KIMIA BAHAN ALAM LAUT

OH OCH3

O H2N H
N
Cl

O N
Br
Br HO
Cl

Terpenoid Steroid Alkaloid

oleh
Dr. Imran, S.Si., M.Si
(Hanya dalam lingkup UHO)

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MIPA
UNINERSITAS HALU OLEO
2020
KIMIA BAHAN ALAM LAUT
(KIM 67085)
 Kata Pengantar

Puji syukur kepada Allah SWT, Tuhan Yang Maha Esa, atas rahmat dan hidayah-Nya
sehingga penulisan modul bahan ajar Kimia Bahan Alam laut ini dapat terselesaikan. Modul ini
disusun untuk memenuhi kebutuhan pembelajaran pada mahasiswa yang memprogram Kimia
Bahan Alam Laut pada Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Halu Oleo.
Modul ini memuat bahasan tentang perberdaan senyawa metabolit sekunder dan primer.
Bahasan selanjutnya hanya difokuskan pada senyawa metabolit sekunder yaitu sumber
ditemukan, penggolongan, manfaat dan isolasi serta metode penentuan struktur senyawa
metabolit sekunder bahan alam laut. Sebenarnya penggolongan senyawa metabolit sekunder ada
beberapa golongan, namun mata kuliah ini hanya dimuat 2 (dua) SKS (setuan kredit semester)
sehingga yang dibahas hanya senyawa metabolit sekunder golongan terpenoid, steroid, alkaloid
dan kasiatnya serta cara mengisolasi dan menentukan struktur senyawa.
Meskipun kami telah membuat modul ini dengan sebaik-baiknya, namun kami menyadari
masih banyak kekurangan dalam penyajian meterinya. Oleh karena itu, kami dengan senang
hatimenerima kritikan dan saran demi kesempurnaan modul ini. Semoga modul ini dapat
bermanfaat sebagaimana diharapkan

Kendari, September 2020

Penulis

Dr. Imran, S.Si., M.Si

 Daftar Isi

Halaman Judul ................................................................................................................................ ii

Kata Pengantar ............................................................................................................................... iii

Daftar isi ……………………………………………………iv

Tinjauan Mata Kuliah…… ..………………………………………………………………… …vii

Peta kompetensi Mata Kuliah………………………………………………. ………………….viii

MODUL I. Terpenoid laut……..…………… ……………………………....................................1

Pendahuluan .................................................................................................................................... 1

Kegiatan Belajar 1. Monoterpen dan sesquiterpen ......................................................................... 2

1. Monoterpen………………………………………………………………………………...2

2. Sesquiterpen......................................................................................................................... 6

Kegiatan Belajar 2. Diterpen dan turunannya ……… ………………………………………....13

1. Diterpen ......................................................................................................................... 13

2. Hidrokuinin dan kuinon ................................................................................................. 16

Kegiatan Belajar 3. Furanoterpen 21 dan sesterpen….................................................................. 19

1. Furanoterpen 21.............................................................................................................. 19

2. Diterpen glikosida .......................................................................................................... 20

3. Sesterpen ........................................................................................................................ 21

Kegiatan Belajar 4. Triterpen dan saponin… ............................................................................... 23

1. Triterpen ......................................................................................................................... 23

2. Saponin ........................................................................................................................... 27

Latihan ................................................................................................................................... 29

Daftar Pustaka .............................................................................................................................. 30

MODUL 2. Steroid laut… ............................................................................................................ 32

Pendahuluan ............................................................................................................................ 32

Kegiatan Belajar 1. Steroid laut 21,22, dan 24 atom karbon ....................................................... 34

1. Steroid laut 21 atom karbon ........................................................................................... 34

2. Steroid laut 22 atom karbon ........................................................................................... 35

3. Steroid laut 24 atom karbon ........................................................................................... 36

Kegiatan Belajar 2 Steroid laut 26 dan 27 atom karbon ............................................................... 37

1. Steroid laut 26 atom karbon ........................................................................................... 37

2. Steroid laut 27 atom karbon .......................................................................................... 38

Latihan .................................................................................................................................. 44

Daftar Pustaka........................................................................................................................ 45

MODUL 3. Alkaloid … ................................................................................................................ 46

Pendahuluan ............................................................................................................................ 46

Kegiatan Belajar 1. Alkaloid pirol dan imidazol … ..................................................................... 47

1. alkaloid pirol .................................................................................................................. 47

2. Alkaloid imidazol ........................................................................................................... 49

Kegiatan Belajar 2. Alkaloid Piridin, piperidin, purin dan kuinolisidin ....................................... 51

1. Alkaloid piridin dan piperidin ........................................................................................ 51

2. Alkaloid turunan purin .................................................................................................. 54

3. Kuinolisidin dan Indolisidin .......................................................................................... 55

Kegiatan Belajar 3. Alkaloid Indol dan Quinolin ......................................................................... 57

1. Alkaloid Indol ................................................................................................................ 51

2. Alkaloid Quinolidin dan Isoquinolidin ......................................................................... 65

Latihan .................................................................................................................................. 67

Daftar Pustaka........................................................................................................................ 68
MODUL 4. Isolasi dan Identifikasi senyawa metabolit sekunder bahan alam laut … ................ 70

Pendahuluan ............................................................................................................................ 70

Kegiatan Belajar 1. Isolasi Senyawa Metabolit Sekunder … ....................................................... 71

1. Ekstraksi ......................................................................................................................... 71

2. Fraksinasi ....................................................................................................................... 73

2. Pemisahan Kromatografi ................................................................................................ 73

Kegiatan Belajar 2. Metode Identifikasi Senyawa Metabolit Sekunder ....................................... 78

1. Spektrofotometri Infra merah ......................................................................................... 78

2. Spektrofotometer UV-Vis .............................................................................................. 79

3. Spektrofotometri 1H dan 13C-NMR ................................................................................ 80

Latihan .................................................................................................................................. 83

Daftar Pustaka ............................................................................................................................... 84

