Judul Jurnal : Bioethanol Production From Pineapple Wastes

Abstrak :

Ada minat yang besar dalam memproduksi bioethanol dari biomass dan ada
banyak tekanan dalam mengeksploitasi sumber lignoselulosa, dari limbah tanaman
hingga tanamah yang kaya akan energi. Namun, beberapa aliran limbah mengandung
gula selulosa dan non-selulosa. Ini termasuk limbah dari pengolahan buah nanas.
Limbah buah nanas yang diproduksi dalam skala besar dari seluruh dunia oleh industri
perkalengan. Limbah tersebut kaya akan gula intraselular dan dinding sell tanaman
yang terdiri dari selulosa, zat pektik, dan hemiselulosa. Tujuan dari penelitian ini adalah
untuk menyelidiki potensi untuk mengubah residu menjadi etanol setelah sakarifikasi
enzimatik dari dinding sel tanaman, dan fermentasi gula sederhana dengan
menggunakan turunan Saccharomyces cerevisiae NCYC 2826. Tiga metode fermentasi
yang berbeda, fermentasi langsung, hidrolisis dan fermentasi terpisah, dan sakarifikasi
dan fermentasi simultan dari biomassa diuji dan dibandingkan. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa gula utama yang didapat dari limbah buah nanas adalah : glukosa,
asam uronat, xilosa, galaktosa, arabinose, dan manosa. Hasil etanol tertinggi dicapai
setelah 30 jam sakarifikasi dan fermentasi simultan, dan mencapai sampai 3,9% (v/v),
sesuai dengan 96% dari hasil teoritis.

Introduction :

Karena penipisan pasokan energy dunia yang cepat, ada minat global yang
tinggi pada sumber energi alternatif (Lin & Tanaka, 2006). Etanol dari biomassa dapat
memberikan alternatif yang berkelanjutan, meskipun terbatas untuk minyak untuk
mengurangi masalah energi global yang terkait dengan pengurangan bahan bakar fosil
dan emisi gas rumah kaca (Farrell et al., 2006). Saat ini, etanol yang diturunkan dari
biomassa diproduksi pada skala industri dari sukrosa dan pati; namun, ini menimbulkan
kekhawatiran tentang potensi persaingan dengan pasokan makanan dan pakan (Hahn-
Hägerdal, Galbe, Gorwa-Grauslund, Lidén, & Zacchi, 2006; Field, Campbell, & Lobell,
2008). Selain itu, konversi hutan dan padang rumput menjadi lahan pertanian baru
untuk memasok permintaan biomassa yang meningkat juga bermasalah karena
perubahan penggunaan lahan tersebut meningkatkan emisi gas rumah kaca (Farrell et
al., 2006; Searchinger et al., 2008). Oleh karena itu, alternatif lain seperti produksi pada
ladang bera dan tanaman rumput untuk menghasilkan biofuel baru-baru ini menarik
perhatian. Secara khusus, bahan lignoselulosa seperti limbah pertanian dianggap
sebagai sumber potensial utama biomassa untuk produksi bioetanol "generasi kedua"
(Galbe & Zacchi, 2007; Merino & Cherry, 2007; Sakai et al., 2007; Hu, Heitmann , &
Rojas, 2008; Goh, Tan, Lee, & Bhatia 2010).
 Limbah nanas (PW) terdiri dari pemangkasan buah yang diproduksi dalam
jumlah besar oleh industri pengalengan di seluruh dunia (FAO, 2009). Kosta Rika
adalah salah satu produsen dan eksportir utama, dengan sekitar 110.000 hektar nanas.
Sekitar 25% dari nanas segar yang dipanen di Kosta Rika diproses untuk membuat
produk bernilai lebih seperti jus pekat, jeli dan nanas kalengan. Hampir 75% dari buah
yang diproses dalam pengalengan menghasilkan kulit yang dikupas, inti, ujung
mahkota, dll., Yang tidak digunakan dan umumnya dibuang sebagai limbah. Kandungan
bahan kering dalam limbah nanas sekitar 10%, dan terdiri dari sekitar 96% organik dan
4% bahan anorganik (Abdullah, 2007). Bahan-bahan ini menunjukkan nilai permintaan
oksigen biokimia (BOD biochemical oxygen demand) dan permintaan oksigen kimia
(COD chemical oxygen demand) yang tinggi (Ban-Koffi & Han, 1990), dan menimbulkan
masalah polusi serius jika tidak dibuang dengan benar.

