Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com
Memahami mekanisme molekuler NET dan perannya dalam antivirus
kekebalan bawaan

1
Memahami mekanisme molekuler NET dan perannya dalam antivirus
kekebalan bawaan

Highlight


Neutrofil yang diaktifkan dapat melepaskan NET

NETs dibentuk oleh protease, kromatin, dan protein antimikroba.

Fungsi utama NET adalah untuk menjebak dan membunuh mikroba menghindari penyebarannya.

Virus mampu menginduksi pembentukan NET oleh neutrofil manusia secara in vitro.

Abstrak

Neutrofil polimorfonuklear (PMN) adalah sel yang paling melimpah dalam konteks
kekebalan bawaan; mereka adalah salah satu sel pertama yang tiba di lokasi virus
infeksi yang merupakan garis pertahanan pertama dalam menanggapi patogen yang menyerang.
Memang, neutrofil dilengkapi dengan beberapa mekanisme pertahanan termasuk:
pelepasan sitokin, butiran sitotoksik dan neutrofil yang baru-baru ini dijelaskan
perangkap ekstraseluler (NET). Komponen utama NET adalah DNA, granular
peptida antimikroba, dan protein nuklir dan sitoplasma, yang bersama-sama memainkan peran
peran penting dalam respon imun bawaan. Sementara NET pertama kali digambarkan sebagai
mekanisme melawan bakteri dan jamur, baru-baru ini, beberapa penelitian mulai
menjelaskan bagaimana NET terlibat dalam respons antivirus inang dan yang menonjol
karakteristik mekanisme baru ini dibahas dalam tinjauan ini.

Kata kunci: Perangkap ekstraseluler neutrofil, Virus, Respon bawaan, Peradangan,

Sitokin.

1. Perkenalan

Neutrofil adalah komponen penting dari respon imun bawaan terhadap

patogen. Karena neutrofil adalah salah satu populasi sel pertama dan paling melimpah
untuk mencapai tempat infeksi, didalilkan bahwa sel-sel ini terlibat dalam

2
respon imun antivirus. Namun, efek perlindungan neutrofil selama
infeksi virus telah menjadi kontroversi karena telah dilaporkan bahwa mereka menengahi
efek menguntungkan dan merugikan pada tuan rumah (Drescher dan Bai, 2013; Jenne
dan Kubes, 2015; Mantovani dkk., 2011). Selain itu, deteksi positif dan
RNA virus indera negatif pada neutrofil manusia dan tikus menunjukkan bahwa
beberapa virus dapat bereplikasi dalam sel-sel ini (Drescher dan Bai, 2013). Untuk membunuh
patogen, neutrofil menggunakan sejumlah strategi seperti fagositosis,
degranulasi dan pembentukan perangkap ekstraseluler neutrofil yang baru-baru ini dijelaskan
(NET). Generasi NET pada awalnya digambarkan sebagai mikrobisida
mekanisme yang merupakan bagian dari gudang neutrofil. Namun, kita sekarang tahu bahwa
mekanisme ini tidak terbatas pada sel-sel ini, karena sel-sel lain juga dapat membentuk
perangkap ekstraseluler (ET), seperti monosit, makrofag, dan sel mast (MC),
eosinofil dan sel dendritik (Jenne dan Kubes, 2015). NET adalah struktur yang
mengandung berbagai komponen yang mendukung penangkapan dan eliminasi patogen
seperti bakteri, jamur dan parasit (Goldmann dan Medina, 2012). Sejak
penemuan NET, studi terbaru telah memperhatikan peran NET dalam
patogenesis virus (Jenne dan Kubes, 2015). Di sini kami akan meninjau temuan terbaru
menuju pemahaman NET, bagaimana mereka terbentuk dan bagaimana mereka berfungsi, dan
juga membahas pentingnya mereka dalam infeksi virus.

