Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053

Daftar isi tersedia diSainsLangsung

Jurnal Etnofarmakologi

beranda jurnal:www.elsevier.com/locate/jethpharm

Aktivitas antiadhesive ekstrak hidroetanol dari polong buncisPhaseolus

vulgaris(kacang biasa) terhadap uropatogenikE. colidan permeabilitas
konstituennya melalui sel Caco-2 monolayer
Dominik Popowskisebuah,B,1, Karolina A. Pawł.owskasebuah,B,1, Melanie DeipenbrockC, Andreas HenselC, Aleksandra
Krukosebuah,B, Matthias F. MelzigD, Jakub P. Piwowarskisebuah,B, Sebastian Granicasebuah,B,*
sebuah DepartemenFarmakognosi dan Basis Molekuler Fitoterapi, Fakultas Farmasi dengan Divisi Kedokteran Laboratorium, Universitas Kedokteran Warsawa, Ul. Banacha 1,
02-097 Warsawa, Polandia
BLabMikrobiota, Pusat Studi Praklinis, Universitas Kedokteran Warsawa, Ul. Banacha 1b, 02-097 Warsawa, Polandia
CInstitut
Biologi Farmasi dan Fitokimia, Universitas Münster, Corrensstraß.e 48, 48149 Münster, Jerman
DDepartemen Biologi Farmasi, Institut Farmasi, Freie Universität Berlin, Königin-Luise-Str. 2+4, 14195 Berlin, Jerman

INFO ARTIKEL ABSTRAK

Kata kunci: Relevansi etnofarmakologis: Phaseaoli pericarpium(kacang polong) adalah bahan tanaman farmakope yang secara tradisional digunakan
Phaseolus vulgaris sebagai diuretik dan agen antidiabetes. Aktivitas diuretik ekstrak polong dilaporkan pertama kali pada tahun 1608. Sejak itu Pericarpium
Infeksi saluran kemih Phaseoli tokoh teh di banyak buku teks sebagai bahan tanaman obat yang digunakan oleh pasien.
Adhesi
Tujuan studi:Meskipun penggunaan tradisional ekstrak dariPhaseolium vulgarispericarp, informasi terbatas tersedia
Saponin
pada bioaktivitas, komposisi kimia, dan ketersediaanhayati sediaan tersebut. Penelitian berikut bertujuan untuk
coklat-2
UPEC mengetahui komposisi fitokimia,in vitro permeabilitas konstituen ekstrak yang dipilih melalui sistem permeasi
Caco-2, dan aktivitas antivirulensi potensial terhadap uropatogenik Escherichia coli seorang hidroalkohol
Pericarpium Phaseoli ekstrak (PPX) in vitro untuk mendukung penggunaan tradisional sebagai obat yang digunakan
dalam infeksi saluran kemih.
Bahan dan metode: Komposisi kimia ekstrak PPX [etanol:air 7:3 (v/v)] diselidiki dengan menggunakan UHPLC-DAD-
MSndan dereplikasi berikutnya. Permeabilitas senyawa hadir dalam PPX dievaluasi menggunakan sistem permeasi
monolayer Caco-2. Pengaruh PPX pada uropatogenikE. coli(UPEC) strain NU14 proliferasi dan melawan adhesi
bakteri ke sel epitel T24 ditentukan oleh uji turbidimetri dan flow cytometry, masing-masing. Pengaruh ekstrak pada
aktivitas mitokondria sel inang T24 dipantau dengan uji MTT.

Hasil: LC-MSnpenyelidikan dan dereplikasi, menunjukkan ekstrak PPX didominasi oleh berbagai flavonoid, dengan rutin
sebagai senyawa utama, dan turunan soyasaponin. Rutin, soyasaponin dan asam lemak terpilih terbukti menembus sistem
monolayer Caco-2, menunjukkan potensi bioavailabilitas setelah asupan oral. Ekstrak tidak mempengaruhi viabilitas sel T24
setelah 1,5 jam inkubasi pada 2 mg/mL dan UPEC. PPX secara signifikan mengurangi adhesi bakteri UPEC ke sel kandung
kemih manusia dengan cara yang bergantung pada konsentrasi (0,5-2 mg/mL). Penyelidikan terperinci oleh protokol inkubasi
yang berbeda menunjukkan bahwa PPX tampaknya berinteraksi dengan sel T24, yang kemudian mengarah pada
pengurangan pengenalan dan adhesi UPEC ke membran sel inang. Kesimpulan:PPX ditandai dengan adanya flavonoid
(misalnya rutin) dan saponin, dari mana senyawa yang dipilih mungkin tersedia secara hayati setelah aplikasi oral, seperti
yang ditunjukkan oleh percobaan permeasi Caco-2. Rutin dan beberapa saponin dapat dianggap berpotensi tersedia secara
hayati setelah asupan oral. Penghambatan adhesi bakteri dari UPEC ke sel T24 yang bergantung pada konsentrasi
membenarkan penggunaan tradisional dariPericarpium Phaseoli dalam pencegahan dan pengobatan infeksi saluran kemih.

