminasi. Oleh karena itu, sterilisasi permukaan
dilakukan dengan merendam eksplan dalam larutan
disinfektan dengan konsentrasi tertentu selama periode
tertentu. Sterilan, atau disinfektan, yang biasa
digunakan untuk sterilisasi permukaan eksplan adalah
natrium hipoklorit (NaOCl) atau kalsium hipoklorit
(Ca[OCl]2). Senyawa hipoklorit sangat efektif dalam
mengurangi kontaminasi pada teknik mikropropagasi.
Penggunaan Ca(OCl)2 atau NaOCl mempunyai
kelebihan dan kekurangan dan memberikan hasil yang
berbeda untuk setiap jenis eksplan yang digunakan.
Sterilan Ca(OCl)2 memilki pH yang stabil namun dapat
merusak jaringan pada bagian pomotongan eksplan
sedangkan NaOCl memiliki pH yang tidak stabil,
bersifat toksik, namun tidak merusak jaringan. Sterilan
NaOCl digunakan sebagai sterilan dalam berbagai
teknik sterilisasi eksplan dengan konsentrasi dan lama
perendaman yang berbeda pada eksplan. Pertumbuhan
tunas, aksilar atau adventif, pada eksplan dipengaruhi
oleh penggunaan ZPT (khususnya sitokinin) pada
media tumbuh [4].
Untuk kebanyakan benda, panas merupakan metode
sterilisasi yang paling praktis dan efisien. Jumlah panas
yang diperlukan untuk mematikan berbeda dari satu
organisme ke organisme lain, yang harus diperhatikan
adalah banyaknya panas (suhu) yang harus
dipergunakan dan lamanya waktu yang diperlukan
benda yang disterilkan untuk dipanaskan pada suhu
tertentu. Kesulitan yang dihadapi dalam sterilisasi
panas antara lain adalah adanya endospora bakter, yang
merupakan bentuk kehidupan yang paling resisten
(bertahan hidup pada suhu air mendidih 100°C pada
permukaan laut untuk beberapa jam). Tidak ada pola
standard ketahanan terhadap panas untuk endospora,
karena ketahanannya beraneka bukan saja dari jenis ke
jenis tetapi juga di dalam jenis yang sama dalam
2
kondisi umur dan pertumbuhan yang berbeda.
Sterilisasi panas lembab dapat dilakukan dengan
penggunaan autoklaf (uap bertekanan) dan penggunaan
uap langsung (tindalisasi/ sterilisasi fraksi). Sterilisasi
panas kering dapat dilakukan dengan oven (udara
panas) dan pembakaran. Panas lembab sangat efektif
meskipun pada suhu yang tidak begitu tinggi, karena
uap air berkondensasi pada bahan‐bahan yang
disterilkan, dilepaskan panas sebanyak 636 kalori per
gram uap air pada suhu 121°C. Panas ini
mendenaturasikan atau mengkoagulasikan protein pada
organisme hidup dan dengan demikian mematikannya.
Dibandingkan dengan panas lembab, panas kering
kurang efisien dan membutuhkan suhu lebih tinggi serta
waktu lebih lama untuk sterilisasi. Hal ini disebabkan
karena tanpa kelembaban tidak ada panas laten. Untuk
sterilisasi panas kering tanah, yang pernah dilakukan
yaitu berupa sterilisasi fraksi dengan oven [5].
2. Metode Praktikum
Pada praktikum kali ini kita melakukan tiga metode,
yaitu ada menggunakan metode panas (heat
sterilization), filtrasi dan bahan kimia. Teknik
sterilisasi yang umum digunakan adalah metode
sterilisasi menggunakan uap air panas bertekanan atau
menggunakan prinsip kerja autoclave. Suhu dan
tekanan tinggi yang diberikan kepada alat dan media
yang disterilisasi memberikan kekuatan yang lebih
besar untuk membunuh sel dibanding dengan udara
panas. Biasanya untuk mesterilkan media digunakan
suhu 121oC dan tekanan 15 lb/in2 (SI = 103,4 Kpa)
selama 15 menit. Alasan digunakan suhu 121oC atau
249,8oF adalah karena air mendidih pada suhu tersebut
jika digunakan tekanan 15 psi. Untuk tekanan 0 psi
pada ketinggian di permukaan laut (sea level) air
mendidih pada suhu 100oC, sedangkan untuk autoclave
yang diletakkan di ketinggian sama, menggunakan
tekanan 15 psi maka air akan memdididh pada suhu
121oC. Ingat kejadian ini hanya berlaku untuk sea
level, jika dilaboratorium terletak pada ketinggian
tertentu, maka pengaturan tekanan perlu disetting
ulang. Misalnya autoclave diletakkan pada ketinggian
2700 kaki dpl, maka tekanan dinaikkan menjadi 20 psi
supaya tercapai suhu 121oC untuk mendidihkan air.
Semua bentuk kehidupan akan mati jika dididihkan
pada suhu 121oC dan tekanan 15 psi selama 15 menit.
Penyaringan dilakukan dengan mengalirka larutan
melalui suatu alat penyaringan yang memiliki pori –
pori cukup kecil. Untuk menahan mikroorganisme
dengan ukuran tertentu. Saringan yang umum
digunakan tidak dapat menyaring virus. Penyaringan
dilakukan dengan untuk mensterilkan cairan yang tidak
tahan terhadap pemanasan dengan suhu tinggi seperti :
serum, larutan yang mengandung enzim, toksin kuman,
ekstrak sel, antibiotik dan asam amino.
Prosedur praktikum