Di masa lalu, limbah nanas digunakan sebagai sumber untuk ekstraksi bromelin,
produksi anggur dan cuka, budidaya ragi untuk protein makanan atau pakan, atau juga
untuk produksi asam organic. Jumlah gula yang tinggi dan jumlah lignoselulosa yang
ditemukan dalam limbah nanas memberikan sumber fermentasi dan non-fermentasi
yang berpotensi bernilai dan menarik. Lignoselulosa terdiri dari dua kelas utama
struktur polisakarida, yaitu selulosa dan hemiselulosa. Jika dihidrolisis, mereka dapat
menyediakan sumber gula yang dapat difermentasi (masing-masing glukosa dan
xilosa). Polisakarida bersifat padat di dinding sel tanaman dan sering dikelilingi oleh
lignin, membentuk struktur yang sangat tahan terhadap serangan enzimatik langsung.
Fraksi selulosa dan hemiselulosa dari residu agroindustri dapat didepolimerisasi
menjadi gula yang dapat difermentasi sehingga masing-masing menghasilkan heksosa
(glukosa dan manosa) dan pentosa (xilosa dan arabinosa), baik dengan hidrolisis
enzimatik atau kimia (Sun & Cheng, 2002; Mosier et al., 2005 ; Himmel et al., 2007).

Hidrolisis enzimatik dianggap sebagai pendekatan yang paling menjanjikan untuk

membebaskan gula yang dapat difermentasi dengan cara yang hemat energi dari
karbohidrat yang ditemukan dalam lignoselulosa untuk menghasilkan etanol. Gula yang
dilepaskan oleh enzim kemudian dapat difermentasi menjadi etanol oleh ragi. Ada
beberapa pendekatan fermentasi yang dapat dipertimbangkan. Hidrolisis dan
fermentasi enzimatik berurutan digambarkan sebagai hidrolisis dan fermentasi terpisah
(SHF, separate hydrolysis and fermentation), sedangkan ketika dua langkah dilakukan
secara bersamaan, proses ini disebut sakarifikasi dan fermentasi simultan (SSF,
simultaneous saccharification and fermentation). SSF memiliki keuntungan mencegah
penumpukan produk hidrolisis seperti selobiosa dan glukosa, yang dapat mengurangi
laju hidrolisis substrat lebih lanjut. Namun, itu harus dilakukan pada suhu yang sesuai
dengan organisme fermentasi. Dalam kasus ragi, suhu umumnya di bawah 40 ºC, yang
di bawah suhu optimal untuk hidrolisis enzimatik (50 ºC) (Takagi, Abe, Suzuki, Emert, &
Yata, 1977; Tengborg, Galbe, & Zacchi, 2001) . Fermentasi juga tampaknya
mengurangi penghambatan enzim yang mungkin dengan mengubah beberapa
senyawa beracun yang ada dalam hidrolisat (Tengborg et al., 2001). Mekanisme ini
meningkatkan produktivitas secara keseluruhan, konsentrasi dan juga hasil etanol akhir
(Wright, Wyman, & Grohmann, 1988; Philippidis, Smith, & Wyman, 1993; Soderstrom,
Galbe, & Zacchi, 2005).

Dalam penelitian ini, ada tiga proses yang berbeda digunakan untuk
mendapatkan bioetanol dari limbah nanas adalah fermentasi langsung (DF, direct
fermentation) diikuti dengan penambahan enzim untuk memverifikasi kapasitas ragi dari
fermentasi substrat yang tidak diolah; pemisahan hidrolisis dan fermentasi (SHF,
separate hydrolysis and fermentation) dalam reaktor yang sama; dan sakarifikasi dan
fermentasi simultan (SSF, simultaneous saccharification and fermentation).