Tinjauan Mata Kuliah
Makhluk hidup mempunyai kemampuan yang bervariatif dalam melakukan
sintesis dan transformasi senyawa organik dalam tubuhnya. Misalnya tumbuhan hayati
laut sangat efektif menggunakan proses fotosintesis untuk sintesis karbohidrat;
sedangkan hewan laut melakukan sintesis dari senyawa yang dikonsumsinya. Jadi jalur-
jalur metabolik secara garis besar dapat di bagi ke dalam dua macam jalur, yaitu jalur
yang bertanggung jawab terhadap degradasi material yang dikonsumsi, dan jalur yang
bertanggung jawab terhadap sintesis senyawa-senyawa organik tertentu (yang
dibutuhkan) dari senyawa dasar yang didapatnya. Meskipun karakteristik makhluk hidup
sangatlah bervariasi, akan tetapi jalur metabolik yang secara umum mensintesis dan
memodifikasi senyawa-senyawa karbohidrat, protein, lemak dan asam nukleat ternyata
secara esensial sama pada semua makhluk (bersifat universal); walaupun ada sedikit
penyimpangan. Kesamaan ini menunjukkan adanya keseragaman proses yang
fundamental pada semua mahluk hidup, yang secara kolektif disebut sebagai
metabolisme primer, dan segala senyawa yang terlibat didalam jalur metabolisme
tersebut disebut sebagai metabolit primer (Rahmawati, 2014).
Berlawanan dengan jalur metabolisme primer terdapat jalur metabolisme lain
yang melibatkan senyawa-senyawa organik spesifik dan terjadi sangat terbatas di alam.
Metabolisme itu disebut metabolisme sekunder, dan senyawa yang dihasilkan disebut
sebagai metabolit sekunder. Metabolit sekunder tertentu hanya ditemukan pada
organisme spesifik, dan bahkan hanya diproduksi pada kondisi-kondisi tertentu
(Rahmawati, 2014). Senyawa metabolit sekunder ditemukan dalam beberapa kelompok.
Senyawa metabolic sekunder disintestesis oleh mahluk hidap dapat berasal dari senyawa
metabolit pemecahan setabolit primer melalui intermediate dan begitu pula sebaliknya.
Senyawa metabolit sekunder bahan alam laut memiliki keragaman struktur yang
sangat luas dan unik karena banyak dari senyawa ini tidak atau jarang ditemukan di darat.
Kelompok senyawa metabolit sekunder yang bnyak ditemukan adalah golongan
terphenoid, steroid, poliketide, fenil propanoid, flavonoid dan alkaloid. Sementara
turunan dari senyawa-senyawa tersebut banyak ditemukan biasanya terbentuk melalu
ikatan glikosida seperti soponin dan senyawa glikosida lainnya. Keunikan senyawa bahan
alam laut ditandai dengan banyaknya melekul yang ditemukan misalnya dalam golongan
terphenoid dalam bentuk terhalogenasi dan jarang ditemukan pada senyawa bahan alam
yang ada di darat. Senyawa bahan alam laut disintesis oleh makhluk hidup sebagai bahan
untuk mempertahankan diri dari pemangsa ataupun dari mikroba yang dapat
menimbulkan penyakit pada hayati laut. Selain itu digunakan pula agar tetap eksis pada
lingkungan sekitarnya yang ekstrim.
Dalam modul ini, akan banyak senyawa metabolit yang akan dipelajari, baik
kompenen seyawa metabolit primer maupun senyawa metabolit sekunder. Namun pada
modul bahan ajar ini pembahasan hanya berfokus pada senyawa metabolit sekunder
bahan alam laut yakni penemuan struktur senyawa bahan alam laut dan sumbernya,
isolasi senyawa bahan alam laut, identifikasi senyawa bahan alam laut, dan analisis
bioaktivitas senyawa bahan bahan alam laut.
Peta Kompetensi Mata Kuliah

Sumber alam
hayati laut

Kimia
bahan alam laut

Senyawa metabolit Senyawa metabolit

sekunder primer

Golongan Isolasi dan penentuan

senyawa struktur senyawa

Ekstraksi dan
fraksinasi
Terpenoid
Pemurnian
senyawa
Steroid

Alkaloid Analsisis
spektroskopi
MODUL 4
Isolasi dan Indentifikasi Senyawa Metabolit Sekunder

PENDAHULUAN
Isolasi senyawa bahan alam laut adalah suatu metoda dalam pemisahan
komponen mayor atau senyawa utama dari komponen minor yang biasanya dinamakan
sebagai senyawa pengganggu. Komponen mayor akan menjadi target dalam isolasi
senyawa bahan alam laut. Isolasi senyawa pada awalnya dilakukan pemisahan komponen
dengan cara ekstraksi dengan beberapa pemilihan metode seperti meserasi, perkolasi,
atau pun metode refluks. Pada tahap ini perolehan hasil ekstraksi masih mengandung
berbagai komponen senyawa yang selanjutnya dipisahkan dengan metode fraksinasi.
Fraksinasi komponen dilakukan berdasarkan perbedaan kepolaran dari dua pelarut cair-
cair yang tidak saling mencampur. Selanjutnya pemisahan senyawa metabolit sekunder
secara partisi antara fasa diam dan fasa gerak yang kenal dengan istilah pemisahan secara
kromatografi. Ada bebrapa cara pemisahan secara kromatografi yaitu, kromatografi
grafitasi, kromatografi kolom fakum, kroatografi tekan, dan kromatografi radial.
Biasanya pada tahap ini kadang-kadang diperoleh senyawa murni sebagai isolate.
Namun, jika belum ada isolate maka dapat dilakukan fraksinasi pertingkat. Senyawa
isolate murni data ditentukan dengan menggunakan system tiga eluen. Senyawa isolate
dapat ditentukan strutunya dengan menggunakan metode spektroskopi. Analisis
spektoskopi dalam menentukan senyawa bahan alam laut biasanya melalui uji
spektrofotometer Ultra violet-visibel (UV-Vis), spektrofotometer infra red (IR), dan
spektrofotometer resonansi magnetic inti atau Nucleur magnetic resonance (NMR).
Tahap terakhir setelah diperoleh isolat adalah pengujian khasiat senyawa metabolit
sekunder bahan alam laut yang ditemukan melalui uji aktivitasnya sebagai antijamur, anti
bakteri, antioksidan, maupun antkanker dan uji khasiat lainnya.
Kegiatan belajar 1
Isolasi Senyawa Metabolit Sekunder

Isolasi senyawa metabolit sekunder bahan alam laut melalui berapa tahap yaitu ekstraksi,
fraksinasi, pemisahan fraksi dengan metode kromatografi, dan analisis komponen
senyawa dengan menggunakan metode kromatografi lapis tipis. Tahap selanjutnya adalah
pemurnian senyawa isolate dan uji aktivitasnya.