A. Sterilisasi dengan panas basah
Sterilisasi Dengan Pemanasan Secara Basah-sediaan
yang akan disterilkan diisikan ke dalam wadah yang
cocok, kemudian ditutup kedap. Jika volume tiap
wadah tidak lebih dari 100 ml, sterilisasi dilakukan
dengan uap air jenuh pada suhu 115ºC sampai 116ºC
selama 30 menit. Jika volume tiap wadah lebih dari
100 ml, waktu sterilisasi diperpanjang hingga seluruh
isi tiap wadah berada pada suhu 115ºC sampai 116ºC
selama 30 menit. Cara kerja: Autoclave dipanaskan,
ventilasi dibuka untuk membiarkan udara kelaur, uap
air masuk dari bagian atas dan uadara keluar dari
bagian bawah yang dapat ditunjukan pada gelembung
yang keluar dari ujung pipa karet dalam air. Setelah
udara bersih, bahan yang akan disterilkan dimasukan
sebelum air mendidih, tutup dan kunci autoclave,
ventilasi ditutup dan suhu serta tekanan akan naik
sesuai dengan yang dikehendaki. Atur klep pengaman
supaya tekanan stabil. Setelah disterilisasi selesai,
autoclave dibiarkan dingin hingga tekanannya sama
dengan tekanan atmosfer. Cara sterilisasi ini lebih
efektif dibandingkan pemanasan basah lainnya, karena
suhunya lebih tinggi.
B. Sterilisasi dengan panas kering
Selama pemanasan kering, mikroorganisme dibunuh
oleh proses oksidasi. Ini berlawanan dengan penyebab
kematian oleh koagulasi protein pada sel bakteri yang
terjadi dengan sterilisasi uap panas. Pada umumnya
suhu yang lebih tinggi dan waktu pemaparan yang
dibutuhkan saat proses dilakukan dengan uap di bawah
tekanan. Saat sterilisasi di bawah uap panas dipaparkan
pada suhu 121°C selama 12 menit adalah efektif.
Sterilisasi panas kering membutuhkan pemaparan pada
suhu 150°C sampai 170°C selama 1-4 jam. Suhu yang
biasa digunakan pada sterilisasi panas kering 160°C
paling cepat 1 jam, tapi lebih baik 2 jam. Suhu ini
digunakan secara khusus untuk sterilisasi minyak
lemak atau cairan anhidrat lainnya. Bagaimanapun juga
range 150-170°C digunakan untuk streilisasi panas
kering dan lain-lain, sebagai contoh : bahan-bahan
gelas, dapat disterilkan pada suhu 170oC. dimana
beberapa serbuk seperti sulfonilamid harus disterilkan
pada suhu rendah dan waktu yang lebih lama.
C. Sterilisasi menggunakan filtrasi
Di dalam sterilisai secara mekanik (filtrasi),
menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil
(0.22 mikron atau 0.45 mikron) sehingga mikroba
tertahan pada saringan tersebut. Proses ini ditujukan
untuk sterilisasi bahan yang peka panas, misal nya
larutan enzim dan antibiotik. Cara kerja: 1)
Menyaring cairan:Hal dapat dilakukan dengan berbagai
filter seperti saringan Seitz, yang menggunakan
3
saringan asbestos sebagai alat penyaringannya;
saringan berkefeld, yang mempergunakan filter yang
terbuat dari tanah diatom; saringan chamberland, yang
mempergunakan filter yang terbuat dari porselen; dan
fritted glass filter, yang mempergunakan filter yang
terbuat dari serbuk gelas. Saringan asbes lebih mudah
dan lebih murah daripada saringan porselen. Saringan
asbes dapat dibuang setelah dipakai, sedangkan
saringan porselen terlalu mahal bila dibuang, tetapi
terlalu sulit untuk dibersihkan. 2) Menyaring
udara:Untuk menjaga suatu alat yang sudah steril agar
tidak tercemar oleh mikroba atau untuk menjaga agar
suatu biakan kuman tidak tercemar oleh kuman yang
lain, maka alat-alat tersebut harus ditutup denagn
kapas, karena kapas mudah ditembus udara tetapi dapat
menahan mikroorganisme. Harus dijaga agar kapas
tidak menjadi basah, oleh karena kapas yang basah
memungkinkan kuman menembus kedalam. Untuk
mencegah pencemaran oleh kuman-kuman udara pada
waktu menuang perbenihan, dapat dipergunakan suatu
alat yang disebut laminar flow bench dimana udara
yang masuk kedalamnya disaring terlebih dahulu
dengan suatu saringan khusus. Saringan ini ada batas
waktu pemakaiannya dan harus diganti dengan yang
baru apabila sudah tidak berfungsi lagi.
3. Hasil dan Bahan
Dalam praktikum ini kita menggunakan alat-alat yaitu:
oven, autoklaf, tabung raeksi, bunsen, alat suntik,
kertas bekas, alat filtrasi membran, dan cawan petri.
Sedangkan bahan yang digunakan adalah alcohol 70%,
membran filter, dan kapas. Secara keseluruhan
sterilisasi alat dan media yang dilakukan menggunakan
pembakaran bunsen, yaitu cawan petri dengan cara
membakar ujung pada alat tersebut diatas api bunsen
sampai berpijar. Sedangkan oven untuk mensterilkan
alat–alat yang terbuat dari gelas atau sebagainya.
Penggunaan alat ini dilakukan dilakukan dengan cara
memasukan alat-alat yang hnendak disterilkan kedalam
oven tersebut dengan dasarnya suhu sekitar 160oC
hingga 180oC selama 1,5 sampai 3,0 jam. Dan yang
terakhir autoclave untuk mensterilkan tabung reaksi
dan sebagainya. Penggunaan pada alat ini dengan cara
memasukan alat-alat tersebut kedalam autoclave
dengan temperatur 121oC dan tekanannya adalah 15 psi
(poud per squere inci) atau 1 atm selama 1 jam.
Gambar 1. Oven untuk melakukan sterilisasi kering
(dry hot air). Dengan suhu 160-180oC
1,5-3 jam.

