ACTAVET. BRNO 2016, 85: 349-353; doi:10.

2754/avb201685040349

Penentuan glukosa dalam plasma ikan dengan dua metode moderat yang berbeda

Jana Bartoňková, Pavel Hyrl, Libor Vojtek

Universitas Masaryk, Fakultas Sains, Institut Biologi Eksperimental,

Brno, Republik Ceko

Diterima 25 Mei 2016

Diterima 12 Oktober 2016

Abstrak

Ikan teleost mencakup banyak spesies yang berbeda, memiliki dampak ekonomi dan lingkungan yang
besar. Glukosa adalah sumber energi utama bagi sebagian besar organisme vertebrata. Ikan serta mamalia
mempertahankan tingkat gula darah tertentu – glikemia, yang dipengaruhi oleh banyak faktor seperti
produksi hormon, diet, dan suhu. Oleh karena itu, ini adalah indikator yang berguna bagi para ilmuwan yang
perlu memeriksa keadaan langsung suatu organisme. Metode yang paling sering digunakan untuk
mengukur glikemia pada ikan budidaya adalah spektrofotometri; Namun, metode ini seringkali tidak nyaman
untuk eksperimen lapangan. Di sini kami melaporkan bahwa spektrofotometri dasar menggunakan oksidasi
beta D-glukosa darah oleh glukosa oksidase (digunakan dalam kondisi laboratorium) dapat dengan mudah
diganti dengan pengukuran glukometer portabel, terutama dirancang untuk sampel manusia. Kemungkinan
penggunaan di luar laboratorium dan tuntutan volume sampel yang kecil membuat metode ini sangat
berguna. Studi lapangan seringkali membutuhkan pemrosesan sampel yang cepat dan kondisi pengukuran
yang terbatas. Menggunakan glukometer adalah pilihan yang sederhana dan elegan. Kami menguji 74
sampel plasma darah (29 laki-laki, 45 perempuan) tench (Tinca tinca) baik secara spektrofotometri maupun
menggunakan glukometer manusia. Hasil kami menunjukkan korelasi linier yang signifikan (P < 0,001) antara
kedua metode. Kontribusi utama dari studi ini terdiri dari komparabilitas dan pertukaran hasil yang diperoleh
dari kedua metode yang disajikan.

Glucometer, spektrofotometri, tench, Tinca tinca

Ikan teleost sangat penting dari segi ekonomi, sosial dan lingkungan, oleh karena itu sifat fisiologis
dan imunologisnya telah dipelajari secara intensif. Salah satu indikator fisiologis utama yang diukur
dalam sebagian besar eksperimen ilmiah adalah konsentrasi glukosa darah yang menyatakan kondisi
kesehatan umum ikan. Glukosa adalah monosakarida dari kelompok aldohexose. Ini adalah sumber
energi dan karbon yang diperlukan untuk sebagian besar vertebrata termasuk ikan. Glukosa
diperoleh dari makanan tetapi karena ikan tidak dapat menggunakan karbohidrat makanan seefisien
misalnya mamalia, mereka memanfaatkan glukosa yang dihasilkan oleh proses glukoneogenesis dan
glikogenolisis (Polakof et al. 2012; Kamalam et al. 2016). Ikan serta mamalia memiliki mekanisme
untuk mempertahankan kadar gula darah tertentu, yang didasarkan pada mekanisme backloop dan
hormon (misalnya kortisol dan insulin) (Martínez-Porchas et al. 2006; Soengas 2014). Nilai glikemia
bervariasi antar spesies (1–10 mmol/l) yang mungkin disebabkan oleh perbedaan penggunaan
glukosa yang terutama: (1) gradien konsentrasi dari ruang ekstraseluler ke intraseluler (sebagian
besar ditentukan oleh level ekstraseluler), (2) permeasi melalui membran sel (ditingkatkan oleh
transporter glukosa), dan (3) aktivitas heksokinase (Driedzic et al. 2013). Metode standar untuk
penentuan konsentrasi glukosa darah adalah spektrofotometri menggunakan glukosa oksidase untuk
mengkatalisis oksidasi beta D-glukosa yang ada dalam darah. Reaksi tersebut menghasilkan hidrogen
peroksida yang dengan adanya peroksidase mengoksidasi 4-aminoantipirin menjadi quinoneimine
berwarna (Weibel dan Bright 1971). Perubahan warna kemudian diukur secara spektrofotometri
menggunakan spektrofotometer lempeng mikro di laboratorium. Pengaturan seperti itu nyaman
untuk eksperimen yang dilakukan pada ikan budidaya di mana jumlah sampel biasanya