2. Neutrofil: fungsi dan perannya dalam respon inflamasi

Neutrofil polimorfonuklear (PMNs) memainkan peran utama dalam inflamasi awal

respon terhadap infeksi virus atau cedera. Fungsi mereka tergantung pada status pematangan
di mana mereka dilepaskan dari sumsum tulang ke dalam sistem sirkulasi darah,
di mana mereka memiliki waktu paruh antara 12 jam dan 5 hari tergantung pada
rangsangan atau tantangan yang mereka hadapi (Colotta et al., 1992; Kim et al.,
2011; Pillay et al., 2010). Waktu paruh yang lebih pendek atau lebih lama akan menentukan apakah
respon inflamasi akan meluas atau berakhir.
Di sumsum tulang, PMN dapat dibagi menjadi tiga kelompok sel: sel induk termasuk:
sel punca hematopoietik yang tidak berdiferensiasi (HSCs) CD34+; sel mitosis

3
mengandung sel progenitor granulosit dalam proses proliferasi dan
diferensiasi; dan kelompok sel pasca-mitosis yang terdiri dari sel matang penuh dan
neutrofil berdiferensiasi yang merupakan reservoir ae di sumsum tulang (Summers et
al., 2010). Pengatur utama granulositopoiesis - koloni granulosit-
faktor perangsang (G-CSF) mempromosikan dan mengontrol produksi neutrofil di bawah
kondisi stabil dan menular. Produksi G-CSF, dijelaskan hampir
tiga dekade lalu dan diproduksi sebagian oleh sel T, memiliki efek yang kuat, cepat dan spesifik
efek pada proliferasi progenitor granulositik dan mempromosikan neutrofil
diferensiasi (Cohen et al., 1987; Richards et al., 2003). Rekrutmen neutrofil ke
situs spesifik peradangan memainkan peran penting dalam respons bawaan dan
membutuhkan pembentukan kompleks pensinyalan yang rumit dan terorganisir dengan
partisipasi molekul kemo-atraktan, reseptor membran dan ligan. NS
kolaborasi erat antara molekul-molekul ini dimulai dengan pensinyalan intraseluler
yang memungkinkan neutrofil meninggalkan aliran darah, sedangkan sinyal dimediasi oleh
interaksi dengan sel residen jaringan memfasilitasi migrasi mereka (Mual dan
Borregaard, 2014). Setelah melewati endotel, neutrofil mengikuti
gradien kemokin dilepaskan dari sel-sel jaringan residen. Di antara yang pertama ditemukan
kemokin, interleukin 8 (IL-8 atau CXCL8), diproduksi oleh monosit teraktivasi,
makrofag, sel mast, sel endotel dan neutrofil (Ghasemi et al., 2011),
adalah salah satu kemokin yang paling penting dalam perekrutan neutrofil ke
tempat peradangan (Rollins, 2009; Van Damme et al., 1989). Dalam model murine itu
diamati bahwa neutrofil mensintesis dan mengeluarkan CXCL1 (homolog
IL-8) manusia dan CXCL2 setelah dirangsang dengan lipopolisakarida (LPS) dan
bahwa regulasi ini dilakukan melalui Toll-like receptor (TLR)-2 dan TLR-4 di a
Cara yang bergantung pada MyD88 dan TRIF (De Filippo et al., 2013; De Filippo et al.,
2008).
Begitu berada di tempat peradangan, neutrofil menjalankan fungsi utama untuk membasmi
agen infeksi atau proses inflamasi, termasuk fagositosis dan pembunuhan
mikroorganisme dalam fagosom. Untuk mencapai ini, neutrofil menghasilkan reaksi reaktif
spesies oksigen (ROS) melalui nikotinamida adenin dinukleotida fosfat
(NADPH) oksidase sistem (Arruda dan Barja-Fidalgo, 2009), dan pelepasan sitotoksik