Gambar 2. Autoklaf untuk melakukan sterilisasi
panas uap basah. Dengan suhu 121oC
12-15 menit (moist wet heat)
Gambar 3. Proses pembungkusan cawan petri dan
pipet volumetri sebelum dimasukan
kedalam oven.
Gambar 4. Membran filter yang yang diugunakan
saat proses sterilisasi menggunakan
membran filter
Gambar 5. Proses penyumbatan tabung reaksi
sebelum dimasukan ke dalam oven.
Pada proses sterilisasi, spora bakteri adalah yang paling
resisten diantara semua organisme hidup. Untuk
mengetahui hal tersebut, diperlukan bakteri berspora
dalam pembuktiannya karena spora bersifat lebih iahan
terhadap pengaruh luar yang tidak sesuai dibandingkan
dengan bakteri biasa (bentuk vegetatif). Efektifitas
sterilisasi tergantung pada jumlah dan jenis
mikroorganisme, jumlah dan jenis kontaminasi oleh zat
lain, serta ada tidaknya tempat-tempat perlindungan
4
mikroorganisme pada alat (misalnya pada alat yang
bergerigi)
Prinsipnya proses sterilisasi mikroorganisme adalah
dengan cara pemanasan berulang kali hal ini
dimaksudkan untuk menumbuhkan spora
mikroorganisme kemudian memanaskannya kembali
agar spora mikroorganisme tersebut mati. Adapun
tahapan yang mesti dilakukan pertama yakni media
yang telah siap disterilisasi harus dibuka sedikit
tutupnya (jika menggunakan wadah tutup berulir) atau
harus dilubangi plastiknya supaya tekanan yang
dihasilkan autoklaf dapat masuk ke dalam media
kemudian memanaskannya hingga 100°C dengan
tujuan agar bakteri yang ada mati. Langkah selanjutnya
adalah didinginkan sehingga suhu turun berkisar antara
30°C hingga 40°C dengan tujuan memberi kesempatan
agar supaya spora mikroorganisme tumbuh menjadi
mikroorganisme lagi selama 24 jam. Tahap kedua
adalah sama dengan tahap pertama yakni memanaskan
hingga 100°C dengan tujuan agar mikroorganisme baru
mati. Andaikata masih ada sisa spora dari
mikroorganisme, maka suhu didinginkan lagi seperti
tahap pertama sampai semua mikroorganisme dan
spora mikroorganisme hilang atau mati.
Autoclave dipanaskan, ventilasi dibuka untuk
membiarkan udara kelaur, uap air masuk dari bagian
atas dan uadara keluar dari bagian bawah yang dapat
ditunjukan pada gelembung yang keluar dari ujung
pipa karet dalam air. Setelah udara bersih, bahan yang
akan disterilkan dimasukan sebelum air mendidih,
tutup dan kunci autoclave, ventilasi ditutup dan suhu
serta tekanan akan naik sesuai dengan yang
dikehendaki.
4. Kesimpulan
Berdasarkan dari hasil pengamatan pada praktikum
mikrobiologi dapat disimpulkan bahwa:
1. Proses yang menghancurkan semua bentuk
kehidupan disebut sterilisasi. Suatu benda
yang steril, dipandang dari sudut mikrobiologi
artinya bebas dari mikroba atau
mikroorganisme hidup. Suatu benda atau
substansi hanya dapat steril atau tidak steril,
tidak akan pernah mungkin setengah steril
atau hampir steril. Sterilisasi yaitu proses
mematikan semua mikroorganisme dengan
pemanasan, dengan tujuan membebaskan
bahan dari semua mikroba perusak.
2. Pada prinsipnya, kita melakukan tiga metode,
yaitu ada menggunakan metode panas (heat
sterilization), filtrasi dan bahan kimia. Teknik
sterilisasi yang umum digunakan adalah
metode sterilisasi menggunakan uap air panas
 bertekanan atau menggunakan prinsip kerja
autoclave.
3. Setiap alat dan pada sterilisasi ini memiliki
fungsi yang baik dan teknik penggunaan yang
berbeda.
4. Autoclave dipanaskan, ventilasi dibuka untuk
membiarkan udara kelaur, uap air masuk dari
bagian atas dan uadara keluar dari bagian
bawah yang dapat ditunjukan pada gelembung
yang keluar dari ujung pipa karet dalam air.
Setelah udara bersih, bahan yang akan
disterilkan dimasukan sebelum air mendidih,
tutup dan kunci autoclave, ventilasi ditutup
dan suhu serta tekanan akan naik sesuai
dengan yang dikehendaki. Atur klep
pengaman supaya tekanan stabil.