Alamat korespondensi:
Mgr. Libor Vojtek, Ph.D. Univerzitní
kampus Bohunice stav
eksperimenální biologi – FIŽ Budova Telepon: +420 549 498 589 Email:
A36 libor.vojtek@mail.muni.cz http://
625 00 Brno – Bohunice actavet.vfu.cz/
350

hampir tidak terbatas (karena ukuran ikan yang lebih besar) dan ada cukup waktu untuk
evaluasi hasil. Di sisi lain, percobaan ikan liar sering diadakan dalam kondisi di mana evaluasi
cepat sampel diperlukan dan jumlah sampel sangat terbatas (ikan kecil). Oleh karena itu,
glukometer portabel dengan strip pengujian menggunakan pyrroloquinoline quinone
– Sistem glukosa dehidrogenase digunakan dalam studi banding ini. Pyrroloquinoline quinone
dengan adanya beta D-glukosa yang direduksi oleh glukosa dehidrogenase dan berubah warna
menjadi merah yang dikenali oleh glukometer (Newman dan Turner 2005).

Bahan dan metode

Dua metode sedang digunakan untuk penentuan konsentrasi glukosa plasma di tench. Kedua metode tersebut
diuji pada 74 sampel tench umur 5-6 tahun, 45 betina dan 29 jantan. Sampel ikan dikumpulkan dari kolam
pengembangbiakan di Vodňany (Republik Ceko); rata-rata panjang ikan adalah 271,2 ± 29,9mm, dan berat ikan rata-
rata adalah 477,9 ± 190,7g. Sampel darah diperoleh dengan punksi vena caudal dengan jarum suntik heparin
menurut Pravda dan Svobodová (2003) dan dipindahkan ke tabung yang mengandung heparin (50 IU/ml darah,
Zentiva, Republik Ceko). Plasma darah dikumpulkan setelah sentrifugasi (800g, 10 menit, 4 °C) dan disimpan pada
- 80 °C. Akibatnya, konsentrasi glukosa diukur menggunakan tabung yang sama pada waktu yang sama menggunakan kedua
metode.

Penentuan glukosa menggunakan kit

Konsentrasi glukosa plasma tench dianalisa menggunakan kit enzim komersial (GluL1000, PLIVA-Lachema,
Republik Ceko). Sampel ditambahkan ke dalam larutan glukosa oksidase, peroksidase dan 4-aminoantipirin;
kemudian setelah 10 menit inkubasi sampel dipindahkan ke pelat mikrotiter 96-sumur (200 l) dan
absorbansinya (500 nm) diukur dengan pembaca pelat (Tecan Sunrise, USA). Konsentrasi glukosa akibatnya
ditentukan dengan menggunakan absorbansi standar glukosa (10 mmol/l). Batas kuantifikasi metode ini
adalah 0,021 mmol/l; rentang kerja 0,065-45 mmol/l, pengulangan 1,05%, dan volume kerja 10 l.

Glukometer
Sampel ikan serupa dianalisis menggunakan glukometer Accu-Chek Glucotrend 2 (Roche Diagnostics,
Jerman) dengan strip uji Accu-Check Active asli (Roche Diagnostics, Jerman). Strip pertama kali dimasukkan ke
dalam glukometer, kemudian 2 l plasma digunakan untuk setiap strip/sampel uji, dan nilai terukur dicatat.
Pengukuran masing-masing sampel dilakukan dalam rangkap dua karena volume sampel yang kecil. Batas
kuantifikasi metode ini adalah 0,6 mmol/l, rentang kerja 0,6–33,3 mmol/l, pengulangan adalah
2,1%, dan volume kerja adalah 1-2 l.

Analisis statistik
Evaluasi statistik dilakukan oleh perangkat lunak Statistica 12 (StatSoft Inc., USA). Koefisien korelasi
Pearson digunakan untuk menilai hubungan antara dua metode yang berbeda.