4
butiran dengan protein antimikroba seperti defensin, cathelicidin, laktoferin,
elastase dan myeloperoxidase (MPO) (Dale et al., 2008; Klebanoff, 1968). Di dalam
Selain eliminasi bakteri dengan fagositosis, neutrofil telah berkembang
mekanisme berbeda yang memungkinkan mereka untuk berpartisipasi aktif dalam pertahanan inang, seperti
mekanisme mikrobisida ekstraseluler, termasuk pelepasan butiran sitotoksik dan
NET. Keadaan neutrofil dengan pembentukan NET dikenal sebagai NETosis, a
fenomena yang digambarkan satu dekade lalu sebagai mekanisme baru kematian sel dengan
sifat mikrobisida (Brinkmann et al., 2004), yang akan dibahas di bawah.
Inflamasi merupakan respon patofisiologis terhadap infeksi atau kerusakan jaringan, dan
untuk dilakukan, sel-sel dari respons imun bawaan meluncurkan pemulihan
program homeostasis yang terdiri dari langkah-langkah yang berbeda. Pertama, fagosit dan
sel penyaji antigen khusus (makrofag, monosit, dan sel dendritik)
mengenali sinyal molekuler yang mengkhawatirkan yang dihasilkan oleh kerusakan jaringan dan/atau invasi
mikroorganisme melalui reseptor pengenalan pola (PRR), menghasilkan
produksi sitokin dan kemokin pro-inflamasi, termasuk TNF-α, IL-6,
CXCL1, CXCL2 dan IL-8 . Molekul-molekul ini merangsang perekrutan neutrofil ke
situs yang rusak, yang mengarah ke tahap berikutnya di mana neutrofil yang direkrut melepaskan
protein granul, seperti cathelicidin LL-37 dan azurocidin, serta
kemokin CCL3, CCL4 dan CCL20, mempromosikan ekstravasasi inflamasi
monosit dan neutrofil ke situs yang rusak (Rigby dan DeLeo 2012; Filep dan
El Kebir, 2009; Fadok dkk., 1998).
Setelah monosit, makrofag, dan neutrofil memasuki tempat infeksi dan
menyebabkan eliminasi agen yang merugikan, respons inflamasi saat ini harus
diatasi untuk menghindari kerusakan jaringan yang berlebihan (resolusi inflamasi). Di antara
mekanisme yang terlibat dalam membatalkan status inflamasi adalah aktivasi
apoptosis spontan pada neutrofil. Dalam hal ini, neutrofil mengalami perubahan dalam
komposisi membrannya, khususnya dalam muatan negatif permukaannya
serta pelepasan lipid, protein dan mediator nukleat (Filep dan El Kebir,
2009; Rigby dan DeLeo, 2012). Perubahan ini berfungsi sebagai sinyal untuk menarik
sel pemulung dan makrofag yang menangani penghapusan neutrofil apoptosis.
Akhirnya, pengambilan tubuh apoptosis bertindak sebagai stimulus untuk makrofag yang

5
melepaskan mediator yang menekan respon inflamasi, seperti IL-10 dan
transforming growth factor-β (TGF-β) (Fadok et al., 1998). Pada neutrofil,
respon inflamasi dapat dipicu oleh TLRs. Studi sebelumnya melaporkan bahwa
neutrofil manusia mengekspresikan TLR-1, -2, -4, -5, -6, -7, -8, -9 dan -10 dan bahwa
stimulasi TLRs, reseptor seperti NOD dan dektin-1 menginduksi produksi
sitokin pro-inflamasi (Moreno et al., 2014; Prince et al., 2011). TLR
Stimulasi dengan masing-masing agonis menginduksi ekspresi L-selectin,
menurunkan kemotaksis, dan meningkatkan fagositosis, produksi ROS dan
jumlah sitokin dan sekresi kemokin (Hayashi et al., 2003).
Beberapa penelitian telah melaporkan keterlibatan TLR dalam pengakuan dan
aktivasi respon inflamasi. Misalnya, neutrofil mengenali
Helicobacter pylori melalui TLR-2 dan TLR-4 dan menginduksi inflamasi awal
respon yang dimediasi oleh peningkatan produksi IL-8, IL-1β dan TNF-α (Alvarez-
Arellano et al., 2007). Selanjutnya, sebelumnya kami menunjukkan bahwa HIV-1 menginduksi
aktivasi neutrofil dan meningkatkan ekspresi TLR-2, TLR-4 dan
TLR-7, dan bersama dengan agonis TLR spesifik, HIV-1 memodulasi IL-6, TNF-α dan
Produksi ROS (Giraldo et al., 2016).

3. Mekanisme dan struktur NETosis: aktivasi NADPH oksidase

NET adalah mekanisme antimikroba baru yang dijelaskan untuk neutrofil dan saat ini
mekanisme ini dianggap sebagai bentuk respons bawaan yang tidak hanya menjebak dan
membunuh mikroorganisme mencegah mereka menyebar, tetapi juga dapat berkontribusi untuk
patologi hiperinflamasi. Struktur NET terutama terdiri dari nuklir
kromatin (untai DNA) yang terkait dengan histon dan protein granular
(neutrofil elastase [NE], defensin dan MPO). Kerangka perangkap ini adalah
dibentuk oleh filamen kromatin dengan diameter ~15-17 nm, dihiasi dengan globular
struktur berdiameter sekitar 50 nm dan komponen utamanya adalah protein dari
butiran dan kompartemen sel lainnya, yang tidak dikelilingi oleh membran
(Brinkmann et al., 2004).

