FAT

(FLUORESCENT ANTIBODY TEST)

 KELOMPOK 14
A. SUCI RAMADHANI PO714203171001
ASTIKA INAYAT ASKAR PO714203171010
ZAKIA RAHMATIKA PO714203171044
MAGHFIRAH ZULHIJJAH PO714203161014
AYU GUSTI PO714203202005
 Pembahasan
01 02 03
Pengertian Jenis Pemeriksaan Alat dan Bahan
FAT FAT FAT
(Fluorescent Antibody Test) (Fluorescent Antibody Test) (Flourescent Antibody Test)

04 05
Cara Pemeriksaan Review Jurnal
FAT FAT
(Fluorescent Antibody Test) (Fluorescent Antibody Test)
 Pengertian
Imunoflourescent adalah metode
Flourescent Antibody Test
imunologi untuk mendeteksi antibodi
(FAT) merupakan uji gold
dari berbagai kelas imunoglobulin
standard untuk diagnose
dalam serum, cairan ludah, cairan otak
rabies dan parasit. FAT ini
dengan cara mereaksikan antibodi dan
juga adalah alat diagnostik
antigen spesifik dan antibodi yang
di mana pewarna
dilabel dengan Flourescent
flourescent ditambahkan ke
Isothiocyanat (FITC), sehingga
jaringan yang mengandung
terpancar sinar warna hijau. Tetapi
antigen. Hasilnya
dalam perkembangan sekarang
menyebabkan wilayah yang
imunoflourescent banyak digunakan
ditargetkan bersinar dengan
dalam penelitian untuk mendeteksi
sinar ultraviolet bila dilihat
antigen atau antibodi dalam mukosa
dengan mikroskop
usus, mukosa mulut, dalam jaringan,
fluorescent.
urine dan cairan mata.
 Jenis Pemeriksaan

Direct Indirecet
Fluorescent Fluorescent
Antibody Test Antibody Test
 Alat dan Bahan
Alat Bahan
1. Serum sampel
1. Obyek Glass
2. Antigen dari sel kultur atau
2. Deck Glass
antigen dari jaringan
3. Pinset
3. Aseton
4. Gelas Inkubator
4. Aquades
5. Kotak Inkubator
5. Phospat Buffer Saline (PBS) pH
6. Inkubator 37C
7,2
7. Laminar air flow (LAF)
6. Conjunggate (anti serum yang
8. Mikroskop Fluorescen
dilabel/diikat dengan
Fluorochrom/Fluorescent
Isothiocyanate/FITC)
 Cara Pemeriksaan
Contoh Pada Rabies

Pengujian dengan teknik FAT dilakukan dengan membuat preparat apus

otak yang difiksasi dengan aseton pada suhu -20 derajat celcius selama 30
menit. Setelah dikeringkan pada suhu ruang, preparat apus digenangi
dengan Conjugate rabies-anti nucleocapsid. Inkubasi dilakukan dalam
inkubator suhu 37 derajat celcius dengan memberi kelembaban
secukupnya. Setelah 30 menit, preparat dicuci dengan larutan PBS pH 7,2
sebanyak 3 kali dilanjutkan dengan menambahkan aquos mounting media
dan ditutup dengan cover slip. Selanjutnya pemeriksaan dilakukan di
bawah mikroskop flourescen, dan sel-sel neuron yang terinfeksi virus
rabies akan ditandai dengan adanya warna hijau (apple green) yang
berpendar (OIE, 2008).
Review Jurnal
01 Evaluasi Teknik Antibodi Fluorescen untuk Diagnosis Rabies dari
Sampel yang Membusuk

02 Penggunaan Metode Enzim Linked Immunosorbent

Assay (ELISA) dan Direct Fluoresent Antibody (DFA)
untuk Diagnosis Giardia intestinalis

Perbandingan Real-Time PCR Kultur

03 Bakteriologis dan Tes Antibodi Fluoresen
untuk Deteksi Leptospira borgpetersenii
dalam Urine Sapi yang Terinfeksi Secara
Alami
 Jurnal 1
Judul Evaluasi Teknik Antibodi Fluoresen untuk Diagnosis Rabies dari Sampel
yang Membusuk

Penulis Tessy D.L., Arun G., Julie B., Sabore P.I , Rayne J., Sunanda C. dan Prejit
N.