1. Ekstraksi
Ekstraksi merupakan salah satu teknik pemisahan kimia untuk memisahkan atau
menarik satu atau lebih komponen atau senyawa-senyawa (analit) dari suatu sampel
dengan menggunakan pelarut tertentu yang sesuai. Prinsip ekstraksi didasarkan pada
kemampuan atau daya larut analit dalam pelarut tertentu. Dengan demikian pelarut yang
digunakan harus mampu menarik komponen analit dari sampel secara maksimal.
Mekanisme ekstraksi dimulai dengan adsorpsi pelarut ke permukaan sampel, diikuti
difusi pelarut ke dalam sampel dan pelarutan alit oleh pelarut (interaksi analit dengan
pelarut). Selanjutnya terjadi difusi analit-pelarut ke permukaan sampel dan desorpsi
analit-pelarut dari permukaan sampel ke dalam pelarut. Perpindahan analit-pelarut ke
permukaan sampel berlangsung sangat cepat ketika terjadi kontak antara sampel dengan
pelarut (Leba, 2017).
Hasil yang diperoleh dari proses ekstraksi disebut ekstrak. Dalam hal ini, ekstrak
dapat diartikan sebagai sediaan kental hasil dari proses penyarian senyawa aktif baik dari
simplisia bahan alam laut menggunakan pelarut yang sesuai, dimana semua atau hampir
semua pelarut diuapkan dan massa atau serbuk yang tersisa selanjutnya diperlakukan
sedemikian rupa sehigga memenuhi baku yang telah ditetapkan.
Ekstraksi dengan menggunakan pelarut yang sesuai dapat dikategorikan secara garis
besar menjadi dua macam, yaitu cara dingin dan cara panas. Ekstrasi dengan cara dingin
meliputi maserasi dan perkolasi. Sedangkan ekstraksi dengan cara panas, yaitu refluks,
dan soxhlet, (Depkes, 2000).

a. Maserasi
Maserasi merupakan metode sederhana yang paling banyak digunakan. Cara ini
sesuai, baik untuk skala kecil maupun skala industri (Agoes, 2007). Metode ini dilakukan
dengan memasukkan serbuk tanaman dan pelarut yang sesuai ke dalam wadah inert yang
tertutup rapat pada suhu kamar. Proses ekstraksi dihentikan ketika tercapai
kesetimbangan antara konsentrasi senyawa dalam pelarut dengan konsentrasi dalam sel
tanaman. Setelah proses ekstraksi, pelarut dipisahkan dari sampel dengan penyaringan.
Kerugian utama dari metode maserasi ini adalah memakan banyak waktu, pelarut yang
digunakan cukup banyak, dan besar kemungkinan beberapa senyawa hilang. Selain itu,
beberapa senyawa mungkin saja sulit diekstraksi pada suhu kamar. Namun di sisi lain,
metode maserasi dapat menghindari rusaknya senyawa-senyawa yang bersifat termolabil.

b. Ultrasound - Assisted Solvent Extraction

Merupakan metode maserasi yang dimodifikasi dengan menggunakan bantuan
ultrasound (sinyal dengan frekuensi tinggi, 20 kHz). Wadah yang berisi serbuk sampel
ditempatkan dalam wadah ultrasonic dan ultrasound. Hal ini dilakukan untuk
memberikan tekanan mekanik pada sel hingga menghasilkan rongga pada sampel.
Kerusakan sel dapat menyebabkan peningkatan kelarutan senyawa dalam pelarut dan
meningkatkan hasil ekstraksi.

c. Perkolasi
Pada metode perkolasi, serbuk sampel dibasahi secara perlahan dalam sebuah
perkolator (wadah silinder yang dilengkapi dengan kran pada bagian bawahnya). Pelarut
ditambahkan pada bagian atas serbuk sampel dan dibiarkan menetes perlahan pada
bagian bawah. Kelebihan dari metode ini adalah sampel senantiasa dialiri oleh pelarut
baru. Sedangkan kerugiannya adalah jika sampel dalam perkolator tidak homogen maka
pelarut akan sulit menjangkau seluruh area. Selain itu, metode ini juga membutuhkan
banyak pelarut dan memakan banyak waktu.

d. Soxhlet
Metode ini dilakukan dengan menempatkan serbuk sampel dalam sarung selulosa
(dapat digunakan kertas saring) dalam klonsong yang ditempatkan di atas labu dan di
bawah kondensor. Pelarut yang sesuai dimasukkan ke dalam labu dan suhu penangas
diatur di bawah suhu reflux. Keuntungan dari metode ini adalah proses ektraksi yang
kontinyu, sampel terekstraksi oleh pelarut murni hasil kondensasi sehingga tidak
membutuhkan banyak pelarut dan tidak memakan banyak waktu. Kerugiannya adalah
senyawa yang bersifat termolabil dapat terdegradasi karena ekstrak yang diperoleh terus-
menerus berada pada titik didih.
 e. Reflux dan Destilasi Uap

Pada metode reflux, sampel dimasukkan bersama pelarut ke dalam labu yang
dihubungkan dengan kondensor. Pelarut dipanaskan hingga mencapai titik didih. Uap
terkondensasi dan kembali ke dalam labu. Destilasi uap memiliki proses yang sama dan
biasanya digunakan untuk mengekstraksi minyak esensial (campuran berbagai senyawa
menguap). Selama pemanasan, uap terkondensasi dan destilat (terpisah sebagai 2 bagian
yang tidak saling bercampur) ditampung dalam wadah yang terhubung dengan
kondensor. Kerugian dari kedua metode ini adalah senyawa yang bersifat termolabil
dapat terdegradasi (Seidel V 2006).

