Topik - 5 Dan 6 - fpls-11-00509.pt - Id

Diterjemahkan dari bahasa Portugis ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.
com
PENELITIAN ASLI
diterbitkan: 15 Mei 2020
doi: 10.3389/fpls.200.00509
Wawasan Unsur Genetik dan Molekul

untuk Pengembangan Tanaman
Transgenik
Marcos Fernando Basso1, Fabrício Barbosa Monteiro Arraes1,2, Maira Grossi-de-Sa1,
Valdeir Junio Vaz Moreira1,2, Marcio Alves-Ferreira3 dan Maria Fatima Grossi-de-Sa1.4*
1Bioteknologi Tanaman, Sumber Daya Genetik dan Bioteknologi Embrapa, Brasilia, Brazil, dua Departemen Biologi
Molekuler dan Bioteknologi, Universitas Federal Rio Grande do Sul, Porto Alegre, Brazil, 3 Departemen Genetika,
Universitas Federal Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil, 4 Departemen Ilmu Genomik dan Bioteknologi, Catholic University
of Brasília, Brasília, Brazil
Perubahan iklim dan eksplorasi area budidaya baru telah berdampak pada hasil minuman
tanaman yang penting kekeringan ekonomi di seluruh dunia. Baik pemuliaan tanaman
konvensional berdasarkan persilangan terencan antara tetua dengan sifat khusus dan
rekayasa genetika untuk mengembangkan alat bioteknologi baru (NBTs) telah
Diedit oleh:
memungkinkan pengembangan kultivar elit denatgannour baru min. Penggunaan NBT ini
Junhua Peng,
Huazhi Rice Bio-Tech Co., Ltd., Cina dalam mencari solusi pertanian telah menjadi terkenal dalam minuman apa tahun terakhir
Diperiksa oleh: karena generasi cepat dari kultivar elit yang memenuhi kebutuhan produsen tanaman, dan
Ahmad Arzani, efisiensi NBT ini terkait erat dengan optimalisasi atau hanya penggunaan ter. elemen.Saat ini,
Universitas Teknologi Isfahan, Iran
Fengqi Li,
drinkapa teknik rekayasa genetika yang digunakan dalam bioteknologi sintetis untuk
Akademi Pertanian Beijing meningkatkan sifat yang diinginkan atau menghilangkan sifat yang tidak diinginkan pada
dan Ilmu Kehutanan, Cinna
tanaman. Namun, fitur, kekurangan, dan kelebihan masing-masing teknik masih belum dapat
* Korespondensi:
dijangkau dengan baik, dan dengan demikian, metode ini belum sepenuhnya dieksploitasi. Di
fatima.grossi@embrapa.br
sini, kami memberikan gambaran singkat tentang platform rekayasa genetika tanaman yang
telah digunakan untuk bukti konsep dan peningkatan sifat agronomi, meninjau elemen
Bagian Khusus:
utama dan proses bioteknologi sintetis, dan, akhirnya sitaman BT manya, menya ekonomi.
Artikel ini dikirim ke
Bioteknologi Tanaman,
Bagian Dari Jurnal
Frontiers in Plant Science Kata kunci: alat bioteknologi baru, transformsi genetik tanaman, kultur jaringan, kaset ekspresi minimal, pengiriman T-
DNA
Ketiga: 17 September 2019
Ketiga: 03 April 2020
Diterbitkan: 15 Mei 2020
BATAR BELAKANG
Kutipan:
Basso MF, Arraes FBM, Perubahan iklim, peningkatan populasi dunia, dan erosi merupakan faktor utama yang menunjukkan kebutuhan
Grossi-de-Sa M, Moreira VJV, untuk meningkatkan adaptasi tanaman, toleransi, dan produktivitas. Ada kebutuhan berkelanjutan untuk kultivar
Alves-Ferreira M dan
baru yang lebih baik beradaptasi dengan bioma yang berbeda dengan toleransi yang lebih baik terhadap
Grossi-de-Sa MF (2020) Wawasan Ke
cekaman biotik dan abiotik serta hasil dan kualitas yang unggul (Arzani dan Ashraf, 2017). Pemuliaan tanaman
Elemen Genetik dan Molekuler untuk
Pengembangan Tanaman Transgenik. konvensional, meskipun prosesnya lambat dan biasanya sulit, telah memberikan kontribusi besar selama
Departemen Ilmu Tanaman. bertahun-tahun. Metode ini telah digunakan terutama untuk menambahkan satu sifat sederhana ke varietas/
11:509. doi: 10.3389/fpls.200.00509 kultivar yang ideal. Sebaliknya, rekayasa genetika telah memberikan komplementer
Perbatasan dalam Ilmu Tanaman | www.frontiersin.org 1 Mei 2020 | Jilid 11 | Pasal 509
Basso dkk. Elemen Molekuler untuk Pengembangan Tanaman Transgenik
alat, memungkinkan pengenalan gen horizontal yang versus pendekatan non-transgenik, kultur jaringan tanaman, dan
diinginkan untuk sifat-sifat yang menarik untuk tanaman hubungan genotipe-phenotipe); dan (v) perspektif masa depan untuk
tanaman. Kemitraan antara alat rekayasa genetika dan meningkatkan sifat agronomi yang diinginkan pada tanaman penting.
program pemuliaan tanaman telah memperbaiki tanaman
yang akurat dan efisien. Sampai saat ini, sifat organism hasil
rekayasa genetika (GM) (GMO) yang paling sukses hanya KONSTRUKSI GEN
terdiri dari dua jenis, Bt dan tahan herbisida, dan alat
transgenik tidak efektif atau tidak diperlukan untuk perbaikan Gen yang Diinginkan (GOI)
antita drinkapa sifat . Meskipun demikian, pengembangan Landasan pengurutan DNA baru dan lebih kuat telah merevolusi
alat bioteknologi baru (NBTs) meningkatkan daya saing sektor penelitian bioteknologi tanaman dalam drinkapa tahun terakhir (
pertanian di pasar internal dan eksternal (Limera dkk., 2017). Shendure dkk., 2017). Tim peneliti yang kuat dan produktif,
Pemuliaan tanaman menggunakan rekayasa genetika telah memungkinkan melalui pengurutan seluruh genom (nuklir, kloroplas, dan DNA
pengembangan minuman apa kultivar elit dengan sifat agronomi yang berbeda. mitokondria), eksom, transkriptom, methylom, miRNA, dan RNA
Banyak spesies tumbuhan telah memiliki genomnya kecil lainnya, serta translatom dalam
dimanipulasi, dan drinkapa asosiasi transformsi spesifik spesies dengan alat bioinformatika yang kuat dan protokol
canggih tersedia. Transformasi genetik dimediasi oleh metode biologi molekuler, telah memperoleh banyak informasi
Agrobacterium tumefaciens, metode biolistik, dan kombinasi dari yang berguna. Dalam konteks ini, elemen rekayasa genetika yang
kedua teknik adalah wajah yang paling umum untuk tak terhitung banyaknya telah mendukung eksplorasi jaringan
memperkenalkan DNA heterolog (Altpeter dkk., 2016). Genom, secara intensif oleh genomik fungsional di drinkapa spesies
sampai saat ini, adalah target utama, bagaimanapun, mengingat tanaman (baik tanaman model maupun tanaman). Fungsi gen
kemungkinan modifikasi genom kloroplas dan keuntungan dari telah terungkap dan, dalam drinkapa kasus, terkait dengan sifat-
pendekatan ini, genom kedua sekarang telah direkayasa (Verma sifat agronomis yang penting. Dengan semua pengetahuan dan
dan Daniell, 2007; Jin dan Daniell, 2015). Alat rekayasa genetika keahlian ini, minuman apa sifat agronomi telah mencapai target
saat ini memungkinkan pengenalan urutan DNA apa pun dari yang mungkin untuk perbaikan, awalnya menggunakan
organisme apa pun, misalnya, gen eksogen yang diminati dan pemuliaan tanaman konvensional yang dibantu oleh penanda
pengatur elemen untuk mendorong ekspresi gen endogen. molekuler dan kemudian dengan rekayasa pendekgenidasa
Terlepas dari metode transformasi, integrasi DNA eksogen ini genetika ber.Ekspresi berlebih dan knockdown gen dengan fungsi
terjadi secara acak dalam genom sebagai tunggal atau ganda. yang terkait dengan phenotype atau sifat agronomi yang
Keacakan penyisipan dan adanya banyak hal dapat menyebabkan diinginkan memungkinkan untuk mengembangkan tanaman
efek yang tidak diinginkan, seperti penyisipan dalam operasi dengan karakteristik yang lebih baik. Saat di,Altpeter dkk., 2016;
penting, yang menghasilkan efek di luar target. Oleh karena itu, Lowder dkk., 2017). Sehubungan dengan asal usul Pemerintah
metode transformasi dan kultur jaringan serta sekuens DNA yang Indonesia, baik metode cisgene (transfer gen antara spesies yang
ada pada vektor biner atau transgen yang akan digunakan dalam dapat disilangkan secara seksual atau spesies yang sama) dan
rekayasa genetika perlu direncanakan dan dioptimalkan secara transgen (antara spesies yang tidak dapat disilangkan secara
khusus untuk spesies atau genotipe yang diinginkan. seksual) kakan yang dapat disilangkan perrenak perrenak yang
digunakan da yang digunakan untuk memiliki efek fungsional
Dalam karya ini, kami telah memberikan gambaran singkat yang sama dengan Pemerintah Indonesia atau menunjukkan
tentang platform bioteknologi tanaman yang telah digunakan ekspresi yang signifikan (Ribeiro dkk., 2017). Khususnya,
untuk mengembangkan bukti konsep (pengujian hipotesis) dan Pemerintah Indonesia sering ditemukan dalam banyak hal
meningkatkan drinkapa sifat agronomi (berjudi 1). Dengan (paralog) dalam genom; oleh karena itu, disarankan untuk
demikian, kami meninjau elemen utama yang digunakan untuk memilih di antara mereka dengan hati-hati berdasarkan kriteria
rekayasa genetika, seperti (i) konstruksi gen (gen yang diinginkan, seperti tingkat ekspresi, struktur gen, dan keberadaan domain
sekuens promotor transkripsi, sekuens terminator transkripsi yang dilestarikan. Selain itu, optimalisasi penggunaan kodon
(TTS), sekuens penambah dan intron, gen singena sele SPs), dan untuk dikotil atau monokotil penting untuk meningkatkan
vektor biner dan alternatif); (ii) metode transformasi tanaman ( efisiensi translasi Pemerintah Indonesia pada tanaman tertentu (
Agrobakteripengiriman T-DNA yang dimediasi, pengiriman DNA Murray dkk., 1989; Barahimipour et al., 2015). Demikian Pula,
yang dimediasi biolistik, metode agrolistik, rekayasa genetika konten GC dari Pemerintah Indonesia dapat meningkatkan
kloroplas, metode alternatif untuk transformasi tanaman, dan tingkat ekspresinya; penggunaan kodon dan kandungan GC juga
teknologi gen bersih), (iii) dan pendekatan untuk mengagensi, merupakan penentu penentu mRNA dan akumulasi protein yang
overpressi RNA [downexpression, overpressi] gen yang lebih tinggi (Sidorenko dkk., 2017; Zhang, 2017). Sebaliknya,
dimediasi , penyetelan miRNA untuk meningkatkan sifat konten GC tinggi di 5kan-UTR (wilayah yang tidak diterjemahkan)
agronomis, regangan palindromik pendek (CRISPR)/CRISPR- dapat mengurangi pemuatan ribosom dan gangguan terjemahan
associated protein-9 nuclease (Cas9) yang dimediasi secara (Kawaguchi dan Bailey-Serres, 2005).
teratur, regulasi transkripsi yang dimediasi CRISPR/dCas9, Selanjutnya, hanya daerah pengkode protein (biasanya disebut
CRISPR-associated protein-9 nuclease, CRISPR RNA berbasis urutan pengkodean atau CDS) dari Pemerintah Indonesia yang
CRISPR-ribonucleoprotein (RNP)]; (iv) masalah utama yang ada dimasukkan ke dalam kaset ekspresi untuk transformasi tanaman.
(transgenik) karena urutan genom lengkap dari daerah pengkode protein
Perbatasan dalam Ilmu Tanaman | www.frontiersin.org dua Mei 2020 | Jilid 11 | Pasal 509
GAMBAR 1 | Pendekatan transformasi genetik tanaman. Alat bioteknologi baru (NBTs) yang terutama menggunakan sistem sekresi tipe IV (T4SS) dariA. tumefaciens, metode
biolistik, atau agrolistik untuk Anda plasmid atau pengiriman kaset ekspresi minimal ke sel tanaman (misalnya, protoplas) atau jaringan (misalnya, kalus atau sumbu
embriogenik, meristem apikal, dan penampang lingkaran daun yang belum matang), dan akhirnya, transformsi genom. panah hitam putus-putus: A. tumefaciensberubah
dengan Anda plasmid; panah ungu: mengubah protoples; panah biru: Agrobakteritransformasi kalus-dimediasi; panah kuning: transformsi biolistik; panah hitam:
transformasi agrolistis; panah hijau: transformsi plastida; ptDNA: plastida genom DNA; danAnda Plasmid: plasmid pemicu tumor.
umumnya berisi minuman apa intron serta urutan ekson, kloning wilayah dkk., 2007). Untuk keberhasilan transkripsi gen apa pun,
panjang penuh sulit karena ukuran wilayah yang besar. Urutannya, urutan kompleks inisiasi transkripsi perlu berikatan dengan protein
urutan berbeda dari urutan transkrip penuh mungkin pada organisme, lain, seperti aktivator atau represor, untuk memicu transkripsi
menghasilkan mRNA dan protein yang tidak diinginkan, dan GOI yang lebih DNA oleh RNA polimerase. Aktivator dan represor adalah
panjang mungkin daripada yang diinginkan, dan GOI yang lebih panjang protein penting untuk mengatur ekspresi gen. TF termasuk
mungkin daripada urutan yang diinginkan. yang lebigu stabada membukh dalam kelas protein penting ini dan memiliki domain
stungenh yang lebih dari mungkin dari lebigu yang membukh yang lebih pengikatan DNA yang akan mengenali bentangan pendek
panjang lebih dari mungkin dikta urutan membilita yang lebigu yang lebih DNA yang disebutcis- elemen biasa (Hernandez-Garcia dan
panjang Namun, di dalam drinkapa kasus, GOI digunakan dalam bentuk tokoh Finer, 2014). inicis-elemen pengatur adalah fungsional yang
tersebut (termasuk intron, ekson, 5kan- dan 3kan-UTRs) karena adanya endogen dilestarikan yang penting untuk mengikat TF spesifik dan
cis-elemen pengatur atau rangkaian penambah yang penting untuk ekspresi, faktor pengaturan lain yang diperlukan untuk memulai, dan
translasi, atau ketepatannya (Gao dkk., 2015; Zhang dkk., 2018). memelihara transkripsi (Hernandez-Garcia dan Finer, 2014).
jumlah dan jenisnyacis-elemen berbeda menentukan
Transkripsi Promotor Urutan pengaturan efisiensi transkripsi yang berbeda pada tingkat
Promotor adalah sekuens DNA yang biasanya panjangnya jumlah transkrip per sel, ekspresi spesifik jaringan atau tahap
300-1500 nt yang terletak di hulu 5 .kan-UTR gen, dan mereka dan aktivasi transkripsi oleh rangsangan (biokin yang kanu
mengandung drinkapa elemen pengatur yang terlibat dalam abiotik), memungkinkan responsungat yang cepat dan dan.
pengaturan spatiotemporal dari inisiasi transkripsi (Yamamoto
Ekspresi semua mRNA pada tumbuhan terus-menerus protein yang menarik untuk disimpan (Li dkk., 2008). Liang dkk. (2019)
dikoordinasikan dengan perubahan ekosistem atau sinyal meningkatkan akumulasi folat dalam biji jagung dan gandum dengan
molekuler apa pun. TF bertindak sebagai pemain utama dalam ekspresi berlebih menggunakan promotor spesifik endosperm untuk
regulasi transkripsi dengan berinteraksi dengan urutan mendorong gen yang bertanggung jawab untuk mensintesis prekursor
promotor. Misalnya, DRE adalah elemen yang responsif terhadap folat pterin dan p-aminobenzoat.
dehidrasi yang merekrut TF (misalnya, DREB1 dan DREB2) yang Namun, ketika ekspresi GOI tingkat tinggi diperlukan untuk mencapai
mengaktifkan gen transkripsi yang terlibat dalam respons dingin fenotipe yang diinginkan (misalnya, protein entomotoksik), penggunaan atau
dan dehidrasi (misalnya,RD29A gen), sedangkan ABRE adalah penemuan promotor spesifik spesies baru yang memberikan akumulasi
elemen responsif ABA yang merekrut TF lain (misalnya, bZIP dan transkrip tinggi sangat diperlukan (Ribeiro dkk., 2017). Promotor sintetik, virus,
AREB) yang mengaktifkan transkripsi gen yang terlibat dalam dan tanaman telah dievaluasi, tetapi hanya ada sedikit sekuens yang tersedia,
respons dehidrasi dan salinitas (misalnya, RD29B gen) ( dan kebanyakan dari mereka telah divalidasi hanya pada satu spesies tanaman
Yamaguchi-Shinozaki dan Shinozaki, 2006). Demikian pula, dan mungkin tidak berfungsi dengan baik pada spesies lain. Selain itu,
elemen MYC/MYB merekrut TF (misalnya, MYC2 dan keluarga peningkatan signifikan dalam transkripsi GOI telah diperoleh dengan alat
MYB) yang mengaktifkan transkripsi gen yang terlibat dalam pengeditan genom menggunakan nuklease yang dinonaktifkan yang
toleransi stres biotik dan abiotik (misalnya,RD22 gen) (Ambawat digabungkan dengan domain aktivasi dan dipandu ke promotor. Teknologi
dkk., 2013). Domain kotak GC, kotak CCAAT, dan kotak TATA pengeditan genom juga dapat digunakan untuk mengedit atau menyisipkancis
biasanya terletak kira-kira 10–110 nt di bagian hulu dari situs awal -elemen pengatur menjadi urutan promotor untuk memodulasi tingkat ekspresi
transkripsi (TSS), dan pengikatan TF spesifik memicu Pemerintah Indonesia (Wolter dan Puchta, 2018). Informasi lebih lanjut tentang
pembentukan kompleks transkripsi. Dengan demikian, TSS penggunaan teknologi pengeditan genom untuk bertindak pada urutan
bertanggung jawab untuk menentukan situs yang tepat di promotor dirinci di bawah ini.
promotor di mana transkripsi harus dimulai, menghasilkan
transkrip primer (mRNA primer), dan awal dari 5kan-UTR wilayah
transkrip primer ini. Urutan Terminator Transkripsi (TTS)
Keberhasilan memiliki sifat-sifat agronomi melalui ekspresi
berlebihan Pemerintah Indonesia secara langsung berkaitan dengan TTS adalah urutan yang dilestarikan yang terdiri dari cis-elemen
tingkat ekspresi Pemerintah Indonesia pada tahap tertentu, sebagai pengatur hilir daerah pengkode protein (mRNA 5kan- atau 3kan
respons terhadap stimulus atau dalam jaringan tanaman tertentu. -UTR), yang dikenali oleh mesin transkripsi sebagai sinyal
Dengan demikian, pilihan jaksa meningkatkan efisiensi NBT dan penghentian transkripsi dan akibatnya menginduksi pemisahan
aksesibilitas sifat-sifat yang kuat. Saat ini, promotor sintetik, virus, mesin ini dari DNA (Loke et al., 2005). TTS yang efisien dikaitkan
atau tanaman dengan konstitutif, yang diinduksi stres (biotik dan dengan peningkatan tingkat transkripsi, poliadenilasi mRNA (poli-
abiotik), jaringan spesifik dan fitur spesifik tahap perkembangan A), dan penghentian transkrip RNA. Sinyal Poly-A di 3kan-UTR gen
tersedia untuk mendorong ekspresi berlebihan pemerintahmanko tanaman terdiri dari tiga komponen utama: jauh elemen hulu (
dan abiotik di minumanBasso dkk., 2020). Ekspresi berlebih FUE, urutan kaya urasil) terletak sekitar 100 nt di hulu situs poli-A;
Pemerintah Indonesia yang didorong oleh promotor spesifik jaringan di dekat elemen hulu (NU, urutan kaya adenin) terletak sekitar 25
atau stadium yang diinduksi stres mengurangi kemungkinan penalti nt di hulu situs poli-A; danCS (situs pembelahan), yaitu
hasil pada tanaman dan efek negatif pada organisme non-target. dinukleotida YA (CA atau UA) yang terletak di dalam wilayah kaya
Misalnya, ekspresi berlebih yang kuat dan konstitutif dari TF, AREB, urasil yang terletak di hilirFUE dan NU (Tian dan Graber, 2012).