Kata Kunci Rabies, Teknik Antibodi Fluoresen, Pembusukan, Diagnosis.

Tahun 2018

Volume dan Halaman Volume 06 dan Halaman 01-04

Tanggal 14 September 2018

Lanjutan
Abstrak Seringkali, sampel untuk diagnosis rabies dikirimkan ke laboratorium setelah berbagai
tingkat pembusukan. Batasan dalam hal logistik dan transportasi, jarak dan akses ke
laboratorium adalah hal biasa dalam alasan keterlambatan pengiriman sampel. Tes
positif dianggap sebagai infeksi rabies yang sebenarnya, tetapi hasil tes negatif tidak
dianggap dapat diandalkan. Penelitian ini dirancang dengan tujuan untuk mempelajari
stabilitas antigen virus rabies dalam penguraian sampel otak anjing untuk diagnosis
berdasarkan FAT. Saat sampel otak positif rabies yang terjadi pembusukan selama
penyimpanan di laboratorium pada suhu kamar menjadi sasaran FAT, tujuh dari
delapan sampel positif diuji memberikan hasil positif pada hari ke-8. Pada hari ke-16,
antigen virus rabies hanya dapat dideteksi dalam enam sampel. Semua enam sampel
negatif pada FAT. Pada hari ke-40 terjadi pembusukan. FAT bisa menjadi alat yang
andal, saat bangkai dikirim segar atau pada tahap awal pembusukan. Pembusukan
hingga satu minggu tidak akan mempengaruhi hasil tes ketika sampel otak dikenai
FAT untuk diagnosis rabies.
 Lanjutan
Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah untuk mempelajari stabilitas antigen virus rabies dalam
penguraian sampel otak anjing untuk diagnosis berdasarkan FAT.