6
Dalam sel fagosit, termasuk neutrofil, aktivasi NADPH oksidase merupakan
mekanisme pertahanan terhadap infeksi bakteri melalui generasi ROS,
seperti O2−, H
2

pembentukan (Araźna et al., 2015). Meskipun mekanisme penuh yang mengarah ke

NET
pembentukannya masih kurang dipahami, diterima bahwa elemen ROS merupakan
bagian integral dari jalur pensinyalan yang terlibat dalam pelepasan ke dalam sitoplasma
Komponen .NET seperti MPO dan elastase, dari butiran azurofilik neutrofil
(Wong et al., 2015). Langkah ini merupakan prasyarat agar enzim dapat
ditranslokasi ke nukleus, di mana elastase memungkinkan degradasi histon dan MPO
memfasilitasi dekondensasi kromatin. Selain itu, ROS memungkinkan histone citrullination
dimediasi oleh enzim peptidil arginin deaminase tipe 4 (PAD4) (Wong et al.,
2015). Akibatnya, diperkirakan bahwa peristiwa ini mempromosikan nukleosom
pembongkaran, dekondensasi kromatin dan gangguan membran intraseluler.
Peningkatan konsentrasi masuknya kalsium sitosol melalui endoplasma
retikulum dan/atau ruang ekstraseluler, merupakan prasyarat lain untuk produksi NET
dengan cara yang bergantung pada NADPH/PAD4 (Stoiber et al., 2015).
Di luar efek ROS dalam produksi NET, ada berbagai macam pro-
rangsangan inflamasi yang mampu menginduksi NET, seperti LPS, IL-6, IL-8 dan TNF-α,
serta beberapa strain bakteri, jamur, protozoa dan beberapa penginduksi kimia.
Penginduksi NET yang paling kuat adalah phorbol 12-miristat 13-asetat (PMA), yang
aktivitasnya bergantung pada ROS (Hosseinzadeh et al., 2012). Selama langkah pertama
NETosis, beberapa menit setelah aktivasi neutrofil, sel-sel berubah morfologi;
yaitu mereka berbaring datar dan sangat melekat pada substrat. Sepanjang jam berikutnya,
nukleus kehilangan lobusnya, kromatin tidak terkondensasi dan bagian dalam dan luar
lapisan membran nukleus dipisahkan, yang disertai dengan granula
kehancuran. Kemudian, membran inti pecah menjadi vesikel terpisah,
sedangkan nukleoplasma dan sitoplasma menyatu menjadi campuran homogen.
Akhirnya, sel menjadi bulat dan tampak berkontraksi sampai sitoplasma
membran rusak dan isinya dilepaskan dalam bentuk filamen tipis
(Pinegin et al., 2015; Remijsen et al., 2011). Kesimpulannya dan menurut
Pinegin et al., (2015), pembentukan NET adalah proses bertahap yang melibatkan proses berturut-turut

7
langkah: pertama, produksi ROS, kedua, transportasi elastase dan MPO ke sel
inti, ketiga, modifikasi histon, dan akhirnya, pecahnya membran sitoplasma
dan pelepasan kromatin (Pinegin et al., 2015). Namun jelas bahwa subseluler
mekanisme yang terjadi selama NETosis masih belum sepenuhnya dipahami, meskipun ada
adalah bukti yang menunjukkan bahwa selama proses ini, selubung nuklir runtuh dan
kromatin intraseluler terdekondensasi diatur oleh interaksi antara
histone citrullination, produksi superoksida dan autophagy. NET mengandung banyak
sejumlah protein dan enzim yang mampu membunuh bakteri, jamur dan virus. Ini
kemampuan disediakan oleh agen antibakteri klasik yang terkandung dalam perangkap, seperti
peptida kationik LL-37, -defensin, histon, elastase dan enzim MPO
(Pinegin et al., 2015).
NET menyebabkan kematian sel (NETosis bunuh diri), sebagian besar disebabkan oleh PMA dan membutuhkan
aktivasi jalur Raf-Mek-ERK dan produksi ROS. Namun, ada
ada jalur berbeda yang tidak selalu menyebabkan kematian neutrofil. Ini
mekanisme ini disebut "NETosis vital" dan ditandai dengan mengandung terutama
DNA mitokondria (Nahrendorf dan Swirski, 2015). Ini diinduksi sebagai respons terhadap
pengenalan pola molekuler spesifik mikroba oleh PRR inang, termasuk toll-like
reseptor, ROS, yang menyebabkan kematian sel atau dengan ROS-independen awal/cepat
jalur tanpa mempengaruhi viabilitas neutrofil (Pilsczek et al., 2010; Rochael et al.,
2015). NETosis vital diinduksi dalam waktu singkat (15-60 menit) oleh Staphylococus
aureus (Pilsczek et al., 2010), dan oleh molekul inflamasi seperti
faktor perangsang koloni granulosit / makrofag (GM / CSF) bersama-sama dengan
LPS (Yousefi et al., 2009).