2. Fraksinasi
Fraksinasi adalah proses penarikan atau pemisahan senyawa pada ekstrak dengan
menggunakan dua macam pelarut yang tidak bercampur. Proses pemisahan komponen
yang diinginkan dengan komponen lain ini didasarkan pada prinsip kepolaran senyawa
dan pelarut. Senyawa-senyawa yang bersifat non polar akan larut dalam pelarut yang non
polar sedangkan senyawa-senyawa yang polar akan larut dalam pelarut yang bersifat
polar (Harborne, 1987).
Pelarut yang digunakan dalam proses ekstraksi adalah pelarut dengan kepolaran
berbeda, yakni seperti n-heksan, diklorometan, etil asetat, dan metanol. Dalam hal ini,
untuk menarik lemak dan senyawa non polar dapat digunakan n- heksan, untuk menarik
senyawa non polar juga dapat digunakan diklorometan, untuk menarik senyawa semi
polar seperti alkaloid dapat digunakan etil asetat atau kombinasi diklorometan dengan
metanol, sedangkan untuk menarik senyawasenyawa polar dapat digunakan metanol.

1. Pemisahan Kromatografi

Metode kromatografi adalah metode pemisahan yang didasarkan atas beda laju
migrasi senyawa karena adanya perbedaan afinitas terhadap dua fasa yaitu fasa diam dan
fasa gerak. Fasa diam dapat berupa silika atau selulosa sedangkan fase gerak dapat
berupa gas dan cairan. Fase gerak mengalir melalui fase diam dan menyebabkan
komponen-komponen sampel terdistribusi pada berbagaitingkat. Komponendengan
afinitas tinggi terhadap fase diam mengalir dengan perlahan bersama aliran fase gerak,
sedangkan komponen dengan afinitas rendah bergerak lebih cepat. Perbedaan gerakan ini
menyebabkan komponen sampel terpisah (Skoog, Holler, & Crouch, 2007).

a. Kromatografi Lapis Tipis (KLT)

Kromatografi merupakan suatu metode fisik untuk pemisahan yang didasarkan atas
perbedaan afinitas senyawa-senyawa yang sedang dianalisis terhadap dua fasa, yaitu fasa
diam dan fasa gerak. Campuran senyawa dapat mengalami adsorpsi dan desorpsi oleh
fasa diam secara berturut-turut sehingga secara berurutan fasa gerak juga akan
melarutkan senyawa-senyawa tersebut dan proses pemisahan dapat terjadi karena
campuran memiliki kelarutan yang berbeda di antara dua fasa tersebut (Kristanti dkk.,
2008). Kromatografi lapis tipis merupakan cara cepat dan mudah untuk melihat
kemurnian suatu sampel maupun karakterisasi sampel. Cara ini praktis untuk analisis
skala kecil karena hanya memerlukan bahan yang sangat sedikit danwaktu yang
dibutuhkan singkat. Kemurnian suatu senyawa bisa dilihat darijumlah bercak yang terjadi
pada plat KLT atau jumlah puncak pada kromatogram KLT. Uji kualitatif dengan KLT
dapat dilakukan dengan membandingkan nilai Rfkromatogram sampel dengan
kromatogram senyawa standar (Handayani dkk.,2005).
Tahapan setelah proses pengembangan cuplikan adalah mengamati nodayang telah
dipisahkan. Jika diperoleh noda yang berwarna maka dapat diamatilangsung secara
visual. Sedangkan untuk noda yang tidak nampak, dapat dilihatdengan menggunakan
lampu ultraviolet (UV), umumnya pada panjang gelombang 254-366 nm
(Sastrohamidjojo, 1985). Apabila kromatogram yang diperoleh tidaktampak maka
disemprotkan dengan serium sulfat (CeSO4), kromatogramkemudian dipanaskan dalam
oven pada suhu 100-105°C selama 5 menit(Harborne, 2006).
Identifikasi noda dinyatakan dengan harga Rf (Retardation factor) yangdidefinisikan
sebagai rasio jarak noda terhadap titik awal dibagi jarak eluenterhadap titik awal. Angka
Rf berkisar 0,00-1,00 hanya ditentukan 2 desimal(Stahl, 1985). Secara matematis dapat
ditulis sebagai berikut.

𝑅𝑓 = (1)
dimana I merupakan jarak noda dari titik awal ke titik akhir setelah proses pengembangan

dan h berupa jarak eluen dari titik awal (juga titik awal noda) ke batas akhir eluen (Stahl,

1985).

Gambar 4.1. Elusi sampel dengan kromatografi Lapis Tipis

b. Kromatografi Kolom (KK)

Kromatografi kolom digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa dalam jumlah

banyak. Pada dasarnya prinsip kromatografi kolom sama denganKLT, dimana senyawa-
senyawa dalam campuran terpisahkan karena adsorpsiantara suatu padatan penyerap
sebagai fase diam dan suatu pelarut sebagai fasegerak. Kolom kromatografi biasanya
berupa pipa gelas yang dilengkapi sebuahkran atau kadang-kadang juga dapat digunakan
buret. Untuk menahan penyerap didalam kolom dapat digunakan wol kaca atau kapas
(Sastrohamidjojo, 1985).Fasa diam yang digunakan pada kromatografi kolom dapat
berupa silikagel. Fasa geraknya dapat dimulai dari pelarut non polar kemudian
ditingkatkankepolarannya secara bertahap, baik dengan pelarut tunggal ataupun
kombinasi dua pelarut yang berbeda kepolarannya dengan perbandingan tertentu sesuai
tingkat kepolaran yang dibutuhkan (Stahl, 1985).
 Gambar 9. Kromatografi Kolom vakum

c. Kromatografi Radial (KR)