dan DREB, menghasilkan keterlambatan pertumbuhan atau penalti poliadenilasi mRNA sangat penting untuk pemrosesan pasca
hasil yang signifikan di beberapa tanaman (misalnya, kapas, tebu, transkripsi (penyambungan), stabilitas, ekspor nuklir-ke-
gandum, dan jelai) (Morran et al., 2011). Namun, promotor yang dapat sitoplasma, dan translasi mRNA. TTS yang paling berhasil
diinduksi kekeringan, termasuk WRKY, NAC6, LEA3, RD21, RD27, dan digunakan pada tanaman adalah T-nos (panjang 254 nt, dari
RD29, telah berhasil digunakan untuk tujuan ini dan biasanya sintase nopalin gen dari A. tumefaciens), T-35S (panjang 226 nt,
digunakan untuk mendorong Pemerintah Indonesia yang terkait dari Virus mosaik kembang kol 35S terminator), rbcS1 atau rbcS-
dengan toleransi garam atau kekeringan (Agarwal et al., 2017). E9 (panjang 291 nt, dari ribulosa-1,5-bifosfat karboksilase gen,
Demikian pula, promotor yang diinduksi patogen tanaman (misalnya, subunit kecil, dari Pisum sativum), dan T-ocs (panjangnya 196 nt;
CYP76M7, pGRMZM2G174449, PR1b, dan GST promotor gen) sangat dari gurita sintase gen dari A. tumefaciens). Namun, terminator
penting untuk meningkatkan ketahanan terhadap penyakit, spesifik tanaman dan gen asli juga dapat digunakan dalam
pengelolaan penyakit tanaman yang efektif dan pencegahan beberapa kasus, misalnya, untuk transkripsiasam asetohidroksi
hukuman hasil (Vijayan et al., 2015; Goto dkk., 2016;Yang dkk., 2017). sintase (ahas) gen sebagai gen penanda yang dapat dipilih (
Dalam konteks lain, promotor yang diinduksi penuaan (misalnya, SAG29) Aguiar dkk., 2012). Selain itu, juga diamati bahwa dua urutan
mungkin menarik untuk mengarahkan ekspresi Pemerintah Indonesia pada terminator secara bersamaan (misalnya, T-nos + T-35S) dapat
tahap akhir perkembangan tanaman, misalnya, untuk mengarahkan meningkatkan tingkat transkripsi (Diamos dan Mason, 2018;
dekonstruksi dinding sel rumput untuk meningkatkan kecernaan enzimatiknya Yamamoto dkk., 2018). Beyene dkk. (2011)menyarankan bahwa
dan, dengan demikian, hasil mereka etanol lignoselulosa. Demikian pula, TTS ganda meningkatkan stabilitas ekspresi transgen dengan
promotor khusus endosperm mungkin menarik untuk ekspresi GOI dalam biji- menyebabkan penghentian transkripsi yang lebih efisien dan
bijian untuk meningkatkan kualitas nutrisi, ukuran dan bentuk biji-bijian, atau mengurangi pembungkaman gen pascatranskripsi (PTGS) dari
toleransi stres atau untuk menghasilkan
gen sasaran. Demikian pula,Diamos dan Mason (2018) menunjukkan bahwa vulgar dan 5kan-UTR urutan (urutan G-bebas; ? urutan Virus mosaik
menggabungkan dua atau tiga terminator secara bersamaan meningkatkan tembakau meningkatkan aktivitas promotor 35S. Benfey dkk. (1990)
level ekspresi hingga 25 kali lipat. menunjukkan bahwa wilayah hulu dari -343 hingga - 46 dari promotor
35S juga bertindak sebagai urutan penambah, dan hasil ini kemudian
dikonfirmasi oleh tingkat ekspresi yang tinggi ketika gen didorong
Urutan Enhancement dan Enhancer oleh promotor yang ditingkatkan 35S (Beringer et al., 2017). Davies
yang Dimediasi Intron dkk. (2014)diidentifikasi dan menunjukkan bahwa Virus basil tebu
Intron adalah urutan non-coding hadir dalam transkrip primer yang enhancer meningkatkan tingkat transkrip pada jagung transgenik dan
dihapus oleh splicing sebelum terjemahan dari urutan coding (ekson). bahwa banyak salinan tandem lebih efektif daripada satu salinan
Namun, beberapa sekuens intron memiliki fungsi tambahan yang dalam meningkatkan transkripsi. Demikian pula,Maiti dkk. (1997)
berguna dalam rekayasa genetika, seperti bertindak dalam menunjukkan bahwa promotor FLt (dari Virus mosaik Figwort) dengan
peningkatan transkripsi yang dimediasi intron dan meningkatkan domain penambah ganda meningkatkan tingkat transkrip dua kali
efisiensi translasi.Laksa, 2017). Selain itu, beberapa intron dapat lipat dibandingkan dengan FLt dengan domain penambah tunggal.
dikaitkan dengan ekspresi gen atau transgen endogen yang kuat, Secara keseluruhan, sekuens intron dan penambah memiliki potensi
konstitutif, dan spesifik tahap perkembangan.Liao dkk., 2013). Intron besar untuk aplikasi dalam rekayasa genetika, tetapi rendahnya
ini mengandung motif tertentu (misalnya, TTNGATYTG) dan harus jumlah studi validasi yang mendukung penggunaan sekuens ini dalam
digunakan dalam orientasi yang benar, di dalam 5kan-UTR, dan di kombinasi dengan promotor tipikal atau pada tanaman tertentu telah
sebelah TSS (Gallegos dan Rose, 2015; Rose et al., 2016). Gallegos dan berkontribusi pada penggunaannya yang terbatas dan tidak pasti.
Rose (2017) menunjukkan peran tak terduga dari intron ini dalam
menentukan TSS baru. Pada monokotil, penyambungan diperlukan Penanda yang Dapat Dipilih
untuk menghapus intron ini dari transkrip utama, sedangkan, pada Tantangan transformasi genetik adalah memasukkan DNA yang
dikotil, penyambungan tidak penting (Clancy dan Hannah, 2002). diinginkan ke dalam genom inti sel dan kemudian memilih sel yang
ditransformasi ini dan mempotensiasi regenerasinya. Seleksi ini
NS Adh1, Sh1, Bz1, Hsp82, UU1, dan celahA1 intron dari gen jagung terjadi melalui penambahan agen selektif kein vitro media kultur
atau padi adalah yang paling umum digunakan untuk meningkatkan (misalnya higromisin, kanamisin, geneticin, glifosat, glufosinat-
tingkat transkripsi pada monokotil, sedangkan rbcS, ST-LS1, Ubq3,Ubq10, amonium, dan imazapyr) diikuti dengan beberapa langkah subkultur
PAT1, dan atpk1 intron dari petunia, kentang, atau dan penggunaan hormon. Seleksi dimulai setelah periode kokultur
A. thaliana gen adalah yang paling umum di dikotil (Gallegos dan dalam kegelapan atau cahaya redup, yang dapat ditingkatkan secara
Rose, 2015; Laksa, 2017). Misalnya,Ubi1 intron (panjang 520 nt bertahap untuk mempotensiasi seleksi (mengurangi jumlah
dan diisolasi dari Ubiquitin 1 gen jagung) secara luas digunakan pelepasan) dan mengurangi oksidasi jaringan (Basso dkk., 2017).
untuk meningkatkan transkripsi dariUbi1 promotor dalam Sebagian besar spesies tanaman atau genotipe memiliki rekomendasi
monokotil transgenik (misalnya, tebu, beras, sorgum, dan Setaria yang telah ditetapkan sebelumnya untuk agen selektif terbaik untuk
viridis). Selain itu,Ubq10 promotor (634-1104) telah ditingkatkan meningkatkan seleksi dan regenerasi dan untuk meningkatkan
oleh Ubq10 intron (panjang 64 nt, dari poliubiquitin 10 gen dari A. efisiensi transformasi. Misalnya, untuk transformasi tebu, glufosinat-
thaliana) dalam dikotil transgenik (misalnya, kedelai dan A. amonium dan geneticin direkomendasikan (Dong dkk., 2014; Basso
thaliana). Strategi tambahan berdasarkan penyisipan intron ke dkk., 2017); untuk kapas dan kedelai, imazapyr (Li dkk., 2017; Ribeiro
dalam daerah pengkode protein penanda yang dapat dipilih dkk., 2017); dan untukSetaria viridis dan S. miring, higromisin (Van
(misalnya,bar / tepuk dan hptII) dan gen reporter [misalnya, Eck, 2018; Santos dkk., 2020). Glufosinate-amonium sangat baik untuk
protein fluoresen hijau (GFP)] berfungsi untuk menghindari A. thaliana, terutama karena kepraktisan seleksi in vivo (melalui
terjemahan pada prokariota; NSST-LS1 (dari ST-LS1gen kentang) penyemprotan tanaman dengan konsentrasi agen ini yang sudah
dan ADH1 (dari alkohol dehidrogenase-1 gen jagung) intron ditentukan). Hygromycin juga merupakan agen selektif yang baik
adalah yang paling umum digunakan untuk tujuan ini di untukA. thaliana, tetapi penyaringan benih harus dilakukan in vitro,
monokotil dan dikotil. yang membuat seleksi lebih melelahkan (Harrison et al., 2006).
Tidak seperti intron, enhancer adalah urutan DNA non-coding yang Dengan demikian, memilih gen penanda terbaik untuk digunakan
biasa ditemukan dalam urutan promotor hulu TSS atau di 5kan- atau 3 pada spesies tanaman yang diinginkan adalah salah satu langkah
kan-UTR; mereka dapat mengikat beberapa TF untuk mengaktifkan pertama sebelum memulai desain dan sintesis vektor transformasi.
ekspresi gen yang terletak di hulu atau hilir. Selain itu, enhancer Efisiensi seleksi dapat ditingkatkan dengan menggunakan promotor
menampilkan motif pengikatan TF yang dilestarikan; mengatur spesifik spesies yang kuat (misalnya, promotor CaMV 35S dalam
ekspresi RNA penambah, aksesibilitas kromatin, dan modifikasi dikotil, beras atau jagung ubiquitin, atau promotor aktin dalam
histon; telah mengurangi tingkat metilasi DNA; dan secara fisik monokotil), penyisipan urutan Kozak yang dioptimalkan sebelum
berinteraksi dengan gen target mereka (Weber et al., 2016). Misalnya memulai ATG, dan penggunaan kodon yang dioptimalkan dalam gen
jagungHepta-ulangi penambah terletak 100 kb di hulu penguat1 gen penanda seleksi.
meningkatkan ekspresinya (Belele et al., 2013), sementara penambah Pemilihan tanaman transgenik didasarkan pada produk gen (mRNA dan
52 nt di 3kan-UTR dari PEMBONGKARAN DIRI 5G gen sangat penting protein/enzim) yang biasanya memberikan ketahanan terhadap agen
untuk peningkatan ekspresi gen ini dalam tomat (Zhang dkk., 2018). selektif (mis. batang atau menepuk gen memberikan resistensi terhadap
Mitsuhara dkk. (1996)menunjukkan bahwa intron pertama dari gen glufosinat-amonium, nptII gen menganugerahkan resistensi terhadap
untuk phaseolin dari Faseolus geneticin atau kanamisin, hptII gen memberikan resistensi
untuk higromisin, cpt-cp4 epsps menganugerahkan ketahanan terhadap glifosat, Aplikasinya beragam dan mencakup penyaringan awal sel atau
dan direkayasa ahas atau juga gen menganugerahkan resistensi terhadap tanaman yang beregenerasi untuk membedakan transgenik dari
imidazolinon, sulfonilurea, dan kelas herbisida triazolopyrimidine). Seleksi positif nontransgenik, reporter dalam uji agroinfiltrasi dan ekspresi
terjadi ketika penanda yang dapat dipilih memberikan keuntungan selektif pada transien, penyaringan penekan peredam RNA, menentukan
sel yang ditransformasikan tanpa menyebabkan cedera atau kematian sel yang lokalisasi subseluler (misalnya, fusi protein yang diminati ke
tidak bertransformasi, sedangkan seleksi negatif terjadi melalui penghambatan protein reporter dan deteksi menggunakan mikroskop confocal
pertumbuhan dan kematian sel yang tidak bertransformasi. atau fluoresensi), memeriksa tingkat ekspresi gen (misalnya,
NS uidA/gus (β-glukuronidase), priaA (fosfomanosa evaluasi urutan promotor atau fusi ke protein yang diinginkan),
isomerase), xylA (xilosa isomerase), PTXD (fosfit dan perdagangan protein intraseluler. Selain itu, penandaanoksidoreduktase),
dan ANJINGR1 (2-deoksiglukosa-6-fosfat gen endogen dengan protein reporter (misalnya, GFP danfosfatase) gen yang diisolasi
dari mikroorganisme adalah salah satu penanda utama untuk seleksi positif dalam alat
LUC) menggunakan kultur jaringangenom
pengeditan tanaman
baru (Izawati dkk., 2015
sedang dieksplorasi
; Nahampun dkk., 2016). Sebaliknya,nptII, hptII, dan CmR gen adalah
untukbeberapa
mendukung contoh penandafungsional
studi genomik seleksi negatif yang
(Fetter et al., 2015). NS
memberikan resistensi terhadap antibiotik PDS Gen telah banyak digunakan sebagai bukti konsep untuk sistem
pengiriman dsRNA topikal pada tanaman, termasuk struktur nano dan
agen penstabil RNA dan kompleks dsRNA dalam
(genetisin/kanamisin, higromisin, dan kloramfenikol, nanopartikel; pembungkaman gen berbasis RNAi pada tanaman transgenik; masing-
masing) yang memblokir aktivitas ribosom dan menghambat protein pembungkaman gen yang diinduksi virus (VIGS); dan
perpaduan. Kekhawatiran utama penggunaan penanda seleksi ini pengeditan genomChen dkk., 2018; Naim dkk., 2018).
adalah terjadinya transfer gen horizontal ke organisme non- GangguanPDSgen biasanya menghasilkan albinisme dan
target dan potensi toksisitas terhadap organisme yang fenotipe kerdil dengan merusak biosintesis klorofil,
mengkonsumsi tanaman transgenik ini. karotenoid, dan giberelin.Qin dkk., 2007).
Penanda seleksi yang memberikan toleransi tinggi terhadap Enhanced GFP (eGFP) dari ubur-ubur equorea victoria adalah versi
herbisida tertentu, seperti: batang (atau menepuk), ahas (atau juga), mutasi dari GFP; itu berbeda dalam beberapa asam amino yang
dan cpt-cp4 epsps (atau aroA) gen, telah banyak digunakan untuk menghasilkan fluoresensi yang lebih tinggi, dan panjang gelombang
memilih tanaman dengan genom nuklir transgenik, terutama karena eksitasinya adalah 489 nm dan emisi 509 nm. Saat ini, eGFP banyak
tingkat pelepasannya yang relatif rendah. Dalam transformasi genom digunakan, terutama sebagai reporter untuk menemukan dan memvalidasi
kloroplas,aadA gen (streptomisin 3kan-adenylyltransferase), yang sekuens promotor baru, untuk menyaring sel yang diubah atau untuk
memberikan resistensi terhadap spektinomisin dan streptomisin, menyatu dengan protein yang diinginkan. Protein reporter lain yang
banyak digunakan untuk seleksi kloroplas transgenik. Namun, berasal dari mutan GFP dengan spektrum fluoresensi berbeda juga
beberapa strategi telah dikembangkan untuk memulihkan tanaman diketahui, sepertikuning, biru(BFP), dan protein fluoresen cyan (CFP).
transgenik bebas penanda, meskipun ada keterbatasan dan efisiensi Misalnya, YFP digunakan dalam uji bimolecular fluorescence
rendah. Strategi kotransformasi, yang menggunakan dua vektor biner Complementation (BiFC) untuk mempelajari interaksi molekuler, sementara
yang berbeda (membawa GOI dan penanda seleksi secara terpisah) CFP digunakan untuk memantau proses fisiologis, memvisualisasikan
diikuti dengan langkah-langkah segregasi untuk eliminasi transgen lokalisasi protein, dan mendeteksi ekspresi transgen.
yang mengandung penanda seleksi, telah digunakan tetapi kesamaan, uid gen mengkodekan hidrolisaβ- glukuronidase (
menunjukkan efisiensi yang sangat rendah (Yau dan Stewart, 2013). enzim GUS), yang salah satu substrat histokimianya adalah X-Gluc
Selain itu, kotransformasi dengan satu vektor biner yang (5-bromo-4-chloro-3-indolylbeta-D-glucuronic acid,
mengandung dua T-DNA atau satu T-DNA dengan dua batas kanan/ cyclohexylammonium salt). Ekspresi konstitutif atau transien GUS
kiri telah digunakan untuk secara independen mentransfer dan menghasilkan degradasi X-Gluc, menghasilkan asam glukuronat
mengintegrasikan penanda GOI dan seleksi ke dalam genom. yang tidak berwarna dan endapan biru yang terlihat. Gen ini juga
Rekombinasi situs spesifik, teknik transposon, seleksi positif-negatif banyak digunakan dalam rekayasa genetika karena kemudahan
dengan sistem kotransformasi, dan pengeditan genom adalah contoh penggunaannya (misalnya, mengekspos jaringan tanaman
teknik yang digunakan untuk menghilangkan penanda seleksi dari transgenik ke substrat X-Gluc dan menginkubasi sampel
tanaman transgenik (Yau dan Stewart, 2013). semalaman pada suhu 37◦C), cepat (~24 h) deteksi, akurasi yang
relatif tinggi dan kemudahan pengamatan dan interpretasi.
Namun, aktivitas GUS biasanya diukur atau divisualisasikan dalam
Gen Reporter Eksogen dan Endogen jaringan yang diambil dari tanaman transgenik dan diekspos ke
buffer yang mengandung substrat X-Gluc.
Protein reporter digunakan dalam rekayasa genetika untuk memfasilitasi NS lacZ gen, yang mengkodekan enzim -galaktosidase dan
©
studi biologi molekuler dan meminimalkan manipulasi tanaman. Untuk digunakan secara luas sebagai reporter dalam vektor kloning
strategi ini, fitur seperti kemudahan penggunaan, toksisitas sel rendah, (misalnya, pGEM -T vektor mudah; Promega) dengan substrat X-Gal
R
ketahanan, dan sinyal tinggi penting untuk keberhasilan. Reporter eksogen (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside), juga telah diuji
yang paling banyak digunakan adalah GFP (atau eGFP),betaglucuronidase ( pada tanaman. Jika gen berhasil dikloning ke dalam beberapa situs
uid/GUS), luciferase (LU), protein fluoresen kuning (YFP), dan protein kloning (MCS) dari vektor-vektor ini,lacZ gen dipotong, dan dalam
fluoresen merah (RFP, mCherry atau DsRed2), sementara fitoena transkrip -galaktosidase diproduksi. Setelah kloning, vektor
desaturase (PDS) adalah gen reporter endogen yang paling banyak ditransfeksi menjadi kompetenEscherichia coli, dan sel-sel yang
digunakan pada tanaman untuk mengevaluasi uji RNAi. diubah dilapisi pada media selektif yang mengandung
antibiotik dan X-Gal. Koloni bakteri berwarna biru mengandung DNA tanpa Dua contoh lain, ConA dan Endochitinase A C-terminal SPs dari
fragmen yang diinginkan (vektor kosong), sedangkan koloni berwarna Canavalia ensiformis dan Tembakau Nicotiana, protein target ke
putih menunjukkan kloning yang berhasil. vakuola, sedangkan ARA12 dari protease serin mirip subtilisin dari
A. thaliana menargetkan protein ke apoplas. Singkatnya, ada
banyak SP yang diketahui dengan beberapa fitur spesifik yang
Sinyal Peptida (SPs) untuk Menargetkan telah divalidasi untuk menargetkan protein heterolog ke organel
Protein ke Organel Tertentu yang berbeda di beberapa spesies tanaman.Ng dkk. (2016)
Setelah DNA, mRNA diproses dengan cara splicing, diangkut ke menegaskan bahwa fusi SPs (misalnya, citrine-NLS dan citrine-
sitoplasma, dan ditranslasi oleh ribosom, yang bebas atau peroxisomal targeting signal) dengan protein yang menarik
berasosiasi dengan retikulum endoplasma (ER). Dua target dasar memfasilitasi penargetan mereka setelah pengiriman
diketahui: jalur pascatranslasi (menargetkan nukleus, intraseluler, dan Shen dkk. (2017)mengembangkan peptida
mitokondria, kloroplas, RE, dan peroksisom) dan jalur kotranslasi transit yang dioptimalkan RC2 untuk penargetan efektif beragam
atau sekretori (menargetkan RE, aparatus Golgi, lisosom, protein asing ke dalam kloroplas beras. Menariknya,Hou dkk.
membran plasma, dan vesikel yang disekresikan).Lee et al., 2014). (2019)menunjukkan bahwa fusi protein menangis dengan E. coli
Setelah protein disintesis dalam sitoplasma, mereka dapat protein pengikat maltosa (MBP) meningkatkan aktivitasnya
ditargetkan oleh SPs, sinyal lokalisasi nuklir (NLS; misalnya, dari melawan cacing akar jagung barat, mungkin karena peningkatan
antigen-T besar SV40 dan protein nukleoplasmin) atau domain kelarutan fusi MBP-Cry8Hb di cacing usus tengah.
transmembran ke tempat-tempat di mana mereka akan
bertindak. Sebaliknya, protein tanpa SP disimpan secara Vektor Biner dan Alternatif
permanen di sitoplasma. SP pendek (~7–36 asam amino), Sejak penjelasan sistem sekresi tipe IV (T4SS) yang terlibat dalam
hidrofobik, dan residu asam amino bermuatan positif yang Agrobakteriumtransformasi tanaman yang dimediasi, beberapa protokol
mengandung ujung-ujung C-terminal sinyal peptidase; mereka transformasi genetik yang ditingkatkan berdasarkanAgrobakterium atau
hadir sebagian besar di N-termini protein dan kadang-kadang di metode agrolistik telah ditetapkan untuk beberapa spesies tanaman.
C-termini mereka. Selain itu, tergantung pada organel mana yang KarenaAnda plasmid sangat besar (~panjangnya 200 kb), sulit ditangani in
ditargetkan (misalnya, kloroplas, vakuola, atau mitokondria; vitro, memperumit penghapusan atau penyisipan DNA apa pun ke situs
bukan RE), protein mungkin memiliki dua atau lebih SP ( tertentu. Selain itu, tulang punggung mereka direkayasa untuk
Christensen et al., 2005). SPs ini dikenali oleh mesin impor yang memungkinkan replikasi di keduanya
secara selektif mengangkut protein ke organel dan memediasi E. coli dan Agrobakterium sp. menggunakan asal replikasi yang
translokasi intraseluler mereka melalui membran. Kemudian, memungkinkan tinggi (misalnya, ColE1 forE. coli) atau rendah
dalam banyak kasus, SP dipecah dari protein oleh peptidase (misalnya, pVS1 untuk A. tumefaciens) jumlah salinan per sel bakteri.
spesifik organel setelah mencapai tujuan akhirnya. Sebaliknya,datanglah kemari gen yang diperlukan untuk transfer T-
SPs saat ini dalam permintaan bioteknologi yang besar untuk DNA dialokasikan ke kointegrasi Anda plasmid atau berlabuh di
menargetkan enzim heterolog atau protein yang menarik bagi Agrobakterium genom (Gelvin, 2010). Strategi lain, yang saat ini
organel tanaman tertentu untuk meningkatkan jumlah protein per sel kurang digunakan, didasarkan pada plasmid kecil "perantara" atau
dengan mengurangi efek sitotoksiknya. Selain itu, penggunaan SPs "shuttle" yang direkayasa untuk memasukkan sekuens DNA yang
dengan enzim heterolog dapat berkontribusi pada penargetan yang diinginkan ke dalam T-DNA dari plasmid endogen.Anda plasmid.
efisien dan karenanya meningkatkan aktivitasnya di organel yang Selain itu, sistem biner telah ditingkatkan untuk meningkatkan
diinginkan. Misalnya, enzim EPSPS tanaman bekerja melalui jalur efisiensi transformasi genetik dari spesies tanaman yang berbeda.
shikimate dalam biosintesis asam amino aromatik, khususnya di Pengembangan vektor superbiner menyimpan tambahandatanglah
kloroplas. Sebaliknya, EPSPS heterolog tahan glifosat (dari kemari gen dan vektor terner yang mengandung plasmid pembantu
Agrobakterium sp. strain CP4) secara efisien menargetkan kloroplas tambahan dengan peningkatan jumlah datanglah kemari salinan gen
kedelai dalam kombinasi dengan peptida transit kloroplas petunia N- telah menunjukkan hasil yang menjanjikan (Anand dkk., 2018; Che
terminal (CTP). NSctp-cp4 epsps fusi meningkatkan penargetan enzim dan Anand, 2018). Pengurangan panjang T-DNA dan optimalisasi
ke kloroplas dan ketahanan tanaman transgenik terhadap glifosat ( komponen merupakan persyaratan penting untuk mencegah
Hammer et al., 2013). Demikian pula, efisiensi tinggi nuklease yang kerusakan selama transfer dan untuk meningkatkan efisiensi
digunakan dalam pengeditan genom tanaman tergantung pada transformasi dan stabilitas transgen. Memang, desain, sintesis, dan
lokalisasi nuklirnya, dan untuk ini, ekspresi heterolognya dilakukan perakitan vektor transformasi biner atau alternatif bukanlah kegiatan
dengan fusi NLS di ujung terminal-N dan terminal-C (Liang dkk., 2017). yang cepat, sederhana, atau murah. Jadi, vektor dengan MCS atau
Sebaliknya, KDEL (H6KDEL) SP terletak di ujung terminal-C dari situs enzim restriksi yang mengapit unit transkripsi utama saat ini
struktur asam amino protein dan mencegah sekresi protein dari RE. sedang direkayasa. Strategi ini memungkinkan urutan kepentingan
Dengan cara ini, secara luas digunakan untuk menargetkan protein (misalnya, pertukaran promotor, terminator, GOI, atau gen penanda
heterolog atau antibodi terhadap ER tanaman biopabrik (misalnya, seleksi) diubah dan vektor digunakan kembali. Alternatif lain yang
selada, tembakau, danBenthamian Nicotiana). Demikian pula, saat ini diadopsi adalah penggunaan vektor biner yang dioptimalkan,
penggunaan N-terminal -zein proline-rich sequence, (VHLPPP)8, untuk sumber terbuka, dan bebas untuk dioperasikan. Misalnya, vektor
menargetkan protein heterolog ke ER dan protein meningkatkan pCAMBIA adalah vektor biner yang ditingkatkan yang digunakan
akumulasi protein tubuh dalam biji (Torrent dkk., 2009). untuk transformasi tanaman.