Materials and Methods :

1. Substrat :

Nanas diperoleh dari pasar lokal di Norwich, Inggris. Untuk tujuan analitis, nanas
dibagi menjadi empat bagian: mahkota (bagian atas), kulit, pulpa dan inti (bagian
dalam). Dalam penelitian ini hanya kulit dan inti yang digunakan untuk tes
fermentasi.

2. Yeats (Ragi) :

Saccharomyces cerevisiae NCYC 2826 disediakan oleh National Collection of Yeast

Cultures, sebuah Kemampuan Nasional yang didukung BBSRC yang berbasis di
Institute of Food Research, Norwich Strain dipertahankan pada media agar ragi
(ekstrak ragi 3 g/L, ekstrak malt 3 g/L , pepton 5 g/L, glukosa 10 g/L) pada 4 ºC.
Untuk melaksanakan tes, S. cerevisiae ditanam semalaman pada 30 ºC pada rotary
shaker (INNOVA 44, Inkubator Shaker Series, New Brunswick Scientific) pada 200
rpm, dalam tabung yang berisi media ragi 20 ml.

3. Experimental Set-up :

Tes fermentasi dilakukan dalam fermentor batch 2,5 L (LH Fermentation 2000
Series). Fermentor ini dilengkapi dengan satu turbin rushton empat bilah, dan sistem
kontrol umum: suhu, pH, detektor CO2 dan meter aliran massa gas.

Limbah nanas, terdiri dari kulit buah dan inti, yang dihomogenisasi dalam blender
buah. Homogenat yang dihasilkan, dengan kandungan bahan kering 14% (b/b),
diencerkan dengan air menjadi bahan kering 9%, dalam volume kerja 1,5 L dan
diperlakukan pada 100ºC selama 10 menit di bawah pencampuran kontinyu untuk
menonaktifkan enzim endogen dan mengurangi pembusukan mikroba. Tidak ada
prosedur sterilisasi lanjut yang diadopsi.
Tiga proses berbeda digunakan untuk mendapatkan bioetanol: fermentasi langsung
(DF) dari biomassa campuran diikuti oleh penambahan enzim; hidrolisis dan
fermentasi terpisah (SHF); sakarifikasi dan fermentasi simultan (SSF).

 DF (dari biomassa campuran) : dengan kandungan bahan kering 9,2%, 20 ml

inokulum S. cerevisiae (107 sel per ml) ditambahkan ke medium. Pengujian
dilakukan pada 30ºC dengan pencampuran kontinyu pada 200 rpm. pH
sebelumnya disesuaikan dari 3,8 hingga 4,5 menggunakan 2 M NaOH.
Setelah 12 jam medium tersebut ditambahi dengan 20 μl/g bahan kering
DepolTM 740L dan 250 μl/g bahan kering dari enzim Accellerase® 1500,
untuk mempertahankan parameter fermentasi yang sama.
 SHF : sakarifikasi 8,5% biomassa bahan kering, dilakukan menggunakan
enzim pendegradasi dinding sel yang sama selama 2 jam pada 50ºC dan pH
5, ditambah dengan NaOH 2M, dengan pengadukan konstan pada 500 rpm.
Setelah 6 jam, substrat yang dicerna didinginkan hingga 30 ºC dan
pengadukan menurun hingga 200 rpm. pH pada 4,5 tidak diperbaiki lebih
lanjut dengan penambahan alkali. Fermentasi dimulai dengan penambahan
20 ml inokulum S. cerevisiae, seperti sebelumnya.
 SSF : menambahkan enzim dan kultur ragi pada substrat. Parameter
fermentasi adalah 30ºC, pH 4,5, disesuaikan seperti di atas, dan pengadukan
konstan pada 200 rpm. Bahan kering biomassa awal adalah 9%..

