UNIVERSITAS PADJADJARAN

FAKULTAS PERTANIAN
LABORATORIUM PEMULIAAN TANAMAN DAN TEKNOLOGI
BENIH
INSTRUKSI KERJA
Isolasi RNA MenggunakanTrizol
No. Dokumen Tanggal Berlaku Revisi Halaman
IK-LPPTB-011 0 1 dari 2

1. Tujuan
Menyediakan pedoman dalam melakukan isolasi RNA
2. Ruang Lingkup
Instruksi kerja ini berlaku di lingkungan Laboratorium Pemuliaan Tanaman dan
Teknologi Benih Departemen Budidaya Tanaman, Fakultas Pertanian,
Universitas Padjadjaran.

3. Pelaksana
Instruksi kerja ini dilaksanakan oleh mahasiswa, peneliti, dan pengelola
laboratorium.

4. Definisi
Isolasi RNA adalah suatu cara untuk memurnikan RNA pada suatu sampel.
5. Langkah kerja
.
Bahan : Alat :
Nitrogen Mortar
Chloroform Cawan porslein
Isopropanol Spatula with spoon
75% Ethanol Sentrifuge
SDS 0.5 % Vortex
waterbath

Tahap Awal
 Menimbang sampel sebanyak 50-100 mg
 Menyiapkan tube ukuran 1.5 ml, memasukkan 1 mL TRIzol
 UNIVERSITAS PADJADJARAN
FAKULTAS PERTANIAN
LABORATORIUM PEMULIAAN TANAMAN DAN TEKNOLOGI
BENIH
INSTRUKSI KERJA
Isolasi RNA MenggunakanTrizol
No. Dokumen Tanggal Berlaku Revisi Halaman
IK-LPPTB-011 0 2 dari 2

 Memasukkan 50-100 mg sampel kedalam tube yang berisi larutan trizol

kocoklah supaya tercampur
 sentrifuge pada 12.000 rpm selama 10 menit dengan suhu 4 0 C.
 Mengambil supernatan (Larutan bening bagian atas) lalu memindahkan ke tube
yang baru.
Pemisahan Larutan
 Menambahkan 0.2 ml chloroform kemudian kocok tube selama 15 detik.
 lalu inkubasikan dalam suhu ruangan selama 2-3 menit.
 Mensentrifuge pada 12.000 rpm selama 15 menit pada suhu 40 C chloroform
 Mengambil bagian bening (aqueous Phase).setelah tube di sentrifugasi.
 Cara mengambil larutan bening adalah dengan memiringkan tube 45 derajat
untuk menghindari bagian yang terambil selain aqueous Phase.
 Memindahkan larutan bening yang tadi diambil ke tube yang baru.
Prosedur isolasi RNA.
Presipitasi RNA
 Menambahkan 0.5 ml 100% isopropanol kemudian inkubasikan pada suhu
ruangan selama 10 menit.
 Mensentrifugasi pada 12.000 rpm selama 10 menit pada suhu 4 0 C.
Ket: RNA hasil sentrifugasi akan terlihat seperti butir gel biasanya terletak pada
sisi dan bagian bawah tube.
Pencucian RNA.
 Membuang hasil sentrifugasi tadi, bila tidak terdapat pellet seperti gel, jangan
membuang semua larutan tersebut.
 Menambahkan ethanol 75 % sebanyak 1 mL
Ket : Pada pase ini RNA bisa disimpan selama setahun pada suhu -200 C dan
selama seminggu pada suhu 40 C.
 Memvortex tube tersebut kemudian mensentrifuge pada 7500 rpm selama 5
menit pada suhu 40 C.
 Membuang larutan hasil sentrifuge tadi. Jangan buang semua larutan
dikhawatirkan RNA ikut terbuang juga.
 UNIVERSITAS PADJADJARAN
FAKULTAS PERTANIAN
LABORATORIUM PEMULIAAN TANAMAN DAN TEKNOLOGI
BENIH
INSTRUKSI KERJA
Isolasi RNA MenggunakanTrizol
No. Dokumen Tanggal Berlaku Revisi Halaman
IK-LPPTB-011 0 3 dari 2

 Mengering anginkan pellet RNA selama 5-10 menit.

Ket: jangan biarkan RNA terlalu kering

6. Pengesahan

Dibuat oleh: Diperiksa

Pranata Laboratorium Pendidikan Kepala Laboratorium

Iman Lukmanul Hakim, SP Ir. Dedi Ruswandi.M.Sc.Ph.D

NRP.199105272016083001 NIP. 196811291993031001