Population Sample/Problem Studi evaluasi FAT untuk diagnosis rabies dari sampel otak yang membusuk dilakukan
selama bulan Juli 2015 hingga November 2015. Bangkai anjing yang diterima di Institut
Negara untuk Penyakit Hewan di Palode di Thiruvananthapuram distrik untuk diagnosis
post-mortem digunakan untuk penelitian ini. Sampel otak yang dinyatakan positif virus
rabies digunakan untuk studi eksperimental ini. Delapan sampel anjing segar dibawa ke
laboratorium dan dinyatakan positif rabies pada FAT dipilih untuk penelitian ini. Satu
sampel negatif juga dimasukkan sebagai kontrol negatif. Porsi otak besar dikumpulkan
dari sampel dan disimpan pada suhu kamar yang berada dalam kisaran 25 °C hingga 32
°C. Sampel diuji oleh FAT pada hari ke-0 (hari presentasi di laboratorium), kemudian
pada hari ke-4. Teknik Antibodi Fluoresen dulu dilakukan dengan konjugat anti-
nukleokapsid rabies diproduksi oleh BIORAD, Prancis dan hasilnya adalah dinilai
berdasarkan skor evaluasi standar yang digunakan sebelumnya (Tepsumethanon et al.,
1997). Hasilnya menjadi sasaran analisis dengan prosedur statistic standar.
Metode Penelitian Menggunakan metode eksperimen
 Lanjutan
Pendahuluan Rabies adalah penyakit mengerikan yang menyerang zoonosis manusia dan hewan yang disebabkan oleh
virus RNA. Diagnosa penyakit ini sangat relevan untuk mengadopsi penting tindakan pencegahan untuk
bertahan hidup dalam kehidupan kontak terkena infeksi. Virus Rabies seharusnya sangat tidak stabil dan
pengiriman sampel segar ke laboratorium dianggap penting untuk diagnosis yang tepat. Tetapi antigen virus
dapat dideteksi dalam pembusukan bangkai terinfeksi yang disimpan dalam rantai dingin. Tes standar emas
untuk diagnosis rabies adalah Fluorescent Antibody Test (FAT) (Meslin et al., 1996; OIE manual, 2012).
Oleh karena itu, dalam penelitian ini, keandalan FAT untuk diagnosis rabies dari sampel yang telah mengalami
beberapa derajat pembusukan dievaluasi. India sangat endemik untuk rabies dan kesehatan masyarakat serta
signifikansi ekonomi penyakit tersebut sangat relevan (Alakes et al., 2014; Sajna dan Roshni, 2014).
Penting untuk menyerahkan bangkai yang dicurigai di bawah 'rantai dingin' ke laboratorium diagnostik untuk
mendapatkan diagnosis yang andal. Namun, hal ini tidak selalu memungkinkan karena kendala logistik dan
transportasi. Jadi, bangkai dapat diterima di laboratorium diagnostik dalam berbagai tahap pembusukan.
Padahal seharusnya virus rabies menjadi sangat tidak stabil, antigen virus dapat dideteksi pada bangkai yang
terinfeksi disimpan dalam rantai dingin. Namun, ada variasi yang signifikan dalam temuan para sarjana yang
berbeda sehubungan dengan durasi penelitian dan hewan yang digunakan untuk penelitian juga berbeda
(Beltrán et al., 2014; Rojas et al., 2006; Lewis dan Thacker, 1974) .
 Lanjutan
Hasil Penelitian Studi tersebut mempresentasikan bahwa, delapan sampel yang menjalani uji antibodi fluoresen, pertama atau hari ke-0, tujuh
sampel positif dengan skor evaluasi 3+ dan sampel sisanya memberikan skor 2+. Pada hari ke-4, semua sampel tetap positif
kecuali pada sampel 2. Pada hari ke-8, derajat kepositifan tetap sama pada 2 sampel dan menurun 1 skor pada 5 sampel.
Satu sampel yang pada awalnya memberikan skor 2+ memberikan hasil negatif. Pada hari ke 12, skor tetap sama seperti
pada hari ke-8 dalam tiga sampel dan menurun satu skor di semua 4 sampel positif lainnya. Sampel yang memberikan hasil
negatif pada hari ke-8 juga diuji ulang dan ditemukan negatif. Pada hari ke-16, skor tetap sama seperti pada hari ke-12 dalam
3 sampel, menurun 1 skor pada 2 sampel dan satu sampel memberikan hasil negatif. Menariknya, skor tersebut meningkat 2
dalam satu sampel.
Tes tidak dapat diulang karena jaringan yang tersedia tidak mencukupi pada beberapa sampel. Namun, pada pengulangan
tes dengan jaringan yang tersedia pada sampel lain, hasil positif dapat diperoleh dalam satu sampel bahkan pada hari ke-32.
Persentase positif tetap 100% hingga hari ke-4, menurun menjadi 87,5% dalam hari ke-12 dan hari ke-16 itu diturunkan
menjadi 75%. Satu sampel kontrol negatif, yang dimasukkan dalam penelitian, tetap negatif selama periode penelitian. Jadi,
dalam semua delapan kasus, ada penurunan umum dalam hal positif hasil tes yang ditunjukkan dengan penurunan bertahap
dalam nilai evaluasi dari hasil tes sebelumnya. Namun, terdapat beberapa pengecualian dimana skor tes memberikan
peningkatan positif dibandingkan hasil tes sebelumnya. Teknik Antibodi Fluoresen mendeteksi keenam kasus rabies dengan
akurasi persen pada hari ke-0 dan pada hari ke-4. Setelah itu pengujian dilakukan pada hari ke-8 pasca-pembusukan di mana
salah satu sampel otak berubah menjadi negatif.
Lanjutan

Kesimpulan Kesimpulan dalam penelitian ini adalah bahwa antigen

nukleokapsid virus rabies relatif stabil dalam sampel otak
yang membusuk untuk didiagnosis dengan FAT. Temuan
penelitian menunjukkan bahwa, FAT dapat digunakan
sebagai tes standar emas ketika sampel otak diterima segar
atau dalam beberapa hari pertama pembusukan. Bahkan
bangkai yang digali dapat dijadikan subjek pengambilan
sampel untuk diagnosis rabies oleh FAT yang dapat
memberikan hasil yang terdepan.
 Jurnal 2
Judul Penggunaan Metode Enzim Linked Immunosorbent Assay (ELISA) dan
Direct Fluorescent Antibody (DFA) untuk Diagnosis Giardia intestinalis