©
R
teknologi, asal replikasi dengan jumlah salinan tinggi di E. coli, situs bertindak dalam jaringan tanaman dan perilaku spesifik spesies (Ascenzi et al., 2003);
pembatasan yang nyaman untuk pertukaran urutan, beberapa penanda dalam beberapa kasus, mereka dapat menghasilkan tingkat ekspresi yang lebih rendah
yang dapat dipilih untuk bakteri dan tanaman, metode untuk membangun (Breyne dkk., 1992) atau mungkin tidak memberikan stabilitas seseorang (Schöffl dkk.,
fusi gen reporter (misalnya, gus dan gfp), dan MCS yang memadai untuk 1993).
menyisipkan gen yang diminati dan promotor populer. Namun, vektor
tradisional ini juga memiliki beberapa kelemahan penting; misalnya,
komponennya mungkin tidak dioptimalkan untuk kasus tertentu (misalnya, METODE TRANSFORMASI
penggunaan kodon, kandungan GC, atau urutan Kozak yang optimal untuk
spesies tanaman tertentu) Pengiriman T-DNA yang Dimediasi Agrobacterium
atau komponennya mungkin tidak ideal untuk tujuan tertentu Agrobakterium sp. (Rhizobiaceae keluarga) adalah gram-(misalnya,
promotor, terminator, penanda seleksi, atau gen reporter). bakteri negatif yang mampu menginduksi crown gall Untuk mengatasi
keterbatasan ini, para peneliti lebih memilih untuk (A. tumefaciens dan A.Vitis), penyakit akar rambut (A. rizogen), dan empedu
mensintesis vektor baru, sederhana, dan dioptimalkan untuk setiap kasus tebu (A. rubi) pada beberapa spesies tumbuhan. interaksi yang kompatibel
tertentu. Saat ini, beberapa perusahaan menyediakan layanan sintesis dan antaraA. tumefaciens dan tanaman inangnya menghasilkan pengiriman T-
kloning, menyediakan vektor yang dioptimalkan dalam 2–4 bulan, tetapi DNA yang dimediasi oleh T4SS ke dalam sel tanaman. Senyawa fenolik
harganya tetap tinggi. dengan berat molekul rendah, asam amino, dan gula yang ada di tempat
Identifikasi daerah genom dengan tingkat ekspresi tinggi dapat infeksi berfungsi sebagai molekul pemberi sinyal utama untuk pengenalan
memberikan urutan DNA untuk rekayasa batas kaset ekspresi minimal dan aktivasi virulensi.datanglah kemari) gen. Selain itudatanglah kemari
(MC). Penyisipan transgen yang direkayasa ke dalam genom tanaman gen yang terletak di genom bakteri, yang terlibat dalam proses infeksi
dapat terjadi dengan spesifisitas yang lebih besar di titik-titik panas awal, enam kelompok gen dianggap penting untuk T4SS (datanglah kemari
ini, sehingga meningkatkan tingkat transkripsi dan meningkatkan NS, datanglah kemariB,datanglah kemariC, dan datanglah kemariD) atau
stabilitas GOI dengan mengurangi efek posisi. Dalam beberapa tahun meningkatkan efisiensinya (datanglah kemariDan dan datanglah kemariG).
terakhir, pembuatan beberapa peristiwa independen dan pemilihan Dengan demikian, T-DNA yang berasal dari tumor (Anda) - atau akar (
peristiwa dengan tingkat ekspresi tertinggi lebih disukai daripada tertawa)-inducing plasmid ditranslokasi dari sitoplasma tanaman ke
mengidentifikasi hot spot dan secara langsung menyisipkan dengan nukleus dan diintegrasikan secara acak dengan rekombinasi ke dalam DNA
rekombinasi spesifik lokasi. Selain itu, vektor biner yang membawa T- genom. Urutan T-DNA biasanya dibatasi oleh dua pengulangan 25 bp
DNA yang direkayasa untuk penyisipan berdasarkan transposisi telah langsung (batas T-DNA kiri dan kanan), yang penting untuk pengenalan T-
dikembangkan untuk transformasi tanaman. Fragmen T-DNA yang DNA olehdatanglah kemariD dan datanglah kemariprotein E dan untuk
panjang ini biasanya mengandung (i) anAc-transposase (Tpa) gen pelepasan konsekuennya dari Anda plasmid. Kemudian, T-DNA ditransfer
yang bertanggung jawab untuk inisiasi transposisi, (ii) MC yang ke dalam inti tanaman oleh protein virulensi terkait DNA untai tunggal
membawa elemen spesifik yang diapit oleh motif disosiasi (ssDNA) yang dikodekan olehAgrobakterium (Gelvin, 2010). Akhirnya,
transposabel (SM), dan (iii) gen penanda seleksi. T-DNA disampaikan ekspresi dan translasi onkogen yang ada dalam T-DNA dalam sel tanaman
olehA. tumefaciens atau biolistik, dan enzim Tpa diterjemahkan yang ditransfeksi secara langsung mengganggu ekspresi gen dan
(sementara atau setelah integrasi ke dalam genom tanaman), biosintesis fitohormon.
berikatan dengan SM motif dan mendorong integrasi spesifik lokasi
MC ke dalam genom tanaman. kemudian,Tpa dan gen penanda yang Sebelum metode ini dikembangkan, rekayasaAnda plasmid
dapat dipilih dikeluarkan dari genom tanaman menggunakan memungkinkan keberhasilan penggunaan Agrobakterium sp.
segregasi Mendel, sementara MC dipertahankan secara stabil setelah sebagai sistem kepentingan bioteknologi, memungkinkan
transposisi (Jin dkk., 2003). Dengan demikian, strategi ini mungkin pengiriman urutan DNA ke sel-sel totipoten di beberapa spesies
tidak cocok dengan tanaman yang diperbanyak secara vegetatif. tanaman. Setelah coinokulasi dan beberapa tahap seleksi dan
Meskipun menggunakan vektor transposisi menghasilkan efisiensi regenerasi sel transgenik, dimungkinkan untuk mencapai
transformasi yang lebih rendah, frekuensi integrasi salinan tunggal tanaman transgenik non-kimerik dengan karakteristik agronomi
yang rendah, dan jumlah peristiwa transformasi bebas tulang yang diinginkan. Selain itu, kemajuan generasi meningkatkan
punggung yang rendah dibandingkan dengan T-DNA konvensional, integrasi T-DNA, dan ekspresi transgen menjadi semakin stabil.
tingkat ekspresi transgen yang disisipkan oleh transposisi yang lebih Ribeiro dkk., 2017; Ribeiro dkk., 2020).
tinggi telah diamati (Yan dan Rommens, 2007). Untuk proses ini, perlu untuk merekayasa T-DNA menjadi vektor biner,
Nuclear matrix attachment region (MARs) adalah sekuens DNA menggantikan gen penyebab tumor (menghasilkan "dilucuti" Anda
kaya A/T sekitar 400 bp yang ditemukan di perbatasan gen yang tidak plasmid) dengan promotor, gen yang diinginkan, dan urutan terminator
ditranskripsi yang memediasi organisasi struktural kromatin di dalam transkripsi. Keuntungan utama dari metode ini adalah tingginya tingkat
nukleus.Dolgova dan Dolgov, 2019). Urutan MAR telah digunakan penyisipan transgen tunggal. Selanjutnya, efisiensi transformasi dapat
untuk mengapit MC untuk mengurangi pembungkaman transgen, ditingkatkan dengan penggunaan strain bakteri dengan tingkat virulensi
meningkatkan stabilitas ekspresi (Zhang dkk., 2004; Li dkk., 2008), dan yang berbeda (misalnya, GV3101, C58C1, EHA105, LBA4404, dan AGL1
meningkatkan efisiensi transformasi (Petersen dkk., 2002). Diamos adalah beberapaA. tumefaciens strain yang paling umum digunakan dalam
dan Mason (2018) Menunjukkan bahwa menggabungkan terminator transformasi tanaman), toleransi yang lebih tinggi terhadap jaringan
ganda secara bersamaan dengan MAR meningkatkan ekspresi hingga rekalsitran atau adaptasi yang lebih baik terhadap spesies tanaman yang
60 kali lipat dibandingkan dengan terminator saja. Namun, MAR tetap diinginkan. EHA105, AGL1, dan LBA4404 dianggap sebagai galur
tidak biasa dalam rekayasa pabrik karena urutan ini hipervirulen, kemungkinan besar karena
untuk meningkatkan induksi datanglah kemari gen. Strain ini dengan menginkubasi jaringan dalam media osmotik selama beberapa jam
direkomendasikan untuk transformasi tanaman rekalsitran atau sebelum prosedur.
monokotil, sedangkan strain yang lebih ringan paling sering
direkomendasikan untuk tanaman dikotil non-rekalsitran. Khususnya,
Transformasi Tanaman yang
menggunakan galur hipervirulen dapat mengurangi efisiensi
Dimediasi Agroistik
transformasi di beberapa tanaman (misalnya, tomat cv. Micro-Tom)
Metode agrolistik menggunakan keunggulan dari A. tumefaciens
dibandingkan dengan menggunakan yang lain.Agrobakterium strain,
dalam kombinasi dengan efisiensi tinggi pengiriman DNA yang
seperti GV3101. Selain itu, T4SS dapat diaktifkan atau ditingkatkan
dicapai dengan biolistik, memungkinkan peningkatan efisiensi
dengan penambahan langsung asetosyringone (fenolik yang berasal
transformasi. Namun, telah paling sering digunakan untuk
dari alam atau sintetis) keAgrobakterium media pertumbuhan
transformasi tanaman bandel, seperti kapas dan kedelai. Selain itu,
(misalnya, YEB atau LB) dan media coinokulasi cair atau padat.
biolistik menggunakan partikel microcarrier tanpa DNA dapat
Langkah pengkondisian lain dapat dilakukan dengan inkubasi lembut
digunakan untuk menyebabkan cedera ringan dan superfisial.
(dalam gelap pada 22◦C selama 12–16 jam) Agrobakterium sel dalam
Kemudian, jaringan yang terluka dapat dibudidayakan bersama
Agrobakterium (AB) medium minimal yang dilengkapi dengan
dengan yang diinginkanA. tumefaciens tekanan. Misalnya, pemboman
asetosyringone (Armstrong dkk., 2015; Basso dkk., 2017).
mikroproyektil sebelum budidaya denganA. tumefaciens
meningkatkan efisiensi transformasi daun tembakau dan meristem
Pengiriman DNA yang Dimediasi Biolistik
apikal bunga matahari setidaknya 100 kali lipat jika dibandingkan
Transformasi yang dimediasi biolistik muncul pada tahun 1987 sebagai
dengan biolistik saja. Serupa,Abdollahi dkk. (2009)mengatasi
alternatif untuk transformasi protoplas. Tidak sepertiAgrobakterium-
penghalang fisik dinding mikrospora rapeseed yang tebal melalui
pengiriman T-DNA yang dimediasi, metode transformasi biolistik
pemboman mikrospora dengan partikel mikroproyektil tanpa DNA
(pengeboman partikel atau senjata gen) memungkinkan pengenalan
dan coinokulasi dengan A. tumefaciens budaya. Namun, karena
langsung setiap urutan DNA ke dalam genom tanaman. Untuk ini, urutan
metode biolistik berat, alternatif telah diadopsi untuk melayani tujuan
DNA target (vektor biner atau MC) didehidrasi dan dikomplekskan dengan
yang sama, seperti kejutan termal sebelum coinoculation, infiltrasi
partikel kecil (0,6-1 .).μM dengan diameter) partikel emas atau tungsten
vakum, cocultivation dalam cawan Petri yang berisi media coculture
(mikrocarrier). Kemudian, microcarrier diendapkan pada membran,
atau kertas saring terhidrasi, cedera jarum, atau sonikasi jaringan.
dipercepat dengan gas helium hingga kecepatan tinggi menggunakan
Dong dkk., 2014).
PDS-1000/HeTM atau sistem serupa, dan dibombardir terhadap jaringan
tanaman totipoten. Di dalam sel, jika DNA belum mencapai nukleus, DNA
dibongkar dan diarahkan ke nukleus, di mana DNA akan berintegrasi Rekayasa Genetika Kloroplas
secara acak ke dalam genom nukleus. Partikel emas direkomendasikan Transformasi genom kloroplas menawarkan keuntungan penting
karena keseragaman ukuran yang lebih besar dan kurangnya toksisitas dibandingkan genom nuklir dalam pengembangan alat bioteknologi (
(kelembaman) terhadap sel tanaman. Namun, penyisipan tulang punggung Adem dkk., 2017). Strategi ini telah dimanfaatkan untuk memproduksi
ke dalam genom tanaman tidak diinginkan, dan untuk alasan ini, biofarmasi (misalnya, vaksin, albumin serum manusia, peptida,
penggunaan MC dianjurkan (Taparia et al., 2012). Keuntungan utama dari protein, dan antigen), mengendalikan hama serangga, dan
metode biolistik adalah kemungkinan transformasi langsung jaringan merekayasa herbisida, kekeringan, dan resistensi patogen pada
seperti serbuk sari, embrio, meristem, dan kultur sel morfogenik terlepas tanaman model atau tanaman yang penting secara ekonomi.Bali dkk.
dari spesies tanaman. Selain itu, transgen yang lebih besar atau lebih (2016)Menunjukkan bahwa overekspresi dsRNA yang menargetkan
banyak dapat digunakan dengan metode transformasi ini. Namun, gen asetilkolinesterase lebih stabil dan efektif dalam pengendalian
penggunaan urutan yang sangat panjang meningkatkan risiko kerusakan Helikopter Armigera ketika diintegrasikan ke dalam genom kloroplas
DNA selama pengiriman. Penyisipan banyak salinan ke dalam genom juga N. benthamiana daripada ketika diintegrasikan ke dalam genom
tidak diinginkan karena rentan terhadap ketidakstabilan selama generasi nuklir.
berturut-turut dan meningkatkan kemungkinan integrasi DNA di daerah Khususnya, kloroplas tidak mengandung mesin interferensi RNA
intragenik yang penting. Ini juga memiliki biaya keuangan yang tinggi, dan mekanisme epigenetik yang dapat mengganggu ekspresi
karena regulasi tanaman transgenik ini untuk penggunaan komersial transgen heterolog.Zhang, 2015). Penyisipan transgen ke dalam
mahal. Menggunakan konsentrasi DNA yang dioptimalkan di setiap bidikan genom biasanya terjadi melalui rekombinasi homolog, sehingga efek
penting untuk mengurangi penyisipan banyak salinan. Sebagai contoh,Kim posisi transgen diminimalkan, dan akumulasi protein stabil. Tingginya
dkk. (2012)tebu transgenik yang diproduksi secara efisien dengan jumlah jumlah kloroplas di setiap sel dan poliploidi genomnya
salinan rendah dari kalus embriogenik yang dibombardir dengan 12-50 ng memungkinkan penyisipan beberapa salinan transgen dalam satu sel,
MC per tembakan. Di sisi lain, dua atau tiga tembakan dalam jaringan yang sehingga menghasilkan tingkat akumulasi protein yang seragam dan
sama dapat digunakan untuk meningkatkan efisiensi transformasi. Untuk kuat.Grevich dan Daniell, 2005). Akumulasi protein rekombinan dalam
beberapa spesies tanaman bandel (misalnya, kapas dan tebu), metode kloroplas transgenik dapat menyebabkan sitotoksisitas yang lebih
biolistik telah digunakan dengan efisiensi transformasi yang wajar (Ribeiro rendah pada sel tumbuhan daripada penyimpanan protein sitosol.
dkk., 2017), sedangkan untuk beberapa spesies tumbuhan, transformasi Selain itu, pewarisan kloroplas secara maternal di sebagian besar
dimediasi oleh tanaman mencegah transgen ditransmisikan melalui serbuk sari ke
spesies tanaman lain (misalnya, gulma atau tanaman yang kompatibel
A. tumefaciens telah lebih banyak orang. Kerusakan yang disebabkan pada secara seksual) dan juga mengurangi efek entomotoksik pada
jaringan yang dibombardir (misalnya, gangguan sel) dapat diminimalkan akhirnya.
penyerbuk atau serangga non-target. Lebih lanjut, tanaman dari produsen pertanian. Sebagai contoh,Manicavasagam dkk. (2004)
transgenik dapat secara opsional dihasilkan tanpa gen penanda dan Mayavan dkk. (2013, 2015)telah mengoptimalkan metode
resistensi antibiotik, dan karena kloroplas mendukung pembentukan transformasi tanaman bebas kultur jaringan yang dimediasi oleh
ikatan disulfida, mereka mewakili biofaktor yang sangat baik untuk A. tumefaciens menggunakan tunas ketiak tebu, stek batang atau biji.
protein mamalia yang memerlukan bentuk pelipatan ini (Bally dkk., Demikian pula, transformasi tanaman melalui tabung polen telah
2008; Mohammadinejad dkk., 2019). menunjukkan keuntungan, seperti menjadi genotipe-independen dan
Vektor tipikal untuk transformasi genom kloroplas mengandung bebas kultur jaringan, memiliki efisiensi tinggi, dan memberikan
GOI, gen penanda yang dapat dipilih (misalnya, badh, aadA,baru, dan kemungkinan memperoleh suatu peristiwa tanpa penanda seleksi (de
aphA6) didorong oleh promotor spesifik organel (misalnya, rrn, psbA, Oliveira dkk., 2016). Namun, cara-cara tersebut saat ini sudah jarang
rbcL, dan 16S rRNA) dan 5kan- dan 3kan-UTR (misalnya, dari psbA atau digunakan, kemungkinan karena memerlukan penanganan khusus.
rbcl transkrip) yang meningkatkan transkripsi dan terjemahan. Kaset Metode tambahan untukdi perkebunan transformasi, mirip dengan
ekspresi ini harus diapit di kiri dan kanan oleh dua wilayah genom transformasi tabung serbuk sari, telah menunjukkan efisiensi yang lebih
(misalnya, wilayah intergenik antaratrna dan trnI gen) untuk tinggi menggunakan nanopartikel pembawa untuk mengirimkan MC
memungkinkan penyisipan spesifik situs dengan rekombinasi secara efisien (Grosside-Sa, MF; Komunikasi pribadi). Transformasi akar
homolog (Verma dan Daniell, 2007). Penyaluran vektor dilakukan dan induksi akar berbulu dimediasi olehA. rizogen telah berhasil digunakan
dengan metode biolistik pada ruas-ruas daun, yang kemudian sebagai model untuk studi ekspresi dan fungsi gen pada beberapa spesies
ditempatkan pada media seleksi dan disubkultur secara berkala tanaman (Ron dkk., 2014; Daspute dkk., 2019). Selain itu, kultur akar
hingga muncul tunas transgenik. Biasanya, beberapa genom rambut sekarang banyak digunakan sebagai sistem bioreaktor untuk
kloroplas ditransformasikan, dan sel-sel heteroplasma dihasilkan. produksi biomolekul (Aggarwal et al., 2018). Kesederhanaan dan efisiensi
Dengan demikian, sel-sel ini harus disubkultur berulang kaliin vitro di transformasi yang tinggi telah membuat sistem ini menjadi metode yang
bawah tekanan seleksi untuk menghilangkan genom non-transgenik sangat baik untuk pembuktian konsep.
