Determination of thiamphenicol, florfenicol and florfenicol amine residues in

poultry meat and pork via ASE-UPLC-FLD

Fauziah
1908203010005

A. Accelerated Solvent Extraction

Solvent extracted adalah suatu metode yang digunakan untuk mengekstraksi minyak
dengan bantuan pelarut organik (Anggorodi, 1985) teknik pemisahannya menyangkut distribusi
suatu zat terlarut (solut) diantara dua fasa cair yang tidak saling bercampur. Cara ini akan
mengakibatkan bahwa beberapa konstituen akan pindah dari pelarut pertama ke pelarut kedua.
Metode solvent extracted telah banyak digunakan untuk melepaskan lemak/minyak kacang
kedelai, minyak kelapa dan sebagian besar biji-bijian. Solvent process dapat dijadikan sebagai
metode alternatif untuk mengekstraksi minyak disamping menggunakan metode mechanical
extracted.
Proses ekstraksi lemak menggunakan metode solvent extracted pada prinsipnya memiliki
kesamaan dengan teknik penentuan lemak kasar. Perbedaannya, pada metode ini pada umumnya
dilakukan pada skala yang lebih besar. Pelarut yang digunakan juga umumnya tidak menggunakan
eter, melainkan menggunakan heksana.
Penggunaan pelarut heksana memiliki kelebihan dan kekurangan. Salah satu kekurangan dari
pelarut heksana yaitu menimbulkan efek negatif berupa penyakit dan pencemaran udara. Pelarut
heksana merupakan materi yang mudah terbakar dan memiliki biodegradabilitas yang rendah. Oleh
karena itu diperlukan alternatif yang lebih aman. Etanol dan isopropil alkohol dapat digunakan
sebagai alternatif heksana, mengingat heksana merupakan materi yang sangat mudah terbakar dan
biodegradabilitasnya rendah, beresiko menimbulkan penyakit dan menyebabkan pencemaran
udara. Untuk menghasilkan ekstraksi lemak yang sempuma, sejumlah lemak harus ditambahkan.
Salah satu soklet extraction yang digunakan adalah Accelerated Solvent Extraction. Efisiensi
ekstraksi solven dapat ditingkatkan dengan melakukannya pada suhu dan tekanan tinggi.
Efektivitas solven untuk ekstraksi lemak dari sampel makanan meningkat dengan
peningkatan temperatur, namun tekanan juga harus ditingkatkan untuk menjaga solven
tetap dalam keadaan cair. Hal ini akan mengurangi jumlah pelarut yang dibutuhkan
sehingga menguntungan dari sisi lingkungan. Sudah tersedia instrumen untuk ekstraksi
lemak pada suhu dan tekanan tinggi. Pada jurnal ini Accelerated Solvent Extraction yang

1
digunakan di gabung dengan UPLC dan FLD. Sebuah metode ekstraksi pelarut
dipercepat ditambah dengan ultra-kinerja cair kromatografi fluorescence deteksi
(ASE-UPLC-FLD) untuk deteksi simultan tiamfenikol, florfenicol dan florfenicol
amina residu dalam daging unggas (otot ayam, otot bebek dan otot angsa) dan babi
dikembangkan dan opti-kap pola. Sampel diekstraksi dengan ASE menggunakan
etil asetat: amonia berair (98:2,V/V) sebagai ekstraktan dan dimurnikan dengan n-
heksana jenuh dengan etil asetat. Kemudian, sampel dianalisis dengan UPLC-FLD.
Sebelumnya ada penelitian yang dilakukan tentang metode untuk mendeteksi TAP,
FF dan FFA umumnya untuk pelarut air. Namun hanya terbatas pada mendeteksi
salas satu obat tidak bisa mengukur FF dan FFA oleh karena itu dikembangkan
dengan ASE-UPLC-FLD. metode analisis involving ultra-kinerja cair kromatografi
fluorescence detection (UPLC-FLD) untuk penentuan simultan dari TAP, FF dan
FFA yang dapat memberikan pemisahan yang cepat dari tiga phenicols dan
mencapai retensi yang memadai dari metabolit polar FFA. Metode yang diusulkan
dikombinasikan dengan akselerasi ekstraksi pelarut (ASE) prosedur untuk analisis
senyawa ini dalam daging unggas dan babi.