Penulis Funda Dogruman Al, Semra Kustimur, Tuncer Ozekinci, Neriman

Balaban, dan Mustafa Necmi Ilhan

Kata Kunci Giardia intestinalis, ELISA, Metode Antibodi Fluoresen Langsung

Tahun 2006

Volume dan Halaman Volume 30 dan Halaman 275-278

Tanggal 25 Desember 2006

 Lanjutan
Abstrak Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi nilai teknik direct fluorescent
antibody (DFA) yang dilaporkan memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi serta uji
enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) yang digunakan untuk menentukan antigen
dalam sampel tinja dalam diagnosis rutin Giardia intestinalis. Ketika 44 sampel feses di
mana kista G. intestinalis dan / atau trofozoit telah terlihat selama pemeriksaan Lugol asli
diselidiki, kepositifan terdeteksi dengan metode pewarnaan trikrom, metode ELISA dan
metode DFA monoklonal ditemukan menjadi 37 (84,0%), 39 (88,6%) dan 35 (79,5%)
masing-masing. DFA mendeteksi Crytosporidium parvum kista selain G. intestinalis dalam
satu sampel. 27 (61,4%) sampel positif dengan ketiga metode tersebut. Jika dibandingkan
dengan metode DFA, metode ELISA memiliki sensitivitas 88,6%, spesifisitas 88,8%, nilai
prediksi positif 79,5%, dan nilai prediksi negatif 20,0% sedangkan metode pewarnaan
trichrome memiliki sensitivitas 85,7%, spesifisitas 77,8%, nilai prediksi positif 81,1% dan
nilai prediksi negatif 22,2%. Tidak ada perbedaan yang signifikan secara statistik antara
tes DFA dan ELISA dan antara tes DFA dan metode pewarnaan trichrome untuk
mendiagnosis G. intestinalis (p> 0,05).
 Lanjutan
Tujuan Penelitian Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi nilai teknik direct fluorescent antibody (DFA) yang dilaporkan
memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi serta uji enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) yang
digunakan untuk menentukan antigen dalam sampel tinja dalam diagnosis rutin Giardia intestinalis.

Population Giardiasis terlihat di seluruh dunia dan pada semua kelompok umur meskipun lebih sering ditemukan pada anak-
Sample/Problem anak. Beberapa penelitian dari Turki pada waktu yang berbeda telah melaporkan kejadian faktor penyebab sebesar
1,9-37,7%. Infeksi asimtomatik atau diare akut dalam waktu yang singkat dapat terjadi. Sebagian besar kasus
mengeluhkan tinja lunak berminyak, perut kembung, gas, kram perut, dan nyeri tekan epigastrium. Perubahan
kualitas dan jumlah lendir di jejunum terlihat pada pasien yang terinfeksi G. intestinalis. Perubahan patologis
bersamaan yang disebabkan oleh parasit di mukosa usus menyebabkan gambaran klinis malabsorpsi. Pasien yang
diagnosisnya belum dibuat dan pengobatan yang tidak tepat diberikan menyebabkan menderita diare intermiten
dengan periode buang air besar normal selama berbulan-bulan. Kasus yang sembuh secara spontan terus
mengeluarkan kista dan menjadi sumber infeksi. Teknik diagnostik pertama yang digunakan adalah pemeriksaan
mikroskopis tetapi metode ini mungkin tidak memadai karena ekskresi bentuk kista parasit bersifat intermiten.
Enterotest, biopsi duodenum dan evaluasi sampel sikat merupakan metode invasif dan sulit digunakan, terutama
pada anak-anak.