dari bibit yang diregenerasi dan untuk mencegah hilangnya genom
transgenik (Bok, 2015). Untuk tujuan ini, penggunaan dua gen Teknologi Clean-Gene
penanda yang dapat dipilih (aphA6 dan nptII) meningkatkan efisiensi Gen penanda yang dapat dipilih seringkali sangat diperlukan untuk pemilihan sel
seleksi transformasi kloroplas kapas, sedangkan pub gen belum yang ditransformasi dan produksi tanaman transgenik. Namun, begitu tanaman
menjadi penanda plastid-selectable yang cocok pada tanaman lain ( transgenik diperoleh, unsur-unsur ini dapat dibuang dan mungkin tidak
Verma dan Daniell, 2007). Tambahkan gen reporter (misalnya,gus dan diinginkan dalam hal keamanan hayati. Mengingat hal ini, beberapa strategi
gfp) dapat menyatu dengan protein rekombinan atau diekspresikan digunakan untuk meminimalkan atau menghindari masalah ini. Penggunaan
secara independen untuk membantu pemilihan kloroplas transgenik ( simultan dari dua atau tiga vektor, satu membawa Pemerintah Indonesia dan
Verma dan Daniell, 2007). Ekspresi berlebihan pendamping secara yang lainnya membawa penanda atau gen reporter yang dapat dipilih,
simultan telah terbukti memberikan stabilitas yang lebih besar pada memungkinkan pembuatan dan pemilihan peristiwa dengan kedua transgen (
protein rekombinan, mengurangi kemungkinan degradasi oleh Kumar dkk., 2010), dan penggunaan vektor tunggal dengan dua T-DNA
protease kloroplas dan meningkatkan hasil mereka. independen telah memungkinkan hasil yang serupa dalam memperoleh kejadian
Beberapa keterbatasan dari strategi ini masih perlu diatasi, seperti bebas penanda (Zhu et al., 2007). Dalam kedua kasus, dengan menggunakan
optimalisasi metode transformasi (misalnya, pengiriman transgen), segregasi Mendel, adalah mungkin untuk menghilangkan transgen yang tidak
pemilihan sel yang ditransformasi dan homoplasma, dan regenerasi diinginkan. Namun, strategi ini, meskipun memiliki hasil yang menjanjikan,
tanaman dengan efisiensi tinggi untuk jumlah spesies tanaman yang jarang digunakan karena efisiensi kotransformasinya yang rendah dan karena
lebih banyak. Dalam konteks ini, tembakau saat ini dianggap sebagai tidak semua spesies tanaman dapat secara efektif mengalami pemisahan
tanaman model terbaik untuk mengevaluasi alat bioteknologi dengan (misalnya, tebu dan anggur). Untuk mengatasi kelemahan ini, beberapa strategi
transformasi genom kloroplas melalui organogenesis. Namun, pada untuk secara khusus menghilangkan unsur-unsur yang tidak diinginkan ini tetapi
beberapa spesies tanaman (misalnya tebu, padi, danSetaria viridis), tetap mempertahankan Pemerintah Indonesia telah dikembangkan. Beberapa
jaringan non-hijau (misalnya, kalus embriogenik yang hanya dari strategi ini didasarkan pada sistem rekombinasi spesifik lokasi atau nuklease
mengandung sedikit proplastid) lebih disukai untuk transformasi yang memediasi pembelahan spesifik lokasi (Yau dan Stewart, 2013). Misalnya,
genetik inti, sedangkan jaringan daun (yang mengandung banyak sistem vektor biner multiautotransformasi (MAT) menggunakan onkogen
kloroplas) menyebabkan kesulitan besar dalam regenerasi tanaman (misalnya,titik, iaaM/H, atau peran) dari
transgenik. Oleh karena itu, untuk transformasi dan ekspresi efisiensi
tinggi, sangat penting untuk mengidentifikasi promotor terbaik, 5kan- A. tumefaciens dikombinasikan dengan sistem rekombinasi spesifik lokasi
dan 3kanUrutan -UTR, situs penyisipan (daerah spacer intergenik) dan sebagai gen penanda yang dapat dipilih (Ebinuma dan Komamine, 2001).
gen penanda yang dapat dipilih untuk spesies tanaman tertentu ( Untuk metode ini, T-DNA berisi dua modul secara bersamaan: (i)
Grevich dan Daniell, 2005). Pemerintah Indonesia dengan promotor dan terminator dan (ii) onkogen
yang digerakkan oleh promotor konstitutif, gen rekombinase (R) yang
digerakkan oleh promotor, terminator, dan dua situs rekombinasi (RS)
Metode Alternatif untuk yang mengapit modul kedua. Kemudian, tanaman transgenik diregenerasi,
Transformasi Tanaman modul 2 dihilangkan oleh sistem R/RS, dan tanaman transgenik bebas
Mendorong peristiwa transgenik elit dengan efisiensi transformasi tinggi; penanda dipilih (Ebinuma dkk., 2004, 2005). Timerbaev dkk. (2019)
pengurangan waktu, biaya, dan tenaga kerja; dan variasi somaklonal yang menggunakan sistem vektor MAT dengan nptII gen penanda yang dapat
berkurang atau tidak ada diinginkan untuk memenuhi tuntutan saat ini dipilih
untuk berhasil mengembangkan pohon apel tanpa penanda. beberapa GOI bertumpuk, telah diintegrasikan ke dalam genom
Demikian pula, FLP/FRT (Hu et al., 2006; Shan et al., 2006; Hu et al., tanaman (McCue dkk., 2019). Sebaliknya, kromosom tanaman
2008), Cre/Lox (Du dkk., 2019), CINH/RS2 (Moon et al., 2011), dan GIN/ buatan adalah minikromosom yang hanya mengandung
GIX (Onouchi et al., 1991) sistem rekombinasi spesifik lokasi telah sentromer, telomer, dan asal replikasi; mereka stabil selama
berhasil digunakan dalam generasi tanaman tanpa penanda; mereka mitosis dan meiosis dan ditransmisikan melintasi sel dan generasi
beroperasi sangat mirip dengan sistem MAR dan menunjukkan (Yu dkk., 2016). Minikromosom digunakan sebagai vektor otonom
efisiensi tinggi dalam eksisi DNA. Selain eliminasi transgen CRISPR/ yang tidak terintegrasi yang sering membawa beberapa GOI.
Cas9 dengan segregasi tanaman, generasi peristiwa elit bebas Carlson dkk. (2007)Menunjukkan transmisi mediasi yang efisien
transgen telah dimungkinkan dengan pengeditan genom dari minikromosom jagung otonom. Fitur, kelebihan, dan
menggunakan RNP (Cas9 nuclease plus RNA pemandu), regenerasi kekurangan kromosom mini tanaman dibahas secara rinci oleh:
tanaman dalam media non-selektif, dan penyaringan massal tanaman Yu dkk. (2016).
menggunakan PCR (Liang dkk., 2017). Selain itu, knockout gen
penanda yang tidak diinginkan dengan membuat penyisipan/
penghapusan (indels) atau penghapusan lengkap gen ini adalah Downregulasi Gen yang
strategi yang menjanjikan menggunakan CRISPR/Cas9 (Cai et al., 2018 Dimediasi RNAi
). Mesin RNAi pada tanaman bertindak sebagai jalur regulasi
endogen yang terutama didasarkan pada pembungkaman gen
kecil yang bergantung pada RNA (siRNA) dan pertahanan
PENDEKATAN UNTUK MENGATUR molekuler terhadap asam nukleat invasif (misalnya, virus dan
EKSPRESI GEN viroid DNA atau RNA). Tanaman memiliki beberapa kelas siRNA
yang berasal dari endogen (misalnya, siRNA trans-acting, siRNA
gen ekspresi berlebih antisense alami, dan siRNA heterokromatik) yang dikodekan oleh
Ekspresi berlebih gen adalah salah satu strategi utama dalam genomik daerah berulang atau intergenik dan elemen transposabel, yang
fungsional tanaman dan mencakup mekanisme penonaktifan (kehilangan bekerja pada tingkat PTGS atau pembungkaman gen transkripsi
fungsi) dan pengaktifan (keuntungan fungsi). Beberapa GOI yang terkait (TGS).Chen dkk., 2018;Gambar 2). Jalur RNAi ditingkatkan oleh
dengan sifat agronomi yang diinginkan telah diekspresikan secara RNA untai ganda bebas (dsRNA) yang ada di sitoplasma; dsRNA
berlebihan pada tanaman, dan banyak dari GOI ini memiliki aktivitas segera dipecah oleh enzim terkait ribonuklease III (Dicerlike 1-4
optimal sesuai dengan cara ekspresinya (misalnya, spesifik jaringan, pada tumbuhan), menghasilkan beberapa dsRNA pendek
stadium, atau kondisi). Oleh karena itu, ekspresi berlebih Pemerintah (biasanya panjangnya 20-24 nt). DsRNA pendek ini adalah 3kan
Indonesia yang dipicu oleh promotor yang diinduksi stres biotik dan abiotik termetilasi, dan untai RNA pemandu (antisense) bergabung
atau promotor spesifik tahap jaringan atau perkembangan telah dengan RNA-induced silencing complex (RISC) dan bertindak
memungkinkan untuk mencapai fenotipe yang sangat menguntungkan sebagai siRNA, mengikat mRNA komplementer. Di RISC, siRNA
dengan penalti hasil yang berkurang dibandingkan dengan ekspresi mengikat nuklease ARGONAUTE, dan pencocokan sempurna
konstitutif yang kuat (Kong dkk., 2016; Wang dkk., 2018). Sebuah optimasi mereka dengan mRNA target menghasilkan pembelahan mRNA
kasus per kasus dari semua elemen genetik yang digunakan juga oleh ARGONAUTE atau penghambatan terjemahan. Kekokohan
diperlukan untuk sukses dengan teknik ini karena ekspresi berlebih saja mekanisme ini tergantung pada amplifikasi sinyal
tidak menjamin fenotipe yang diinginkan. pembungkaman yang dipicu oleh siRNA; Amplifikasi ini dilakukan
oleh pengikatan RNA-dependent RNA polymerase (RdRPs) ke
Strategi Penumpukan Gen kompleks siRNA/mRNA, menghasilkanlagi sintesis dsRNA dan
Tanaman terus-menerus ditantang oleh stres abiotik dan biotik siRNA (Borges dan Martiensen, 2015).
simultan (tekanan silang). Selain itu, sebagian besar sifat-sifat penting Awalnya, teknologi RNAi banyak digunakan dalam pembuktian
secara agronomis berada di bawah kendali multigenik yang kompleks konsep untuk penilaian fungsional dan untuk karakterisasi fenotipik
dan dapat disetel oleh efek gen versus lingkungan (Arzani dan Ashraf, gen yang terlibat dalam beberapa proses biologis dengan strategi
2016; Shehryar dkk., 2019). Dengan demikian, keuntungan dari sifat- kehilangan fungsi. Namun, segera ditemukan bahwa itu memiliki
sifat GM piramida terlihat jelas. Dua atau lebih GOI dalam kaset potensi besar sebagai pendekatan untuk memanipulasi ekspresi gen
ekspresi yang sama telah berhasil digunakan untuk secara bersamaan yang terkait dengan fenotipe atau sifat agronomi yang diinginkan.
mendapatkan satu atau lebih sifat agronomi yang diinginkan pada Saat ini, beberapa alat bioteknologi berbasis RNAi telah
tanaman tanaman (Aznar dkk., 2018). Penumpukan Pemerintah dikembangkan untuk menurunkan regulasi gen kunci yang terkait
Indonesia adalah strategi ampuh untuk mengatasi seringnya dengan sifat agronomi yang penting secara ekonomi (Rosa dkk., 2018
kerusakan resistensi, memfasilitasi pengelolaan serangga hama atau ). NBT berbasis RNAi ini dikembangkan oleh ekspresi berlebih
patogen, meningkatkan sifat agronomi, dan menghasilkan peristiwa konstitutif dari dsRNA yang direkayasa panjang dalam orientasi
elit dengan banyak sifat. Namun, urutan promotor dan terminator sense / antisense dan dipisahkan dengan spacer atau urutan intron.
yang berbeda untuk setiap Pemerintah Indonesia merupakan Dengan demikian, dsRNA sintetis menghadirkan identitas urutan
persyaratan mendasar untuk stabilitas tinggi dari transgen ini. Ukuran tinggi dengan mRNA target, yang mengarah pada penurunan regulasi
MC merupakan faktor pembatas kritis untuk efisiensiAgrobakterium dan akumulasi siRNA spesifik target yang berhasil. Urutan indranya
pengiriman yang dimediasi, integritas transgen, dan efisiensi seharusnya~150–250 nt panjangnya, dan di luar target (urutan
transformasi. Namun, fragmen panjang DNA hingga~30 kb, berisi dengan identitas nukleotida tinggi dengan
GAMBAR 2 | Teknologi interferensi RNA (RNAi) pada tumbuhan. Setelah karakterisasi molekuler dan fenotipik dari gen target potensial (dari tanaman atau patogen), kaset ekspresi dirancang untuk akumulasi RNA kecil pada tanaman
transgenik. Di sini, tiga vektor transformasi untuk ekspresi tiga jenis RNA kecil yang berbeda ditampilkan: RNA jepit rambut (hpRNA), mikroRNA buatan (amiRNA) dan molekul mimikri target (spon miRNA), yang disebut RNA kompetitif
(cRNA) atau RNA melingkar ( circRNAs) dan dapat menangkap tanaman atau miRNA endogen patogen (emiRNAs). Setelah transformasi inti, RNA kecil ini diekspresikan dan diproses oleh sel tumbuhan. RNA pengganggu pendek
(siRNA) dan miRNA yang dihasilkan bergabung dengan kompleks pembungkaman yang diinduksi RNA tanaman (RISC), yang akan mempromosikan knockdown gen di pabrik (mis. gen kerentanan) atau patogen (misalnya, virus dan
gen virulensi). Untuk patogen ekstraseluler (misalnya, jamur/oomycetes), RNA kecil yang dihasilkan dapat ditransfer di tempat kontak antara sel tanaman dan patogen. Untuk eukariota multiseluler yang lebih kompleks (misalnya,
serangga dan nematoda), pengiriman RNA kecil terjadi terutama melalui makan. Selain itu, pendekatan non-transgenik berdasarkan nanoenkapsulasi dsRNA atau RNA kecil dapat diterapkan pada knockdown gen. PTGS:
pembungkaman gen pascatranskripsi; vRNA: RNA virus. pengiriman RNA kecil terjadi terutama melalui makan. Selain itu, pendekatan non-transgenik berdasarkan nanoenkapsulasi dsRNA atau RNA kecil dapat diterapkan pada
knockdown gen. PTGS: pembungkaman gen pascatranskripsi; vRNA: RNA virus. pengiriman RNA kecil terjadi terutama melalui makan. Selain itu, pendekatan non-transgenik berdasarkan nanoenkapsulasi dsRNA atau RNA kecil dapat
diterapkan pada knockdown gen. PTGS: pembungkaman gen pascatranskripsi; vRNA: RNA virus.
mRNA non-target) harus dihindari. NSpdk dan adh1intron dari sampai saat ini, bagaimanapun, promotor spesifik jaringan dan
piruvat dehidrogenase kinase dan alkohol dehidrogenase 1 gen, stadium atau yang diinduksi stres juga dapat digunakan sesuai
masing-masing, telah banyak digunakan dalam teknologi RNAi dengan tujuan NBT. Vektor biner tipikal untuk teknologi RNAi harus
tanaman (Ali dkk., 2017). Ekspresi berlebihan yang kuat dan mengandung gen penanda yang dapat dipilih dengan promotor
konstitutif telah menjadi strategi yang paling umum digunakan konstitutif dan urutan terminator transkripsi klasik dan RNAi
konstruk (urutan indera target/antisense yang diberi jarak oleh inokulasi mekanis dan inokulasi yang dimediasi kutu daunVirus
sekuens intron) dengan sekuens promotor yang diinginkan dan mosaik kacang umum.
sekuens terminator transkripsi klasik. Opsional, TRV-VIGS (Virus derik
tembakau) atau Agrobakteriumsistem yang dimediasi dapat
digunakan untuk mengekspresikan konstruksi RNAi secara sementara Penyesuaian Mirna untuk
pada tanaman untuk studi genetika terbalik. Strategi tambahan Meningkatkan Sifat Agronomis
lainnya adalah produksi RNAidi perkebunan dengan pendekatan MiRNA tanaman biasanya 21-24 nt panjangnya dan ditranskripsi
transgenik untuk mengontrol crosstalk antara patogen (misalnya, dalam nukleus dari gen non-pengkode protein (MIR gen). Setiap
nematoda dan jamur) dan hama serangga (misalnya, anthonomus transkrip primer (pri-miRNA) adalah 5kan tertutup dan 3kan
grandis dan ulat). Strategi ini memungkinkan tanaman yang diminati polyadenylated dan membentuk struktur batang-loop, yang
untuk menghasilkan dan mengakumulasi siRNA yang direkayasa diproses oleh nuklease seperti Dicer, menghasilkan pra-miRNA.
untuk tidak mengatur gen endogen apa pun tetapi menargetkan Pra-miRNA ini sekali lagi diproses oleh nuklease seperti Dicer,
organisme yang menyerang dan memakan tanaman ini. Jadi, ketika menghasilkan miRNA dupleks yang khas, yaitu 3kan termetilasi
organisme ini memakan tanaman transgenik, siRNA dicerna dan dan dibawa ke sitoplasma. MiRNA untai tunggal memodulasi
diambil oleh sistem pencernaan di mana mereka bertindak pada jalur akumulasi spatiotemporal dari beberapa mRNA target dengan
PTGS, mengatur gen esensial (siRNA ini dapat menyebabkan fenotipe pembelahan spesifik urutan atau penghambatan translasi (PTGS)
daun keriting ketika ditargetkan untuk melumpuhkan gen spesifik (Borges dan Martiensen, 2015). Selain itu, miRNA 24 nt dapat
yang penting untuk siklus hidup) (Ali dkk., 2017). Namun, dinamika kembali ke nukleus dan dimediasi TGS oleh metilasi DNA yang
pemrosesan dsRNA dan produksi siRNA pada serangga agak berbeda diarahkan RNA (RdDM) (Castel dan Martiensen, 2013).
dari pada tanaman (walaupun ini masih belum dipahami dengan ekspresi diferensial dari MIR gen sebagian besar berkorelasi dengan
baik). Dengan demikian, siRNA (panjang 20–24 nt) diproduksidi up- atau downregulation dari mRNA target mereka dan berhubungan
perkebunan tidak efisien untuk melumpuhkan gen serangga, dengan respon biologis (misalnya, toleransi terhadap kekeringan, salinitas,
sementara dsRNA panjang penuh telah terbukti lebih efisien ( dan kekurangan nutrisi) atau fenotipe (misalnya, pertumbuhan, berbunga,
Mengapa, 2015;Burke et al., 2019). Burke dkk. (2019)menunjukkan dan penuaan) (Ferdous et al., 2015; Hackenberg dkk., 2015). Dengan
bahwa dsRNA panjang di perkebunan dihasilkan dari transformasi demikian, fine-tuning spesifikMIR gen oleh rekayasa genetika dianggap
plastid dan menargetkan v-ATPaseA gen dari manduca jumat sebagai alat bioteknologi yang kuat untuk meningkatkan sifat-sifat
menyebabkan kontrol serangga berbasis RNAi yang tidak efisien, agronomi penting (Zhang, 2015; Teotia dkk., 2016). Selain itu, peningkatan
menunjukkan bahwa stabilitas dan panjang dsRNA mungkin telah regulasi miRNA yang terkait dengan sifat agronomi yang diinginkan dapat
terpengaruh. Untuk mengatasi masalah ini, molekul dsRNA panjang dicapai dengan mengekspresikannya secara berlebihanMIR gen di bawah
direkayasadi perkebunandengan struktur seperti viroid untuk kendali promotor asli, spesifik jaringan, terinduksi stres, atau spesifik tahap
melumpuhkan gen serangga hama. DsRNA terstruktur ini diapit oleh perkembangan. Namun, promotor yang kuat dan konstitutif sering
domain ribozim yang bergantung pada pH, yang tidak diproses oleh menghasilkan fenotipe pleiotropik (Basso dkk., 2019). Selain itu, buatanMIR
mesin RNAi tanaman tetapi diproses secara efisien dalam saluran dan gen (amiRNA) dapat direkayasa dalam tanaman transgenik untuk
sel pencernaan serangga (Macedo dkk., 2017). menghasilkan miRNA spesifik dan secara efektif membungkam gen target
Baru-baru ini, teknologi RNAi non-transgenik dioptimalkan untuk (termasuk mRNA endogen atau eksogen, seperti serangga hama atau
pengiriman topikal (penyemprotan daun) molekul dsRNA yang patogen). amiRNA memiliki urutan dan struktur yang mirip dengan yang
distabilkan struktur nano pada tanaman untuk pengendalian patogen diketahuiMIR gen, kecuali untuk urutan miRNA dupleks, yang digantikan
atau manajemen hama serangga (Mainkan dkk., 2016; McLoughlin et oleh urutan miRNA tertentu. Pemilihan tulang punggung (urutan pra-
al., 2018). nanopartikel pembawa dsRNA (misalnya, biopolimer amiRNA) adalah pembungkaman efektif tanpa efek di luar target
kitosan, karbon, silikon, dan nanosheet tanah liat) (Mitter et al., 2017), merupakan langkah penting; itu harus menyajikan kesamaan urutan
partikel RNP (misalnya, domain pengikatan domain transduksi rendah dengan gen non-target.Agrawal dkk. (2015)Menunjukkan bahwa
peptida-dsRNA) (Gillet dkk., 2017), knockout simultan dari nuklease tanaman tembakau yang mengekspresikan mikroRNA spesifik serangga
sistem pencernaan serangga (Garcia et al., 2017; Prentice dkk., 2019), amiR-24 secara berlebihan memperoleh aktivitas insektisida terhadap
dan pengikat silang (misalnya, tripolifosfat, dekstran sulfat, dan asam
poli-D-glutamat) (Raja dkk., 2015) berhasil dikembangkan dan H. armigera.
dioptimalkan untuk meningkatkan pengiriman dan internalisasi Sebaliknya, penurunan regulasi miRNA juga dimungkinkan melalui
dsRNA dalam sel, mencegah degradasi dsRNA dan meningkatkan rekayasa genetika menggunakan strategi target mimikri (ATM) buatan.
pengiriman oral ke serangga (Cunningham et al., 2018). Produksi ATM adalah RNA non-coding sintetis dengan urutan nukleotida yang mirip
dsRNA skala besar masih menjadi hambatan utama dari pendekatan dengan mRNA target tetapi mengandung situs pengikatan untuk miRNA
ini (misalnya, biaya produksi); namun, sudah ada beberapa tertentu dengan tiga ketidakcocokan di CS untuk mencegah pembelahan
perusahaan swasta yang memasok molekul, partikel nano, dan ATM (Bank et al., 2012). ATM bertindak dengan mengasingkan miRNA, dan
senyawa penstabil ini (misalnya, EZBiolab di AS dan Bioteknologi oleh karena itu, mRNA targetnya tetap stabil. Beberapa miRNA dapat
Biomik di Cina). Akhirnya, semua strategi RNAi yang diulas di atas diturunkan regulasinya secara bersamaan menggunakan mimik target
dapat secara efisien melumpuhkan satu atau beberapa gen target tandem pendek (STTM) atau SPONS (Gambar 2). STTM mengandung dua
secara bersamaan.Worall dkk. (2019)Ditunjukkan bahwa aplikasi atau lebih situs pengikatan miRNA yang dipisahkan oleh beberapa
topikal dsRNA yang dirakit dalam nanopartikel hidroksida ganda nukleotida, sedangkan SPONGES mengandung beberapa situs pengikatan
berlapis efektif terhadap miRNA secara bersamaan (Reichel dkk., 2015; thomson dan
Dinger, 2016). Canto-Pastor and Santos (2019) meningkatkan ketahanan yang tidak memiliki domain HNH dan RuvC (D10A/H840A) yang
tomat terhadap patogen bakteri dan oomycete menggunakan STTM RNA terlibat dalam produksi DSB dan menyatu di terminal-C ke
yang menargetkan miR482/2118. domain aktivator atau represor transkripsi, dapat dipandu oleh
sgRNA khas ke urutan promotor GOI mana pun untuk
Pengeditan Genom yang Dimediasi CRISPR/Cas9 memodulasi ekspresinya (Angka 4A,B; Lowder dkk., 2015, 2017).
