Nama Nazwar Eka Putri

NIM 205100501111030
Kelas Q
Kelompok Q5

A. Diagram Alir B. Analisa Prosedur

1. EKSTRAKSI ENZIM SELULASE
a. Pembuatan Stok Kultur
1 ose kultur Bacillus subtilis (dari NA miring)
Diinokulasikan pada 40 ml medium NB
Dishaker pada kecepatan 100 rpm, 55oC, 24 jam
Stok kultur 40 ml
1. Ekstraksi Enzim Selulase
1. Langkah pertama yang dilakukan dalam pembuatan stok
kultur adalah persiapan bahan utamanya yaitu 1 ose
kultur Bacillus subtilis dari media NA miring.
2. Bahan diinokulasikan pada 40 ml medium NB untuk
mendapatkan biakan bakteri yang cepat tumbuh dan
berkembangbiak.
3. Kemudian bahan yang telah diinokulasi dengan medum
NB 40 ml di shaker pada kecepatan 100 rpm, dengan suhu
55 derajat selama 24 jam agar diperoleh kultur murni
bakteri dari media.
4. Jadilah hasil berupa stok kultur 40 ml.
 Nama Nazwar Eka Putri
NIM 205100501111030
Kelas Q
Kelompok Q5

b) Produksi dan Ekstraksi Enzim Selulase
Stok kultur 40 ml
Dimasukkan ke falcon sebanyak 10 ml
Disentrifugasi pada 8000 rpm, 4oC, 10 menit
b) Produksi dan Ekstraksi Enzim Selulase
1. Disiapkan stok kultur 40 ml sebagai bahan percobaan.
2. Kemudian dimasukkan kedalam falcon sebanyak 10 ml
untuk memudahkan proses produksi ekstraksi.
3. Setelah itu disentrifugasi pada 8000 rpm pada suhu 4
derajat selsilius selama 10 menit untuk mendapatkan
enzim yang diinginkan.
4. Diperoleh hasil ekstraksi enzim selulase.

Diambil supernatant

Hasil
 Nama Nazwar Eka Putri
NIM 205100501111030
Kelas Q
Kelompok Q5

1. PRESITIPASI PROTEIN 1. PRESITIPASI PROTEIN

a. Tahap 1 a. Tahap 1
Sampel protein 1) Siapkan sampel protein yang akan di presitipasi.
2) Sampel diambil sebanyak 10 ml.
3) Ditambahkan ammonium sulfat 1.698 gram dengan
Diambil 10 ml konsentrasi 30% pada sampel dengan tujuan garam ini
(NH4)2SO4 1.698 gram akan mengikat kadar air sehingga protein mengendap.
4) Diaduk menggunakan magnetic strirer pada suhu 4
Konsentrasi ammonium sulfat 30% derajat selama 30 menit di dalam bak berisi es batu
untuk menghomogenkan larutan sampel.
Diaduk dengan magnetic strirer pada suhu 4oC, 30 menit 5) Disentrifugasi 8000 rpm selala 15 menit untuk
mendapatkan enzim yang diinginkan.
Di dalam bak berisi es batu
6) Diperoleh filtrat hasil penyaringan, diamil supernatant
dan diukur volumenya.
1 ml supernatant Disentrifugasi 8000 rpm, 15 menit 7) Diperoleh hasil berupa superntan A.
untuk dianalisis
elektroforesis
Diambil supernatant, diukur volumenya

Disimpan di
suhu 4oC Supernatant A
 Nama Nazwar Eka Putri
NIM 205100501111030
Kelas Q
Kelompok Q5

b. Tahap 2 b. Tahap 2
Supernatant A 1) Siapkan sampel protein yang akan di presitipasi.
2) Sampel diambil sebanyak 10 ml.
Ammonium Sulfat sesuai 3) Ditambahkan ammonium sulfat 1.698 gram dengan
konsentrasi 60% pada sampel dengan tujuan garam ini
akan mengikat kadar air sehingga protein mengendap.
4) Diaduk menggunakan magnetic strirer pada suhu 4
Konsentrasi ammonium sulfat 60% derajat selama 30 menit di dalam bak berisi es batu
untuk menghomogenkan larutan sampel.
Diaduk dengan magnetic strirer pada suhu 4oC, 30 menit 5) Disentrifugasi 8000 rpm selala 15 menit untuk
Di dalam bak berisi es batu mendapatkan enzim yang diinginkan.
6) Diperoleh filtrat hasil penyaringan, diamil supernatant
dan diukur volumenya.
1 ml supernatant Disentrifugasi 8000 rpm, 15 menit 7) Diperoleh hasil berupa superntan B.
untuk dianalisis
elektroforesis
Diambil supernatant, diukur volumenya

Disimpan di
suhu 4oC Supernatant B
 Nama Nazwar Eka Putri
NIM 205100501111030
Kelas Q
Kelompok Q5

c. Tahap 3 c. Tahap 3
1) Siapkan sampel protein yang akan di presitipasi.
Supernatant B 2) Sampel diambil sebanyak 10 ml.
3) Ditambahkan ammonium sulfat 1.698 gram dengan
Ammonium Sulfat sesuai konsentrasi 30% pada sampel dengan tujuan garam ini
dengan volume sueprnatan akan mengikat kadar air sehingga protein mengendap.
yang diperoleh 4) Diaduk menggunakan magnetic strirer pada suhu 4
derajat selama 30 menit di dalam bak berisi es batu
Konsentrasi ammonium sulfat 90% untuk menghomogenkan larutan sampel.
5) Disentrifugasi 8000 rpm selala 15 menit untuk
Diaduk dengan magnetic strirer pada suhu 4oC, 30 menit mendapatkan enzim yang diinginkan.
Di dalam bak berisi es batu 6) Diperoleh filtrat hasil penyaringan, diamil supernatant
dan diukur volumenya.
7) Diperoleh hasil berupa superntan.
1 ml supernatant Disentrifugasi 8000 rpm, 15 menit
untuk dianalisis
elektroforesis
protein
Diambil supernatant, diukur volumenya

Disimpan di
Seluruh supernatant dianalisis
suhu 4oC
dengan elektroforesis protein
Nama Nazwar Eka Putri
NIM 205100501111030
Kelas Q
Kelompok Q5