Hasil

Hasil kami menunjukkan sedikit perbedaan dalam konsentrasi glukosa plasma antara pria dan wanita
menggunakan kedua metode pengukuran. Hasil yang diperoleh dengan menggunakan glukometer sedikit
meningkat dibandingkan dengan hasil yang ditentukan oleh kit (Tabel 1) tetapi grafik regresi yang
menggambarkan ketergantungan satu metode dengan yang lain menunjukkan distribusi linier dari semua
data, menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan antara hasil yang dicapai ( Gambar 1, r = 0,995;P <
0,001). Kedua metode memberikan hasil yang sebanding, oleh karena itu, penggunaannya dalam kondisi
yang berbeda (studi laboratorium atau lapangan) dimungkinkan.

Tabel 1. Tabel menunjukkan nilai rata-rata konsentrasi glukosa plasma darah dalam mmol/l ± SD diukur dengan dua
metode yang berbeda.

metode Kit BioLA Glukometer

Seks Pria (n = 29) Wanita (n = 45) Pria (n = 29) Wanita (n = 45)
Glukosa (mmol/l) 6,3 ± 2,3 5,6 ± 1,8 7.1 ± 3.1 6.1 ± 2.3
 351

Gambar 1. Kurva regresi menyatakan perbandingan dua metode yang digunakan untuk evaluasi konsentrasi glukosa
plasma.

Diskusi

Glikemia dipengaruhi oleh banyak faktor. Kandungan spesifik gula darah berbeda antar
spesies. Penting untuk mempertimbangkan musim, suhu air (ikan bersifat poikilothermic),
ketersediaan makanan atau apakah ikan tersebut karnivora atau omnivora (Suárez et al. 2002).
Atanasova dkk. (2006) menggunakan metode spektrofotometri untuk membandingkan
konsentrasi glukosa darah dalam tench sebelum dan sesudah periode musim dingin. Mereka
menemukan perbedaan yang signifikan saat mengukur tench berumur dua tahun di musim
semi dan musim gugur. Nilai di musim gugur sekitar 73 mg/100ml dan di musim semi sekitar
24 mg/100ml. Nilai yang lebih tinggi pada periode musim gugur dikaitkan dengan asupan
makanan yang lebih tinggi sebagai persiapan untuk musim dingin. Reproduksi merupakan
faktor penting lain yang mempengaruhi indeks biokimia dan hematologi. Svoboda dkk. (2001)
mengukur konsentrasi glukosa darah dalam tench dua bulan sebelum pemijahan (diinduksi
oleh hormon) dan segera setelahnya. Mereka tidak menemukan perbedaan tergantung jenis
kelamin dalam konsentrasi glukosa darah pada periode sebelum dan sesudah pemijahan.
Namun, ditemukan perbedaan antara betina yang bertelur dan tidak bertelur dalam periode
reproduksi. Rata-rata konsentrasi glukosa darah pada periode pra pemijahan adalah sekitar 6
mmol/l dan sekitar 9,5 mmol/l.
Tidak seperti mamalia, ikan tidak dapat memanfaatkan glukosa makanan dengan sangat efisien (Polakof et al.
2012; Kamalam et al. 2016). Kemampuan yang buruk untuk memanfaatkan glukosa makanan mungkin disebabkan
oleh aktivitas heksokinase yang rendah dan kurangnya enzim glukokinase yang dapat diinduksi, kemungkinan
penghambatan pelepasan insulin oleh somatostatin yang dilepaskan karena konsentrasi glukosa darah yang tinggi
atau jumlah reseptor insulin yang relatif rendah pada ikan dibandingkan dengan ikan. mamalia (Kamalam et al.
2016). Selain itu, akan sangat tidak menguntungkan untuk mengandalkan sebagian besar pada makanan karena ikan
harus berurusan dengan ketersediaan makanan musiman (De Pedro et al. 2003). Ikan telah mengadaptasi beberapa
strategi untuk bertahan hidup kekurangan makanan, termasuk metabolisme, hormonal, dan respon perilaku. Untuk
mempertahankan fungsi metabolisme selama kelaparan makanan, ikan menggunakan glikogen hati sebagai sumber
energi atau mereka memetabolisme protein dan/atau lipid. Dalam studi De Pedro et al. (2003), ikan dibiarkan
kelaparan selama 7 hari dan kemudian diberi makan selama 2 hari. Selama kelaparan, penurunan glikogen dan
konsentrasi glukosa darah dicatat. Setelah refeeding, nilai-nilai ini sebagian terbalik.
352