Metode Penelitian Menggunakan metode analisis perbandingan

 Lanjutan
Pendahuluan Diagnosis Giardia intestinalis (G.intestinalis) pada orang yang terinfeksi dilakukan
dengan mengamati kista atau trofozoit. Secara mikroskopis pada tinja atau cairan
duodenum atau dengan pemeriksaan sampel usus kecil dan biopsi. Metode
tradisional seperti itu membutuhkan banyak tenaga dan staf berpengalaman.
Metode ini juga menyebabkan hasil yang salah pada 10-50% kasus ketika sampel
tinja tunggal diperiksa karena kista dapat dikeluarkan dalam tinja dan jumlah kista
dalam tinja rendah. Ketika infeksi diketahui ada, tidak mungkin untuk mendeteksi
parasit pada 20-50% kasus bahkan ketika metode konsentrasi digunakan selain
metode pemeriksaan tinja rutin. Ini telah mengarah pada pengembangan metode
yang cepat dan andal untuk diagnosis giardiasis. Metode ELISA di mana antibodi
monoklonal yang dimurnikan digunakan untuk mendeteksi G. intestinalis antigen
kista dalam tinja (sensitivitas 88-99%, spesifisitas 100%) dan antibodi fluoresen
langsung (DFA) di mana antibodi monoklonal fluoresen mengikat khusus pada G.
intestinalis kista digunakan (sensitivitas 100%, spesifisitas 100%) adalah tes yang
telah digunakan baru-baru ini untuk diagnosis.
 Lanjutan
Hasil Penelitian Dari 44 sampel feses yang diduga terdapat G. intestinalis kista atau trofozoit pada
pemeriksaan lugol native, 37 (84%) positif dengan metode pewarnaan Trichrome,
39 (88,6%) dengan metode ELISA monoklonal dan 35 (79,5%) dengan tes DFA
monoklona. DFA menunjukkan Crytosporidium parvum kista bersama dengan G.
intestinalis dalam satu sampel. Hanya 27 (61,4%) sampel positif pada ketiga
metode. Jika dibandingkan dengan metode DFA dimana fluorescent monoclonal
antibodies mengikat khusus pada G. intestinalis kista maka metode ELISA
mempunyai sensitivitas 88,6%, spesifisitas 88,8%, nilai prediksi positif 79,5% dan
nilai prediksi negatif 20% sedangkan metode pewarnaan Trichrome memiliki
sensitivitas 85,7%, spesifisitas 77,8%, nilai prediksi positif 81,1% dan nilai prediksi
negatif 22,2%. Tidak ada perbedaan yang signifikan secara statistik antara tes
DFA dan ELISA dan antara tes DFA dan metode pewarnaan Trichrome untuk
mendiagnosis G. intestinalis (p>0,05)
 Lanjutan
Pembahasan Metode ELISA dan DFA telah digunakan untuk diagnosis giardiasis. Di berbagai studi di Turki telah melaporkan 136 (96,4%) dari 141 sampel
feses mereka telah mendeteksi kista G. intestinalis dan / atau trofozoit dengan mikroskop langsung sebagai positif dengan metode ELISA. Metode
ELISA memiliki sensitivitas 96,4% dan spesifisitas 80,8% pada penelitian ini. Ada perbedaan yang signifikan secara statistik antara kedua metode
tersebut. Gödekmerdan et al. telah menemukan G.intestinalis kista dan / atau trofozoit pada 20% sampel tinja dari 260 pasien dengan berbagai
keluhan gastrointestinal melalui mikroskop langsung. Mereka mencari G.intestinalis antigen dengan metode ELISA pada sampel tersebut dan
menemukan antigen pada 25,4%. Metode ELISA memiliki sensitivitas 100% dan spesifisitas 93% tetapi tidak ada perbedaan yang signifikan
secara statistik antara kedua metode tersebut. Yılbaz dkk. telah melaporkan sensitivitas 92,5% dan spesifisitas 97,7% untuk metode ELISA
sedangkan tingkat yang sama masing-masing adalah 98% dan 92% dalam studi oleh (Değerli dan Özçelik).
Di antara studi asing, Schunk et al. menemukan 22 dari 276 sampel feses positif dengan metode ELISA dan ditemukan kista parasit / trofozoit
pada 21 sampel dengan pemeriksaan mikroskopis. Mengambil pemeriksaan mikroskopis sebagai metode referensi, mereka melaporkan
sensitivitas 100% dan spesifisitas 99,6% untuk metode ELISA. Aldeen dkk. mengevaluasi sembilan yang diperoleh dari pasien yang diduga
menderita giardiasis dan melaporkan sensitivitas 88,6-100% dan spesifisitas 99,3-100%.
Hanya ada sedikit penelitian Turki tentang penggunaan metode DFA untuk mendiagnosis giardiasis. Taylan Özkan dkk. telah mendeteksi
G.intestinalis kista dan trofozoit pada 11% dari 272 sampel pasien yang diduga menderita G.intestinalis dengan metode DFA dan pada 9%
dengan metode pewarnaan Trichrome.
Di antara penelitian asing, Alles et al. telah menemukan kista parasit / trofozoit pada 4,4% dari 2696 sampel tinja oleh DFA dan pada 2,9%
dengan pemeriksaan mikroskopis rutin dan telah melaporkan sensitivitas tes masing-masing 99,2% dan 66,4% dan spesifisitas 100% untuk kedua
tes. Mereka menyatakan bahwa ada perbedaan yang signifikan secara statistik untuk diagnosis antara DFA dan pemeriksaan mikroskopis.
Garcia dan Shimizu telah menggunakan berbagai kit ELISA dan DFA komersial dan melaporkan sensitivitas metode ELISA dalam diagnosis
giardiasis sebesar 94-100% dan spesifisitas 100% sedangkan kedua angka tersebut 100% untuk DFA.
Lanjutan