Misalnya, CRISPR/dCas9:VP64 (pengulangan tandem tiga atau
Meganucleases, zinc finger (ZNFs), dan transcription activatorlike
empat kali lipat darivirus herpes simpleks domain aktivasi VP16)
effector nucleases (TALENs) (Angka 3A–C) adalah nuklease pertama
mengarah ke aktivasi transkripsi (Chavez dkk., 2015), sedangkan
yang digunakan dalam pengeditan genom tanaman. Meganucleases
dCas9:SRDX (penekan transkripsi sintetik pco-dCas9-3X) dan
mengenali urutan yang dilestarikan dari 12-42 nt, sementara ZNF
dCas9:KRAB (kotak terkait Kruppel) bertindak sebagai penekan
terdiri dari dua modul domain pengikatan DNA berulang tandem yang
transkripsi yang kuat (Lowder dkk., 2017). Selain dCas9-VP64,
mengapitfokI nuclease catalytic domain, di mana domain pengikat
domain aktivasi MS2-p65-HSF1 yang menyatu diekspresikan
mengenali triplet nukleotida unik, dan setiap modul mengenali hingga
secara bersamaan, berinteraksi dengan loop batang sgRNA dan
24 nt. Sebaliknya, TALEN juga terdiri dari dua modul motif pengikatan
merekrut TF tambahan ke promotor gen target (Konermann et al.,
DNA berulang tandem yang mengapit afokI motif, tetapi setiap
2014;Roca Paixão dkk., 2019). Sebaliknya, dCas9:SET (domain
domain pengikatan hanya mengenali satu nukleotida (Streubel et al.,
methyltransferase H3K9me3) dan dCas9:AT (domain
2012). Dalam 10 tahun terakhir, CRISPR/Cas9 atau nuklease yang
asetiltransferase) bertindak sebagai pengubah epigenetik, yang
dioptimalkan (misalnya, CRISPR/Cpf1 atau CRISPR/Csm1) telah
diharapkan untuk memperluas atau memadatkan kromatin untuk
berhasil digunakan dalam pengeditan genom tanaman (Osakabe dkk.,
mengaktifkan promotor gen (O'Geen dkk., 2017). Lebih lanjut,
2016; Wang dkk., 2018). Nuklease ini dipandu ke genom oleh RNA
strategi dCas9-SunTag didasarkan pada perpaduan dCas9 dengan
pendek (panjang kira-kira 20 nt) dengan urutan spesifik yang
peptida berulang tandem spesifik yang secara kuat mengikat dan
menargetkan urutan DNA genom, dan mereka menyebabkan double-
merekrut peptida atau protein aktivator lain, meningkatkan
stranded break (DSB) di situs target yang mengandung motif
transaktivasi atau pengeditan epigenom (Huang dkk., 2017). Tang
berdekatan protospacer yang dilestarikan ( PAM). Akibatnya, mesin
dkk. (2017)menunjukkan represi transkripsi yang efisien dari
perbaikan DNA tanaman dapat secara keliru memasukkan atau
miRNA159b gen dalam A. thalianamenggunakan sistem CRISPR/
menghapus nukleotida selama perbaikan DSB. Mengingat hal ini,
dCpf1-SRDX. Taman dkk. (2017)menggunakan sistem CRISPR/
strategi CRISPR/Cas9 non-homologous end-joining (NHEJ)
Cas9-V64 dan aktivator p65-HSF untuk meningkatkan tingkat
dikembangkan untuk memperkenalkan indels di daerah pengkode
transkripsi pigmen antosianin 1 (PAP1) dan vakuolar H +
protein, menghasilkan frameshift dan knockdown dari gen yang
-pirofosfatase (AVP1) gen dalam A. thaliana. Papikian dkk. (2019)
diinginkan (sosok 3D). Selain itu, strategi CRISPR/Cas9 homology-
mengadaptasi sistem dCas9- SunTag di A. thaliana untuk
directed repair (HDR) dan homology and recombination-directed
merekayasa aktivasi transkripsi dengan aktivator transkripsi VP64
repair (HRDR) memungkinkan pengeditan nukleotida spesifik dari
dan metilasi DNA dengan domain katalitik dari Tidak ada
urutan gen atau promotor menggunakan donor DNA sintetis yang
tembakau metiltransferase DRM.
direkayasa selain Cas9 nuclease dan RNA panduan tunggal (sgRNA) (
sosok 3D; Sun dkk., 2016). Ketiga strategi CRISPR/Cas9 ini dapat
ditambatkan dalam genom tanaman melalui pendekatan transgenik
Pengeditan RNA yang Dimediasi CRISPR/Cas13a
sehingga komponen-komponen tersebut bertindak dalamtrans, baik
Cas13a nuclease (endoribonuclease tipe VI-A kelas II) digunakan
melalui ekspresi komponen sementara atau dengan pengiriman
dalam sistem CRISPR untuk menargetkan dan membelah RNA untai
sitosolik langsung dari CRISPR/Cas9 RNP (Lowder dkk., 2015; Liang
tunggal (ssRNA atau mRNA) dan juga bergantung pada motif
dkk., 2017). Varian nicking dari Cas9 (nCas9) yang menyatu dengan
protospacer flanking site (PFS) (Angka 5A,B). cas13a dariLeptotrichia
domain deaminasi cytidine dan adenosine juga digunakan dalam
wadei (LwaCas13a) dipandu oleh sgRNA dan berisi dua domain
pengeditan genom (Angka 3E,F). Lebih lanjut, mutasi yang dihasilkan
pengikat nukleotida (2x HEPN) yang terkait dengan aktivitas RNase
oleh sistem CRISPR/Cas9 stabil dan dapat diwariskan oleh segregasi
yang berbeda. CRISPR/Cas13a telah berhasil dibuat di sel mamalia
Mendel klasik ke generasi berikutnya.Zhang dkk. (2019)meningkatkan
dan tumbuhan untuk merobohkan RNA eksogen atau endogen
toleransi salinitas beras melalui mutagenesis gen OsRR22 yang
(misalnya, untuk kekebalan terhadap RNA virus dan knockdown RNA
ditargetkan CRISPR / Cas9.Bao dkk. (2019)Menunjukkan bahwa
tunggal atau ganda) (Abudayyeh dkk., 2017; Aman et al., 2018a).
mutagenesis target gen GmSPL9 yang dimediasi CRISPR/Cas9 dalam
Selain itu, sistem CRISPR/Cas13a memiliki aktivitas terhadap RNA
kedelai meningkatkan arsitektur tanaman. Tian dkk. (2018)
nuklir dan telah menunjukkan spesifisitas target yang tinggi. Mutasi
menghasilkan varietas semangka tahan herbisida menggunakan
titik dalam domain HEPN mengakibatkan gangguan aktivitas
pengeditan dasar yang dimediasi CRISPR/Cas9 dari juga gen.
nukleasenya (East-Seletsky dkk., 2017). Dengan demikian, Cas13a
yang dinonaktifkan (dCas13a) dapat digabungkan dengan domain
deaminase (misalnya, domain ADAR2 menjadi adenosin-ke-inosin
Regulasi Transkripsi yang Dimediasi deaminase, atau domain dCMP menjadi sitidin-ke-uridin deaminase)
CRISPR/dCas9 dan digunakan untuk mengedit polimorfisme/mutasi dalam
Sistem CRISPR/Cas9 dan CRISPR/Cpf1 direkayasa untuk memodulasi pengkodean protein atau urutan RNA non-coding (Cox dkk., 2017).
transkripsi (aktivasi atau represi) gen yang diinginkan (Tang dkk., 2017 Selain itu, ekspresi berlebih Cas13a atau dCas13a didorong oleh
). Cas9 nuclease (dCas9) yang dinonaktifkan, spesifik jaringan atau diinduksi
GAMBAR 3 | Teknik pengeditan genom DNA yang digunakan dalam pengembangan tanaman transgenik. (NS) Meganuklease, (B) nuklease jari seng, (C) nuklease efektor
seperti aktivator transkripsi (TALEN), (D) sistem CRISPR/Cas9 berdasarkan strategi non-homologous recombination system (NHEJ) dan homology-directed recombination
(HDR), (DAN) editor basa DNA berbasis cytidine deaminase, dan (F) editor berbasis DNA adenosine deaminase.
GAMBAR 4 | Modulasi epigenetik / transkripsi berbasis CRISPR pada tanaman. (NS) dCas9 bergabung dengan modulator epigenetik (EM) untuk memodulasi pembentukan eukromatin dan
heterokromatin pada tanaman. (B) Modul transkripsi berbasis CRISPR disajikan dengan dCas9 yang ditambatkan dalam gen promotor dan berinteraksi dengan modulator transkripsi (TM).
promotor atau dipicu oleh vektor virus dapat memungkinkan Hampir semua nuklease CRISPR dapat diproduksi dan dimurnikan
modulasi RNA target yang lebih tepat dan konsisten. Nuklease Cas13 dalam sistem heterolog (misalnya, Cas9, Cpf1, Cms1, dan Cas13a).
ortologis, seperti PspCas13b dariPrevotelella sp., telah menunjukkan Keuntungan dari pendekatan pengeditan yang dimediasi RNP sangat
knockdown RNA yang lebih efisien daripada LwaCas13a (Cox dkk., banyak: (i) penghapusan persyaratan backcrossing untuk
2017). Aman dkk. (2018b)menggunakan CRISPR/Cas13a untuk penghapusan kaset transformasi; (ii) penerapan untuk sebagian besar
merekayasa A. thaliana untuk interferensi terhadap genom RNA dari tanaman dengan adaptasi kecil (pembentukan dan/atau optimalisasi
Virus mosaik lobak. transfeksi, regenerasi, danin vitro budaya); dan (iii) sejumlah kecil
target karena persistensi RNP dalam sistem pembangkit relatif singkat
Pengeditan DNA/RNA Berbasis CRISPR- (~48 jam) (Kim dkk., 2017). Sebaliknya, kelemahan utama adalah
Ribonucleoprotein (RNP) efisiensi pengeditan, yang lebih rendah daripada pendekatan yang
Kemajuan teknologi berbasis CRISPR telah menyediakan beberapa bergantung pada DNA (Metje-Sprink dkk., 2019). Liang dkk. (2017,
strategi/pipa untuk pengeditan DNA/RNA pada tanaman (Gambar 6). 2018)Menunjukkan pengeditan genom roti gandum bebas DNA
Teknologi RNP (Cas9 rekombinan yang terkait denganin vitro dengan efisiensi 4-5%. Svitashev dkk. (2016)melaporkan pengiriman
transkripsi sgRNA) (Gambar 7) yang digunakan pada tumbuhan untuk biolistik RNP Cas9-gRNA yang telah dirakit sebelumnya ke dalam sel
memperoleh sifat-sifat baru dapat dianggap sebagai kemajuan embrio jagung dan regenerasi tanaman dengan alel yang bermutasi
terpenting hingga saat ini. Dalam prosedur ini, tidak perlu dan diedit. Veillet dkk. (2019)menunjukkan pengeditan genom tomat
mengintegrasikan DNA eksogen ke dalam genom tanaman (Liang dan kentang bebas transgen yang efisien menggunakan
dkk., 2018). RNP dirakitin vitro dan langsung dikirim ke protoplas atau Agrobakteriumpengiriman yang dimediasi dari editor basis cytidine
embrio yang belum matang, dan mekanisme perbaikan sel dapat CRISPR / Cas9 dengan masing-masing 12,9 dan 10% tanaman yang
menyebabkan mutasi pada target yang diinginkan (Liang dkk., 2018). diedit tetapi bebas transgen pada generasi pertama.
GAMBAR 5 | Knockdown berbasis CRISPR/Cas13a dan pengeditan basis RNA dalam pengembangan tanaman transgenik. (NS) Sistem CRISPR/Cas13a dapat digunakan untuk mendegradasi
ssRNA spesifik karena adanya dua domain endo-RNase pengikat nukleotida eukariotik dan prokariotik yang lebih tinggi dan tidak adanya situs katalitik DNase.
(B) Nuklease dCas13a (dengan domain RNAse yang bermutasi) dapat digabungkan ke domain deaminase tertentu untuk mempromosikan pengeditan basis tunggal. Sejauh ini, domain
deaminase yang paling berhasil menyatu dengan nuklease Cas13a adalah domain adenosin deaminase (ADA), khususnya, domain ADAR2, yang mampu mengubah adenosin (NS) menjadi
inosin (Saya), yang selanjutnya dikenal sebagai guanin (G) oleh mesin translasi, dalam molekul ssRNA.
GAMBAR 6 | Diagram alur jalur pipa yang disarankan untuk pengembangan tanaman transgenik berbasis CRISPR. Setelah analisis awal wilayah genom target
yang akan diedit, nuklease (Cas9, Cpf1, Cms1, Cas13a, antara lain) atau varian nuklease (nickase atau mati) harus dipilih. Pilihan ini harus didasarkan pada
respons molekuler dan fenotipik yang diharapkan dari tanaman transgenik, serta pada strategi (ekspresi berlebih gen, knockdown, atau knockout) dan
karakteristik sgRNA yang diperlukan untuk masing-masing nuklease, seperti ada/tidaknya dan posisi crRNA/tracrRNA, selain urutan PAM (Cas9, Cpf1, Cms1,
antara lain) atau PFS (Cas13a).
MASALAH UTAMA YANG ADA adalah empat tanaman GM utama (Tabel 1). Sebanyak 70 negara
telah mengadopsi tanaman GM; 26 menanam tanaman, dan 44
Pendekatan Transgenik Versus Non- lainnya mengimpor produk.
transgenik Proses pengembangan kultivar baru dengan sifat target yang diwariskan
Pada tahun 2018, lebih dari 191,7 juta hektar ditanami secara stabil oleh pemuliaan tanaman konvensional dapat memakan waktu 10
tanaman GM di seluruh dunia, meningkat sebesar ~113 hingga 25 tahun (tergantung pada tanaman atau sifat agronomis), tetapi durasi
kali lipat dari tahun 1996. Amerika Serikat, Brasil, dan ini dapat dikurangi menjadi 7-10 tahun menggunakan alat rekayasa genetika
Argentina adalah petani tanaman GM terbesar (ISA, 2018); canggih. . Pernyataan ini tidak hanya relevan dengan aspek komersial tetapi juga
kedelai (95,9 juta hektar), jagung (58,9 juta hektar), kapas ketika isunya adalah pengembangan tanaman yang lebih toleran/tahan patogen.
(24,9 juta hektar), dan kanola (10,1 juta hektar) Contohnya adalah
GAMBAR 7 | Pengeditan genom tanaman yang dimediasi Ribonucleoprotein (RNP). Desain eksperimental dimulai dengan desain sgRNA, yang kemudian ditranskripsiin vitrodan dimurnikan.
Secara paralel, nuklease Cas9 diekspresikan dalam sistem heterolog dan dimurnikan. Setelah pemurnian dan perakitan kedua komponen ini (Cas9 dan sgRNA), kompleks ribonukleoprotein
atau ribonukleoprotein (RNP) dapat dikirimkan ke sel tumbuhan dalam beberapa cara: (i) melalui elektroporasi; (ii) melalui vesikel lipid kationik; dan (iii) melalui interaksi ligan-reseptor. Ketiga
metodologi pengiriman RNP ini paling sering digunakan dalamin vitro studi dengan protoplas, dan (ii) dan (iii) memberikan kompleks melalui endositosis. Metodologi pengiriman keempat
baru-baru ini disajikan di mana RNP diterapkan untuk melapisi partikel tungsten atau emas, dan konjugat ini digunakan untuk mengubah embrio tanaman yang belum matang (teknik
biolistik). Dalam semua sistem ini, setelah pengiriman, pembentukan kalus diinduksi untuk regenerasi tanaman berikutnya. Akhirnya, bibit yang diregenerasi dikenai langkah-langkah
penyaringan, seperti amplifikasi PCR awal dari wilayah target DNA diikuti oleh sekuensing Sanger dan konfirmasi selanjutnya dengan sekuensing generasi berikutnya (NGS). Keuntungan dari
teknologi ini adalah bebas DNA dan bebas penanda seleksi, selain menghindari kemungkinan efek yang tidak diinginkan yang disebabkan oleh ekspresi Cas9 konstitutif pada tanaman yang
diedit.
TABEL 1 | Area global tanaman rekayasa genetika (GM) pada tahun 2018 (ISA, 2018). genotipe tanaman diperlukan (Wen dkk., 2019). Genotipe rekalsitran
membutuhkan media kultur yang sesuai untuk setiap langkah induksi,
negara Area yang ditanami tanaman GM
(Juta hektar)
ko-kultivasi, seleksi atau regenerasi untuk mencegah oksidasi jaringan
danAgrobakterium penghambatan dan untuk meningkatkan seleksi
Amerika Serikat 75 Jagung, kedelai, kapas, kanola, bit dan regenerasi tanaman. Penanganan eksplan yang benar sebelum
gula, alfalfa, pepaya, labu, kentang,
dan sesudah transformasi dianggap penting untuk meningkatkan
apel
seleksi, mempercepat regenerasi, dan meningkatkan perakaran.Basso
Brazil 50.2 Tebu kapas jagung kedelai Kapas
dkk. (2017)Hal ini menunjukkan bahwa perbaikan media kultur,
Argentina 23.9 jagung kedelai
frekuensi subkultur, serta jenis dan intensitas cahaya sangat penting
Kanada 12,7 Canola, jagung, kedelai, bit
gula, alfalfa, apel untuk meningkatkan efisiensi transformasi tebu. Dong dkk. (2014)
India 11.6 kapas meningkatkan efisiensi transformasi kalus embriogenik tebu hingga
Paraguay 3.8 Kedelai, jagung, kapas 10 kali lipat dengan menerapkan kejutan panas awal pada 45◦C,
Cina 2.9 kapas, pepaya sonikasi dan infiltrasi vakum selama Agrobakterium inokulasi dan
pakistan 2.8 kapas pengeringan kalus selama tahap kokultivasi. Anderson dan Birch
Afrika Selatan 2.7 Jagung, kedelai, kapas (2012) membahas beberapa poin penting dan mempresentasikan
Uruguay 1.3 jagung kedelai prosedur utama untuk meningkatkan kultur jaringan, transformasi
Bolivia 1.3 Kedelai efisiensi,
negara-negara lain 0.9 - dan regenerasi tebu.
Total 191.7
Hubungan Genotipe-Fenotipe
Karakterisasi molekuler peristiwa transgenik adalah langkah pertama dalam mengurangi jumlah peristiwa elit untuk
diketahui bahwa beberapa populasi serangga hama atau patogen sering penyaringan di bawah kondisi lapangan. Peristiwa dengan tingkat ekspresi transgen tinggi, knockdown atau
menembus resistensi tanaman (Tabashnik, 2015). Selain itu, dengan pengeditan gen endogen yang efisien, akumulasi protein atau RNA asing yang tinggi, tidak ada penyisipan fragmen
pemuliaan konvensional, DNA bunga yang terpisah dapat ditransfer ke tulang punggung, jumlah salinan transgen rendah (sehingga meningkatkan stabilitas transgen dan mengurangi
tanaman baru yang kompatibel secara seksual, bersama dengan fragmen risiko pembungkaman transgen) , pewarisan dan stabilitas transgen tinggi lintas generasi, fenotipe yang diinginkan,
DNA lain yang tidak diinginkan. Masalah ini dapat diminimalkan dengan dan kinerja agronomi yang setara dalam kondisi rumah kaca adalah beberapa persyaratan untuk memilih peristiwa
menggunakan rekayasa genetika, karena pendekatan transgenik yang ideal. Mengingat hal ini, generasi awal yang tinggi dari kejadian independen (100-1000 kejadian) diperlukan.
memungkinkan pengenalan spesifik dari satu atau beberapa fragmen DNA Baik produksi sejumlah besar peristiwa dalam waktu singkat maupun karakterisasi molekuler dari peristiwa-
spesifik antara organisme yang berkerabat dekat atau jauh. Namun, biaya peristiwa ini membutuhkan sumber daya keuangan yang cukup besar, infrastruktur, teknologi canggih, dan
tinggi dan waktu yang lama untuk melepaskan tanaman transgenik baru ketersediaan tenaga kerja terampil. Meskipun saat ini ada perusahaan yang menyediakan layanan transformasi
adalah hambatan utama untuk pendekatan ini. Mengingat masalah ini, tanaman dan banyak transformasi dalam beberapa bulan, biayanya masih cukup tinggi, dan layanan ini dibatasi
komunitas ilmiah sedang mencari NBT yang memungkinkan generasi hanya untuk beberapa tanaman. Selain itu, karakterisasi molekuler dari peristiwa ini dapat memakan waktu,
kultivar bebas transgen elit, seperti pengiriman topikal dsRNA/amiRNA melelahkan, dan mahal pada tanaman bandel (misalnya, kapas dan pohon kayu). Tergantung pada sifat agronomi
menggunakan nanopartikel pembawa, pengeditan genom menggunakan yang menarik, fenotip dalam kondisi rumah kaca merupakan faktor pembatas untuk memilih peristiwa terbaik ( dan
strategi bebas DNA, dan kemungkinan penggunaan clean- teknologi gen. ketersediaan tenaga kerja terampil. Meskipun saat ini ada perusahaan yang menyediakan layanan transformasi
Departemen Pertanian Amerika Serikat (USDA) mengumumkan peraturan tanaman dan banyak transformasi dalam beberapa bulan, biayanya masih cukup tinggi, dan layanan ini dibatasi
khusus untuk tanaman bebas transgen yang dikirim ke pengeditan genom, hanya untuk beberapa tanaman. Selain itu, karakterisasi molekuler dari peristiwa ini dapat memakan waktu,
mengingat tanaman baru ini tidak dapat dibedakan dari yang melelahkan, dan mahal pada tanaman bandel (misalnya, kapas dan pohon kayu). Tergantung pada sifat agronomi
dikembangkan melalui metode pemuliaan konvensional. Demikian pula, yang menarik, fenotip dalam kondisi rumah kaca merupakan faktor pembatas untuk memilih peristiwa terbaik ( dan
Kanada, Brasil, dan Argentina mengadopsi langkah-langkah pengaturan ketersediaan tenaga kerja terampil. Meskipun saat ini ada perusahaan yang menyediakan layanan transformasi
untuk tanaman baru dengan genom yang diedit, mirip dengan USDA, tanaman dan banyak transformasi dalam beberapa bulan, biayanya masih cukup tinggi, dan layanan ini dibatasi
tetapi ini akan dievaluasi kasus per kasus (misalnya, sehubungan dengan hanya untuk beberapa tanaman. Selain itu, karakterisasi molekuler dari peristiwa ini dapat memakan waktu,
strategi pengeditan genom yang digunakan). Sebaliknya, negara-negara melelahkan, dan mahal pada tanaman bandel (misalnya, kapas dan pohon kayu). Tergantung pada sifat agronomi
Eropa telah mengadopsi langkah-langkah peraturan ketat yang serupa yang menarik, fenotip dalam kondisi rumah kaca merupakan faktor pembatas untuk memilih peristiwa terbaik
dengan tanaman GM konvensional. Akhirnya, meskipun setiap pendekatan ( karakterisasi molekuler dari peristiwa ini dapat memakan waktu, melelahkan, dan mahal pada tanaman bandel
memiliki kelebihan dan kekurangan, pemuliaan konvensional dan rekayasa (misalnya, kapas dan pohon kayu). Tergantung pada sifat agronomi yang menarik, fenotip dalam kondisi rumah kaca
genetika dapat bekerja sama untuk mempotensiasi pengembangan NBT merupakan faktor pembatas untuk memilih peristiwa terbaik ( karakterisasi molekuler dari peristiwa ini dapat
dengan karakteristik baru yang aman, cepat, dan spesifik. memakan waktu, melelahkan, dan mahal pada tanaman bandel (misalnya, kapas dan pohon kayu). Tergantung pada
sifat agronomi yang menarik, fenotip dalam kondisi rumah kaca merupakan faktor pembatas untuk memilih
peristiwa terbaik (Cobb dkk., 2013; Singh dkk., 2019). Dengan demikian, pilihan metodologi yang lebih akurat untuk
fenotip dianjurkan.Casari dkk. (2019)menggunakan analisis termografi untuk mengkonfirmasi variasi genotipe dalam
Kultur Jaringan Tumbuhan respon kekeringan pada jagung. de Sousa dkk. (2017)menggunakan pencitraan fluoresensi klorofil dari kurva cahaya
Kultur jaringan sering menjadi batasan penting dalam menghasilkan cepat pada jagung untuk diskriminasi genotipe toleransi kekeringan.Zhao dkk. (2019)meninjau secara menyeluruh
peristiwa transgenik atau efisiensi transformasi karena memerlukan fitur fenotip tanaman dan membahas kelebihan dan kekurangan dari pendekatan ini. Secara keseluruhan,
banyak pengalaman profesional untuk melakukannya (Altpeter dkk., penyaringan lapangan adalah evaluasi fenotipik yang paling kuat dan paling dekat dengan kenyataan petani.