Evolusi CO2 diukur selama semua uji fermentasi menggunakan ADC Infra Red CO2
Analyzer dan duplikat sampel kaldu ditarik dari bejana reaksi menggunakan jarum
suntik 20 ml: sampel untuk analisis etanol segera dibekukan pada -18 ºC sampai
analisis; sedangkan sampel untuk penentuan kelembaban, gula larut dan tidak larut
dipanaskan pada 100 oC selama 6 menit untuk menonaktifkan enzim dan kemudian
dibekukan pada -18 ºC sampai dianalisis. Semua fermentasi dilakukan sampai tidak
ada lagi fluktuasi CO2 yang diamati. pH tidak dikontrol oleh penambahan alkali
selama fermentasi.

4. Bahan kimia

Bahan kimia disediakan oleh Sigma Aldrich, kecuali untuk asam galakturonat dan
glukosa yang disediakan oleh Fluka Biokimia dan gliserol yang disediakan oleh
Fisher Scientific.

Campuran enzim yang tersedia secara komersial DepolTM 740 L (esterase asam
ferulat), disediakan oleh Biocatalysts Ltd., Cefn Coed, Wales, U.K dan Accellerase®
1500 (endoglukanase), yang disediakan oleh Genencore. Keduanya ditambahkan
ke media dengan dosis yang disarankan. Aktivitas yang dideklarasikan masing-
masing adalah 36 U/g dan 2200-2800 CMC U/g.
(1CMC U = unit aktivitas membebaskan 1 μmol gula pereduksi, dinyatakan sebagai
setara glukosa per menit pada 50 º C dan pH 4,8).

5. Alcohol-Insoluble Residues (AIR) Preparation

AIR dibuat dari pulp dan residu sebelum dianalisis untuk gula dinding sel. Sampel
limbah nanas fermentasi basah, setelah pencairan, dihomogenisasi selama 1 menit
dengan kecepatan maksimal dalam Janke & Kunnel, Ika-Werk Ultra-Turrax
homogenizer pada suhu kamar. 30 ml dari masing-masing sampel kemudian
dituangkan ke dalam etanol mendidih, untuk mendapatkan campuran akhir dengan
konsentrasi EtOH 85% (v/v), dengan mempertimbangkan kadar air sampel. 50 ml
70% EtOH untuk dicuci dan mengumpulkan partikel sampel dari penghomogen
digunakan. Residu yang tidak larut tinggal setelah perawatan ini diolah dengan
penyaringan vakum melalui filter nilon 5μm NYBOLT menggunakan corong Buchner.
Setelah 2 ekstraksi berurutan selanjutnya dalam mendidihkan etanol 85% (v/v),
residu diekstraksi dalam etanol absolut mendidih (300 mL selama 5 menit),
kemudian dicuci dengan etanol absolut dingin (150 mL). Filtrat terakhir dikeringkan
oleh Büchi Rotary Evaporator pada 40 ºC, diperoleh kembali dalam air dan diuji
untuk sisa gula yang larut. Residu yang tidak larut dicuci dengan 2 volume aseton
dan setelah dihilangkan dengan penyedotan, dikeringkan sampai berat konstan
pada 40°C (Waldron & Selvendran, 1990; Mandalari et al., 2005).

6. Penentuan Kelembaban

Bobot kering dari limbah nanas segar dan sampel fermentasi, dihitung sebagai
bobot stabil setelah 2 jam pada 110°C menggunakan Mettler PM 200 yang
dilengkapi dengan keseimbangan IR Mettler LP16 IR.

7. Penentuan Gula

Gula dilepaskan dari sampel AIR oleh Hidrolisis Saeman dengan dispersi sampel
dalam 72% H2SO4 selama 3 jam pada suhu kamar diikuti oleh hidrolisis dalam 1 M
H2SO4 selama 1 jam pada 100ºC.

Hidrolisat diderivatisasi sebagai asetat alditolnya dan dianalisis dengan GC

menggunakan Perkin-Elmer Autosystem XL (Perkin Elmer, Seer Green, UK),
dilengkapi dengan deteksi ionisasi nyala dan RTX-225.