* Penulis yang sesuai. ul. Banacha 1, 02-097 Warsawa, Polandia.

Alamat email:dominik.popowski@wum.edu.pl (D. Popowski),karolina.pawlowska1@wum.edu.pl (KA Pawł.owska),m_deip01@uni-muenster.de (M.Deipenbrock),
ahensel@uni-muenster.de (A.Hensel),akruk@wum.edu.pl (A.Kruk),melzig@zedat.fu-berlin.de (MF Melzig),jpiwowarski@wum.edu.pl (JP Piwowarski),sgranica@wum.edu.pl,
sgranica@gmail.com (S. Granika).
1 - para penulis ini berkontribusi sama pada naskah.

https://doi.org/10.1016/j.jep.2021.114053 Diterima 16
Februari 2021; Diterima 16 Maret 2021
Tersedia online 19 Maret 2021 0378-8741/
© 2021 Penulis. Diterbitkan oleh Elsevier BV Ini adalah artikel akses terbuka di bawah lisensi CC BY-NC-ND
(http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
D.Popowski dkk. Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053

(Van Hellemont, 1985;Wichtl, 1994).

ISK adalah salah satu infeksi bakteri yang paling umum karena
1. Perkenalan mempengaruhi 150 juta orang setiap tahun dengan biaya perawatan
kesehatan sekitar US $ 3,5 miliar pada tahun 2015 di Amerika Serikat
saja (Flores-Mireles dkk., 2015). Menurut European Association of
Daftar singkatan
Urology and European Section of Infection in Urology, ISK dapat dibagi
menjadi dua kelompok: tidak rumit (bakteriuria asimtomatik, sistitis
anti ISK terhadap infeksi saluran kemih
akut tanpa komplikasi dan pielonefritis tanpa komplikasi dan infeksi
coklat-2 adenokarsinoma kolon Caco-2
berulang) dan rumit (berhubungan dengan infeksi akut ginjal, demam,
DMEM Dulbecco's modified eagle medium
infeksi nyeri perut, obstruksi dalam saluran kemih dan faktor risiko
DMSO dimethyl sulfoxide
seperti jenis kelamin laki-laki, gangguan neurogenik, penyakit
DPBS Dulbecco's phosphate-buffered saline
nefropatik) (Asosiasi Urologi Eropa, 2020). ISK terutama disebabkan
FBS fetal bovine serum
oleh uropatogenikEscherichia coli (UPEC), tetapi jugaKlebsiella
FITC larutan garam seimbang
pneumoniae, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, dan
HBSS fluorescein isothiocyanate Hanks
Proteus mirabilis dapat berkontribusi. Dalam kebanyakan kasus, strain
HMPC Komite Produk Obat Herbal Badan Medis Eropa
UPEC yang berbeda dengan fenotipe dan sifat biokimia yang berbeda
EMA
bertanggung jawab untuk ISK yang tidak rumit dan rumit.Foxman,
MTT 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium
2010). Perbedaan distribusi kelompok filogenetik yang signifikan antara
bromide
isolat ISK dan fekalE. colitelah diamati, karena UPEC dicirikan oleh
NU14 uropatogenikE. colitekanan
faktor virulensi yang berbeda dan spesifik (Bahadori dkk., 2019;Mojaz-
OD640 nm kerapatan optik, ditentukan padaλ.= 640
Dalfardi dkk., 2020).
PELIHARAAN nm polietilen tereftalat
Strategi fitoterapi melawan ISK digantikan dengan antibiotik pada
PPX Pericarpium Phaseoli etanol – ekstrak air 7:3 (v/v) garis
abad ke-20 (Nikel, 2005). Namun, karena meningkatnya resistensi
T24 sel epitel manusia dari karsinoma kandung kemih (ATTC
antibiotik, strategi terapi alternatif, termasuk pendekatan fitoterapi,
HTB-4)
harus dipertimbangkan kembali atau dikembangkan.Mazzariol dkk.,
TEER kromatografi lapis tipis hambatan
2017;WHO, 2014). Selain itu, perlu untuk melawan ISK berulang, yang
TLC listrik transepitel
sering terjadi setelah terapi antimikroba. Insiden ISK berulang setelah
UHPLC-MS kromatografi cair kinerja sangat tinggi -
3-4 bulan pengobatan antibiotik standar berikutnya telah diamati pada
ditulis dgn tanda penghubung dengan
hingga 30% wanita dewasa (Foxman et al., 2000). Ini mungkin terkait
UPEC spektrometri massa uropathogenicE. coli
dengan strategi pelarian kekebalan bakteri dengan menciptakan
ISK Infeksi saluran kemih
komunitas bakteri intraseluler seperti biofilm di sel kandung kemih (