2
3
4
 Matrix Analyte Linearity range (μg/kg) Linear regression Determination coefficient (R2) LOD LOQ
equation (μg/kg) (μg/kg)

Chicken muscle TAP 8.5-250.0 y = 1405.9x – 68.602 0.9998 3.0 8.5

FF 10.2-400.0 y = 927.42x + 475.42 0.9997 3.6 10.2
FFA 3.5-400.0 y = 4220.7x + 181.6 0.9992 1.4 3.5
Duck muscle TAP 9.0-250.0 y = 1120.5x – 76.758 0.9997 3.3 9.0
FF 11.4-400.0 y = 705.98x + 224.67 0.9995 4.2 11.4
FFA 3.3-400.0 y = 3789.9x – 71.703 0.9994 1.3 3.3
Goose muscle TAP 8.8-250.0 y = 1353.9x + 32.74 0.9998 3.1 8.8
FF 10.6-400.0 y = 818.24x – 351.29 0.9998 3.8 10.6
FFA 3.0-400.0 y = 4687.2x – 374.53 0.9996 1.0 3.0
Pork TAP 9.4-250.0 y = 653.38x + 10.81 0.9993 3.5 9.4
FF 9.8-400.0 y = 842.44x – 302.95 0.9992 3.3 9.8
FFA 3.2-400.0 y = 3101.8x + 183.26 0.9999 1.2 3.2

Matrix Analyte Spiking level (μg/kg) Recovery (%) RSD (%) Intraday RSD (%) Interday RSD (%)

Chicken muscle TAP 8.5 84.81 ± 3.02 3.56 4.81 5.33

25 89.82 ± 2.97 3.31 3.59 4.04
50α 91.35 ± 2.75 3.01 3.80 3.40
100 93.15 ± 3.92 4.21 5.03 5.79
FF 10.2 83.34 ± 1.90 2.28 2.81 3.22
50 93.91 ± 2.45 2.61 3.86 3.95
100α 97.05 ± 2.01 2.07 3.51 4.37
200 96.31 ± 2.83 2.94 3.75 4.31
FFA 3.5 82.93 ± 3.17 3.82 4.54 5.08
50 93.22 ± 3.91 4.20 5.46 5.31
100.0α 96.47 ± 2.36 2.44 3.70 4.55
200 98.35 ± 4.13 4.20 5.54 6.08
Duck muscle TAP 9.0 80.80 ± 2.02 2.50 2.94 3.29
25 90.76 ± 2.77 3.06 3.95 4.29
50α 95.83 ± 3.03 3.16 4.03 4.57
100 94.20 ± 2.34 2.48 3.47 4.03
FF 11.4 83.88 ± 3.57 4.26 4.79 5.23
50 93.58 ± 3.63 3.88 4.18 4.89
100α 96.56 ± 2.81 2.91 3.92 4.43
200 94.70 ± 3.20 3.38 3.98 3.83
FFA 3.3 83.89 ± 2.88 3.43 4.04 4.26
50 94.93 ± 3.52 3.70 3.58 3.87
100.0α 96.16 ± 2.26 2.35 3.21 3.88
200 97.38 ± 2.46 2.53 2.97 3.31
Goose muscle TAP 8.8 82.13 ± 2.15 2.62 3.39 4.17
25 94.50 ± 2.69 2.85 3.41 3.70
50α 93.22 ± 3.03 3.25 2.59 4.40
100 96.74 ± 2.97 3.07 3.45 4.01
FF 10.6 83.00 ± 2.05 2.48 3.04 3.48
50 93.90 ± 3.04 3.24 2.60 4.81
100α 96.00 ± 3.12 3.25 3.62 3.93
200 96.94 ± 3.00 3.09 4.60 5.09
FFA 3.0 85.65 ± 2.75 3.21 4.34 4.71
50 94.40 ± 1.87 1.98 2.37 2.92
100.0α 96.76 ± 2.55 2.64 3.79 4.66
200 95.02 ± 1.98 2.08 3.27 3.56
Pork TAP 9.4 83.83 ± 2.72 3.25 4.07 4.68
25 93.84 ± 2.82 3.01 3.29 3.49
50α 95.29 ± 2.88 3.02 4.25 5.10
100 94.22 ± 2.66 2.82 2.35 2.88
FF 9.8 83.31 ± 1.46 1.76 2.22 2.42
100 92.92 ± 2.77 2.99 3.37 4.08
200α 94.97 ± 2.73 2.88 3.36 3.42
400 94.09 ± 1.99 2.11 2.82 3.00
FFA 3.2 84.87 ± 2.37 2.79 3.75 4.44
100 94.89 ± 3.19 3.36 3.05 3.73
200.0α 95.45 ± 2.56 2.69 4.36 4.45
400 94.63 ± 2.04 2.16 2.47 2.78

