Sebuah sistem kromatografi fluida superkritis (SFC), model Agilent 1260 infinity II

(Wilmington, DE,USA), dan sistem kromatografi cair ultra-kinerja (UPLC), model Agilent 1290
Infinity II digunakan sebagai teknik pemisahan. Kedua sistem digabungkan ke Agilent Instrumen
QTOF (model 6550 Agilent), dilengkapi dengan sumber ESI semprotan corong ganda. Itu
Kolom UPLC terhubung langsung ke sumber ESI menggunakan tabung mengintip. Fase seluler
muncul dari kolom SFC dicampur dengan solusi make-up dan kemudian dibagi menjadi dua
aliran. Salah satunya terhubung ke back-flush pressure regulator (BPR), bertanggung jawab
untuk mempertahankan CO2 dalam kondisi superkritis, dan yang lainnya ke sumber ESI.
Biasanya, antarmuka ini disebut pra-BPR splitter [22]. Koneksi antara titik pemisahan dan
sumber ESI dibuat menggunakan tabung silika 500 mm (panjang) x 0,05 mm (yaitu) yang
disediakan oleh Agilent.

Supercritical fluid chromatography (SFC) adalah teknik laboratorium yang berkembang pesat
untuk pemisahan dan identifikasi senyawa dalam campuran. Peningkatan signifikan dalam
instrumentasi telah menghidupkan kembali minat pada SFC dalam beberapa tahun terakhir dan
meningkatkan posisinya di komunitas ilmiah. Banyak ilmuwan yang akrab dengan kromatografi
cair kolom dan kekuatan dan kelemahannya, tetapi kemungkinan yang dibawa ke meja oleh SFC
kurang dikenal dan kurang dihargai.
(Colin F. Poole, Supercritical Fluid Chromatography. Handbooks in separation sicence.
Elsevier, 2017. Chapter 8. Pages 229-238.)
Kromatografi fluida superkritis (SFC) melibatkan pemanfaatan gas seperti karbon dioksida pada
tekanan dan suhu tertentu sehingga menghasilkan superkritis cairan. Pengubah tertentu dapat
ditambahkan untuk meningkatkan pemisahan. Teknik ini memberikan keuntungan dari kedua
kromatografi gas, dalam hal detektor, dan HPLC, dalam hal peningkatan selektivitas melalui fase
seluler.
Diskusi terperinci tentang kromatografi kertas, kromatografi lapis tipis, kromatografi gas, dan
kromatografi cair tekanan tinggi
86 S. AHUJA
ditemukan dalam Bab 7-10. Bab 11 membahas kromatografi cairan superkritis
(SFC) serta sejumlah teknik pemisahan lainnya termasuk kapiler
electrophoresis (CE), dan itu menyediakan strategi untuk memilih pemisahan
metode.

Supercritical fluid chromatography (SFC) adalah teknik gas hibrid

chromatography (GC) dan HPLC yang menggabungkan beberapa fitur terbaik dari
kedua metode tersebut. Pada tahun 1985, beberapa produsen instrumen mulai menawarkan
peralatan yang dirancang khusus untuk SFC. Skema dari peralatan yang digunakan adalah
ditunjukkan pada Gambar 1. Pengembangan instrumen untuk SFC muncul dari apa
telah dikembangkan untuk GC dan HPLC. Pengiriman cairan superkritis
Sistem ini pada dasarnya adalah pompa yang dimodifikasi untuk kontrol tekanan, dan injeksi
sistem menggunakan katup putar mirip dengan yang digunakan dalam HPLC. Oven kolom
dan detektor ionisasi nyala mirip dengan yang digunakan dalam GC. Detektor digunakan
di HPLC juga dapat digunakan dengan modifikasi yang sesuai untuk tekanan yang lebih tinggi
operasi. Persyaratan penting dalam SFC adalah pembatas untuk pemeliharaan
kepadatan konstan dari fase gerak di sepanjang panjang kolom dan pemeliharaan
laju aliran melalui kolom. Sejumlah instrumen SFC komersial
tersedia hari ini

Dalam SFC fase gerak memiliki viskositas rendah dan difusi-diri yang tinggi koefisien. Ini
dicapai dengan memanfaatkan berbagai gas yang menghasilkan superkritis cairan dengan
kepadatan rendah pada suhu dan tekanan kritis.

karbon dioksida paling umum digunakan. Fase seluler dapat dimodifikasi lebih lanjut dengan
menambahkan pengubah kutub dalam jumlah kecil.

SFC telah menjadi penting sebagai teknik pemisahan karena memungkinkan pemisahan senyawa
yang tidak mudah dipisahkan oleh GC atau HPLC. Ini menawarkan sejumlah keunggulan dari
GC dan HPLC. 1. Kemampuan memprogram kepadatan atau tekanan memberikan keunikan
keuntungan dalam SFC dibandingkan GC dan HPLC karena memungkinkan kromatografer
untuk meningkatkan daya solven dari pelarut dengan meningkatkan
massa jenis.
2. Selektivitas fase seluler yang ditawarkan oleh HPLC masih dapat dipertimbangkan
bermain dengan menggunakan berbagai aditif.
3. Fase seluler dapat dengan mudah diuapkan dibandingkan dengan HPLC.
4. Keuntungan dibandingkan HPLC adalah bahwa detektor yang digunakan dalam GC dapat
digunakan dalam SFC. Kadang-kadang, kromatografi cairan subkritis (subFC) dapat digunakan
untuk keuntungan.
Gambar 2 menunjukkan pemisahan untuk oxazepam oleh HPLC dan subFC pada hal yang sama
CSP. Dapat dicatat bahwa waktu pemisahan lebih pendek oleh subFC, dan puncak
lebarnya lebih sempit dari pada dengan HPLC.

