ELISA
KELOMPOK
AINUN GALLBY1
CINDANI
CINDANI MELINIA
ME LINIA PUTRI
EKA RISTIANI SORMIN
NIKEN SAYMONA SARI SUSANTI
VERREN
VERR EN DIHAN T.
T.
 

Pengertian

Tips penggunaan elisa

Macam-Macam ELISA Outline
 

Teknik Enzyme Linked

Immunosorbent Assay (ELISA ) Atau
S
E
 J
A disebut enzyme immunoassay 
R (EIA)
A
h
Pengertian ELISA

pertama kali diperkenalkan pada tahun 1971

oleh Peter Primann dan Evia Engvall. Mereka
Mereka
menggunakan teknik ELISA dalam bidang
imunologi
 

Prin
Prinsi
sip
p pe
peme
meri
riks
ksaa
aan
n EL
ELIS
ISA
A

Intraksi antara antigen dan antibodi yang terabsorbsi pada permukaan fase
padat (micr
(microtiter)
otiter) dengan mengunakan konjugat antibodi yang di label enzim
enzim,,
apabila ditambahkan substrat dan kromatogenik yang
kromatogenik  yang dapat menghasilkan
warna.. Warna yang timbul dapat ditentukan secara kualitatif (pandangan mata)
warna
dan kuantitatif dengan pembacaan nilai absorbansi pada ELISA reader
 

Macam-macam ELISA

2. Direct
Dir
1.Ind ect
IndirectELI
irect ELISA
SAA
ELISA
ELIS
3. San
Sandwi
dwich
ch ELIS
ELISA
A
4. Com]
Com]etitiv
etitive
e ELIS
ELISA
A
 

Macam-macam ELISA

Metode ini di lakukan dengan menempelkan antigen

pada well dan antibodi primer yang berlabel enzim,
enzim,
DIRECT ELISA
berfungsi untuk mendeteksi atau mengukur
konsentrasi antigen dimana spesifitas antibodi
primer sangat penting.

Kelebihan :
• prosedurnya sederhana,
• dapat menghindari reaktivitas silang dari reaksi sekunder
sekunder,, sedangkan

Kekurangan :
• biaya mahal
• penempelan antigen membutuhkan waktu yang lama (Boster
(Boster,, Handbook of ELISA).
 

Macam-macam ELISA

Metode ini menggunakan antigen yang telah di coating pada

well,l, antib
wel antibodi
odi primer tanpa
tanpa label (spesifik) akan berikatan
INDIRECT ELISA dengan antigen tersebut dan kem kemudian
udian antibodi sekunder
belabel enzim akan mementuk ikatan kompleks antigen
antibodii antibod
antibod antibodii berlabe
berlabell enzim. Metode ini merupakan
merupakan metode yang paling populer pada ELISA.

Kelebihan :
• tingkat sensitiviitas tinggi

kelemahannya
• membutuhkan waktu pengujian yang relativ
lebih lama
 

Macam-macam ELISA

ELISA jenis ini menggunakan antibodi primer yang spesifik untuk

mendeteksi antigen yang diingikan dan antibodi sekunder (antibodi
SANDWICH ELISA
berlabel enzim) untuk mendeteksi keberadaan antigen yang
diinginkan. Metode ini membutuhkan Antigen yang memiliki minimal 2

sisi antigenik (sisi interaksi dengan antibodi) karena antigen tersebut

harus dapat berinteraksi dengan antibodi primer spesifik dan antibodi
berlabel enzime.
Kelebihan :
•
tingkat sensitivitas relativ lebih tinggi
•

kelemahannya :
• metode ini hanya dapat diaplikasikan untuk mendeteksi antigen yang bersifat
multivalen serta
• sulitnya mencari dua jenis antibodi yang dapat berinteraksi dengan antigen
 
tersebut.

Macam-macam ELISA

Metode ini digunakan untuk untuk mendeteksi antigen atau

antibodi. Pada pendeteksian antigen, well yang telah di coating antigen
COMPETITIVE ELISA berlabel enzime akan berkompetisi dengan antigen primer pada saat
penambahan antibody spesifik . Begitu pula sebaliknya pada saat
mendeteksi antibodi.
antibod i. Dalam ELISA kompetitif ini semakin tinggi
konsentrasi antigen primer semakin lemah sinyal yang dihasilkan
(tidak berwarna).

Kelebihan utama dari metode ini yaitu antigen primer tidak harus dimurnikan karena tingkat
sensitivitasnya tinggi terhadap perbedaan komposisi dalam kedua antigen, bahkan ketika jumlah
antibodi spesifik relatif kecil.
 

Sampple Kontrol positif

Kontrol
diluent dan negatif 

Ab sekunder 
mikeoplate /
mikrotiter / well

Stop solution Substrat

 

Proseur kerja
 

Tips
menghindari
kesalahan dalam
praktikum

• Mengikuti petunjuk penggunaan (kit)

•
Mempersiapkan sapel dengan baik, benar dan
berhati-hati.
•  Jangan gunakan sampel dengan lipemia (keruh
(keruh
seperti susu), hemol
hemolisis
isis
• Lakukan proses pemipetan yang benar dan cepat
•
Beri tanda pada setiap micriolate agar tidak terjadi
kesalahan pada identitas pasien
• Hati-hati dalam menangani sampel agar tidak terjadi
t erjadi
kontaminasi silang antarmicroplate
• Pastikan pembacaan microplate pada panjang
gelombang yang benar
 

perawatan

Perawataan 6 bulan dengan melakukan kalibrasi pada alat

secara keseluruhan seperti : Lampu, Proses pembacaannya
 pada ELISA Reader yang dilakukan oleh teknisi.