Foxman dan Buxton, 2013).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh potensial ekstrak
Kacang biasa (Phaseolus vulgarisL.) adalah tanaman tahunan, dibudidayakan buah polong terhadap UPEC, khususnya proliferasi UPEC dan virulensi
di seluruh dunia untuk bijinya yang dapat dimakan. Selain nilai gizi yang tinggi adhesi spesifik UPEC. Selain itu, studi fitokimia harus dilakukan untuk
dari biji dan produk olahannya (Messina, 2014), ekstrak biji matang yang mendapatkan wawasan yang lebih rinci tentang komposisi ekstrak, juga
mengandung glikoprotein penghambat alfa-amilase digunakan dalam suplemen terkait dengan penyelidikan potensial pada permeabilitas komponen ekstrak
penurun berat badan (Udani dkk., 2018). Namun, pericarp kacang umum, bebas yang ditentukan selama periode tertentu.in vitro model Caco-2.
dari bijinya, banyak digunakan dalam pengobatan tradisional Eropa. Kacang
polong (pericarp) disebut sebagaiPericarpium Phaseoli atau Fructus Phaseoli sinus 2. Bahan-bahan dan metode-metode

semine dan dimonografikan dalam Polish Pharmacopoeia (PPXI) edisi ke-11

(“Polandia Pharmacopoeia XI,” 2017a). Kualitas bahan herbal terkait dengan
kandungan asam fenolik yang dihitung sebagai asam caffeic (minimal 0,01%w/w,
terkait dengan produk kering). Bahan herbal juga merupakan bagian dari
campuran banyak digunakan bahan herbal obat yang digunakan untuk efek
diuretiknya (Diuretik spesies) (Panjang, 2017; “Farmakope Polandia XI,” 2017b).
Phaseoli vulgarisLbuahsinus semine juga telah dimonografikan oleh
Committee on Herbal Medicinal Products (HMPC) dari European
Medicine Agency (Badan Obat Eropa, 2013). Monografi masing-masing
menjelaskan penggunaan tradisional bahan herbal dan persiapan
herbal masing-masing sebagai adjuvant pada infeksi saluran kemih
(ISK) tanpa komplikasi dengan pembilasan saluran kemih karena
peningkatan urin. Selain itu, monografi HMPC menggambarkan
aktivitas antidiabetik ringan dari bahan herbal dan persiapan ekstrak
masing-masing.
Secara tradisional bahan herbal juga telah digunakan untuk mengobati
diabetes, tetapi penyelidikan rinci tentang efek antidiabetes potensial dari ekstrak
pericarp berair menunjukkan aktivitas penurun glukosa yang signifikan pada
konsentrasi yang relatif tinggi, dan dengan demikian, penyelidikan lebih lanjut
telah dihentikan.Helmstdter, 2010). Aktivitas diuretikPericarpium Phaseoli infus air
telah dilaporkan dalam sejarah monografi (Dodoens, 1608). Sejak itu infus kacang
polong telah dilaporkan di banyak buku teks yang relevan sebagai diuretik - secara
tradisional digunakan untuk ISK dan juga sebagai adjuvant untuk pengobatan
radang sendi dan asam urat.
2.1. Prosedur eksperimen umum
Pemurnian air yang digunakan untuk HPLC dilakukan dengan
menggunakan Sistem Kesederhanaan (Merck KDaD, Darmstadt, Jerman).
Pelarut yang digunakan untuk kromatografi (kelas HPLC), metanol yang
digunakan untuk melarutkan sampel sebelum UHPLC-DAD-MSnanalisis
(gradien grade) dan etanol yang digunakan untuk ekstraksi bahan tanaman
(analytical grade) diperoleh dari POCh (Gliwice, Polandia). DMSO yang
digunakan untuk tes MTT adalah kelas analitis dan dibeli dari Sigma Aldrich
(Saint Louis, MO, USA). Triton X dan 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-
diphenyltetrazolium bromide (MTT) dibeli dari Carl Roth (Karlsruhe, Jerman).
2.2. bahan tanaman
Perikarp kacang biasa, Pericarpium Phaseoli, dibeli dari Kawon,
Polandia (nomor batch: 598.2019). Spesimen voucher disimpan di
Herbarium Departemen Farmakognosi dan Basis Molekuler Fitoterapi
dengan nomor [PP598.2019]. Identitas bahan tanaman dikonfirmasi
oleh Prof. Sebastian Granica, menggunakan metode identifikasi
mikroskopis dan KLT yang dijelaskan secara rinci dalam monografi
Polandia Pharmacopoeia edisi ke-11 (“Farmakope Polandia XI,” 2017a).