Analisis fraksi supernatan mengikuti protokol yang sama, tetapi dimulai dari
hidrolisis dalam 1 M H2SO4.

Total kandungan asam uronat dalam gula hidrolisat ditentukan secara

spektrofotometri menggunakan asam glukuronat sebagai standar mengikuti metode
Blumenkrantz dan Asboe-Hansen (1973), dimodifikasi oleh Rae et al. (1985).
 Semua sampel dianalisis dalam rangkap tiga.

8. Penentuan Etanol

Etanol dikuantifikasi oleh HPLC.

Sampel supernatan 500 µl dari limbah nanas yang difermentasi disentrifugasi

selama 10 menit pada 500 rpm dan 20ºC dalam plat sumur dalam 96 menggunakan
Eppendorf Centrifuge 5810 R, kemudian disaring melalui AcroPrepTM 0,2 µm GHP
Membran 96 Well Filter Plates ke dalam sumur 96 deep well piring koleksi selama
10 menit lebih lanjut dengan kecepatan yang sama.

Setelah pelat sentrifugasi ditutup oleh tutup karet dan dimuat langsung ke instrumen
Seri 200 LC (Perkin Elmer, Seer Green, UK) yang dilengkapi dengan detektor
indeks bias. Analisis dilakukan menggunakan kolom Aminex HPX-87P (Bio-Rad
Laboratories Ltd, Hemel Hempstead, UK) dengan kolom pelindung yang beroperasi
pada 65°C dengan air ultra murni dengan laju alir 0,6 mL/min sebagai fase gerak.

9. Perhitungan

Hasil teoritis (TY) dalam penelitian ini dihitung sebagai hasil etanol maks dalam
kaitannya dengan bahan kering: 0,511 g alkohol per 1,0 g bahan kering.

Result (Hasil) :

3.1 Fermentasi Langsung dari Biomassa Campuran yang Diikuti oleh Penambahan
Enzim (DF).

Awalnya, produksi etanol oleh S. cerevisiae NCYC 2826 menggunakan biomassa

campuran yang tidak diolah, dengan kandungan bahan kering 9,2%, diselidiki oleh
kultur batch dalam mode DF seperti yang dijelaskan dalam bagian 3. Tabel 1
menunjukkan komposisi serat limbah pada awal fermentasi, sebelum penambahan
enzim dan pada akhir proses. Seperti yang ditunjukkan pada Table 1, pada awal
fermentasi glukosa dan xilosa yang mana adalah monosakarida netral paling berlimpah
residu limbah nanas yang tidak larut dalam alkohol, diikuti oleh Asam Galaktosa,
Arabinosa, Galaktosa, dan Manosa, dengan proporsi Rhanosa dan Fukosa yang lebih
kecil. Gula utama dalam fraksi terlarut pada Gambar 1 adalah Glukosa dan Manosa;
hanya sejumlah kecil Asam Galaktosa dan Galaktosa yang terdeteksi.
Tabel 1. Komposisi monosakarida dari dinding sel limbah nanas. Komposisi serat pada
waktu 0, setelah 12 jam dan pada akhir proses, untuk Fermentasi Langsung (DF),
Hidrolisis dan Fermentasi Terpisah (SHF) dan Sakarifikasi dan Fermentasi Bersamaan
(SSF)

Hasil ditampilkan sebagai nilai rata-rata (M, mean) dan standar deviasi (SD); residu (%)
= proporsi biomassa yang dipulihkan sebagai residu tidak larut alkohol (AIR).

Tabel 2. Bahan kering (% FWt), serat dan gula larut (% bahan kering), hasil EtOH, hasil
teoritis (TY) dan pH untuk DF), SHF, dan SSF.
Gambar 1. Gula larut dalam ekstrak yang larut dalam alkohol dari kaldu fermentasi
nanas pada waktu 0, setelah 12 dan pada akhir proses, untuk Fermentasi Langsung
(DF), Hidrolisis dan Fermentasi Terpisah (SHF) dan Sakarifikasi dan Fermentasi
Bersamaan (SSF).