Note: α, maximum residue limits.

5
 Banyak metode untuk mendeteksi residu TAP, FF dan FFA telah dilaporkan.
Penelitian ini terutama membandingkan efek dari dua metode sampel pra-perawatan dan
metode deteksi pada waktu tes yang dihasilkan, tingkat pemulihan, LOD dan LOQ. Hasil
dari metode yang berbeda ditunjukkan pada Tabel 4 untuk perbandingan. Hasil
menunjukkan bahwa pemulihan (80-120%) dari sampel dicapai dengan metode ekstraksi
yang berbeda dan reagen tidak berbeda secara signifikan. Namun, LOD dan LOQ berbeda
secara substansial karena detektor sampel yang digunakan berbeda dan sensitivitasnya
berbeda. Secara umum, detektor MS / MS memiliki sensitivitas yang lebih tinggi, dan LOD
dan LOQ sampel yang diperoleh lebih rendah untuk detektor ini; detektor, seperti UV dan
PDA, yang memiliki sensitivitas lebih rendah menghasilkan LOD dan LOQ yang lebih
tinggi. Dalam penelitian ini, metode pretreatment sampel otomatis, ASE, digunakan untuk
mengekstraksi target, dan sampel dianalisis dengan UPLC-FLD. Pemulihan target tinggi;
antara 80% dan 100%. Selain itu, dibandingkan dengan metode HPLC-FLD, target dapat
dideteksi dalam waktu 5 menit dengan menggunakan metode yang dikembangkan dalam
penelitian ini, yang sangat mempersingkat waktu deteksi dan meningkatkan efisiensi
deteksi relatif terhadap metode yang dilaporkan; dibandingkan dengan metode GC, metode
deteksi ini memungkinkan analisis sampel tanpa langkah derivatisasi yang rumit, dan
secara operasional lebih sederhana dan nyaman; dibandingkan dengan detektor MS,
detektor FLD tidak hanya memiliki sensitivitas yang lebih tinggi dan menghasilkan LOD
dan LOQ yang lebih rendah tetapi juga merupakan instrumen yang lebih murah, yang

6
memungkinkan persyaratan deteksi dipenuhi sekaligus mengurangi biaya deteksi. Oleh
karena itu, metode yang ditetapkan dalam penelitian ini cocok untuk mendeteksi residu
TAP, FF dan FFA dalam makanan hewani.
A. Kesimpulan.
Metode ASE-UPLC-FLD untuk ekstraksi dan deteksi simultan TAP, FF dan FFA
dari daging unggas dan babi dibuat dan dioptimalkan, dan tingkat pemulihan di atas 80,0%.
Metode ekstraksi mengurangi konsumsi pelarut ekstraksi, dan seluruh proses cepat, mudah
dan otomatis. Metode deteksi akurat untuk kuantisasi dan menawarkan tingkat
pengembalian yang tinggi dan sensitivitas yang baik. Metode deteksi baru ini dapat
digunakan untuk menentukan obat kloramfenikol.

Referensi :

Guotian Wang, dkk jurnal homepage: www.elsevier.com/locate/jfca