Prinsip kromatografi radial sama seperti kromatografi klasik dengan aliran fasa gerak
dipercepat oleh gaya sentrifugal. Kromatografi ini menggunakan rotor miring dalam
ruang tertutup, sedangkan fase diam berupa lempeng kaca terlapisi silika gel. Plat
dipasang pada motor listrik dan diputar pada kecepatan 800 rpm. Sampel dan fasa gerak
dimasukkan ke bagian tengah plat sehingga mengalir dan merambat melalui fasa diam
karena gaya sentrifugal. Proses elusi dimonitor dengan lampu UV. Hasilnya berupa pita
lingkaran yang terputar keluar melalui tepi plat dan ditampung ke dalam botol fraksi
(Hostettmann dkk., 1995).
 Gambar 10. Kromatografi Radial

2. Pemurnian (Purification)

Tujuan pemurnian adalah untuk menghilangkan atau memisahkan senyawa yang

tidak dikehendaki. Proses-proses pada tahapan ini adalah pengendapan, pemisahan dua
cairan (pelarut) yang tidak saling bercampur, sentrifugasi, dekantasi, filtrasi (Imran,
2008).
Kegiatan belajar 2
Metode Identifikasi Senyawa

1. Spektrofotometri Inframerah
Spektrofotometri inframerah (IR) didasarkan pada interaksi sinar inframerah oleh
molekul senyawa. Alat ini digunakan untuk penentuan struktur, khususnya senyawa
organik. Cuplikan yang dianalisis dapat berupa zat cair atau zat padat. Radiasi IR antara
10.000-100 cm-1 diserap dan diubah oleh molekul organik menjadi energi molekular
vibrasi. Penyerapan ini juga terkuantisasi, tetapi spektrum vibrasi menunjukan ikatan-
ikatan sebagai garis-garis dikarenakan perubahan suatu energi vibrasi tunggal diikuti
dengan perubahan energi rotasi. Sebagian besar hal ini terjadi antara 4000 sampai 400
cm-1, disinilah yang perlu menjadi pusat perhatian. Frekuensi atau panjang gelombang
adsorpsi tergantung pada massa relatif atom-atom, tetapan gaya dari ikatan-ikatan, dan
geometri atom-atom (Silverstein, 2002).

Tabel 4.1. Nilai-nilai bilangan gelombang absorbsi IR oleh gugus fungsional senyawa
kimia (Pavia dkk., 2009).
Bilangan
Gugus funsional
gelombang (cm-1)
3400-3200 Stretching O-H (ikatan hidrogen, alkohol dan fenolik)
3000-2850 Stretching C-H (alkan, CH3, CH2, dan CH)
1725-1705 Stretching C=O (keton, aldehi, asam karboksilat dan
1680-1600 ester)
1600 dan 1475 Stretching C=C (alkena)
1450-1375 Stretching C=C (cincin aromatik)
1430-1330 Bending C-H (deformasi CH3 dan CH2 alkana)
Bending O-H (alkohol dan fenolik)
1300-1000 StretchingC-O (alkohol dan fenolik)
900-650 Bending ke luar bidang C-H (cincin aromatik)
850-780 Bending ke luar bidang C-H (alkena)
770-650 Bending ke luar bidang O-H (alkohol dan fenolik)
 Posisi pita spektrum IR ditunjukkan sebagai bilangan gelombang atau panjang
gelombang. Gugus fungsional dapat ditentukan dengan melihat bilangan gelombang
dimana bilangan gelombang yang lebih tinggi (4000-1300 cm-1) disebut daerah gugus
fungsional. Dalam daerah ini, gugus-gugus fungsional yang penting seperti -OH, -NH,-
C≡CH, =CN dan C=O menunjukkan puncak yang khas, dan letak puncak tersebut tidak
berubah karena bentuk atau ukuran molekulnya (Fessenden dan Fessenden, 1997).
Daerah 1300-400 cm-1 disebut sebagai daerah sidik jari (finger print region), yaitu daerah
yang amat kompleks tetapi spectrum daerah ini sangat berharga bila disesuaikan dengan
daerah yang lain (Sastrawijaya, 1985).

2. Spektrofotometer UV-VIS
Spektrofotometer Ultraviolet-Visible (UV-Vis) merupakan instrumen analisis
yang termasuk dalam spektroskopi absorpsi. Apabila radiasi atau cahaya dilewatkan
melalui larutan berwarna maka radiasi dengan panjang gelombang tertentu akan diserap
secara selektif dan radiasi lainnya akan diteruskan. Metode Spektrofotometer (UV-Vis)
didasarkan atas absorban sinar tampak oleh suatu larutan berwarna. Oleh karena itu,
metode ini dikenal juga sebagai metode kolorimetri, karena larutan berwarna saja yang
dapat ditentukan dengan metode ini. Senyawa yang tidak berwarna dapat dibuat berwarna
dengan mereaksikannnya dengan pereaksi yang menghasilkan senyawa berwarna
(Syaifuddin, 2015).