4. Peran NET dalam imunitas bawaan dan peradangan

NET mewakili mekanisme mikrobisida yang baru-baru ini didirikan dengan efek pada
respon imun bawaan untuk menjebak dan membunuh mikroorganisme. Fungsi ini adalah
awalnya terbukti efektif melawan Escherichia coli, Shigella flexneri,
Salmonella typhimurium dan Staphylococus aureus (Brinkmann et al., 2004;
Grinberg dkk., 2008). Penelitian telah menunjukkan bahwa NET menurunkan faktor virulensi

8
dan membunuh bakteri sebelum mikroorganisme ditelan oleh neutrofil. Nanti
ditunjukkan bahwa NET memiliki efek mikrobisida terhadap berbagai
patogen, termasuk beberapa virus dan parasit (Drescher dan Bai, 2013;
Hermosilla et al., 2014). Sampai saat ini ada bukti yang menunjukkan bahwa ukuran mikroba
merupakan faktor penting yang terlibat dalam mengatur NETosis (Branzk et al., 2014), dan itu
mengamati bahwa neutrofil merasakan ukuran mikroba dan secara selektif menginduksi NET
respons terhadap jamur seperti hifa Candida albicans besar dan bakteri seperti
Mycobacterium bovis BCG. Selama NETosis beberapa inti dan sitoplasma
peristiwa harus terjadi untuk memulai NET yang lengkap dan tepat. Pelepasan cepat dari
NET mungkin penting untuk pengendalian infeksi yang efektif, memungkinkan
neutrofil untuk membunuh bakteri yang terperangkap dalam NET melalui fagositosis atau aksi
dari protein mikrobisida.
Selanjutnya, NET mengatur perekrutan neutrofil baik secara tidak langsung melalui CXCL2 dan
langsung melalui up-regulasi ekspresi MAC-1 dan meningkatkan produksi
faktor inflamasi neutrofil seperti IL-6 dan ROS (Merza et al., 2015).
Studi lain telah melaporkan bahwa pelepasan NET menginduksi peningkatan
respon inflamasi melalui aktivasi inflammasome NLRP3 dalam makrofag
(Kahlenberg et al., 2013). Selain itu, paparan neutrofil terhadap resistensi manusia
menghasilkan peningkatan aktivasi NADPH oksidase dan produksi NET, melalui AMPK
aktivasi, dan menginduksi respon inflamasi yang diperburuk pada pasien dengan
cedera (Jiang et al., 2014). Studi lain telah menunjukkan bahwa kerusakan terkait
pola molekuler yang dilepaskan selama cedera hati mendorong pembentukan NET melalui
Jalur pensinyalan TLR/MyD88 dan selanjutnya memulai respons inflamasi
selama penyakit hati (Huang et al., 2015). Secara bersama-sama, hasil ini menunjukkan
bahwa NET memiliki sifat ganda dalam respons bawaan: NET bertindak sebagai
agen antibakteri atau terlibat dalam respon inflamasi yang sebagian membantu untuk
merekrut lebih banyak neutrofil ke situs yang rusak. Aktivasi respon imun
terhadap agen infeksi atau cedera jaringan menyebabkan pelepasan sitokin inflamasi
yang secara bersamaan merangsang NETosis, menghasilkan loop inflamasi umpan yang
berpotensi menyebabkan kerusakan organ.