2
D.Popowski dkk.
2.3. Persiapan ekstrak hidroetanol
Ekstrak etanol diperoleh dengan ekstraksi tiga langkah dari 50 g bahan
tanaman dengan EtOH:air (7:3v/v). Proses ini dilakukan dalam penangas
ultrasonik pada suhu 40 .◦C selama 30 menit, menggunakan 500 mL pelarut
setiap langkah. Selanjutnya, bagian ekstrak disaring menggunakan kertas
saring (kertas kualitatif Whatman grade 1 (GE Healthcare, Buckinghamshire,
UK)), digabungkan dan dipekatkan di bawah tekanan tereduksi diikuti
dengan liofilisasi untuk menghasilkan 3,86 gPericarpium Phaseoli ekstrak
(PPX), sesuai dengan 7,72%, terkait dengan bahan awal.
2.4. Analisis kromatografi
UHPLC-DAD-MSnanalisis PPX (ekstrak 10 mg, dilarutkan dalam 1 mL
MeOH:H2O 1:1 (v/v)) dan sampel dari percobaan permeabilitas
dilakukan pada sistem UHPLC-3000 RS (Dionex, Leipzig, Jerman),
dilengkapi dengan detektor DAD dan sambungan tanpa putus ke
spektrometer massa perangkap ion AmaZon SL dengan antarmuka ESI
(Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Jerman). Spektrum UV direkam dariλ.
= 200–450nm. Parameter unit MS adalah sebagai berikut: tekanan
nebulizer: 40 psi, laju aliran gas pengering: 9 L/menit, suhu gas
nitrogen 300◦C, dan tegangan kapiler: 4,5 kV. Spektrum massa
didaftarkan dengan memindai darim/z 70 hingga 2200. Kinetex XB-C18
kolom kromatografi digunakan (Phenomenex, Torrance, CA, 150 mm;
2,1 mm; 1,7 m). Fase gerak (A): adalah H2O:asam format (99.9:0.1,v/v),
dan fase gerak (B) adalah asetonitril:asam format (99.0:0.1,v/v).
Program gradien adalah 0-60 menit 5-26% B, 60-80 menit 26-90% B,
dan laju aliran 0,3 mL/menit. Volume injeksi adalah 3 L untuk larutan
PPX, 2 L untuk sampel sisi donor, dan 10 L untuk sampel sisi akseptor.
Suhu oven kolom diatur ke 25◦C. Sampel PPX disaring melalui filter
jarum suntik PET 0,45 m (Kinesis, Cambridge, UK) sebelum analisis
kromatografi.
2.5. Metode mikrobiologi dan biologi sel
2.5.1. Garis sel
Garis sel T24 (ATCC HTB-4) adalah garis sel epitel manusia dari
karsinoma kandung kemih seorang wanita Swedia berusia 82 tahun.
Budidaya sel dilakukan di Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM)
dengan glukosa tinggi dan L-glutamin, ditambah dengan 10% (v/v) Fetal
Bovine Serum (FBS), dan 0,5% (v/v) penisilin/streptomisin pada suhu 37◦C
dan 5% CO2. Semua bahan kimia yang digunakan untuk kultur sel diperoleh
dari Biochrom (Berlin, Jerman).
Garis sel Caco-2 yang digunakan dalam percobaan diperoleh dari
Koleksi Jerman Mikroorganisme dan Kultur Sel DSMZ, Institut Leibnitz,
Braunschweig, Jerman. Sel-sel dikultur dalam botol kultur sel 75 mL
dengan kepadatan penyemaian 1×105sel/mL dalam DMEM ditambah
dengan 20% FBS (v/v), 100 IU/mL penisilin, dan 100 g/mL streptomisin,
dan dalam 12,5 mL medium. Tiga kali seminggu, sel dicuci dua kali
dengan 5 mL Dulbecco's Phosphate Buffer Saline (DPBS) dan media
diganti. Passaging dilakukan pada konfluensi 80%. Semua kultur dan
pelat uji dipertahankan pada suhu 37◦C dalam atmosfer 5% CO2. Hank's
