BAB V

INSTRUMEN SPEKTROFOTOMETER UV-VIS DAN INFRA MERAH

A. Instrumen Spektrifotometer UV-Vis

1. Definisi Spektrofotometri UV-Vis

Spektrofotometri UV-Vis adalah pengukuran serapan cahaya di daerah

ultraviolet (200-400 nm) dan sinar tampak (400-800 nm) oleh suatu senyawa.

Serapan cahaya uv atau cahaya tampak mengakibatkan transisi elektronik, yaitu

promosi elektron-elektron dari orbital dasar yang berenergi rendah ke orbital

tereksitasi yang berenergi lebih tinggi. Panjang gelombang cahaya uv atau cahaya

tampak bergantung pada mudahnya promosi elektron. Molekul- molekul yang

memerlukan lebih banyak energi untuk promosi elektron, akan menyerap pada

panjang gelombang yang lebih pendek. Molekul yang memerlukan energi lebih

sedikit akan menyerap pada panjang gelombang yang lebih panjang. Senyawa

yang menyerap cahaya dalam daerah tampak (senyawa berwarna) mempunyai

elektron yang lebih mudah dipromosikan dari pada senyawa yang menyerap pada

panjang gelombang lebih pendek.

Absorpsi spektrofotometri UV-Vis adalah istilah yang digunakan ketika

radiasi ultraviolet dan cahaya tampak diabsorpsi oleh molekul yang diukur.

Alatnya disebut spektrofotometer UV-Vis. Spektrofotometer UV-Vis (Ultra

Violet-Visible) adalah salah satu instrumen yang digunakan dalam menganalisa

suatu senyawa kimia. Spektrofotometer digunakan karena kemampuannya dalam

menganalisa banyak senyawa kimia serta kepraktisannya dalam hal preparasi

sampel apabila dibandingkan dengan beberapa metode analisa

Beberapa istilah umum digunakan untuk menjelaskan instrumen lengkap.

Spektrometer adalah spesifikasi-instrumen mikroskopis yang menggunakan

monokromator atau polikromator dalam hubungannya dengan transduser untuk

mengubah intensitas radiasi menjadi sinyal listrik. Spectrofotometer adalah

spektrometer yang memungkinkan pengukuran rasio pancaran kekuatan dua

balok, persyaratan untuk mengukur absorbansi. Fotometer menggunakan filter

untuk pemilihan panjang gelombang dalam hubungannya dengan transmisi radiasi

yang sesuai. ducer. Spektrofotometer menawarkan keuntungan yang cukup besar

dari panjang gelombang yang digunakan dapat divariasikan terus menerus,

sehingga memungkinkan untuk merekam spektrum serapan. Fotometer memiliki

keunggulan kesederhanaan, kekasaran, dan biaya rendah. Beberapa lusin model

spektrofotometer tersedia secara komersial. Kebanyakan spektrofotometer

menutupi UV / tampak dan kadang-kadang wilayah inframerah-dekat, sedangkan

fotometer paling banyak sering digunakan untuk wilayah yang terlihat. Fotometer

banyak digunakan sebagai pendeteksi kromatografi, elektroforesis, immunoassay,

atau analisis aliran kontinu. Kedua fotometer dan spektrofotometer dapat

diperoleh dalam berkas sinar tunggal dan ganda varietas.

Kromofor adalah bagian molekul yang bertanggung jawab pada

penyerapan cahaya. Suatu kelompok atom yang memberikan peningkatan absorbsi

di daerah UV-dekat. Setiap benda yang menyerap cahaya tampak (visibel) akan

nampak berwarna.
Absorpsi Ultraviolet Dan Molekul Terlihat Spektroskopi

Absorpsi energi ultraviolet sebesar 100 kcal/mol, menyebabkan

perubahan elektronik, vibrasi dan rotasi menghasilkan bentuk pita absorpsi yang

melebar. Absorpsi energi di IR sebesar 5 kcal/mol, cukup untuk memacu

molekul secara keseluruhan untuk mengalami perubahan vibrasi dan rotasi yang

menggambarkan struktur menyeluruh.

Beberapa jenis spesies molekuler menyerap ultraviolet dan radiasi

tampak. Molekuler penyerapan oleh spesies ini dapat digunakan untuk analisis

kualitatif dan kuantitatif. Absorbsi UV-vis juga digunakan untuk memantau titrasi

dan untuk mempelajari komposisi ion kompleks. Penggunaan spektrometri

serapan mengikuti kinetika kimia reaksi untuk tujuan kuantitatif.

penyerapan ultraviolet dan radiasi tampak oleh molekul umumnya terjadi

dalam satu atau lebih pita absorpsi elektronik, masing-masing adalah terdiri dari

banyak garis yang padat namun terpisah. Setiap garis muncul dari transisi elektron

dari keadaan dasar ke salah satu dari banyak keadaan energi getaran dan rotasi

yang terkait dengan setiap keadaan energi elektronik tereksitasi. Karena disana

begitu banyak dari status getaran dan rotasi ini dan karena energinya berbeda

hanya sedikit, jumlah garis yang terdapat pada pita tipikal cukup besar dan

pemisahan mereka satu sama lain sangat kecil.