DAFTAR ACUAN

[1]. Rizal M.S., E. Sumaryati, & Suprihana. 2016.

Pengaruh Waktu Dan Suhu Sterilisasi Terhadap
Susu sapi rasa coklat, J. Ilmu-ilmu Pertnian (10),
PT Indolakto, Purwosari.

[2]. Adji D., Zuliyanty & H. Larashanty . 2007.

Perbandingan Efektifitas Sterilisasi Alkohol
70% Inframerah,Otoklaf dan Ozon Terhadap
Pertumbuhan Bakteri Bacillus Subtillis, J. Sain
25(1), Universitas gdjah mada, Yogyakarta.

[3]. Nurhikmat A., B. Suratmo, N. Bintoro, &

Suharwadji. 2016. Pengaruh Suhu Dan Wktu
Sterilisasi Terhadap Nilai F Dan Kondisi Fisik
Kaleng Pada Pengalengan Daging, J. Agritech
36(1), Universitas Gadjah mada, Yogyakarta.

[4]. Ardiansyah R., supriyanto, A.S. Wulandari, B.

Subandy, & Y. Fitriani. 2014. Teknik Sterilisasi
Explan Dan Induksi Tunas Dalam
Mikropropagasi Tembesu (fagraea fragrans
ROXB), J. Silvikultur Tropika 5(3).
IPB, Bandung.

[5]. Cahyani V.R. 2009. Pengaruh Beberapa Metode

Sterilisasi Tanah Terhadap Status Hara, Populasi
Mikrobiota, Potensi Infeksi Mikrorisa Dan
Pertumbuhan Tanaman, J. Ilmu tanah,
Universitas Sebelas Maret, Surakarta.