Balanced Salt Solution (HBSS) digunakan sebagai media transportasi
dalam eksperimen transportasi. Semua bahan kimia untuk budidaya
dibeli dari Biowest (Nuaillé, Prancis).
2.5.2. Strain bakteri
UropatogenikE. coliStrain NU14, sistitis diisolasi dari pasien yang
terinfeksi kandung kemih (Johnson dkk., 2001) diberikan oleh Prof. Dobrindt
(University of Münster, Jerman). Stok kultur bakteri yang dicairkan diinkubasi
pada suhu 37◦C selama 24 jam atau 48 jam pada cawan agar. Media
pertumbuhan dibuat dari agar 15 g (Merck, Darmstadt, Jerman), Bacto-
Tryptone 10 g (BD Biosciences, Franklin Lakes, USA), NaCl 8 g (Appli-Chem,
Darmstadt, Jerman), glukosa 1 g (Merck, Darmstadt, Jerman), ekstrak ragi
bergranulasi 1 g (Merck, Darmstadt, Jerman), CaCl22 g (Merck, Darmstadt,
Jerman), air deionisasi 1 L. Semua konstituen
3
Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053
kecuali glukosa dilarutkan dalam air dan diautoklaf. Larutan glukosa
dalam air deionisasi disaring melalui membran selulosa asetat 0,2 m
dan ditambahkan ke media yang diautoklaf, yang kemudian digunakan
untuk pembuatan pelat agar.
2.5.3. Uji proliferasi bakteri
Pengujian yang memantau pengaruh PPX pada pertumbuhan bakteri
dilakukan pada bakteri yang ditumbuhkan agar, yang dipanen setelah 24
jam inkubasi dan disuspensikan dalam media cair 1 mL. Media cair disiapkan
secara analog dengan media pertumbuhan (lihat2.5.2), kecuali penambahan
agar-agar. Kepadatan optik (OD) dari suspensi bakteri ditentukan pada:λ.=
640 nm dan diatur menjadi 0,5/mL dalam medium cair. PPX dilarutkan
dalam medium cair dan disaring secara steril. Filter jarum suntik dengan
membran selulosa asetat 0,2 m digunakan. Medium cair berfungsi sebagai
kontrol yang tidak diberi perlakuan (UC), sedangkan gentamisin 100 g/mL
0,2 M (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) digunakan sebagai kontrol positif (PC).
Ekstrak diuji dalam kisaran konsentrasi dalam sumur dari 1 mg/mL hingga
31,25 g/mL. Sumur dengan ekstrak yang diuji mengandung 100 L suspensi
bakteri dan 100 L larutan ekstrak. Kemungkinan gangguan ekstrak dengan
parameter yang diukur dikeluarkan dengan menggabungkan kontrol
dengan ekstrak dalam konsentrasi yang sesuai yang dilarutkan dalam 200 L
medium cair tetapi tanpa penambahan suspensi bakteri. Plat diinkubasi
pada suhu 37◦C, dan proliferasi bakteri dipantau dengan mengukur OD640
setiap 60 menit selama 6 jam dan setelah 24 jam.
2.5.4. uji MTT
Bagian No 20-22 dari garis sel T24 digunakan untuk uji vitalitas
dengan penentuan aktivitas dehidrogenase mitokondria dengan uji
MTT (Mosmann, 1983). Pengujian dilakukan di 48 pelat sumur pada sel
dengan 90% pertemuan, kira-kira 48 jam setelah penyemaian 2,4×104
sel/sumur pada media budidaya. Selanjutnya, sel dicuci dengan DPBS
dan diinkubasi selama 1,5 jam dan 24 jam dengan PPX dalam rentang
konsentrasi 250 g/mL hingga 2 mg/mL, serta kontrol positif dan
negatif, 0,1% TritonX dalam DPBS dan media kultivasi, masing-masing.