2016). Penggunaan protokol transformasi khusus atau prosedur Namun, penyaringan lapangan hanya dapat menampung sejumlah kecil acara untuk penilaian yang lebih rinci.
kultur jaringan untuk setiap strategi atau Selain itu, otorisasi oleh Komisi Nasional untuk
Keamanan hayati untuk melakukan uji coba lapangan seringkali agak birokratis produksi, mengefektifkan pengembangan produk baru, dan menjadikan agribisnis semakin berdaya
dan memakan waktu. saing (Mohammadinejad dkk., 2019). Penggunaan vektor entri atau biner yang dioptimalkan dan
kemajuan signifikan dalam transformasi genetik tanaman (baik di rumah maupun oleh fasilitas kultur
jaringan) telah membantu dalam pembuktian konsep dan mempercepat pengembangan produk
PERSPEKTIF MASA DEPAN bioteknologi baru. Sebaliknya, transformasi konstitutif genom kloroplas untuk mengekspresikan protein
heterolog yang berlebihan atau mengakumulasi RNA atau dsRNA telah menjadi strategi yang kuat untuk
Kemajuan dalam genomik fungsional dan teknologi omics lainnya selama meningkatkan akumulasi protein dan meningkatkan stabilitas RNA.Jin dan Daniell, 2015). Pendekatan ini
bertahun-tahun telah mengungkapkan fungsi dan fitur biologis dari sangat menarik sehubungan dengan peristiwa elit untuk pengendalian hama serangga menggunakan
elemen rekayasa genetika yang tak terhitung banyaknya. Eksplorasi RNAi dan kurangnya transmisi transgen melalui serbuk sari. Namun, keberadaan transgen di kedua
elemen-elemen ini telah memungkinkan para peneliti untuk mendapatkan tanaman dan tanaman biofactory telah membatasi pelepasan komersial tanaman GM ini dan
lebih banyak peristiwa elit dalam waktu yang dikurangi secara signifikan. penerimaan komersial bahan baku dan produk sampingannya. Penggunaan gen penanda atau reporter
Beberapa Pemerintah Indonesia dikaitkan dengan ciri-ciri agronomi yang yang dapat dipilih sangat penting untuk proses memperoleh peristiwa elit tetapi mungkin tidak
memiliki kepentingan ekonomi yang besar, dan beberapa NBT telah diperlukan ketika digunakan secara komersial dalam kondisi lapangan. Sampai baru-baru ini,
dikembangkan untuk mengatasi keterbatasan utama yang ada di sektor penghapusan elemen-elemen ini tidak mungkin, tetapi sekarang, dengan teknologi pengeditan genom
pertanian. Meskipun isolasi, kloning, dan transfer elemen-elemen ini, baru, ini menjadi sangat mungkin (baik dengan urutan penghapusan lengkap dan knockdown gen). Alat
ekspresi heterolog dan downregulasi GOI, dan pengeditan genom (DNA pengeditan genom baru merevolusi bioteknologi tanaman dan menghasilkan alternatif baru untuk
dan RNA) saat ini dianggap sebagai metode yang lebih mudah diakses, mengurangi keterbatasan pertanian. Beberapa pendekatan menggunakan sistem CRISPR/Cas9 atau
pengetahuan tentang kelebihan dan kekurangannya penting untuk lebih nuklease serupa lainnya (misalnya, NHEJ untuk gen knockdown) telah memungkinkan generasi garis
memanfaatkan potensinya dan untuk pengembangan NBT yang kuat. tanaman bebas transgen baru, yang saat ini non-GMO, karena pada dasarnya adalah mutan dari
Ekspresi berlebih dari GOI eksogen dan regulasi naik atau turun dari GOI tanaman konvensional. Pengembangan NBT yang menggunakan teknologi bebas transgen atau yang
endogen yang didorong oleh promotor spesifik-tahap atau jaringan dan memiliki potensi untuk menghasilkan peristiwa elit bebas transgen (pengeditan genom) telah menjadi
yang diinduksi stres telah memungkinkan ekspresi gen dalam jaringan terkenal dalam beberapa tahun terakhir karena potensi penerimaan konsumen yang lebih tinggi, biaya
yang diinginkan, pada tahap yang diinginkan, atau hanya ketika tanaman regulasi yang lebih rendah daripada pabrik GM dan pengurangan dampaknya terhadap ekosistem ( NHEJ
berada di bawah tekanan tertentu . Dengan cara ini, adalah mungkin untuk untuk gen knockdown) telah memungkinkan generasi garis tanaman bebas transgen baru, yang saat ini
mengurangi hukuman hasil pada tanaman GM dan efek merugikan pada dianggap non-GMO, karena pada dasarnya adalah mutan dari tanaman konvensional. Pengembangan
organisme non-target. Namun, penggunaan promotor spesifik jaringan NBT yang menggunakan teknologi bebas transgen atau yang memiliki potensi untuk menghasilkan
yang paling umum tidak menghasilkan ekspresi jaringan yang cukup untuk peristiwa elit bebas transgen (pengeditan genom) telah menjadi terkenal dalam beberapa tahun terakhir
memberikan fenotipe yang diharapkan, dan promotor yang diinduksi stres karena potensi penerimaan konsumen yang lebih tinggi, biaya regulasi yang lebih rendah daripada
dari transkripsi tidak selalu mengaktifkan dengan kecepatan yang cukup pabrik GM dan pengurangan dampaknya terhadap ekosistem ( NHEJ untuk gen knockdown) telah
untuk mencapai tingkat resistensi yang diinginkan dalam kondisi itu. . Oleh memungkinkan generasi garis tanaman bebas transgen baru, yang saat ini dianggap non-GMO, karena
karena itu, karakterisasi GOI yang ekstensif, pencarian urutan promotor pada dasarnya adalah mutan dari tanaman konvensional. Pengembangan NBT yang menggunakan
baru dengan spesifisitas dan ketahanan yang lebih tinggi untuk fenotipe teknologi bebas transgen atau yang memiliki potensi untuk menghasilkan peristiwa elit bebas transgen
yang diinginkan,cis-elemen pengatur dan validasi promotor virus atau (pengeditan genom) telah menjadi terkenal dalam beberapa tahun terakhir karena potensi penerimaan
sintetis yang mengandung spesifik cis-elemen pengatur pada tanaman konsumen yang lebih tinggi, biaya regulasi yang lebih rendah daripada pabrik GM dan pengurangan
tanaman masih diperlukan. Selain itu, penggunaan sekuens intron atau dampaknya terhadap ekosistem (Schiemann dkk., 2019; Dalakouras dkk., 2020). Secara keseluruhan,
penambah untuk meningkatkan tingkat transkripsi atau translasi GOI, penelitian dasar dan terapan sangat penting untuk pengembangan tanaman baru yang memenuhi
optimalisasi semua elemen yang ada dalam transgen kaset DNA dan kebutuhan pertanian di seluruh dunia dalam waktu singkat dengan biaya rendah dan efek minimal yang
penerapan sinyal peptida untuk menargetkan protein ke organel tidak diinginkan pada organisme non-target.
penyimpanan telah terbukti menjadi teknik penting dalam bioteknologi

tanaman. Misalnya, temuan ini penting untuk pengembangan NBT untuk
mengendalikan hama serangga secara efisien yang menargetkan jaringan
tertentu dari tanaman inang (misalnya, kapas boll
KONTRIBUSI PENULIS
kumbang, yang lebih suka menyerang kuncup bunga kapas), tulis MB dalam manuskrip tersebut. FA memberikan angkanya. di mana
sejumlah besar protein entomotoksik diperlukan MG, VM, MA-F, dan MFG direvisi dan disediakan (Ribeiro dkk., 2017). Sebaliknya,
masukan
sebagian besar sifat-sifat penting secara agronomis pada tanaman pangan pada naskah.
diturunkan Semua penulis
secara kuantitatif menyetujui
(poligenik). versi
Sampai saat ini,
final.
banyak lokus sifat kuantitatif (QTL) telah dikloning untuk menggali gen kandidat yang berkontribusi besar. Identifikasi gen-gen
penting yang terkait dengan sifat-sifat agronomi yang diinginkan ini patut mendapat perhatian (Wang dkk., 2019).
PENDANAAN
MB berterima kasih kepada CNPq atas beasiswa penelitian

Tanaman telah berhasil direkayasa sebagai biofactories pascadoktoral (PDJ 150936/2018-4). FA berterima kasih kepada
untuk mensintesis biomolekul kepentingan farmasi dan CAPES atas beasiswa Ph.D. (88882.157206/2017-01). MFG
industri; upaya ini memerlukan optimalisasi elemen berterima kasih atas dukungan keuangan kepada EMBRAPA, UCB,
genetik tersebut di atas untuk meningkatkan skala besar CNPq, PlantStress Biotech - INCT, CAPES, dan FAP-DF.
REFERENSI Bally, J., Paget, E., Droux, M., Pekerjaan, C., Pekerjaan, D., dan Dubald, M. (2008). Keduanya
stroma dan lumen tilakoid kloroplas tembakau kompeten untuk
Abdollahi, MR, Moieni, A., Salmanian, AH, dan Mousavi, A. (2009). pembentukan ikatan disulfida dalam protein rekombinan. Tanaman
Embriogenesis sekunder dan ekspresi transien dari β-glukuronidase gen dalam Bioteknol. J.6, 46–61. doi: 10.1111/j.1467-7652.2007.00298.x
hipokotil embrio yang diturunkan dari mikrospora rapeseed. Biol. Tanaman.53:573. Bank, IR, Zhang, Y., Wiggins, BE, Heck, GR, dan Ivashuta, S. (2012). RNA
doi: 10.1007/BF00225896 umpan: komponen yang muncul dari jaringan pengatur pabrik? Sinyal Tanaman.
Abudayyeh, OO, Gootenberg, JS, Essletzbichler, P., Han, S., Joung, J., Belanto, Perilaku7, 1188-1193. doi: 10.4161/psb.21299
JJ, dkk. (2017). Penargetan RNA dengan CRISPR-Cas13.alam 550, 280-284. doi: Bao, A., Chen, H., Chen, L., Chen, S., Hao, Q., Guo, W., dkk. (2019). CRISPR/Cas9-
10.1038/alam24049 mutagenesis target gen GmSPL9 yang dimediasi mengubah arsitektur tanaman
Adem, M., Beyene, D., dan Feyissa, T. (2017). Prestasi terbaru diperoleh pada kedelai Biol Tanaman BMC. 19:131. doi: 10.1186/s12870-019-1746-6
dengan transformasi kloroplas. Metode Tanaman 13:30. doi: 10.1186/ Barahimipour, R., Strenkert, D., Neupert, J., Schroda, M., Merchant, SS, dan Bock,
s13007-017-0179-1 R. (2015). Membedah kontribusi konten GC dan penggunaan kodon terhadap
Agarwal, PK, Gupta, K., Lopato, S., dan Agarwal, P. (2017). Dehidrasi ekspresi gen dalam model algaChlamydomonas reinhardtii. Tanaman J 84, 704-717.
faktor transkripsi pengikat elemen responsif dan aplikasinya untuk doi: 10.1111/tpj.13033
rekayasa toleransi stres. J. Eks. Bot. 68, 2135–2148. doi: 10.1093/jxb/ Basso, MF, da Cunha, BADB, Ribeiro, AP, Martins, PK, de Souza, WR,
erx118 de Oliveira, NG, dkk. (2017). Peningkatan transformasi genetik tebu (saccharum
Aggarwal, PR, Nag, P., Choudhary, P., Chakraborty, N., dan Chakraborty, spp.) kalus embriogenik yang dimediasi oleh Agrobacterium tumefaciens.Curr.
S. (2018). Genotipe-independenAgrobacterium rhizogenes-Media Protokol Tumbuhan Biol.2, 221–239. doi: 10.1002/cppb.20055
transformasi akar buncis: metode yang cepat dan efisien untuk studi genetika Basso, MF, Ferreira, PCG, Kobayashi, AK, Harmon, FG, Nepomuceno,
terbalik. Metode Tanaman 14:55. doi: 10.1186/s13007-018-0315-6 AL, Molinari, HBC, dkk. (2019). MicroRNA dan alat bioteknologi baru untuk
Agrawal, A., Rajamani, V., Reddy, VS, Mukherjee, SK, dan Bhatnagar, RK modulasi dan meningkatkan toleransi stres pada tanaman.Tanaman
(2015). Tanaman transgenik yang mengekspresikan mikroRNA spesifik serangga Bioteknol. J.17, 1482-1500. doi: 10.1111/pbi.13116
secara berlebihan memperoleh aktivitas insektisida terhadapHelikopter Armigera: Basso, MF, Lourenco-Tessutti, IT, Busanello, C., Pinto, CEM, de Oliveira
alternatif teknologi toksin Bt. Transgenik Res. 24, 791–801. doi: 10.1007/ Freitas, E., Ribeiro, TP, dkk. (2020). Wawasan yang diperoleh dengan menggunakan modul
s11248-015-9880-x Aguiar, RWDS, Martins, ES, Ribeiro, BM, dan Monnerat, RG (2012). kapas yang berbedauceA1.7 promotor. Tanaman 251:56. doi: 10.1007/s00425-020-03348-8
Protein Cry10Aa sangat beracun bagi anthonomus grandis Boheman (Coleoptera:
Curculionidae), serangga hama penting di ladang kapas Brasil. Bt Res. Belele, CL, Sidorenko, L., Stam, M., Bader, R., Arteaga-Vazquez, MA, dan
3, 20–28. Chandler, VL (2013). Pengulangan tandem spesifik cukup untuk pembungkaman
Ali, MA, Azeem, F., Abbas, A., Joyia, FA, Li, H., dan Dababat, AA (2017). trans-generasi yang diinduksi paramutasi.Gen PLoS. 9:e1003773. doi: 10.1371/
Strategi transgenik untuk peningkatan ketahanan nematoda pada tanaman. Depan. Ilmu journal.pgen.1003773
Tanaman.8:750. doi: 10.3389/fpls.2017.00750 Benfey, PN, Ren, L., dan Chua, NH (1990). Ekspresi spesifik jaringan dari
Altpeter, F., Springer, NM, Bartley, LE, Blechl, AE, Brutnell, TP, Citovsky, Subdomain penambah CaMV 35S pada tahap awal pengembangan tanaman. EMBO
V., dkk. (2016). Memajukan transformasi tanaman di era pengeditan genom.sel J. 9, 1677–1684.
tanaman 28, 1510–1520. doi: 10.1105/tpc.16.00196 Beringer, J., Chen, W., Garton, R., Sardesai, N., Wang, PH, Zhou, N., et al. (2017).
Aman, R., Ali, Z., Bokong, H., Mahas, A., Aljedaani, F., Khan, MZ, dkk. (2018a). Perbandingan dampak promotor virus dan turunan tanaman yang mengatur gen
Interferensi virus RNA melalui sistem CRISPR/Cas13a pada tumbuhan. Biola genom. 19:1. penanda yang dapat dipilih pada transformasi jagung dan ekspresi transgen.
doi: 10.1186/s13059-017-1381-1 Perwakilan Sel Tumbuhan. 36, 519–528. doi: 10.1007/s00299-017-2099-y
Aman, R., Mahas, A., Butt, H., Aljedaani, F., dan Mahfouz, M. (2018b). Rekayasa Beyene, G., Buenrostro-Nava, MT, Damaj, MB, Gao, SJ, Molina, J., dan
Interferensi virus RNA melalui mesin CRISPR/Cas13 di Arabidopsis.Virus Mirkov, TE (2011). Peningkatan ekspresi gen transien yang belum pernah terjadi
10:732. doi: 10.3390/v10120732 sebelumnya dari kaset minimal menggunakan terminator ganda.Perwakilan Sel Tumbuhan.
Ambawat, S., Sharma, P., Yadav, NR, dan Yadav, RC (2013). transkripsi MYB 30, 13–25. doi: 10.1007/s00299-010-0936-3
gen faktor sebagai regulator untuk respon tanaman: gambaran. Fisiol. Mol.Biol. Bock, R. (2015). Rekayasa genom plastid: metode, alat, dan aplikasi
tanaman19, 307–321. doi: 10.1007/s12298-013-0179-1 dalam penelitian dasar dan bioteknologi. annu. Pdt. Tanaman Biol.66, 211–241. doi:
Anand, A., Bass, SH, Wu, E., Wang, N., McBride, KE, Annaluru, N., dkk. (2018). 10.1146/annurev-arplant-050213-040212
Sistem vektor ternary yang ditingkatkan untuk Agrobakterium-dimediasi Borges, F., dan Martienssen, RA (2015). Dunia RNA kecil yang berkembang di
transformasi jagung cepat. Tanaman Mol.Biol. 97, 187–200. doi: 10.1007/ tanaman. Nat Rev Mol Sel Biol. 16, 727–741. doi: 10.1038/nrm4085
s11103-018-0732-y Anderson, DJ, dan Birch, RG (2012). Penanganan minimal dan super Breyne, P., van Montagu, M., Depicker, N., dan Gheysen, G. (1992).
fasilitator vektor biner efisien, Agrobakterium-Media, transformasi tebu Karakterisasi wilayah perlekatan perancah tanaman dalam fragmen DNA yang
(saccharum sp. hibrida).Trop. Tumbuhan Biol.5, 183-192. Armstrong, C., menormalkan ekspresi transgen dalam tembakau. sel tanaman 4, 463–471. doi:
Duncan, D., Kemper, EL, dan Oliveira, SBF (2015). tebu 10.1105/tpc.4.4.463
Metode Regenerasi dan Transformasi. Paten No. WO2015099674A1. Arzani, Burke, WG, Kaplanoglu, E., Kolotilin, I., Menassa, R., dan Donly, C. (2019). RNA
A., dan Ashraf, M. (2016). Rekayasa cerdas sumber daya genetik untuk gangguan pada ulat tanduk tembakau, manduca jumat, menggunakan RNA untai ganda
meningkatkan toleransi salinitas pada tanaman tanaman. Kritis. Pdt. Tanaman Sci.35, panjang yang disandikan plastid. Depan. Ilmu Tanaman.10:313. doi: 10.3389/fpls.2019.
146-189. Arzani, A., dan Ashraf, M. (2017). Gandum purba yang dibudidayakan (Tritikum spp.): 00313
sumber potensial produk makanan yang bermanfaat bagi kesehatan. Komp. Pdt. Food Sci. Food Saf. Cai, Y., Chen, L., Sun, S., Wu, C., Yao, W., Jiang, B., dkk. (2018). CRISPR/Cas9-
16, 477–488. penghapusan dimediasi fragmen genom besar dalam kedelai. Int.J.Mol.Sci.
Ascenzi, R., lker, B., Todd, JJ, Sowinski, DA, Schimeneck, CR, Allen, 19:3835. doi: 10.3390/ijms19123835
GC, dkk. (2003). Analisis interaksi trans-pembungkaman menggunakan peredam Canto-Pastor, A., dan Santos, B. (2019). Peningkatan resistensi terhadap bakteri
transkripsi dari berbagai kekuatan dan target dengan dan tanpa mengapit daerah dan patogen oomycete dengan target tandem pendek meniru RNA dalam tomat.Prok. Natal
perlekatan matriks nuklir.Transgenik Res. 12, 305–318. doi: 10.1023/a: Akademik Sains Amerika Serikat116, 2755–2760. doi: 10.1073/pnas.181438 0116
1023310118231
Aznar, A., Chalvin, C., Shih, PM, Maimann, M., Ebert, B., Birdseye, DS, dkk. Carlson, SR, Rudgers, GW, Zieler, H., Mach, JM, Luo, S., Grunden, E.,
(2018). Penumpukan gen dari beberapa sifat untuk hasil tinggi gula yang dapat difermentasi dalam dkk. (2007). Transmisi meiotik dariin vitro-merakit minichromosome jagung otonom.
biomassa tanaman.Bioteknologi. Bahan Bakar Nabati11:2. doi: 10.1186/s13068-017-1007-6 Bally, J., Gen PLoS. 3:e179. doi: 10.1371/journal.pgen.0030179 Casari, R., Paiva, DS, dan Silva,
McIntyre, GJ, Doran, RL, Lee, K., Perez, A., Jung, H., dkk. (2016).Di dalam- VNB (2019). Menggunakan termografi untuk mengonfirmasi
tanaman perlindungan terhadap Helikopter Armigera dengan produksi hpRNA panjang variasi genotipe untuk respon kekeringan pada Jagung. Int.J.Mol.Sci. 20:2273. doi:
dalam kloroplas. Depan. Ilmu Tanaman.7:1453. doi: 10.3389/fpls.2016.01453 10.3390/ijms20092273
Castel, SE, dan Martiensen, RA (2013). Interferensi RNA dalam nukleus: peran dan pemilihan tanaman transgenik bebas penanda. Sel In Vitro. Dev.Biol. tanaman37,
untuk RNA kecil dalam transkripsi, epigenetik dan seterusnya. Nat Rev. Genet. 14, 103-113.