2. Komponen Instrumen

Kebanyakan instrumen spektroskopi di daerah UV / tampak dan IR terdiri dari

lima komponen yaitu :

 1. sumber energi pancaran yang stabil;

2. pemilih panjang gelombang untuk diisolasi wilayah spektrum terbatas

untuk pengukuran;

3. satu atau lebih wadah sampel;

4. detektor radiasi, untuk mengubah energi radiasi menjadi sinyal listrik yang

dapat diukur;

5. unit pemrosesan dan pembacaan sinyal yang terdiri dari perangkat keras

elektronik dan in instrumen modern komputer.

3. Sumber Kontinum Di Wilayah Ultraviolet/Visibel

Sumber kontinum yang paling banyak digunakan tercantum pada diatas.

Tungsten biasa lampu filamen memberikan distribusi panjang gelombang yang

luas dari 320 hingga 2500 nm. Umumnya lampu ini dioperasikan pada suhu

sekitar 2900 K, dengan demikian menghasilkan radiasi yang berguna dari sekitar

350 hingga 2500 nm.

Sumber Ultraviolet / Visibel Lainnya

Selain sumber kontinum yang baru saja dibahas, sumber garis juga penting

untuk digunakan di wilayah UV / tampak. Lampu busur merkuri bertekanan

rendah biasa terjadi sumber untuk digunakan dalam detektor kromatografi cair.

Garis dominan yang dipancarkan oleh sumber ini adalah garis 253,7-nm Hg.

Lampu katoda berongga juga merupakan jalur umum sumber yang secara khusus

digunakan untuk spektroskopi serapan atom,. Laser juga digunakan dalam banyak

aplikasi spektroskopi, baik untuk panjang gelombang tunggal maupun untuk

tujuan pemindaian.

Sumber Kontinum di Wilayah Inframerah

Sumber kontinum untuk radiasi IR biasanya adalah padatan inert yang

dipanaskan. Sebuah Globar sumber terdiri dari batang silikon karbida. Radiasi

infra merah dipancarkan ketika Globar dipanaskan sampai sekitar 1500 °C dengan

mengalirkan listrik melaluinya. Memberikan rentang panjang gelombang dari

sumber ini. Glower Nernst adalah silinder zirkonium dan yttrium oksida yang

memancarkan radiasi IR, saat dipanaskan hingga suhu tinggi oleh arus listrik.

Dipanaskan dengan listrik spiral kawat nichrome juga berfungsi sebagai sumber

IR murah.
B. SPEKTROFOTOMETER INFRAMERAH
1. Inframerah
Dua jenis spektrometer digunakan dalam spektroskopi IR: jenis dispersif

dan Variasi transformasi Fourier.

1. Instrumen Inframerah Dispersif

Berkas tunggal (Single beam), tidak terlalu praktis karena adanya absorpsi

radiasi IR oleh H2O dan CO2 atmosfer Berkas rangkap (Double beam), sel

sampel ditempatkan di depan monokromator untuk meminimalkan efek adanya

emisi IR dan radiasi sesatan dari kompartemen sampel Metode deteksi Sistem

optis nol (Optical null) dan Sistem perekam rasio (Ratio recording).

Instrumen IR lama hampir selalu merupakan desain balok ganda dispersif.

Ini sering dari varietas balok-dalam-waktu yang ditunjukkan pada Gambar 25-20c

kecuali itu lokasi kompartemen sel sehubungan dengan monokromator itu

kembali berpengalaman. Di sebagian besar instrumen UV / visibel, sel terletak di

antara monokromator dan detektor untuk menghindari fotodekomposisi sampel,

yang mungkin terjadi terjadi jika sampel dihadapkan pada kekuatan penuh

sumber. Perhatikan fotodioda berikut

 instrumen larik menghindari masalah ini karena waktu pemaparan sampel

yang singkat ke berkas sinar. Sebaliknya, radiasi infra merah tidak cukup energik

untuk dibawa tentang fotodekomposisi. Selain itu, sebagian besar sampel adalah

pemancar radiasi IR yang baik. Karena faktor-faktor ini, kompartemen sel

biasanya terletak di antara sumbernya dan monokromator dalam instrumen IR.