Setelah inkubasi sel T24 dengan PPX, dan sebelum melanjutkan dengan
uji MTT, sel diamati di mikroskop cahaya Nikon Eclipse TS-100 (Nikon,
Tokyo, Jepang) di 20×pembesaran untuk mengevaluasi morfologi
mereka.
Bagian No. 31 digunakan untuk tes MTT pada garis sel Caco-2. Pengujian
dilakukan di piring 24 sumur, dan sel-sel diunggulkan dengan kepadatan 1×
105sel/sumur dalam media FBS 20%. Medium/larutan uji/larutan reagen/
DMSO dan volume pencucian adalah 1 mL per sumur. Setelah 24 jam media
diubah menjadi satu dengan 10% FBS dan sel-sel dibudidayakan selama 48
jam. Selanjutnya, sel dicuci dengan DPBS dan diinkubasi selama 24 jam
dengan PPX dalam konsentrasi berikut 5,0, 2,5, 1,0, dan 0,5 mg/mL, serta
kontrol positif dan negatif, masing-masing 0,1% TritonX dalam DPBS dan
media budidaya.
Setelah inkubasi dengan PPX, kedua jenis sel dicuci dengan DPBS,
dan ditambahkan reagen MTT 0,5 mg/mL dalam medium. Setelah 1 jam
inkubasi, campuran dibuang, sedangkan residu dilarutkan dalam
DMSO. Absorbansi diukur pada 560 nm (uji) dan 620 nm (referensi).
Semua pengujian dilakukan sebagai tiga eksperimen independen
dengann=6 ulangan per percobaan.
2.5.5. Uji adhesi aliran sitometrik
Pengujian yang memantau pengaruh PPX pada adhesi UPEC ke sel T24
didasarkan pada pelabelan FITC dan dilakukan sesuai dengan literatur
sebelumnya (Rafsanjany dkk., 2013). Pertama, bakteri yang ditumbuhkan
agar dipanen setelah 48 jam inkubasi dan disuspensikan dalam 1 mL larutan
garam steril (NaCl 150 mM, Na2BERSAMA3100 mM, pH 8.0). Kepadatan optik
suspensi bakteri diukur dalamλ.= 640 nm dan diatur menjadi 8,0/mL dalam
larutan garam steril. Semua prosedur yang dilakukan dengan larutan FITC
dan bakteri berlabel FITC dilakukan di bawah perlindungan cahaya. FITC
dilarutkan dalam DMSO untuk mendapatkan larutan 10 g/mL, ditambahkan
ke suspensi bakteri dalam proporsi
D.Popowski dkk.
1:9, dan diinkubasi selama 1 jam pada 37 ◦C dengan pengocokan suspensi. Setelah
inkubasi, suspensi disentrifugasi (10.000×G, 5 menit) dan dicuci 3 kali dengan PBS
untuk menghilangkan kelebihan FITC. Pelet disuspensikan kembali dalam DMEM
dan OD640disesuaikan dengan 4.0/mL untuk mendapatkan suspensi akhir bakteri.
Bagian No 74-76 digunakan untuk uji adhesi pada garis sel T24.
Pengujian dilakukan di 6 pelat sumur pada sel dengan konfluensi 90%,
kira-kira 48 jam setelah penyemaian 1,25×105sel/sumur pada media
budidaya. Selanjutnya, sel dicuci dua kali dengan DPBS dan sekali
dengan DMEM tanpa antibiotik. Semua pengujian dilakukan dengan
PPX dalam kisaran konsentrasi dari 2 mg/mL hingga 250 g/mL, serta
kontrol yang tidak diberi perlakuan (media budidaya).
Uji adhesi aliran sitometri dilakukan dalam tiga variasi. Pertama, 1,5
jam co-inkubasi sel T24, UPEC berlabel FITC, dan ekstrak dilakukan. Dua
variasi lainnya didasarkan pada inkubasi terpisah dari sel T24 atau
UPEC berlabel FITC dengan PPX selama 1,5 jam. Selanjutnya, ekstrak