Incident Transmitted
Intensity, Io Intensity, It

Gambar 14. Ilustrasi prinsip kerja spekropfotometer UV-VIS

(Kealey dan Haines, 2002)

Prinsip kerja spektrofotometer UV-Vis adalah interaksi yang terjadi antara energi
yang berupa sinar monokromatis dari sumber sinar dengan materi yang berupa molekul.
Hukum Lambert-Beer menyatakan bahwa konsentrasi zat dalam larutan berbanding lurus
dengan absorbansi (A) dari larutan. Bila cahaya monokromatik (Io) melalui suatu materi,
maka sebagian cahaya tersebut diserap, sebagian dipantulkan, dan sebagian lagi teruskan
(I).
Ketika suatu sinar melewati suatu substansi atau larutan, sebagian cahaya ada
yang diserap dan sisanya diteruskan melewati sampel. Perbandingan antara intensitas
cahaya yang masuk melewati sampel (I0) dengan yang keluar (It) pada panjang
gelombang tertentu didefinisikan sebagai transmitans (T) dan biasa dinyatakan sebagai
persen transmitans (%T), dimana transmitan dikali dengan 100 (Persamaan 1):

T= ( ) 1 (1)

Absorbans (A) suatu sampel merupakan logaritma negatif dari transmitans

(Persamaan 2):
A = - log T (2)
Prinsip terpenting dalam analisis absorpsi yaitu berdasarkan hukum Lambert–
Beer. Hukum tersebut menyatakan bahwa pada suatu larutan ideal terdapat hubungan
linear antara konsentrasi dan absorbans dengan panjang medium yang tetap, absorptivitas
(ε) merupakan nilai yang tetap untuk setiap molekul pada panjang gelombang tertentu
(Persamaan 3):
A = ɛСl (3)
dimana ɛ = absorptivitas zat, С = konsentrasi dan l = panjang medium. Karena nilai ɛ dan
l tetap, maka terdapat hubungan garis lurus antara absorbans sampel dan konsentrasi zat
yang mengabsorbsi. Secara praktis, kurva kalibrasi dapat dibuat dengan memplotkan
absorbans larutan seri standar sebagai fungsi dari konsentrasi. Jika suatu sampel yang
tidak diketahui diukur absorbansnya, konsentrasi zat yang mengabsorpsi dapat dihitung
memalui grafik tersebut (Upstone, 2000).

3. Spektrofotometri 1H dan 13C NMR

Menurut Khopkar (2003), spektroskopi NMR (Nuclear Magnetic Resonance
=Resonansi Magnetik Inti) berhubungan dengan sifat magnet dari inti atom. Spektroskopi
NMR didasarkan pada penyerapan panjang gelombang radio oleh inti-inti tertentu dalam
molekul organik, apabila molekul ini berada dalam medan magnet yang kuat. Inti atom
unsur-unsur dapat dikelompokkan menjadi dua, yakni atom unsur yang mempunyai spin
atau tidak mempunyai spin. Spin inti akan menimbulkan medan magnet. Metode ini
memberikan banyak informasi mengenai kedudukan gugus fungsi. Ada empat parameter
yang dapat membantu menginterpretasi spektra NMR, yatiu (1) geseran kimia, (2)
penjodohan spin, (3) tetapan penjodohan dan pola penjodohan, dan (4) integrasi
(Khopkar, 2003).
Spektrum RMI proton memberikan informasi tentang keadaan lingkungan kimia
proton dalam senyawa. Dasar RMI proton adalah inti atom hidrogen mempunyai sifat-
sifat magnet. Suatu senyawa mengandung hidrogen diletakkan dalam bidang magnet
yang kuat dan diradiasi menggunakan radiasi elektromagnetik maka inti atom hidrogen
dari senyawa tersebut akan menyerap energi melalui suatu proses absorpsi yang dikenal
dengan resonansi magnet.
Tidak semua proton menyerap energi pada kekuatan medan magnet yang sama,
karena proton-proton dilindungi oleh elektron yang mengelilinginya. Makin besar
densisitas elektron yang mengelilingi proton maka makin besar medan magnet yang
dihasilkan. Densisitas elektron dipengaruhi oleh ada tidaknya atom yang mempunyai
elektronegativitas tinggi (Silverstein dkk., 2005).
Persamaan Double Bond Equivalent (DBE) dapat digunakan untuk memudahkan
dalam menentukan struktur suatu senyawa. Nilai ini dapat memprediksi banyaknya ikatan
rangkap, siklik, karbonil dari suatu senyawa. Perhitungan nilai DBE menggunakan
persamaan (2):

(2)

Keterangan:
X : atom tetravalent (C, Si)
Y : atom monovalent (H, halogen)
Z : atom trivalent (N, P) (Watson,
2009).
 RMI karbon memiliki prinsip pengukuran yang sama dengan RMI proton. Spektrum
RMI karbon memberikan informasi jumlah dan jenis atom karbon primer (CH3),
sekunder (CH2), tersier (CH), dan kuartener (C) dalam suatu struktur senyawa kimia
(Silverstein dkk., 2005).
LATIHAN SOAL

1. Jelaskan perbedaan ekstraksi dengan metode maserasi dan metode refluks.

Tuliskan keuntungan dan kerugian dari kedua metode tersebut!
2. Jelaskan tujuan isolasi senyawa metabolit sekunder senyawa bahan alam laut!
3. Apakah perbedaan mendasar dari skpoktroskopi IR (infra red), UV (ultra violet)
dan NMR pada penentuan struktur senyawa metabolit sekunder bahan alam laut
4. Tuliskan beberapa metode pemisahan kompenen senyawa metabolit sekunder
secara kromatografi
5. Jelaskan teknik pemurnian senyawa metabolit sekunder
DAFTAR PUSTAKA

Agoes. G. 2007., Teknologi Bahan Alam, ITB Press Bandung.

Asaduzzaman Md., Md Sohel R., S.M Raqibul H., Md. Monir H., Nittanda Das., 2015
Cytotoxic ( Brine Shrimp Lethality Bioassay) and Antioxidant Investigation of
Barrington Acutangula (L), International Journal Of Pharma and Science, Vol. 6
(8) : 1179-1185

Bilecka, I. dan Niederberger, M., 2010, Microwave chemistry for inorganic

nanomaterials, Nanoscale, vol.2, hh. 1358–1374.

Chan, C. H., Jian J. L., Rozita Y. dan Gek-Cheng N., 2015, A Generalized Energy-Based
Kinetic Model For Microwave-Assistedextraction Of Bioactive Compounds From
Plants, Separation And Purificationtechnology, vol. 143, hh. 152-160.