*Disajikan sebagai μg / mg gula anhidrat dalam sampel asli. GalA, hitam; Glu, putih;
Gal, abu-abu gelap; Man, abu-abu muda; Xyl, putih dengan garis hitam; Ara, abu-abu.
Gambar 2. %Serat (persegi), %gula larut (segitiga) yang dihitung pada bahan kering
awal, dan %EtOH (berlian) dalam limbah nanas yang difermentasi oleh Saccharomyces
cerevisiae NCYC 2826 selama: a) fermentasi langsung (DF), b) sakarifikasi awal dan
fermentasi berturut-turut dari limbah campuran (SHF) dan c) sakarifikasi dan fermentasi
simultan (SSF)
Gambar 2a menunjukkan perjalanan waktu produksi etanol dan penurunan kadar gula
yang larut dan terikat serat. Pemanfaatan gula oleh ragi pada fase awal kultur relatif
lambat dan produksi etanol sangat rendah. Sampel yang dikumpulkan sebelum
penambahan enzim, setelah 12 jam fermentasi, menunjukkan konsentrasi etanol
0,07%, dengan konsentrasi gula yang tidak larut sedikit dipengaruhi oleh pertumbuhan
ragi, sedangkan di antara gula larut, penurunan glukosa 9% diamati. Penambahan
enzim pendegradasi dinding sel ke substrat setelah 12 jam menyebabkan penurunan
konsentrasi gula yang cepat, diikuti oleh peningkatan yang sesuai dalam produksi
etanol. %residu AIR menurun dari 3,9 menjadi 1,7 dan jumlah total gula dinding sel
menurun dari 657,1 μg / mg menjadi 528,6 μg / mg. Glukosa dan Manosa dalam fraksi
gula terlarut menurun masing-masing sebesar 63,7% dan 5,3%, sementara Xylose dan
Arabinose, Galactose dan Galacturomic Acid meningkat mencerminkan pelepasan
mereka dari dinding sel, dan ketidakmampuan ragi untuk memfermentasi mereka.
Produksi etanol mencapai 3,4% dalam waktu 24 jam penambahan enzim, mencapai
86% dari TY (Tabel 2). Konsentrasi etanol ini tetap stabil sampai fermentasi selesai. PH
fermentasi turun dari 4,5 menjadi 3,4 pada akhir proses.

3.2 Hidrolisis Terpisah dan Fermentasi Limbah Campuran (SHF)

Hasil mengenai %bahan kering, serat dan gula terlarut untuk proses SHF dilaporkan
pada Tabel 2.

Bahan kering awal dari bahan adalah 8,5%. Gambar 2b menunjukkan produksi etanol
dan pemanfaatan gula oleh S. cerevisiae selama mode SHF, dijelaskan dalam bagian
2.3. Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas enzim pada awal proses
menghasilkan penurunan fraksi tidak larut dan peningkatan bersamaan dalam gula
larut. Komposisi monosakarida awal untuk fraksi yang tidak larut dan larut sebanding
dengan yang ditemukan untuk mode DF (bagian 3.1), masing-masing mewakili 25%
dan 48,6% dari bahan kering awal. Sesuai dengan pengamatan ini, sakarifikasi
enzimatik sebelum inokulasi ragi menyebabkan residu AIR menurun dari 3,2% menjadi
1,4%, menghasilkan 15% kehilangan serat dan 11% gula larut meningkat. % Serat
menurun menjadi 10,17%, diikuti oleh gula larut meningkat hingga 59,26%, sebelum
penambahan ragi. Seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1, pada 12 jam hasil AIR telah
menurun lebih dari 50%, dan gula yang tidak larut yang tersisa telah menurun dari
660,1 μg / mg menjadi 581,1 μg / mg, karena pelarutan Ara, Xyl, Man Gal Glu dan Gal
A ; di sisi lain gula larut menunjukkan penurunan Glc dan Man masing-masing 31% dan
8%, mungkin karena fermentasi, dan peningkatan Xyl, Ara, Gal A dan Gal dari hidrolisis
serat (Gambar 1). Pada penyelesaian fermentasi, residu AIR adalah 0,7% dan
konsentrasi gula tidak larut total adalah 565,6 μg / mg. Kandungan bahan kering akhir
adalah 2,6% dan serat dan gula larut% turun masing-masing menjadi 5,36 dan 6,2. EY
tertinggi mencapai 3,7%, mencapai 89% dari TY (Tabel 2). PH yang direkam pada akhir
proses adalah 3,3.
3.3 Sakarifikasi dan Fermentasi Serentak (SSF)