100-112. doi: 10.1038/nrg3355 Ebinuma, H., Sugita, K., Endo, S., Matsunaga, E., dan Yamada, K. (2004).
Chavez, A., Scheiman, J., Vora, S., Pruitt, BW, Tuttle, M., Lin, S., dkk. (2015). “Eliminasi gen penanda dari tanaman transgenik menggunakan sistem vektor MAT,”
Pemrograman transkripsi yang dimediasi Cas9 yang sangat efisien. Metode Nat 12, di Tanaman Transgenik: Metode dan Protokol, ed. L. Peña, (Totowa, NJ: Humana
326–328. doi: 10.1038/nmet.3312 Press), 237–253. doi: 10.1385/1-59259-827-7:237
Che, P., dan Anand, A. (2018). Mengembangkan fleksibel, efisiensi tinggi Ebinuma, H., Sugita, K., Endo, S., Matsunaga, E., dan Yamada, K. (2005).
Agrobakterium-Media sistem transformasi sorgum dengan aplikasi yang Eliminasi gen penanda dari tanaman transgenik menggunakan sistem vektor MAT.
luas. Tanaman Bioteknol. J.16, 1388–1395. doi: 10.1111/pbi.12879 Metode Mol Biol. 286, 237-254.
Chen,W., Zhang,X., Fan,Y., Li,B., Ryabov,E., Shi,N., dkk. (2018). genetik Ferdous, J., Hussain, SS, dan Shi, BJ (2015). Peran microRNAs dalam kekeringan tanaman
jaringan untuk pembungkaman RNA sistemik pada tanaman. Fisiol Tumbuhan. 176, 2700–2719. doi: toleransi. Tanaman Bioteknol. J.13, 293–305. doi: 10.1111/pbi.12318
10.1104/pp.17.01828 Belenggu, J., Samsonov, A., Zenser, N., Zhang, F., Zhang, H., dan Malkov, D. (2015).
Christensen, AC, Lyznik, A., Mohammed, S., Elowsky, CG, Elo, A., Yule, R. Penandaan gen endogen dengan protein fluoresen. Metode Mol Biol. 1239,
dkk. (2005). Domain ganda, urutan protein organel penargetan ganda diArabidopsis 231–240. doi: 10.1007/978-1-4939-1862-1_12
dapat menggunakan kodon start non-AUG. sel tanaman 17, 2805–2816. doi: Gallegos, JE, dan Rose, AB (2015). Misteri abadi dari intron-mediated
10.1105/tpc.105.035287 peningkatan. Ilmu Tanaman. 237, 8–15. doi: 10.1016/j.plantsci.2015.04.017
Clancy, M., dan Hannah, LC (2002). Penyambungan intron pertama jagung Sh1 adalah Gallegos, JE, dan Rose, AB (2017). Urutan DNA intron bisa lebih
penting untuk peningkatan ekspresi gen, dan motif kaya-T meningkatkan ekspresi tanpa penting daripada promotor proksimal dalam menentukan situs inisiasi
mempengaruhi penyambungan. Fisiol Tumbuhan. 130, 918-929. doi: 10.1104/ pp.008235 transkrip. sel tanaman 29, 843–853. doi: 10.1105/tpc.17.00020
Gao, W., Liu, W., Zhao, M., dan Li, WX (2015). NERF mengkodekan ke RING E3 ligase
Cobb, JN, Declerck, G., Greenberg, A., Clark, R., dan McCouch, S. (2013). penting untuk ketahanan terhadap kekeringan dan meningkatkan ekspresi gen
Fenotip generasi berikutnya: persyaratan dan strategi untuk meningkatkan antisense NFYA5 di Arabidopsis. Asam Nukleat Res. 43, 607-617. doi: 10.1093/nar/
pemahaman kita tentang hubungan genotipe-fenotipe dan relevansinya dengan gku1325
perbaikan tanaman. Teori. aplikasi gen.126, 867–887. doi: 10.1007/ Garcia, RA, Lima Pepino Macedo, L., Cabral do Nascimento, D., Gillet, F.-X.,
s00122-013-2066-0 Moreira-Pinto, CE, Faheem, M., dkk. (2017). Nuklease sebagai penghalang
Cox, DBT, Gootenberg, JS, Abudayyeh, OO, Franklin, B., Kellner, MJ, pembungkaman gen pada kumbang kapas,anthonomus grandis. PLoS Satu
Joung, J., dkk. (2017). Pengeditan RNA dengan CRISPR-Cas13.Sains 358, 1019-1027. 12:e0189600. doi: 10.1371/journal.pone.0189600
Gelvin, SB (2010). Protein nabati yang terlibat dalamAgrobakterium-genetik yang diperantarai
Cunningham, FJ, Goh, NS, Demirer, GS, Matos, JL, and Landry, MP (2018). transformasi. annu. Pdt. Fitopatol.48, 45-68.
Pengiriman yang dimediasi nanopartikel menuju kemajuan rekayasa genetika Gillet, FX, Garcia, RA, Macedo, LLP, Albuquerque, EVS, Silva, MCM,
tanaman.Tren Bioteknologi. 36, 882-897. doi: 10.1016/j.tibtech.2018.03.009 dan Grossi-de-Sa, MF (2017). Menyelidiki partikel ribonukleoprotein yang direkayasa untuk
Dalakouras, A., Wassenegger, M., Dadami, E., Ganopoulos, I., Pappas, M., dan meningkatkan pengiriman RNAi oral pada hama serangga tanaman.Depan. Fisiol.8:256. doi:
Papadopoulou, KK (2020). RNAi bebas transgenik: aplikasi eksogen molekul 10.3389/fphys.2017.00256
RNA pada tanaman.Fisiol Tumbuhan. 182, 38-50. doi: 10.1104/pp.19.00570 Goto, S., Sasakura-Shimoda, F., Yamazaki, M., Hayashi, N., Suetsugu, M., Ochiai,
Daspute, AA, Yunxuan,X., Gu,M., Kobayashi,Y., Wagh,S., Panche,A., dkk. H., dkk. (2016). Pengembangan padi tahan penyakit dengan ekspresi WRKY45 yang
(2019). Agrobacterium rhizogenesTransformasi akar berbulu yang dimediasi sebagai alat untuk responsif terhadap patogen.Tanaman Bioteknol. J.14, 1127-1138. doi: 10,1111/pbi.
mengeksplorasi fungsi gen yang responsif terhadap aluminium. Masa depan Sci.OA5:FSO364. doi: 12481
10.4155/fsoa-2018-0065 Grevich, JJ, dan Daniell, H. (2005). Rekayasa genetika kloroplas: baru-baru ini
Davies, JP, Reddy, V., Liu, XL, Reddy, AS, Ainley, WM, Thompson, M., kemajuan dan perspektif masa depan. Kritis. Pdt. Tanaman Sci.24, 83-107.
dkk. (2014). Identifikasi dan penggunaan penambah virus bacilliform tebu pada Hackenberg,M., Gustafson,P., Langridge,P., dan Shi,BJ (2015). Diferensial
jagung transgenik.Biol Tanaman BMC. 14:359. doi: 10.1186/s12870-014-0359-3 de ekspresi microRNA dan RNA kecil lainnya dalam jelai antara kondisi air dan
Oliveira, RS, Oliveira-Neto, OB, Moura, HF, de Macedo, LL, Arraes, kekeringan. Tanaman Bioteknol. J.13, 2–13. doi: 10.1111/pbi.12220 Hammer,
FB, Lucena, WA, dkk. (2016). Tanaman kapas transgenik yang mengekspresikan toksin PE, Beilinson, V., dan Hinson, K. (2013). Chlamydomonas EPSPS
Cry1Ia12 memberikan ketahanan terhadap ulat grayak (Spodoptera frugiperda) dan Kloroplas Transit Peptida (CTP) dan Kaset Ekspresi dan Tanaman Transgenik
kumbang kapas (anthonomus grandis). Depan. Ilmu Tanaman.7:165. doi: 10.3389/fpls. Memanfaatkan CTP. Paten No US8426204B2.
2016.00165 Harrison, SJ, Mott, EK, Peterseli, K., Aspinall, S., Gray, JC, dan Cottage,
de Sousa, CAF, de Paiva, DS, Casari, R., de Oliveira, NG, Molinari, A.2006. Metode cepat dan kuat untuk mengidentifikasi transformasiArabidopsis
HBC, Kobayashi, AK, dkk. (2017). Prosedur untuk diskriminasi genotipe jagung thaliana bibit setelah transformasi celup bunga. Metode Tanaman 2:19. doi:
terhadap kekeringan dengan pencitraan fluoresensi klorofil kurva cahaya cepat. 10.1186/1746-4811-2-19
Metode Tanaman 13:61. doi: 10.1186/s13007-017-0209-z Hernandez-Garcia, CM, dan Finer, JJ (2014). Identifikasi dan validasi
Diamos, AG, dan Mason, HS (2018). Daerah sayap Chimeric 3' dengan kuat dari promotor dan cis-bertindak elemen peraturan. Ilmu Tanaman. 21, 109–119. doi:
meningkatkan ekspresi gen pada tanaman. Tanaman Bioteknol. J.16, 1971-1982. doi: 10.1016/j.plantsci.2013.12.007
10.1111/pbi.12931 Hou, J., Cong, R., Izumi-Willcoxon, M., Ali, H., Zheng, Y., Bermudez, E., et al.
Dolgova, AS, dan Dolgov, SV (2019). Daerah lampiran matriks sebagai alat untuk (2019). Rekayasa dariBacillus thuringiensis cry protein untuk meningkatkan aktivitas
mempengaruhi ekspresi transgen tanaman. 3 Biotek 9:176. doi: 10.1007/s13205-019-1709-5 melawan cacing akar jagung barat. Racun 11:162. doi: 10.3390/toxins11030162
Hu,Q., Kononowicz-Hodges,H., Nelson-Vasilchik,K., Viola,D., Zeng,P., Liu,
Dong,S., Delucca,P., Geijskes,RJ, Ke,J., Mayo,K., Mai,P., dkk. (2014). Rayuan H., dkk. (2008). FLP rekombinase-dimediasi rekombinasi situs-spesifik dalam beras.
di dalam Agrobakteriumtransformasi tebu yang dimediasi dan ekspresi transgen yang Tanaman Bioteknol. J.6, 176–188. doi: 10.1111/j.1467-7652.2007.00310.x Hu, Q.,
stabil. Teknologi Gula 16, 366–371. Nelson, K., dan Luo, H. (2006). Rekombinasi spesifik situs yang dimediasi FLP
Du, D., Jin, R., Guo, J., dan Zhang, F. (2019). Konstruksi tanpa penanda untuk modifikasi genom di turfgrass. Bioteknologi. Surat28, 1793–1804. doi:
jagung yang dimodifikasi secara genetik menggunakan vektor eksisi otomatis yang dapat diinduksi 10.1007/s10529-006-9162-z
panas. Gen (Basel) 10:374. doi: 10.3390/genes10050374 Huang, Y.-H., Su, J., Lei, Y., Brunetti, L., Gundry, MC, Zhang, X., dkk.
East-Seletsky, A., O'Connell, MR, Burstein, D., Knott, GJ, dan Doudna, JA (2017). Pengeditan epigenom DNA menggunakan DNMT3A yang diarahkan CRISPR-Cas SunTag.Biola
(2017). Penargetan RNA oleh enzim tipe VI-A CRISPR-Cas yang berfungsi genom. 18:176.
ortogonal.Sel mol 66, 373–383.e3. doi: 10.1016/j.molcel.2017.04.008 Ebinuma, ISA (2018). Status Global Tanaman Biotek/GM yang Dikomersialkan pada tahun 2018, ISAAA
H., dan Komamine, A. (2001). Vektor Mat (Transformasi Multi-Otomatis) Singkat 54-2018. Tersedia online di: http://www.isaaa.org/resources/publications/
sistem. onkogen dariAgrobakterium penanda positif untuk regenerasi briefs/54/executivesummary/default.asp (diakses 23 Juni 2019).
Izawati, AM, Masani, MY, Ismanizan, I., dan Parveez, GK (2015). Evaluasi Loke, JC, Stahlberg, EA, Strenski, DG, Haas, BJ, Wood, PC, dan Li, QQ
pada 2-deoxyglucose-6-fosfat fosfatase (Gen DOG(R)1) sebagai penanda yang dapat (2005). Kompilasi sinyal poliadenilasi mRNA diArabidopsis mengungkapkan
dipilih untuk kelapa sawit (Elaeis guineensis Jacq.) transformasi kalus embriogenik elemen sinyal baru dan struktur sekunder potensial. Fisiol Tumbuhan. 138,
yang dimediasi oleh Agrobacterium tumefaciens. Depan. Ilmu Tanaman.6:727. doi: 1457–1468. doi: 10.1104/pp.105.060541
10.3389/fpls.2015.00727 Lowder, LG, Paul, JW III, dan Qi, Y. (2017). transkripsi multipleks
Jin, S., dan Daniell, H. (2015). Genom kloroplas yang direkayasa menjadi lebih pintar. aktivasi atau represi pada tanaman menggunakan sistem berbasis CRISPR-dCas9. Metode
Tren Tanaman Sci. 20, 622–640. doi: 10.1016/j.tplants.2015.07.004 Mol Biol. 1629, 167–184. doi: 10.1007/978-1-4939-7125-1_12
Jin, WZ, Duan, RJ, Zhang, F., Chen, SY, Wu, YR, dan Wu, P. Lowder, LG, Zhang, D., Baltes, NJ, dan Paul, JW III (2015). CRISPR/Cas9
(2003). Penerapan sistem transposon Ac/Ds untuk menghasilkan tanaman kotak peralatan untuk pengeditan genom tanaman multipleks dan regulasi transkripsi.Fisiol
transgenik bebas gen penanda pada tanaman padi.Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao Tumbuhan. 169, 971–985. doi: 10.1104/pp.15.00636
19, 668–673. Mainkan, MR, Zotti, MJ, Smagghe, G., dan Christiaens, O. (2016). RNAi Macedo, LLP, Grossi-de-Sa, MF, Silva, MCM, dan Garcia, RA (2017).
efisiensi, sifat sistemik, dan metode pengiriman baru untuk pengendalian serangga hama: Peningkatan Efisiensi Penekanan Ekspresi Gen melalui penggunaan
apa yang kita ketahui sejauh ini. Depan. Fisiol.7:553. doi: 10.3389/fphys.2016. 00553 Molekul dsRNA yang Stabil Struktur. Paten: Hak Istimewa Inovasi.
Nomor Registrasi: BR 10 2017 006904 4. Deposit 04/04/04. Permohonan
Kawaguchi, R., dan Bailey-Serres, J. (2005). fitur urutan mRNA yang 870170022156. INPI.
berkontribusi pada regulasi translasi Arabidopsis. Asam Nukleat Res. 33, Maiti, IB, Gowda, S., Kiernan, J., Ghosh, SK, dan Shepherd, RJ (1997).
955-965. doi: 10.1093/nar/gki240 Analisis penghapusan promotor/pemimpin dan vektor ekspresi tanaman dengan
Kim, H., Kim, S.-T., Ryu, J., Kang, B.-C., Kim, J.-S., and Kim, S.-G. (2017). virus mosaik figwort (FMV) promotor transkrip panjang penuh (FLt) yang berisi
Pengeditan genom tanaman bebas DNA yang dimediasi CRISPR/Cpf1. Nat. domain penambah tunggal atau ganda. Transgenik Res. 6, 143-156. doi: 10.1023/a:
8:14406. doi: 10.1038/ncomms14406 1018477705019
Kim, JY, Gallo, M., dan Altpeter, F. (2012). Analisis integrasi transgen Manickavasagam M. Ganapathi A. Anbazhagan VR Sudhakar B. Selvaraj N.
dan ekspresi berikut transfer biolistik dari jumlah yang berbeda dari kaset Vasudevan, A., dkk. (2004).Agrobakteriumtransformasi genetik yang dimediasi dan
ekspresi minimal ke tebu (saccharum sp. hibrida).Kultus Organ Jaringan Sel pengembangan tebu tahan herbisida (saccharum spesies hibrida) menggunakan
Tumbuhan. (PCTOC)108, 297–302. tunas ketiak. Perwakilan Sel Tumbuhan. 23, 134-143. doi: 10.1007/s00299-004-0794-
Konermann, S., Brigham, MD, Trevino, AE, Joung, J., Abudayyeh, OO, y
Barca, C., dkk. (2014). Aktivasi transkripsi skala genom oleh kompleks CRISPR- Mayavan, S., Subramanyam, K., Arun, M., Rajesh, M., Kapil Dev, G., Sivanandhan,
Cas9 yang direkayasa.alam 517:583. doi: 10.1038/nature14136 Kong, X., Zhou, G., dkk. (2013).Agrobacterium tumefaciens-dimediasi dalam strategi transformasi
S., Yin, S., Zhao, Z., Han, Y., dan Wang, W. (2016). Menekankan- benih tanaman tebu. Perwakilan Sel Tumbuhan. 32, 1557–1574. doi: 10. 1007/
ekspresi gen F-box yang dapat diinduksi TaFBA1 dari gandum meningkatkan toleransi s00299-013-1467-5
kekeringan pada tanaman tembakau transgenik tanpa mempengaruhi pertumbuhan dan Mayavan, S., Subramanyam, K., Jaganath, B., Sathish, D., Manickavasagam,
perkembangan. Depan. Ilmu Tanaman.7:1295. doi: 10.3389/fpls.2016.01295 Kumar, S., Arul, M., dan Ganapathi, A. (2015). Agrobakterium-dimediasi dalam transformasi genetik
L., dan Talwar, D. (2010). Generasi transgenik Bt bebas penanda tanaman setts tebu. Perwakilan Sel Tumbuhan. 34, 1835–1848. doi: 10.1007/
menunjukkan padi dan evaluasi ketahanannya terhadap penggerek batang kuning. J. Aplikasi gen.51, s00299-015-1831-8
243-257. doi: 10.1007/BF03208854 McCue, KF, Gardner, E., Chan, R., Thilmony, R., dan Thomson, J. (2019).
Laxa, M. (2017). Peningkatan yang dimediasi intron: alat untuk gen heterolog Penumpukan transgen pada kentang menggunakan sistem GAANTRY. Catatan Res. BMC
ekspresi pada tumbuhan? Depan. Ilmu Tanaman.7: 1977. doi: 10.3389/ 12:457. doi: 10.1186/s13104-019-4493-8
fpls.2016.01977 Lee, J., Kim, DH, dan Hwang, I. (2014). Penargetan spesifik protein untuk McLoughlin, AG, Wytinck, N., Walker, PL, Girard, IJ, Rashid, KY, dari Kievit,
membran selubung luar organel endosimbiosis, kloroplas, dan T., dkk. (2018). Identifikasi dan penerapan dsRNA eksogen memberikan
mitokondria. Depan. Ilmu Tanaman.5:173. doi: 10.3389/fpls.2014. 00173 perlindungan tanaman terhadapsclerotinia sclerotiorum dan Botrytis cinerea. Rep.
8:7320. doi: 10.1038/s41598-018-25434-4
Li, J., Brunner, AM, Meilan, R., dan Strauss, SH (2008). Lampiran matriks Metje-Sprink, J., Menz, J., Modrzejewski, D., dan Sprink, T. (2019). bebas DNA
elemen wilayah memiliki efek kecil dan variabel pada ekspresi dan stabilitas pengeditan genom: masa lalu, sekarang dan masa depan. Depan. Ilmu Tanaman.9:1957. doi:
transgen di bidang-tumbuh penduduk. Tanaman Bioteknol. J.6, 887–896. doi: 10.3389/fpls.2018.01957
10.1111/j. 1467-7652.2008.00369.x Mitsuhara, I., Ugaki, M., Hirochika, H., Ohshima, M., Murakami, T., Gotoh, Y.,
Li, M., Singh, R., Bazanova, N., Milligan, AS, Shirley, N., Langridge, P., dkk. dkk. (1996). Kaset promotor yang efisien untuk meningkatkan ekspresi gen
(2008). Ekspresi spasial dan temporal dari promotor spesifik sel transfer endosperm asing pada tanaman dikotil dan monokotil.Fisiol Sel Tumbuhan. 37, 49–59.
dalam beras dan jelai transgenik.Tanaman Bioteknol. J.6, 465–476. doi: 10.1111/ doi: 10.1093/oxfordjournals.pcp.a028913
j.1467-7652.2008.00333.x Mitter, N., Worrall, EA, Robinson, KE, Li, P., Jain, RG, Taochy, C., dkk. (2017).
Li,S., Cong,Y., Liu,Y., Wang,T., Shuai,Q., Chen,N., dkk. (2017). Optimasi Lembaran nano tanah liat untuk pengiriman topikal RNAi untuk perlindungan berkelanjutan
dari Agrobakteriumtransformasi -dimediasi dalam kedelai. Depan. Ilmu Tanaman.8:246. doi: terhadap virus tanaman. Tanaman Nat 3:16207. doi: 10.1038/nplants.2016.207
10.3389/fpls.2017.00246 Mohammadinejad, R., Shavandi, A., Raie, DS, Sangeetha, J., Soleimani, M.,
Liang, Q., Wang, K., Liu, X., Riaz, B., Jiang, L., Wan, X., dkk. (2019). ditingkatkan Hajibehzad, SS, dkk. (2019). Pertanian molekuler tanaman: produksi nanopartikel
akumulasi folat dalam jagung dan gandum yang dimodifikasi secara genetik. J. Eks. Bot. 70, logam dan protein terapeutik menggunakan pabrik hijau.Kimia Hijau. 21, 1845–
1539–1551. doi: 10.1093/jxb/ery453 1865.