Chen, Y., ZhaoL., Liu B. dan Zuo S., 2012, Application of Response Surface
Methodology to Optimize Microwave-Assisted Extraction of Polysaccharide from
Tremella, Physics Procedia, vol. 24, hh. 429 – 433.

Delazar, Abbas, Lutfun Nahar, Sanaz Hamedeyazdan, Satyajit D. Sarker. 2012.

MicrowaveAssisted Extraction in Natural Products Isolation. Di dalam Satyajit D.
Sarker and Lutfun Nahar (eds.), Natural Products Isolation, Methods in Molecular
Biology, vol. 864. Springer Science : New York.
Depkes RI, 2000, Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat, Departemen
Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, 9-16.Erwin, Dwi, F., & Chairul, s.
(2013). Uji Toksisitas dan Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode
DPPH dari Metabolit Sekunder Fraksi N-Heksan, Etil Asetat dan Metanol-Air
Daun Sisik Naga (Drymoglossum piloselloides [Linn.] Pr.). Prosiding Seminar
Nasional Kimia, ISBN : 978-602-19421-0-9.
Frengki, Roslizawaty, dan Desi, P., 2014, Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Sarang Semut
Lokal Aceh (Mymercodia sp.) dengan Metode BSLT terhadap Larva Udang
Artemia salina Leach, Jurnal Medika Veterinaria, 8(1): 60-62.

Gunawan, G., Chikmawati, T., Sobir, S., & Sulistijorini, S. (2016). Fitokimia genus
Baccaurea spp. Bioeksperimen: Jurnal Penelitian Biologi, 2(2), 96-110.
Heliawati, L., 2018, Kimia Organik Bahan Alam, Universitas Pakuan Bogor, Bogor.
Harborne, J. B. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Institut Teknologi Bandung. Bandung.
Hikmah, F. (2012). Pengaruh Partisi Bertingkat Cair–Cair Ekstrak Etanol Rimpang Jahe
(Zingiber officinale Rosc.) Terhadap Profil Kandungan Senyawa Kimia dan
Aktivitas Antiradikalnya. Universitas Muhammadiyah. Surakarta.
ngole, M. A. D. (2015) Application Potential for Developments in Microwave Oven
Systems, SSRG International Journal of Electrical and Electronics Engineering
(SSRG-IJEEE), 2(3).
Indranila, & Maria, U. (2015). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Karika
(Carica Pubescens) dengan Metode DPPH Beserta Identifikasi Senyawa Alkaloid,
Fenol Dan Flavonoid. Prosiding Seminar Nasional Peluang Herbal Sebagai
Alternatif Medicine, ISBN: 978-602-19556-2-8. 105-111.

Irianti dan Tatang., 2015, The Activity of Radical Scavenging of 2,2-diphenyl-1-

pycrilhydrazil (DPPH) by Ethanolic Extracts of Mengkudu Leaves (Morinda
Citrifolia L.), Brotowali Stem ( Tinospora Crispa L.), Its Water Fraction and Its
Hydrolized Fraction, Traditional Medicine Journal, vol. 20, no.3, hh. 140-148.
Jayanegara, A. and A. Sofyan. 2008. Penentuan aktivitas biologis tanin beberapa hijauan
secara in vitro 'hohehenheim gas test' dengan polietilen glikol sebagai determinan.
Media Peternakan 31(1): 44-52
Kalonio, D., Rini, H., & Elisabeth, N. (2017). Aktivitas Antikanker Tanaman Genus
Clerodendrum (Lamiaceae): Sebuah Kajian. Traditional Medicine Journal, 22
(3). 182-189.
Lampe, J.W., 1999, Health Effects of Vegetables and Fruit: Assesing Mechanisms of
Action in Human Experimental Studies, The American Journal of Clinical
Nutrition, 70(3), 475-490.
Lenny, Sovia. 2006. Senyawa Flavonoid, Fenilpropanoida dan Alkaloida. Medan:
Universitas Sumatera Utara.
Litescu SC, Sandra AV, Eremia SAV, Diaconu M, Tache A., 2011, Biosensors
Applications on Assessment of Reactive Oxygen Species and Antioxidants,
Environmental Biosensors, In Tech Rijeka Croatia.
Meyer B. N., et al. 1982. Brine Shrimp: A Convenient General Bioassay For Active Plant
Constituents. Journal of Medical Plant Research Vol. 45.
Ningsih, I. (2016). Studi Etnofarmasi Penggunaan Tumbuhan Obat Oleh Suku Tengger
Di Kabupaten Lumajang dan Malang, Jawa Timur. Pharmacy, 13 (1). 10-20.
Ningsih, I. Y., 2014, Modul Farmakognosi: Fenilpropanoid, Fakultas Farmasi Universitas
Jember, Jember.
Parubak, A. S. (2013). Senyawa flavonoid yang bersifat antibakteri dari akway (Drimys
becariana. Gibbs). Chemistry Progress, 6(1).
Prakash, A., 2001, Antioxidant Activity, Medallion Laboratories Analytical Progress,
19(2), 1-4.
Rijke, E. (2005). Trace-level Determination of Flavonoids and Their Conjugates
Application ti Plants of The Leguminosae Family [disetasi]. Amsterdam:
Universitas Amsterdam.
Sada, J., & Rosye, H. (2010). Keragaman Tumbuhan Obat Tradisional di Kampung
Nansfori Distrik Supiori Utara, Kabupaten Supiori–Papua. Jurnal Biologi Papua,
2 (2). 39-46.
Sadarun, B., M. Hajrul M., Wahyuni, dan Sahidin, 2017, Toksisitas Akut enyawa
Metabolit Sekunder dari Spons Laut Clathriasp. Pharmauho, 3 (1).