Kesimpulan Kesimpulan dalam penelitian ini, 44 sampel tinja di

mana Giardia intestinalis kista dan / atau trofozoit
dicurigai dengan pemeriksaan lugol asli diperiksa,
metode pewarnaan Trichrome, metode ELISA
monoklonal dan DFA monoklonal (dilaporkan memiliki
sensitivitas tinggi dan metode spesifisitas) ditemukan 37
( 84%), 39 (88.6%) dan 35 (79.5%) sebagai positif
masing-masing.
Jurnal 3

Judul Perbandingan Real-Time PCR, Kultur Bakteriologis dan Tes

Antibodi Fluoresen untuk Deteksi Leptospira borgpetersenii dalam
Urine Sapi yang Terinfeksi Secara Alami

Penulis Jarlath E.Nally, Ahmed AA Ahmed, Ellie J. Putz, Debra E.

Palmquist dan Marga GA Goris

Kata Kunci Penyakit ternak; Leptospira; leptospirosis; urine

Tahun 2020

Volume dan Halaman Volume 7, 66 dan Halaman 1-6

Tanggal 15 Mei 2020

 Lanjutan
Abstrak Sapi rentan terhadap infeksi multi serovar leptospira patogen, mengakibatkan abortus, lahir
mati, lahir prematur, gagal reproduksi dan sindrom penurunan susu. Sapi juga berperan
sebagai inang reservoir L. borgpetersenii serovar Hardjo yang diekskresikan dari ginjal
tubulus melalui urin ke lingkungan di mana ia bertahan dalam kondisi lembab yang sesuai
dengan yang sebelumnya. Ini menunjukkan bahwa 7% sampel urin dari sapi potong positif L.
borgpetersenii serovar Hardjo dengan kultur dan / atau uji antibodi fluoresen (FAT). Dalam
studi ini, uji real-time PCR (rtPCR) diterapkan untuk menentukan kinerja relatif deteksi
berbasis rtPCR L. borgpetersenii serovar Hardjo dibandingkan dengan teknik kultur dan FAT
yang dilaporkan sebelumnya. Dari 42 sampel urin sapi yang positif leptospira melalui kultur
dan / atau FAT, 60% (25/42) positif oleh rtPCR. Dari 22 sampel kultur-positif, 91% (20/22)
adalah rtPCR-positif. Dari 32 positif FAT sampel, 50% (16/32) positif rtPCR. Untuk 10 sampel
yang kultur-positif tetapi FAT-negatif, 90% (9/10) adalah rtPCR-positif. Untuk 20 sampel yang
FAT-positif tetapi budaya-negatif, 25% (5/20) adalah rtPCR-positif. Secara kolektif, hasil ini
menunjukkan bahwa tidak ada uji tunggal yang optimal, dan penggunaan lebih dari satu uji
untuk mendeteksi leptospira dalam urin dari sapi yang terinfeksi secara alami
direkomendasikan.
 Lanjutan
Tujuan Penelitian Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui Perbandingan Real-Time PCR, Kultur Bakteriologis dan
Tes Antibodi Fluoresen untuk Deteksi Leptospira borgpetersenii dalam Urine Sapi yang Terinfeksi
Secara Alami
Population Patogen Leptospira menjajah tubulus ginjal dari inang reservoir infeksi, termasuk spesies hewan
Sample/Problem domestik dan liar, dari mana mereka diekskresikan melalui urin ke lingkungan dan bertahan dalam
kondisi lembab yang sesuai. Kontak dengan sumber lingkungan yang terkontaminasi, atau langsung
dengan urin dari hewan yang terinfeksi, dapat mengakibatkan infeksi akut pada inang insidental,
karena patogen Leptospira dapat menembus permukaan mukosa atau kerusakan kulit. Lebih dari 1 juta
kasus penyakit manusia diperkirakan terjadi setiap tahun, dengan hampir 60.000 kematian.
Pasien hewan dan manusia yang menderita akut leptospirosis dapat terus mengeluarkan leptospira
dalam urin meskipun gejala klinisnya sudah sembuh. Pada hewan peliharaan, kerugian ekonomi
terbesar timbul dari infeksi kronis, menyebabkan reproduksi pemborosan. Penularan penyakit dari
semua patogen Leptospira dipertahankan oleh reservoir asimtomatik inang dimana terdapat
keseimbangan biologis yang unik antara inang hewan dan serovar spesifik Leptospira, dan seperti
yang dicontohkan oleh Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo pada sapi di populasi seluruh dunia.