Studi juga mengungkapkan bahwa ada perbedaan dalam memanfaatkan glukosa makanan
antara ikan karnivora yang hidup di perairan dingin dan ikan omnivora yang hidup di perairan
hangat (Suárez et al. 2002). Ikan omnivora mampu memetabolisme glukosa lebih cepat
dibandingkan ikan karnivora (Eames et al. 2010). Jadi, ketika menggunakan makanan kering
dalam budidaya, kandungan karbohidrat harus dipertimbangkan sebagai salah satu faktor
utama untuk memilih diet yang sesuai. Sebuah studi pada belut Eropa (ikan karnivora air
hangat) dan rainbow trout (ikan karnivora air dingin) menunjukkan pemanfaatan karbohidrat
yang berbeda dari makanan (Suárez et al. 2002). Konsentrasi glukosa darah tetap stabil pada
belut, terlepas dari kandungan karbohidrat dalam makanannya; Namun, dalam ikan trout
hubungan langsung ditentukan antara konsentrasi glukosa plasma dan karbohidrat makanan.

Bersama dengan kortisol, kandungan glukosa darah dalam serum atau plasma darah dapat
digunakan sebagai indikator stres (Yi n et al. 1995). Dalam kondisi stres, organisme
menggunakan cadangan energi, sebagian besar glikogen di otot dan hati yang pada gilirannya
meningkatkan konsentrasi glukosa dalam plasma (Bar ton et al. 1987). Konsentrasi glukosa
plasma yang lebih tinggi karena kondisi stres muncul beberapa menit atau jam setelah stres
akut (Mar ínez-Porchas et al. 2009). Paparan stres mempengaruhi banyak indeks fisiologis dan
imunologi yang berbeda pada ikan, sehingga tingkat stres perlu dicatat dan dipertimbangkan
dalam setiap percobaan. Jentof dkk. (2005) mengukur konsentrasi glukosa dan kortisol di
tempat bertengger Eurasia (Perca fluviatilis) dan trout pelangi peliharaan yang terpapar stresor
penanganan standar. Mereka mencatat perubahan kadar kortisol dan glukosa satu jam setelah
paparan stres. Peningkatan konsentrasi kedua faktor tersebut berlangsung selama beberapa
jam setelah paparan. Namun, perlu untuk mempertimbangkan bahwa stres memiliki dampak
multifaktorial pada organisme dan perubahan konsentrasi glukosa darah dapat dipengaruhi
oleh berbagai cara. Seperti disebutkan di atas, pemanfaatan glukosa pada ikan bervariasi antar
spesies sehingga menggunakannya sebagai indikator stres seharusnya hanya pelengkap (Mar t
ínez-Porchas et al. 2009).
Penentuan konsentrasi glukosa dalam plasma ikan secara rutin dilakukan dengan menggunakan
metode/kit spektrofotometri yang cepat, murah, dan mudah digunakan tetapi tidak sesuai untuk
penggunaan di luar ruangan. Dua glukometer berbeda yang dirancang khusus untuk sampel
manusia digunakan untuk mengukur konsentrasi glukosa darah pada ikan Zebra (Danio rerio) (Eam di
al. 2010). Ditemukan bahwa baik glukometer yang menggunakan metode glukosa oksidase dan
glukometer yang menggunakan pirolokuinolin kuinon glukosa dehidrogenase, konsisten dengan
hasil uji glukosa oksidase yang dilakukan di laboratorium. Dalam penelitian kami, kami menggunakan
glukometer berdasarkan pyrroloquinoline quinone glucose dehydrogenase. Kami dapat
mengkonfirmasi bahwa glukometer manusia dapat diandalkan digunakan pada sampel ikan seperti
yang dilaporkan dalam studi Eames et al. (2010). Karena diuji pada spesies ikan yang berbeda, kami
dapat menyimpulkan bahwa metode ini dapat dengan mudah menggantikan metode laboratorium di
kondisi lapangan. Sejauh ini, tidak ada penelitian (kecuali untuk satu membandingkan terutama dua
glukometer yang berbeda oleh Eames pada al. 2010) telah diterbitkan berurusan dengan
perbandingan pendekatan pengukuran glikemia yang berbeda; satu diusulkan untuk pengukuran
laboratorium dan set lainnya untuk studi lapangan. Kontribusi utama dari penelitian ini terdiri dari
komparabilitas dan pertukaran hasil yang diperoleh dari kedua metode yang disajikan.