Salas, P. G.,Aranzazu, M.-S., Antonio, S.-C. dan Alberto, F.G., 2010, Phenolic-
Compound-Extraction Systems for Fruit and Vegetable Samples. Molecules,
vol.15, hh. 8813-8826.
Septiana, A. T., & Asnani, A. (2012). Kajian sifat fisikokimia ekstrak rumput laut coklat
Sargassum duplicatum menggunakan berbagai pelarut dan metode
ekstraksi. Agrointek, 6(1), 22-28.
Solis, P.N., Wright, C.W., Anderson, M.M., Gupta, M.P., Phillipson, J.D., 1992. A
microwell cytotoxicity assay using Artemia salina (brine shrimp). Planta Med. 59,
250-252.
Sondakh, R.M., Jimmy P., dan Pemsi M.W., 2017, Uji Toksisitas Akut Ekstrak Spons
Laut (Callyspongia aerizusa) terhadap Larva Artemia salina Leach.
Sukardiman, Abdul Rahman, Nadia Fatma Pratiwi, 2004, Uji Praskrining Aktivitas
Antikanker Ekstrak Eter dan Ekstrak Metanol Marchantia cf. planiloba Steph.
Dengan Metode Uji Kematian Larva Udang dan Profil Densitometri Ekstrak
Aktif. Majalah Farmasi Airlangga, Vol.4 No.3

Svarc-Gajic, J., Z., Stojanovic, A. S., Carretero, D. A., Román, I., Borrás, I. dan
Vasiljevic, 2013, Development of A Microwave-Assisted Extraction for the
Analysisof Phenolic Compounds from Rosmarinus Officinalis, Journal of Food
Engineering, vol.119.

Skripsi, Semarang: Fakultas Ilmu Tarbiyah dan Keguruan Universitas Islam Negeri
Walisongo.
Solis, P.N., Wright, C.W., Anderson, M.M., Gupta, M.P., Phillipson, J.D., 1992. A
microwell cytotoxicity assay using Artemia salina (brine shrimp). Planta Med. 59,
250-252.
Sondakh, R.M., Jimmy P., dan Pemsi M.W., 2017, Uji Toksisitas Akut Ekstrak Spons
Laut (Callyspongia aerizusa) terhadap Larva Artemia salina Leach

Tarigan, K. 2004. Profil Pengusahaan (Budidaya) Gaharu. Pusat Bina Penyuluhan

Kehutanan. Departemen Kehutanan. Jakarta.
Tiwari, Kumar, Kaur Mandeep, Kaur Gurpreet & Kaur Harleem. 2011. Phytochemical
Screening and Extraction: A Review. Internationale Pharmaceutica Sciencia vol.
1: issue 1.
Tonahi, J. M. M., Nuryanti, S., & Suherman, S., 2014, Antioksidan Dari Daun Sirih
Merah (Piper Crocatum), Jurnal Akademika Kimia, 3(3), 158-164.
Tristantini, D., Alifah, I., Bhayangkara, T., & Jason, G. (2016). Pengujian Aktivitas
Antioksidan Menggunakan Metode DPPH pada Daun Tanjung (Mimusops elengi
L). Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia “Kejuangan”, ISSN 1693-4393. 1-
7.

Ulfah, S., 2015, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Rambutan (Nephelium
lappaceum Linn) dengan Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil). Skripsi,
Jakarta: Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah.

Upstone, S.L., 2000, Encyclopedia Of Analytical Chemistry R.A. Meyers:

Ultraviolet/Visible Light Absorption Spectrophotometry In Clinical Chemistry,
John Wiley & Sons Ltd.
Wahid, N. (2017). Skrining Partisi-Partisi dan Fraksi-Fraksi Tidak Larut Heksan dari
Ekstrak Metanol Kulit Batang Kayu Jawa (Lanneacoromandelica (Houtt.) Merr.)
 Sebagai Inhibitor Pertumbuhan Mycobacterium Tuberculosis. UIN Alauddin.
Makassar.
Wardatun, S. (2011). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Akar, Kulit Batang dan
Daun Tanaman Sambiloto (Andrographis Paniculata Ness.) dengan Metode
Linoleat – Tiosianat. Fitofarmaka, 1 (2). 9-13.
Widiyastuti, Y., Ika, Y., & Sari, H. (2019). Efek Sitotoksik Formula Jamu Daun Sirsak,
Buah Takokak, dan Umbi Bidara Upas terhadap Sel Kanker Payudara MCF-7.
Jurnal Kefarmasian Indonesia, 9 (2). 140-149.
Widodo, N., 2007, Isolasi dan Karakterisasi Senyawa Alkaloid yang Terkandung dalam
Jamur Tiram Putih. (Skripsi Sarjana, FMIPA UNNES), Semarang.
Widyastuti, R., Galuh , R., & Saryanto. (2019). Penggunaan Tumbuhan Jerango (Acorus
Calamus) Untuk Pengobatan Berbagai Penyakit Pada Delapan Etnis Di Provinsi
Aceh. Media Konservasi, 24 (1). 11-19.
Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, Kanisius, Yogyakarta.
Yanti, I. G., Swastini, D. A., & Kardena, I. M. (2013). Skrining Fitokimia Ekstrak
Metanol Daun Gaharu (Gyrinops versteegii (Gilg) Domke). Jurnal Farmasi
Udayana.
Yanuartono, H. P., Nururrozi, A., & Indarjulianto, S. (2017). Saponin: dampak terhadap
ternak (ulasan). Jurnal Peternakan Sriwijaya, 6(2), 79-90.
Yodha, A.W.M., 2017, Isolasi, Identifikasi dan Aktivitas Farmakologi Senyawa
Metabolit Sekunder dari Batang Tumbuhan Polygonum sagittatum, Tesis,
Universitas Halu Oleo
Zafrial, R., & Riezki, A. (2018). Artikel Tinjauan : Anti Kanker Dari Tanaman Herbal.
Farmaka, 16 (1). 15-23.
Zamroni S., & Ernawati M. (2017). Info Komoditi Tanaman Obat. Jakarta: Badan
Pengkajian dan Pengembangan Perdagangan Kementerian Perdagangan Republik
Indonesia.
Zulfa, H.I., 2019, Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Dan Kulit Buah Tiga Spesies
Pohon Penghasil Gaharu, Skripsi, Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan
Alam Institut Pertanian Bogor.