Metode Penelitian Menggunakan metode eksperimen

 Lanjutan
Pendahuluan Leptospirosis adalah penyakit zoonosis global. Leptospirosis merupakan penyebab morbiditas dan mortalitas yang signifikan pada hewan peliharaan, termasuk sapi,
anjing, domba, babi dan kuda, yang dapat menjadi insidental dan reservoir inang, tergantung pada spesies dan serovar Leptospira yang terlibat. Gejala klinis berkisar dari
demam ringan hingga penyakit ikterik yang lebih parah dan perdarahan paru masif, yang mencerminkan sistemik penyebaran dari serovar yang berbeda ke seluruh inang.
Leptospirosis sapi dapat menyebabkan aborsi, lahir mati, kelahiran prematur, kegagalan reproduksi dan sindrom penurunan susu. Sapi rentan terhadap infeksi beberapa
Leptospira spesies dan serovar termasuk L. borgpetersenii serovar Hardjo, L. interrogans serovar Pomona, L. kirschneri serovar Grippotyphosa dan L. noguchii. Namun,
serovar paling menonjol yang terkait dengan sapi adalah Hardjo, yang menyebabkan kegagalan reproduksi. Pada sapi seropositif untuk Hardjo, rata-rata waktu dari
beranak hingga konsepsi (132,6 hari) secara signifikan lebih lama dari pada waktu untuk sapi seronegatif (95,4 hari). Sapi yang seropositif terhadap serovar Hardjo dua
kali lebih mungkin gagal untuk hamil dari pada sapi yang seronegatif. Studi seroprevalensi menunjukkan bahwa hingga 49% ternak terkena patogen serovar. Hewan
seronegatif juga dapat mengeluarkan Leptospira.
Tes definitif untuk mengidentifikasi sapi yang mengeluarkan leptospira dalam urin adalah kultur, yang menghasilkan isolat Leptospira yang dapat sepenuhnya
dikarakterisasi pada tingkat genetik dan serovar, dan tersedia untuk digunakan dalam panel diagnostik uji aglutinasi mikroskopis (MAT) atau dimasukkan dalam vaksin
berbasis bakteri. Namun, budaya bisa memakan waktu berminggu-minggu hingga berbulan-bulan, dan membutuhkan sangat khusus media sebagai alternatif, tes antibodi
fluoresen (FAT) dapat dilakukan relatif cepat dengan menggunakan antibodi yang memberikan spesifisitas untuk mendeteksi leptospira patogen sertavisual konfirmasi dari
morfologi leptospira utuh yang secara aktif diekskresikan dalam urin. Namun, FAT tidak memberikan identifikasi serovar atau spesies. Tes molekuler seperti PCR dapat
dilakukan secara relatif cepat dan digunakan untuk menyimpulkan adanya leptospira dalam sampel urin; keuntungan termasuk sensitivitas, kuantifikasi, dan kemampuan
untuk mengurutkan produk yang diperkuat yang dapat digunakan untuk mengidentifikasi spesies patogen yang terlibat. Berbagai faktor dapat mempengaruhi pilihan
pengujian yang digunakan untuk mendeteksi keberadaan leptospira dalam sampel urin, termasuk ketersediaan sumber daya, keahlian, waktu, tujuan diagnostik, dan
aplikasi hilir. Sebelumnya telah dilaporkan bahwa penggunaan setidaknya dua teknik deteksi diperlukan untuk mendeteksi L. borgpetersenii serovar Hardjo dalam urin
ternak yang terinfeksi secara eksperimental.
Penelitian ini menunjukkan bahwa 7% (43/600) kasus sampel sapi potong secara aktif mengeluarkan leptospira dalam urin seperti yang dideteksi oleh kultur dan / atau
FAT . Dari 43 sampel tes-positif, 13 positif dengan kultur dan FAT, sedangkan 10 positif hanya dengan kultur, dan 20 positif hanya oleh FAT. Dalam studi saat ini menilai
