Reaksi gelap adalah tahap kedua dalam proses fotosintesis yang disebut juga dengan nama

siklus Calvin. Reaksi gelap menggunakan karbondioksida (CO2) untuk membentuk

gliseraldehida 3 fosfat (G3P) yang merupakan gula berkarbon 3.

Dalam sekali siklus Calvin akan dikeluarkan 1 molekul G3P, tumbuhan perlu melakukan 2 kali
siklus untuk menghasilkan 2 molekul G3P yang kemudian akan disatukan menjadi glukosa
(Gula berkarbon 6).
 Langkah-langkah dalam reaksi gelap fotosintesis

Langkah-langkah reaksi dalam siklus Calvin terbagi menjadi 3 fase, yaitu fiksasi, reduksi, dan
regenerasi.

Fase pertama: fiksasi karbon

Karbondioksida akan ditangkap dan disatukan dengan ribulosa bifosfat (RuBp) oleh enzim
rubisco. Rubisco adalah protein enzim yang paling banyak terdapat di dalam kloroplas. Dalam
tahap ini ribulosa bifosfat akan mengikat karbondioksida dan hasilnya adalah molekul dengan
6 karbon yang tidak stabil dan segera pecah menjadi 2 molekul 3 fosfogliserat. Dalam sekali
siklus terdapat 3 molekul ribulosa bifosfat yang menangkap 3 molekul karbondioksida dan
akan diubah menjadi 3 molekul berkarbon 6 yang tidak stabil sehingga langsung pecah menjadi
6 molekul 3 fosfogliserat.

Fase kedua: reduksi

Masing-masing molekul 3 fosfogliserat akan menerima fosfat dari ATP sehingga berubah
menjadi 1,3 difosfogliserat. Dibutuhkan 6 ATP untuk merubah 6 molekul 3 fosfogliserat menjadi
6 molekul 1,3 difosfogliserat. Molekul 1,3 difosfogliserat akan mengalami reduksi oleh NADPH
sehingga berubah menjadi gliseraldehida 3 fosfat (G3P), dibutuhkan 6 molekul NADPH dalam
sekali siklus Calvin. Hasil dari tahap reduksi adalah 6 molekul gliseraldehida 3 fosfat dengan 1
molekul tersebut akan dikeluarkan untuk bahan baku glukosa sehingga tersisa 5 molekul G3P.

Fase ketiga: regenerasi

Tahapan ini merupakan pembuatan kembali ribulosa bifosfat (molekul dengan 5 atom C) dari
sisa gliseraldehida 3 fosfat (molekul dengan 3 atom C). Pada tahapan ini 5 molekul
gliseraldehida 3 fosfat akan diubah menjadi 3 molekul ribulosa bifosfat yang dapat digunakan
kembali untuk menangkap karbondioksida. Dalam reaksi ini terdapat 3 molekul ATP yang
mendonorkan fosfatnya.

Reaksi gelap terjadi pada bagian stroma kloroplas. Reaksi gelap disebut siklus karena reaksi-
reaksi yang berlangsung berjalan berputar-putar dan kembali menjadi molekul asalnya.
Disebut reaksi gelap karena dalam tahap-tahap reaksinya tidak membutuhkan cahaya matahari
sebagai sumber energi.