Secara simultan serat awal dan gula larut masing-masing adalah 23,9% dan 42,2%.
Komposisi gula sebanding dengan yang di atas yang dilaporkan untuk mode DF di
bagian 3.1 (Tabel 1). Seperti yang ditunjukkan pada Gambar 2c, sakarifikasi dimulai
pada t = 0: gula larut meningkat mencapai konsentrasi tertinggi setelah 6 jam, pada
51,54%. Pada saat ini, ragi berfermentasi dengan baik dan setelah titik ini gula yang
larut turun dengan cepat sementara alkohol mulai meningkat hingga ketinggian 4%.
Dengan 21 jam produksi etanol, serta pemanfaatan substrat oleh ragi, berhenti karena
dapat diamati dari gula stabil dan% alkohol. Tabel 1 menunjukkan komposisi
monosakarida dalam sampel SSF di awal, setelah fermentasi 12 jam dan pada akhir
proses. Pada Gambar 1 komposisi gula terlarut dilaporkan. Pada akhir fermentasi,
konsentrasi Glc dan Man sangat rendah dibandingkan dengan kadar Xyl, Ara dan Gal
A, seperti yang diamati sebelumnya juga untuk proses DF dan SHF. Gula serat dan
larut menurun selama proses dari masing-masing 23,9% menjadi 3,4% dan 42,2%
menjadi 7,5%. EY tertinggi mencapai 3,9%, mencapai 96% dari TY (Tabel 2). Pada
akhir fermentasi, pH turun dari 4,5 menjadi 3,3.

DISCUSSION

Sejumlah besar bahan kaya karbohidrat yang dibuang di pabrik pengalengan nanas
membuat limbah ini menjadi sumber yang menarik untuk produksi etanol. Menurut
Abdullah dan Mat (2008) dan Huang et al. (2011), gula utama, dihitung berdasarkan
biomassa kering awal, adalah glukosa dan xilosa, diikuti oleh asam uronat, arabinosa,
galaktosa dan manosa, dengan jumlah rhamnosa dan fosa yang lebih kecil,
mengungkapkan bahwa limbah nanas terutama terdiri dari selulosa, zat pektik dan
hemiselulosa. Kehadiran berbagai zat polimer di dinding sel membenarkan perlunya
pra-perawatan pada limbah ini. DF memunculkan EY sebesar 0,07%, karena
pemanfaatan glukosa yang larut oleh ragi. Setelah penambahan enzim ke medium,
serat mulai dicerna dan hasil etanol naik menjadi 3,4%, sesuai dengan 86% dari TY.

Pengujian yang dilakukan di SHF dan SSF menghasilkan 3,7% dan 3,9% dari EY,
masing-masing sesuai dengan 89% dan 96% dari TY, dihitung berdasarkan bahan
kering.