Referensi

Atanasova R, Hadjinikolova L, Hubenova T 2006: Beberapa parameter biokimia tench (Tinca tinca L.). Ikan
Arch Pol14: 123-130
Barton BA, Schreck CB, Barton LD 1987: Efek pemberian kortisol kronis dan stres akut harian pada
pertumbuhan, kondisi fisiologis, dan respon stres pada juvenil rainbow trout. Dis Aquat Org2: 173-185
 353

De Pedro N, DelgadoMJ, Gancedo B, Alonso-Bedate M2003: Perubahan glukosa, glikogen, aktivitas tiroid dan
katekolamin hipotalamus di tench oleh kelaparan dan refeeding. J Comp Fisiol B173: 475-481
Driedzic WR, Clow KA, Short CE 2013: Pengambilan dan metabolisme glukosa oleh sel darah merah dari ikan dengan
kadar glukosa ekstraseluler yang berbeda. J Exp Biola216: 437-446
Eames SC, Philipson LH, Prince VE, Kinkel MD 2010: Pengukuran gula darah pada ikan zebra mengungkapkan dinamika
homeostasis glukosa. ikan zebra7: 205-213
Jentoft S, Aastveit AH, Torjesen PA, Andersen O 2005: Efek stres pada pertumbuhan, kortisol dan kadar glukosa di
bertengger Eurasia yang tidak dijinakkan (Perca fluviatilis) dan trout pelangi peliharaan (Oncorhynchus mykiss).
Comp Biochem Physiol AMol Integr Physiol 3: 353-358
Kamalam BS, Medane F, Panserat S 2016: Pemanfaatan Karbohidrat Pakan Pada Ikan Ternak: Wawasan Baru
pada faktor-faktor yang mempengaruhi, keterbatasan biologis dan strategi masa depan. Akuakultur (dalam pers, tersedia online;
doi:10.1016/j.aquaculture.2016.02.007)
Martínez-Porchas M, Martínez-Cordova LR, Ramos-Enriques R 2009: Kortisol dan glukosa: Indikator yang dapat diandalkan
stres ikan? PANAMJAS4: 158-178
Newman JD, Turner AP 2005: Biosensor glukosa darah rumah: perspektif komersial. Biosens Bioelektron
20: 2435-2453
Polakof S, Panserat S, Soengas JL, Bulan TW 2012: Metabolisme Glukosa pada Ikan: Review. J Comp Fisiol B
182: 1015-1045
Pravda D, Svobodová Z 2003: Hematologie ryb (Hematologi ikan, dalam bahasa Ceko). Dalam: Doubek J (Ed.): Veterinární
hematologie NOVIKO as, Brno, hlm. 381-405
Soengas JL 2014: Kontribusi sistem penginderaan glukosa dan asam lemak untuk pengaturan asupan makanan pada ikan.
Sebuah ulasan. Gen Comp Endokrinol205: 36-48
Suárez MD, A. Sanz A, Bazoco J, Garcia-Gallego M 2002: Efek metabolik dari perubahan protein makanan:
rasio karbohidrat pada belut (anguila anguila) dan ikan trout (Oncorhynchus mykiss). Aquac Int 10: 143-156
Svoboda M, Kouřil J, Hamáčková J, Kaláb P, Savina L, Svobodová Z, Vykusová B 2001: Profil biokimia
plasma darah tench (Tinca tinca L.) selama periode pra dan pasca pemijahan. Acta Vet Brno70: 259-268
Weibel MK, Bright HJ 1971: Mekanisme glukosa oksidase. Interpretasi ketergantungan pH. J Biol Chem
246: 2734-2744
Yin Z, Lam TJ, Sin YM 1995: Efek dari stres berkerumun pada respon imun non-spesifik pada ikan mas mewah
(Cyprinus carpio L.). Kerang Ikan Imunol7: 519-529