Pemisahan kiral menggunakan berbagai metode yang dicakup dalam buku ini. Itu
metode yang digunakan untuk pemisahan kiral termasuk dalam satu bagian di sini karena
mereka bergantung pada metodologi yang berkembang yang menyediakan selektivitas unik
untuk
Molekul yang memiliki struktur molekul sama tetapi stereomeriknya berbeda
konfigurasi, yang menghasilkan rotasi optik yang berbeda (dextro atau levo) untuk
enansiomer. Karena metode ini merangkul berbagai metodologi dan
diperlukan teknik untuk memberikan pemisahan optimal untuk molekul itu
memiliki sifat fisikokimia yang sama, diharapkan bahwa detail
diskusi yang diberikan di bawah ini akan membantu dengan apresiasi pemisahan yang lebih baik
metode. Teknik yang sering digunakan untuk pemisahan enansiomer dapat
secara luas diklasifikasikan ke dalam tujuh kategori berikut:

Thin-layer chromatography (TLC) . Gas chromatography (GC) . High-pressure liquid

chromatography (HPLC) . Supercritical fluid chromatography (SFC) . Capillary electrophoresis
(CE) . Enzymatic methods . Membrane separations
Seharusnya jelas bahwa tiga metode terakhir tidak didasarkan pada kromatografi, meskipun
kromatografi banyak digunakan dalam berbagai langkah pemisahan enzimatik. Diskusi berikut
terbatas pada pengantar singkat tentang
teknik-teknik ini dan bagaimana mereka paling baik digunakan untuk pemisahan enansiomer.

Seperti disebutkan sebelumnya, fase gerak dalam kromatografi fluida superkritis (SFC) memiliki
viskositas rendah dan koefisien difusi diri yang tinggi. Ini tercapai dengan memanfaatkan gas
seperti karbon dioksida, yang pada tekanan kritis dan suhu kritis membuat cairan superkritis
dengan kepadatan rendah. Kepadatan karbon dioksida pada 72,9 atm dan 31,3 C adalah 0,47 g /
l. Fase seluler juga dapat disesuaikan dengan penambahan sejumlah kecil pengubah kutub. Oleh
karena itu, SFC menawarkan keunggulan GC dan HPLC dalam hal fase gerak mudah diuapkan
dan detektor yang digunakan dalam GC bisa dimanfaatkan; selektivitas fase seluler HPLC masih
dapat digunakan dengan bekerja dengan berbagai aditif. Kapasitas untuk memprogram kepadatan
atau tekanan adalah unik untuk SFC karena memungkinkan memperbesar daya solven pelarut
dengan meningkatkan kepadatan. Gambar 14 menggambarkan pemisahan skala preparatif untuk
warfarin pada Whelk-O 1 kolom.27 Fase gerak terdiri dari mengandung karbon dioksida 25%
isopropanol dan asam asetat 0,5% dengan deteksi UV pada 260 nm.

Contoh yang mengesankan dari kekuatan pemisahan komparatif dari GC, SFC, HPLC, dan CEC
dijelaskan di bawah ini untuk pemisahan enansiomer hexobarbital oleh Schurig dan rekan
kerja.40 Dapat diingat bahwa enansiomer memiliki hal yang sama struktur kimia, massa kimia,
dan sifat fisikokimia; mereka berhubungan satu sama lain sebagai objek dengan gambar
cerminnya. Pemisahan enansiomer dievaluasi pada kapiler Chiral-Dexcolumn (85 cm 0,05 mm
diameter dalam dengan ketebalan film 0,15 mm). Hasilnya ditunjukkan pada Gambar 20.
Sebagai hasil dari koefisien difusi yang berbeda dalam gas dan cairan, waktu analisis dan
efisiensi optimal dalam kapiler HPLC dalam kolom tubular terbuka dan KTK lebih panjang
dengan empat kali lipat dibandingkan dengan GC. Namun, ketinggian pelat minimum, kecepatan
optimal, dan total waktu analisis bergantung pada faktor retensi. Faktor retensi besar di GC,
menengah di SFC, dan sangat kecil dalam HPLC dan CEC untuk enansiomer pertama yang
dielusi.

Pengamatan berikut ini menarik berdasarkan pemisahan ini: . untuk CEC dan HPLC> SFC>
GC . RS untuk CEC> HPLC> GC> SFC . N (dari puncak pertama) untuk CEC> HPLC ¼ GC>
SFC Perlu dicatat bahwa KTK adalah metode paling lambat karena berkurangnya aliran
elektroosmotik di kapiler yang dilapisi. Evaluasi serupa harus dilakukan sebelum pemilihan,
optimasi, dan validasi metode pemisahan apa pun