Meskipun EY yang diperoleh nampaknya agak rendah, karena tentu saja dengan kadar
gula yang rendah, ini bisa menarik karena TY, yang dihitung berdasarkan kehilangan
bahan kering, berada dalam kisaran sekitar 90-96%, menjadikan limbah ini bahan baku
yang sangat baik untuk produksi etanol oleh S. cerevisiae NCYC 2826, dibandingkan
dengan penelitian sebelumnya tentang jus atau nanas busuk (Ban-Koffi & Han 1990;
Nigam, 1999a; Nigam, 2000; Hossain & Fazliny, 2010).
Tes pendahuluan yang dilaporkan dalam makalah ini menunjukkan pentingnya
pretreatment enzimatik limbah nanas untuk meningkatkan kadar gula tumbuk untuk
fermentasi alkohol. Harus ditunjukkan bahwa SHF dan SSF menunjukkan tren yang
sama, baik pada sakarifikasi serat dan pemanfaatan gula oleh S. cerevisiae. Ini berarti
bahwa aktivitas enzim tidak terpengaruh oleh parameter fermentasi yang digunakan.
Faktanya, sakarifikasi sebelumnya yang digunakan dalam mode SHF, pada 50 ºC, pH 5
dan 500 rpm, tidak diikuti oleh degradasi dinding sel yang lebih tinggi dibandingkan
dengan mode SSF, di mana enzim dan ragi ditambahkan bersama-sama ke substrat
pada 30 ºC, pH 4,5 dan 200 rpm. Ini memfasilitasi pengaturan proses fermentasi
berdasarkan penambahan simultan kultur ragi dan enzim, untuk mengurangi waktu
proses dan total biaya. Sebenarnya produksi etanol di SSF dimulai 3 jam sebelum itu di
SHF. Karenanya, SSF mungkin merupakan mode fermentasi yang paling nyaman dan
cocok digunakan dalam penelitian ini.

Semua sampel bahan yang dicerna ditandai oleh peningkatan xilosa, arabinosa,
galaktosa, asam galakturonat dan glukosa yang larut. Ini tentu saja disebabkan oleh
sakarifikasi enzimatik dari dinding sel nanas. Aktivitas Accellerase® 1500 mungkin
ditingkatkan oleh DepolTM 740L karena, sesuai dengan literatur, dinding sel nanas
ditandai dengan asam ferulic, diesterifikasi menjadi glucuronoarabinoxylans (Smith &
Harris, 1995; Smith & Harris, 2001). Pelepasan enzimatik jumlah xilosa dan arabinosa
yang signifikan pada penggunaan kultur campuran dan ragi rekombinan, atau dalam
pengembangan strain kuat yang secara simultan akan memfermentasi gula heksosa
dan pentosa untuk produksi etanol. Ini akan diharapkan untuk meningkatkan
konsentrasi etanol akhir dan produktivitas, karena sejumlah besar gula pentosa
dibiarkan tidak digunakan dalam media fermentasi hidrolisat.

Semua fermentasi yang dilakukan dalam penelitian ini ditandai dengan hilangnya bahan
kering sekitar 70%. Ini berarti bahwa 30% dari media tetap tidak digunakan. Ini bisa
disebabkan oleh penurunan pH selama periode fermentasi. Bahkan nilai-nilai pH
tampaknya stabil di kisaran 3.3-3.5. Penurunan pH yang signifikan mungkin disebabkan
oleh produksi katabolit ragi dan pelepasan asam D-galakturonat dari pektin, memiliki
nilai pKa 3,51 (Filippov, Shkolenko & Kohn, 1978). Penurunan pH yang diamati dapat
menyebabkan penurunan aktivitas enzimatik dan menghentikan sakarifikasi serat. Tes
lebih lanjut, dilakukan dengan kontrol pH yang ketat selama proses, dapat
meningkatkan pemanfaatan bahan kering dan akibatnya produksi etanol.

Selain itu, peningkatan EY juga dapat dicapai baik dengan mengembangkan metode
pra-perawatan yang lebih efisien (mekanik dan / atau enzimatik) dan dengan
melengkapi substrat dengan sumber nitrogen yang berbeda untuk mengurangi fase
jeda dan meningkatkan biomassa ragi.

ACKNOWLEDGMENTS
Penulis mengakui “Dipartimento di Scienze dell'Ambiente, della Sicurezza, del
Territorio, degli Alimenti e della Salute”, Universitas Messina (I) dan Institut Penelitian
Pangan Norwich (Inggris) (Program Strategis Lembaga Grant BB / J004545 / 1 dari
BBSRC) untuk dukungan.