Seperti yang telah dibahas sebelumnya di bagian ini, komponen instrumen

IR berbeda secara signifikan dari instrumen UV/visibel. Jadi, sumber IR adalah

padatan yang dipanaskan, dan detektor IR merespons panas daripada foton.

Selanjutnya bagian optik komponen instrumen IR dibuat dari garam yang dipoles,

seperti natrium klorida atau kalium bromida.

2. Instrumen Transformasi Fourier

Ketika spektrometer Fourier Transform Infrared (FTIR) pertama kali

muncul di pasaran pada awal 1970-an, mereka besar, mahal (lebih dari $ 100.000),

dan dibutuhkan penyesuaian mekanis yang sering. Untuk alasan ini,

penggunaannya terbatas pada khusus aplikasi yang memiliki karakteristik unik

(kecepatan tinggi, resolusi tinggi, tinggi sensitivitas, dan presisi dan akurasi

panjang gelombang yang sangat baik) sangat penting. Sejak 1990-an,

bagaimanapun, spektrometer FTIR telah dikurangi menjadi ukuran benchtop dan

telah menjadi sangat andal dan mudah dirawat. Selanjutnya model sederhana

sekarang dengan harga yang sama untuk spektrometer dispersif. Oleh karena itu,

spektrometer FTIR memiliki sebagian besar menggusur instrumen dispersif di

sebagian besar laboratorium.

 Ketika spektrometer Fourier Transform Infrared (FTIR) pertama kali

muncul di pasaran pada awal 1970-an, mereka besar, mahal (lebih dari $ 100.000),

dan dibutuhkan penyesuaian mekanis yang sering. Untuk alasan ini,

penggunaannya terbatas pada khusus aplikasi yang memiliki karakteristik unik

(kecepatan tinggi, resolusi tinggi, tinggi sensitivitas, dan presisi dan akurasi

panjang gelombang yang sangat baik) sangat penting. Sejak 1990-an,

bagaimanapun, spektrometer FTIR telah dikurangi menjadi ukuran benchtop dan

telah menjadi sangat andal dan mudah dirawat. Selanjutnya model sederhana

sekarang dengan harga yang sama untuk spektrometer dispersif. Oleh karena itu,

spektrometer FTIR memiliki sebagian besar menggusur instrumen dispersif di

sebagian besar laboratorium.

2. Spektroskopi Penyerapan Inframerah

Spektroskopi inframerah adalah alat yang ampuh untuk mengidentifikasi

organik murni dan anorganik senyawa karena, dengan pengecualian beberapa

molekul homonuklir seperti O2, N2, dan Cl2, semua spesies molekul menyerap

radiasi infra merah. Selain itu, dengan pengecualian molekul kiral dalam bentuk

kristal, setiap senyawa molekuler memiliki spektrum serapan infra merah yang

unik. Oleh karena itu, kesesuaian yang tepat antara spektrum senyawa dengan

struktur yang diketahui dan spektrum analit secara jelas mengidentifikasi analit

tersebut.

Spektroskopi inframerah adalah alat yang kurang memuaskan untuk

analisis kuantitatif dibandingkan ultraviolet dan spektrum tampak karena

sensitivitas yang lebih rendah dan penyimpangan yang sering dari hukum Beer.
Selain itu, pengukuran absorbansi infra merah jauh lebih sedikit tepat. Namun

demikian, dalam kasus di mana presisi sederhana memadai, unik sifat spektrum

inframerah memberikan tingkat selektivitas dalam pengukuran kuantitatif yang

dapat mengimbangi karakteristik yang tidak diinginkan.

Kebanyakan spektrometer FTIR benchtop berjenis single-beam. Untuk

mengumpulkan spektrum sampel, spektrum latar belakang pertama kali diperoleh

oleh Fourier transformasi interferogram dari latar belakang (pelarut, air ambien,

dan karbon dioksida). Selanjutnya, spektrum sampel diperoleh. Terakhir, rasio

spektrum sampel berkas tunggal ke spektrum latar belakang dihitung dan

absorbansi atau transmitansi versus panjang gelombang atau bilangan gelombang

diplot. Sering instrumen benchtop membersihkan spektrometer dengan gas inert

atau udara kering bebas CO2 untuk mengurangi penyerapan latar belakang dari

uap air dan CO2.

Keuntungan utama instrumen FTIR dibandingkan spektrometer dispersif

meliputi kecepatan dan sensitivitas yang lebih baik, kekuatan pengumpulan

cahaya yang lebih baik, panjang gelombang yang lebih akurat kalibrasi, desain

mekanis yang lebih sederhana, dan penghapusan virtual dari setiap kontribusi dari

cahaya nyasar dan emisi IR. Karena kelebihan tersebut, hampir semua IR baru

instrumen adalah sistem FTIR.