manfaat penerapan waktu nyata molekuler alternatif uji PCR (rtPCR) untuk mendeteksi leptospira di 42 sampel urin sapi positif uji untuk menentukan kinerja relatif dari
setiap pengujian dalam sampel dari sapi yang terinfeksi secara alami.
Lanjutan
Hasil Penelitian Dari 42 sampel urin sapi yang diketahui positif Leptospira melalui kultur
dan / atau FAT, 60% (25/42) positif oleh rtPCR. Dari 22 sampel kultur-
positif, 91% (20/22) adalah rtPCR-positif dan dari 32 sampel FAT-positif,
50% (16/32) adalah rtPCR-positif. Hanya 26% (11/42) dari semua sampel
yang positif kultur, FAT dan rtPCR. Semua kontrol negatif, negatif
dengan rtPCR. Persentase yang diamati untuk gabungan hasil positif dan
negatif antara rtPCR dan kultur hasil adalah 86,5% dan 51,9% untuk
rtPCR dan FAT, masing-masing. Kappa Cohen dilakukan untuk
mengevaluasi tingkat kesepakatan antara metode rtPCR dan kultur yang
dilaporkan sebelumnya dan deteksi FAT. Nilai Kappa Cohen 0,74
menunjukkan kesepakatan substansial antara rtPCR dan budaya,
sementara nilai Kappa Cohen 0,04 antara rtPCR dan FAT menunjukkan
hanya sedikit kesepakatan, hampir setara dengan peluang acak.
 Lanjutan
Pembahasan Secara kolektif, hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tidak ada uji tunggal untuk mendeteksi leptospira dalam sampel
urin sapi yang optimal. Dalam studi ini, kami menganggap pengumpulan dan pemprosesan sampel sedekat mungkin
dalam pengaturan non-eksperimental: urin dikumpulkan langsung dari kandung kemih dengan jarum dan spuit pada saat
penyembelihan dan segera digunakan untuk kultur. Selain itu, sampel urin dibawa ke laboratorium pada suhu kamar dan
diproses untuk FAT dan rtPCR dalam waktu 3 jam setelah pengambilan. Ada banyak kemungkinan alasan untuk
variabilitas dalam hasil positif yang diamati untuk setiap pengujian, termasuk variabilitas dalam komposisi urin dari hewan
turunan, serta jumlah leptospira yang ditumpahkan per mL urin, seperti yang diharapkan dengan sampel lapangan.
Namun demikian, perbandingan berdampingan dari masing-masing teknik dengan sampel lapangan yang identik
menyoroti adanya variabel melekat dan faktor yang dapat mempengaruhi hasil tes-positif untuk mendeteksi leptospira
dalam sampel urin sapi. Pada beberapa sampel, rtPCR positif sedangkan FAT negatif, sebaliknya ketika rtPCR negatif
FAT positif. Hasil tersebut menekankan kesulitan dalam menentukan benar uji referensi untuk sampel lapangan.
Dalam penelitian sebelumnya, tujuan utama adalah untuk mendapatkan dan mengidentifikasi isolat sapi Leptospira, yang
semuanya diklasifikasikan sebagai L. borgpetersenii. Identifikasi spesies dimungkinkan dengan isolat yang dibudidayakan
tetapi tidak dengan FAT. Dalam studi ini, penggunaan rtPCR memberikan nilai yang identik di semua sampel positif
rtPCR, dan yang sebelumnya ditetapkan untuk L. borgpetersenii. Meskipun kultur dianggap sebagai tes diagnostik
standar emas untuk deteksi langsung Leptospira, pada dasarnya sulit, dan hanya dilakukan oleh laboratorium spesialis.
Jadi, penerapannya terbatas pada studi lapangan dianjurkan untuk menggunakan lebih dari satu alat tes untuk
mendiagnosis pelepasan leptospira melalui urin pada sapi.
Lanjutan

Kesimpulan Penggunaan lebih dari satu uji diagnostik

direkomendasikan untuk mendeteksi dan
mendiagnosis L. borgpetersenii dalam urin sapi.
Thanks