Liang, Z., Chen, K., Li, T., Zhang, Y., Wang, Y., Zhao, Q., dkk. Bulan, HS, Abercrombie, LL, Eda, S., Blanvillain, R., Thomson, JG, Ow,
(2017). Pengeditan genom roti gandum bebas DNA yang efisien DW, dkk. (2011). Eksisi transgen dalam serbuk sari menggunakan sistem rekombinasi spesifik situs
menggunakan kompleks ribonukleoprotein CRISPR / Cas9.Nat. 8:14261. serin resolvase CinH-RS2 yang dioptimalkan kodon.Tanaman Mol.Biol. Reputasi.
doi: 10.1038/ncomms14261 75, 621–631. doi: 10.1007/s11103-011-9756-2
Liang, Z., Chen, K., Zhang, Y., Liu, J., Yin, K., Qiu, JL, dkk. (2018). genom Morran, S., Eini, O., Pyvovarenko, T., Induk, B., Singh, R., Ismagul, A., et al.
pengeditan roti gandum menggunakan pengiriman biolistik CRISPR / Cas9 transkrip (2011). Peningkatan toleransi stres gandum dan jelai dengan modulasi
in vitro atau ribonukleoprotein. Protokol Nat. 13, 413-430. doi: 10.1038/nprot. ekspresi faktor DREB/CBF.Tanaman Bioteknol. J.9, 230–249. doi: 10.1111/
2017,145 j.1467-7652.2010.0547.x
Liao, L., Ning, G., Liu, C., Zhang, W., dan Bao, M. (2013). intron dari Murray, EE, Lotzer, J., dan Eberle, M. (1989). Penggunaan kodon pada gen tanaman.Nukleat
5'-UTR dari gen FBP11 di petunia menampilkan fungsi seperti promotor dan Asam Res. 17, 477–498.
penambah. Ilmu Hortik. 154, 96-101. Nahampun, HN, Lopez-Arredondo, D., Xu, X., Herrera-Estrella, L., dan Wang,
Limera, C., Sabbadini, S., Manis, JB, dan Mezzetti, B. (2017). bioteknologi baru K.(2016). Penilaian gen ptxD sebagai penanda alternatif yang dapat dipilih untuk
alat untuk perbaikan genetik spesies buah berkayu utama. Depan. Ilmu Tanaman. Agrobakteriumtransformasi jagung yang dimediasi. Perwakilan Sel Tumbuhan. 35,
8:1418. doi: 10.3389/fpls.2017.01418 1121-1132. doi: 10.1007/s00299-016-1942-x
Naim, F., Dugdale, B., Kleidon, J., Brinin, A., Shand, K., Waterhouse, P., et al. Santos, CM, Romeiro, D., Silva, JP, Basso, MF, Molinari, HBC, dan
(2018). Pengeditan gen alel fitoena desaturase pisang Cavendish menggunakan Seratus, DC (2020). Protokol yang Ditingkatkan untuk Transformasi dan Regenerasi yang
CRISPR/Cas9.Transgenik Res. 27, 451–460. doi: 10.1007/s11248-018-0083-0 Ng, KK, Efisien darisetaria miring. Perwakilan Sel Tumbuhan. 39, 501–510. doi: 10.1007/s00299-
Motoda, Y., Watanabe, S., Sofiman Othman, A., Kigawa, T., Kodama, 019-02505-y
Y., dkk. (2016). Pengiriman protein intraseluler melalui peptida fusi pada tanaman Schiemann, J., Dietz-Pfeilstetter, A., Hartung, F., Kohl, C., Romeis, J., dan Sprink,
utuh.PLoS Satu 11:e0154081. doi: 10.1371/journal.pone.0154081 T. (2019). Penilaian risiko dan regulasi tanaman yang dimodifikasi oleh bioteknik
O'Geen, H., Ren, C., Nicolet, CM, Perez, AA, Halmai, J., Le, VM, dkk. (2017). modern: status saat ini dan tantangan masa depan.annu. Pdt. Tanaman Biol.70,
Pengeditan epigenom berbasis dCas9 menunjukkan bahwa akuisisi metilasi histone 699–726. doi: 10.1146/annurev-arplant-050718-100025
tidak cukup untuk represi gen target. Asam Nukleat Res. 45, 9901–9916. doi: Schöffl, F., Schröder, G., Kliem, M., dan Rieping, M. (1993). Urutan SAR
10.1093/nar/gkx578 mengandung fragmen DNA 395 bp memediasi peningkatan ekspresi gen-dosis yang
Onouchi, H., Yokoi, K., Machida, C., Matsuzaki, H., Oshima, Y., Matsuoka, K. berkorelasi dari gen kejutan panas chimaeric pada tanaman tembakau transgenik.
dkk. (1991). Pengoperasian sistem rekombinasi spesifik lokasi yang efisien dari Transgenik Res. 2, 93–100. doi: 10.1007/bf01969382
Zygosaccharomyces rouxii dalam sel tembakau. Asam Nukleat Res. 19, 6373–6378. Shan, X.-Y., Li, B., dan Zhang, J.-R. (2006). Produksi bebas penanda transgenik
doi: 10.1093/nar/19.23.6373 tanaman tembakau dengan sistem rekombinasi FLP/frt. Dagu. J. Bioteknologi.22,
Osakabe, Y., Watanabe, T., Sugano, SS, Ueta, R., Ishihara, R., Shinozaki, K., dkk. 744-749. doi: 10.1016/s1872-2075(06)60054-x
(2016). Optimalisasi pengeditan genom CRISPR / Cas9 untuk memodifikasi respons stres Shehryar, K., Khan, RS, Iqbal, A., Hussain, SA, Imdad, S., Bibi, A., dkk. (2019).
abiotik pada tanaman.Rep. 6:26685. doi: 10.1038/srep26685 Penumpukan transgen sebagai alat yang efektif untuk meningkatkan ketahanan penyakit pada
Papikian, A., Liu, W., Gallego-Bartolomé, J., dan Jacobsen, SE (2019). Khusus situs tanaman.Mol Bioteknologi. 62, 1–7. doi: 10.1007/s12033-019-00213-2
manipulasi Arabidopsis lokus menggunakan sistem CRISPR-Cas9 SunTag. Nat. Shen, B.-R., Zhu, C.-H., Yao, Z., Cui, L.-L., Zhang, J.-J., Yang, C.-W., dkk. (2017).
10:729. doi: 10.1038/s41467-019-08736-7 Peptida transit yang dioptimalkan untuk penargetan efektif beragam protein asing
Park, J.-J., Dempewolf, E., Zhang, W., dan Wang, Z.-Y. (2017). RNA- ke dalam kloroplas dalam beras. Rep. 7:46231. doi: 10.1038/srep46231 Shendure, J.,
aktivasi transkripsi terpandu melalui CRISPR / dCas9 meniru fenotipe ekspresi Balasubramanian, S., Gereja, GM, Gilbert, W., Rogers, J., Schloss,
berlebih di Arabidopsis. PLoS Satu 12:e0179410. doi: 10.1371/journal.pone. 0179410 JA, dkk. (2017). Urutan DNA pada 40: masa lalu, sekarang dan masa depan.alam
550:345. doi: 10.1038/s41586-019-1120-8
Petersen, K., Leah, R., Knudsen, S., dan Cameron-Mills, V. (2002). matriks Sidorenko, LV, Lee, T.-F., Woosley, A., Moskal, WA, Bevan, SA, Merlo,
daerah lampiran (MARs) meningkatkan frekuensi transformasi dan mengurangi PAO, dkk. (2017). Urutan pengkodean kaya GC mengurangi pembungkaman transgen kecil
varians ekspresi transgen dalam jelai. Tanaman Mol.Biol. 49, 45–58. doi: 10.1023/ yang dimediasi RNA seperti transposon.Tanaman Nat 3, 875–884. doi: 10.1038/
a:1014464127973 s41477-017-0040-6
Prentice, K., Smagghe, G., Gheysen, G., dan Christiaens, O. (2019). Nuklease Singh, D., Wang, X., Kumar, U., Gao, L., Noor, M., Imtiaz, M., dkk. (2019). Tinggi-
aktivitas menurunkan respons RNAi pada kumbang ubi jalar Cylas puncticollis throughput fenotip memungkinkan diseksi genetik penginapan tanaman di gandum.Depan.
. Biokimia Serangga. Mol.Biol.110, 80–89. doi: 10.1016/j.ibmb.2019. 04.001 Ilmu Tanaman.10:394. doi: 10.3389/fpls.2019.0394
Streubel, J., Blucher, C., Landgraf, A., dan Boch, J. (2012). Efektor RVD TERSEBUT
Qin, G., Gu, H., Ma, L., Peng, Y., Deng, XW, Chen, Z., dkk. (2007). Gangguan kekhususan dan efisiensi. Nat. Bioteknologi. 30, 593-595. doi: 10.1038/nbt.
gen phytoene desaturase menghasilkan fenotipe albino dan kerdil di Arabidopsis 2304
dengan mengganggu biosintesis klorofil, karotenoid, dan giberelin. Res. Sel 17, 471– Sun, Y., Zhang, X., Wu, C., He, Y., Ma, Y., Hou, H., dkk. (2016). Rekayasa
482. doi: 10.1038/cr.2007.40 tanaman padi tahan herbisida melalui rekombinasi homolog asetolaktat
Raja, MAG, Katas, H., dan Jing Wen, T. (2015). Stabilitas, pengiriman intraseluler, sintase yang dimediasi CRISPR/Cas9. Mol Tanaman 9, 628–631. doi: 10.1016/
dan pelepasan siRNA dari nanopartikel kitosan menggunakan cross-linker yang berbeda. j.molp.2016.01.001
PLoS Satu 10:e0128963. doi: 10.1371/journal.pone.0128963 Svitashev, S., Schwartz, C., Pemberi Pinjaman, B., Muda, JK, dan Mark Cigan,
Reichel, M., Li, Y., Li, J., dan Millar, AA (2015). Menghambat microRNA tanaman (2016). Pengeditan genom dalam jagung yang diarahkan oleh kompleks
aktivitas: SPONGE molekuler, MIMIC target, dan STTM semuanya menampilkan ribonukleoprotein CRISPR-Cas9.Nat. 7:13274. doi: 10.1038/ncomms1
kemanjuran variabel terhadap microRNA target. Tanaman Bioteknol. J.13, 915–926. 3274
doi: 10.1111/pbi.12327 Tabashnik, BE (2015). ABC resistensi serangga terhadap Bt.Gen PLoS. 11:e1005646.
Ribeiro, AP, de Souza, WR, Martins, PK, Vinecky, F., Duarte, KE, Basso, doi: 10.1371/journal.pgen.1005646
MF, dkk. (2017). Ekspresi gen BdMATE yang berlebihan meningkatkan toleransi Tang, X., Lowder, LG, Zhang, T., Malzahn, AA, Zheng, X., Voytas, DF, dkk.
aluminium dalamSetaria viridis. Depan. Ilmu Tanaman.8:865. doi: 10.3389/ (2017). Sistem CRISPR-Cpf1 untuk pengeditan genom yang efisien dan represi
fpls.2017.00865 Ribeiro, TP, Arraes, FBM, Lourenco-Tessutti, IT, Silva, MS, Lisei-de- transkripsi pada tanaman.Tanaman Nat 3:17018. doi: 10.1038/nplants.2017.103
Sa, ME, Lucena, WA, dkk. (2017). Kapas transgenik yang mengekspresikan toksin Cry10Aa Taparia, Y., Fouad, WM, Gallo, M., dan Altpeter, F. (2012). produksi cepat
memberikan ketahanan yang tinggi terhadap kumbang kapas.Tanaman Bioteknol. J.15, tebu transgenik dengan pengenalan lokus sederhana setelah transfer biolistik
997–1009. doi: 10.1111/pbi.12694 dari kaset ekspresi minimal dan embriogenesis langsung. Sel In Vitro.
Ribeiro, TP, Basso, MF, Carvalho, MHD, Macedo, LLPD, Silva, Dev.Biol. tanaman48, 15-22.
DMLD, Tessutti, ITL, dkk. (2020). Stabilitas dan ekspresi berlebih Cry10Aa spesifik Teotia, S., Singh, D., Tang, X., dan Tang, G. (2016). Berbasis RNA esensial
jaringan meningkatkan ketahanan kapas terhadap kumbang kapas.Bioteknologi. teknologi dan aplikasinya dalam genomik fungsional tanaman. Tren
inovasidoi: 10.1016/j.biori.2019.12.003 Bioteknologi. 34, 106–123. doi: 10.1016/j.tibtech.2015.12.001
Roca Paixo, JF, Gillet, F.-X., Ribeiro, TP, Bournaud, C., Lourenço-Tessutti, Thomson, DW, dan Dinger, ME (2016). Spons microRNA endogen:
IT, Noriega, DD, dkk. (2019). Peningkatan toleransi cekaman kekeringan di bukti dan kontroversi. Nat Rev. Genet. 17, 272–283.
Arabidopsis oleh fusi CRISPR/dCas9 dengan histone acetyl transferase. Rep. Tian, B., dan Graber, JH (2012). Sinyal untuk pembelahan pra-mRNA dan
9:8080. doi: 10.1038/s41598-019-44571-y poliadenilasi. Wiley Interdisiplin. Pdt. RNA3, 385–396. doi: 10.1002/
Ron, M., Kajala, K., Pauluzzi, G., Wang, D., Reynoso, MA, Zumstein, K., wrna.116 Tian,S., Jiang,L., Cui,X., Zhang,J., Guo,S., Li,M., dkk. (2018).
dkk. (2014). transformasi akar berbulu menggunakanAgrobacterium rhizogenes Rekayasa varietas semangka tahan herbisida melalui pengeditan dasar yang dimediasi
sebagai alat untuk mengeksplorasi ekspresi dan fungsi gen spesifik tipe sel CRISPR/Cas9. Perwakilan Sel Tumbuhan. 37, 1353-1356. doi: 10.1007/s00299-018- 2299-0
menggunakan tomat sebagai model. Fisiol Tumbuhan. 166, 455-469. doi: 10.1104/
pp.114.23 9392 Timerbaev, V., Mitiouchkina, T., Pushin, A., dan Dolgov, S. (2019). Produksi dari
Rosa, C., Kuo, YW, Wuriyanghan, H., and Falk, BW (2018). gangguan RNA tanaman apel bebas penanda yang mengekspresikan gen protein supermanis yang digerakkan oleh
mekanisme dan aplikasi dalam patologi tanaman. annu. Pdt. Fitopatol.56, promotor tanaman. Depan. Ilmu Tanaman.10:388. doi: 10.3389/fpls.2019.00388
581–610. doi: 10.1146/annurev-phyto-080417-050044 Torrent M. Llompart B. Lasserre-Ramassamy S. Llop-Tous I. Bastida M.
Rose, AB, Carter, A., Korf, I., dan Kojima, N. (2016). Barisan intron yang Marzabal, P., dkk. (2009). Produksi protein eukariotik dalam organel penyimpanan
rangsangan ekspresi gen di Arabidopsis. Tanaman Mol.Biol. 92, 337–346. yang dirancang.BMC Bio. 7:5. doi: 10.1186/1741-7007-7-5
Van Eck, J. (2018). status dariSetaria viridis transformasi: Agrobakterium- distribusi urutan pendek. BMC Genomics 8:67. doi: 10.1186/1471-2164-8-67
dimediasi untuk penurunan bunga. Depan. Ilmu Tanaman.9:652. doi: 10.3389/fpls.2018.
00652 Yan, H., dan Rommens, CM (2007). Transformasi tanaman berbasis transposisi.
Veillet, F., Perrot, L., Chauvin, L., Kermarrec, M.-P., Guyon-Debast, A., Chauvin, Fisiol Tumbuhan. 143, 570-578.
JE, dkk. (2019). Pengeditan genom bebas transgen pada tanaman tomat dan kentang Yang, F., Ding, X., Chen, J., Shen, Y., Kong, L., Li, N., dkk. (2017). Fungsional
menggunakanAgrobakterium-Dimediasi pengiriman editor berbasis CRISPR/Cas9 cytidine. analisis promotor GRMZM2G174449 untuk mengidentifikasi Rhizoctonia solani- elemen cis
Int.J.Mol.Sci. 20:402. doi: 10.3390/ijms20020402 yang dapat diinduksi dalam jagung. Biol Tanaman BMC. 17:233. doi: 10.1186/
Verma, D., dan Daniell, H. (2007). Sistem vektor kloroplas untuk bioteknologi s12870-017-1181-5
aplikasi. Fisiol Tumbuhan. 145, 1129–1143. doi: 10.1104/pp.107.10 6690 Yau, Y.-Y., dan Stewart, CN (2013). Lebih sedikit lebih banyak: strategi untuk menghapus penanda
gen dari tanaman transgenik. Bioteknologi BMC. 13:36. doi:
Vijayan, J., Devanna, BN, Singh, NK, dan Sharma, TR (2015). Kloning 10.1186/1472-6750-13-36
dan validasi fungsional dari awal yang dapat diinduksi magnaporthe oryzae promotor Yu, W., Yau, Y.-Y., dan Birchler, JA (2016). kromosom tanaman buatan
CYP76M7 responsif dari beras. Depan. Ilmu Tanaman.6:371. doi: 10.3389/fpls.2015. 00371 teknologi dan aplikasi potensialnya dalam rekayasa genetika. Tanaman
Bioteknol. J.14, 1175–1182. doi: 10.1111/pbi.12466
Wang,B., Li,Z., Ran,Q., Li,P., Peng,Z., dan Zhang,J. (2018). ZmNF- Zhang,A., Liu,Y., Wang,F., Li,T., Chen,Z., Kong,D., dkk. (2019). Nasi yang ditingkatkan
Ekspresi berlebih YB16 meningkatkan ketahanan dan hasil kekeringan dengan toleransi salinitas melalui mutagenesis gen OsRR22 yang ditargetkan CRISPR / Cas9.
meningkatkan fotosintesis dan kapasitas antioksidan tanaman jagung. Fronti. Ilmu Mol Breed. 39:47.
Tanaman.9:709. doi: 10.3389/fpls.2018.00709 Zhang, B. (2015). MicroRNA: target baru untuk meningkatkan toleransi tanaman terhadap abiotik
Wang,P., Zhang,J., Sun,L., Ma,Y., Xu,J., Liang,S., dkk. (2018). Tinggi efisien menekankan. J. Eks. Bot. 66, 1749–1761. doi: 10.1093/jxb/erv013
pengeditan genom multisite dalam kapas allotetraploid (Gossypium hirsutum) Zhang, C., Feng, L., dan Tian, XS (2018). Perubahan pada daerah 5' yang tidak diterjemahkan
menggunakan sistem CRISPR/Cas9. Tanaman Bioteknol. J.16, 137–150. doi: 10.1111/ dari 5-enolpyruvylshikimate-3-fosfat sintase (Gen EPSPS) memengaruhi ekspresi
pbi.12755 Wang, W., Ding, G.-D., White, PJ, Wang, X.-H., Jin, K.-M., Xu, F.-S., dkk . . berlebih EPSPS pada tahan glifosat Eleusin menunjukkan. Pengendalian Hama Sci.
(2019). Pemetaan dan kloning lokus sifat kuantitatif untuk efisiensi fosfor pada 74, 2561–2568. doi:10,1002/ps.5042
tanaman: peluang dan tantangan.Tanah Tanaman 439, 91-112. Zhang, KW, Wang, JM, dan Zheng, CC (2004). Peran potensial nuklir
Weber, B., Zicola, J., Oka, R., dan Stam, M. (2016). Penambah tanaman: panggilan untuk daerah perlekatan matriks (MARs) dalam regulasi ekspresi gen. Sheng Wu
penemuan. Tren Tanaman Sci. 21, 974–987. doi: 10.1016/j.tplants.2016.07.013 Wen, Gong Cheng Xue Bao 20, 6-9.
L., Chen, Y., Schnabel, E., Crook, A., dan Frugoli, J. (2019). Perbandingan dari Zhang, S., Jiao, Z., Liu, L., Wang, K., Zhong, D., Li, S., dkk. (2018). penambah-
efisiensi dan waktu untuk regenerasi Agrobakterium-Metode transformasi yang interaksi promotor SELF PRUNING 5G membentuk adaptasi fotoperiode.Fisiol
dimediasi dalam Medicago truncatula. Metode Tanaman 15:20. doi: 10.1186/ Tumbuhan. 178, 1631-1642. doi: 10.1104/pp.18.01137
s13007-019-0480-2 Zhang, X. (2017). GC tangguh mengalahkan pembungkaman transgen.Tanaman Nat 3, 850–851.
Whyard, S. (2015). RNA insektisida, panjang dan pendeknya.Sains 347, 950–951. doi: 10.1038/s41477-017-0048-y
doi: 10.1126/science.aaa7722 Zhao, C., Zhang, Y., Du, J., Guo, X., Wen, W., Gu, S., dkk. (2019). Fenomena tanaman:
Wolter, F., dan Puchta, H. (2018). Penerapan CRISPR/Cas untuk dipahami status dan perspektif saat ini. Depan. Ilmu Tanaman.10:114. doi: 10.3389/fpls.2019.
cis- dan trans-elemen pengatur pada tumbuhan Metode Mol Biol. 1830, 23–40. doi: 00714
10.1007/978-1-4939-8657-6_2 Zhu, L., Fu, Y.-P., Liu, W.-Z., Hu, G.-C., Si, H.-M., Tang, K.-X., dkk. (2007). cepat
Worrall, EA, Bravo-Cazar, A., Nilon, AT, Fletcher, SJ, Robinson, KE, Carr, generasi padi transgenik bebas penanda yang dapat dipilih dengan tiga gen target melalui
JP, dkk. (2019). Aplikasi eksogen dari RNA untai ganda yang menginduksi RNAi ko-transformasi dan kultur antera. Ilmu Beras. 14, 239–246.
menghambat transmisi virus tanaman yang dimediasi kutu.Depan. Ilmu Tanaman.
10:265. doi: 10.3389/fpls.2019.00265 Konflik kepentingan: Para penulis menyatakan bahwa penelitian dilakukan
Yamaguchi-Shinozaki, K., dan Shinozaki, K. (2006). transkripsi peraturan tanpa adanya hubungan komersial atau keuangan yang dapat dibangun sebagai
jaringan dalam respon seluler dan toleransi terhadap dehidrasi dan stres dingin. potensi konflik kepentingan.
annu. Pdt. Tanaman Biol.57, 781–803. doi: 10.1146/annurev.arplant.57.032905.
105444 Copyright © 2020 Basso, Arraes, Grossi-de-Sa, Moreira, Alves-Ferreira dan
Yamamoto, T., Hoshikawa, K., Ezura, K., Okazawa, R., Fujita, S., Takaoka, M., Grosside-Sa. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah
dkk. (2018). Peningkatan sistem ekspresi transien untuk produksi ketentuan Lisensi Atribusi Creative Commons (CC BY). Penggunaan, distribusi
protein rekombinan pada tanaman.Rep. 8:4755. doi: 10.1038/ atau reproduksi di forum lain diperbolehkan, asalkan penulis asli dan pemilik hak
s41598-018-23024-y cipta dikreditkan dan publikasi asli dalam jurnal ini dikutip, sesuai dengan praktik
Yamamoto, YY, Ichida, H., Matsui, M., Obokata, J., Sakurai, T., Satou, M., akademik yang diterima. Penggunaan, distribusi, atau reproduksi tidak diizinkan
dkk. (2007). Identifikasi konstituen promotor tanaman dengan analisis lokal yang tidak mematuhi ketentuan ini.

Topik - 5 Dan 6 - fpls-11-00509.pt - Id

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Topik - 5 Dan 6 - fpls-11-00509.pt - Id

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

Diterjemahkan dari bahasa Portugis ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

Wawasan Unsur Genetik dan Molekul

penyimpanan telah terbukti menjadi teknik penting dalam bioteknologi

MB berterima kasih kepada CNPq atas beasiswa penelitian

Anda mungkin juga menyukai