dicuci dengan DPBS (menggunakan kondisi yang sama untuk suspensi
bakteri seperti di atas). Inkubasi 1,5 jam UPEC berlabel FITC
ditangguhkan dalam DMEM dengan sel T24 diikuti, memasangkan
UPEC yang dirawat PPX dengan sel T24 yang tidak diobati atau sel T24
yang dirawat PPX dengan UPEC yang tidak diobati. Rasio bakteri
terhadap sel adalah 100:1 di semua percobaan. Semua inkubasi UPEC
dengan sel T24 diakhiri dengan mengeluarkan suspensi bakteri dari
sumur dan dicuci dengan DPBS tiga kali untuk menghilangkan UPEC
yang tidak terikat pada sel T24. Kemudian,×G, 5 menit). Sel
disuspensikan kembali dalam 700 L DMEM untuk pengukuran
fluoresensi menggunakan flow cytometry. Untuk evaluasi data, 10.000
hitungan per sampel digunakan. Sampel diukur dengan dua kali
pengulangan teknis. Tiga percobaan independen dilakukan untuk
mendapatkan data. Data dihitung per intensitas fluoresensi relatif
menengah (median, M) dari setiap populasi sampel. Dengan demikian,
peningkatan nilai median menunjukkan jumlah bakteri berlabel FITC
yang lebih tinggi. Adhesi relatif dihitung dari median yang diperoleh
sebagai persen dari sampel yang diberi perlakuan dibandingkan
dengan kontrol yang tidak diberi perlakuan. Hasilnya diberikan sebagai
mean±SD.
2.5.6. Uji permeabilitas Caco-2
Untuk studi transportasi, bagian 33 digunakan. Untuk uji permeabilitas
Caco-2, sisipan kultur sel tembus diameter pori 0,4 m dan 6 pelat sumur
(permukaan monolayer sel efektif: 4,254 cm2; ThinCert, Greiner Bio One,
Kremsmünster, Austria) digunakan. Sel-sel diunggulkan di atas sisipan kultur
sel dengan kepadatan 1,5×105sel/cm2
dan ditransfer di dalam perangkat cellZscopeE (nanoAnalytics, Münster,
Jerman) pada perubahan media pertama. Volume medium dan larutan uji
adalah 2,7 mL pada sisi apikal dan 4,4 mL pada sisi basolateral. Sejak
perubahan media pertama, media FBS 10% telah digunakan. Sel dikultur
selama 21 hari. Pengukuran transepithelial electrical resistance (TEER)
dilakukan secara otomatis setiap jam. Nilai TEER dari semua sel monolayer
yang digunakan berada di atas 250 /cm2sebelum percobaan. Larutan PPX 1
mg/mL yang dilarutkan dalam HBSS digunakan sebagai larutan uji. 100 M
propranolol dalam HBSS digunakan sebagai penanda transportasi
transelular. Transportasi sisi apikal ke basolateral diperiksa dalam dua
pengulangan, dan arah yang berlawanan diperiksa dalam satu percobaan.
Pra-dipanaskan dihangatkan (37◦C) larutan uji dan penanda ditambahkan ke
donor dan HBSS ke sisi akseptor. 25 L sampel donor dan sisi akseptor
diambil setelah 1, 2, dan 3 jam inkubasi (37◦C) dan dianalisis menggunakan
UHPLC-DAD-MSn. Data diproses, dan senyawa secara otomatis ditetapkan ke
sinyal setelah dibandingkan dengan perpustakaan senyawa yang dibuat
berdasarkan analisis sampel PPX menggunakan perangkat lunak Compass
DataAnalysis 5.3 (Bruker Daltonik GmbH, Bremen, Jerman).
2.6. Analisis statistik
Hasilnya disajikan sebagai nilai rata-rata±SEM dari yang ditunjukkan
4
Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053
jumlah percobaan. ANOVA satu arah digunakan untuk menentukan
signifikansi statistik dari perbedaan antara mean, dan Dunnett'spasca hoc
tes digunakan untuk membandingkan hasil dengan kelompok kontrol.
3. Hasil
3.1. Komposisi fitokimia ekstrak menggunakan UHPLC-DAD-MSn
Berdasarkan analisis kromatografi senyawa hidroetanol Phaseolus
pericarpium ekstrak PPX (Tabel 1), konstituen utama ekstrak dapat
dibagi menjadi tiga kelompok senyawa: turunan asam fenolik, glikosida
flavonoid, dan saponin. Turunan asam fenolik pertama yang dielusi
adalah asam protocatechuicHAI-heksosida (1), yang diserap pada 295
nm dan memberikan ion pseudo-molekul [MH]- pada m/z 315 dan
terfragmentasi menjadi aglikon [M–C6H10HAI5-H]- , yang memberi sinyal di m/z
153. Diikuti oleh a P-turunan coumaroyl dari asam
tetrahidroksiheksanedioat (2). Itu memiliki karakteristik maksimal untukP
-turunan coumaroyl pada 312 nm, ion pseudo-molekul [MH]- pada m/z 355,
yang setelah kehilangan P-bagian kumaroil [M–C9H6HAI2-H]- memberikan
sinyal fragmen asam tetrahidroksiheksanedioat pada m/z 209. Fraksi fenolik
juga terdiri dari turunan asam caffeic yang tidak teridentifikasi (3, [MH]- pada
m/z 525, [M–C9H8HAI4-H]- pada m/z 345), yang memiliki bagian caffeoyl khas
UV/vis maxima pada 290 dan 320 nm. Fraksi flavonoid sebagian besar terdiri
dari berbagai turunan kuersetin dan kaempferol. Rutin (15), kuersetinHAI
-heksosida (16), danHAI-glukuronida (18, [MH]- pada m/z 477, [M-GlcA-H]-
pada m/z 301) diakui sebagai yang paling melimpah. Kandungan quercetin
yang lebih rendahHAI-pentopiranosildeoksiheksososilheksosida (10, [MH]-
pada m/z 741, [M-Pentosa-H]- pada m/z 609, [M-Pentosa-deoksiHex-H]- pada
m/z 463, [M-Pentosa-deoksiHex-Hex-H]- pada m/ z301) dan kaempferolHAI
-pentopyranosilhexosyldeoxyhexoside (14, [MH]- pada m/z 725, [M-Pentosa-
H]- pada m/z 593, [M-Pentosa-Hex-H]- pada m/z
431, [M-Pentosa-Hex-deoxyHex-H]- pada m/z 301), kuersetinHAI
-pentopiranosilheksosida (11, [MH]- pada m/z 595, [M-Pentosa-H]- pada m/z
463, [M-Pentosa-Hex-H]- pada m/z 301), kaempferolHAI-rutinosida (19) dan
HAI- glukuronida (21, [MH]- pada m/z 461, [M-GlcA-H]- pada m/z 285) juga
diamati dalam ekstrak. Namun, kelompok produk alami yang paling
melimpah dan paling banyak hadir dalam ekstrak adalah saponin. Di antara
mereka, jumlah yang paling signifikan terdeteksi untuk kelompok B
soyasaponin (Kamo et al., 2014). Puncak tertinggi diberikan pada
soyasaponin I (Bb) (38) dengan ion pseudo-molekul [MH]- pada m/z 941 dan
diidentifikasi berdasarkan ion fragmentaris: [M–H2OH]- pada m/z 923, [M–H2
O–CO2-H]- padam/z879, [M-Rha-H]- pada m/z 795,
[M–H2O–CO2-Rha-H]- pada m/z 733, [M–H2O–Rha-Gal-H]- pada m/z 615 dan
fragmen aglikon [Soyasapogenol B–H]- pada m/z 457. Kandungan soyasaponin Ba
yang lebih rendah (37) diamati, karena senyawa ini dielusi dengan cermat
sebelumnya 38 dan diidentifikasi oleh masing-masing ion pseudo-molekul [MH]-
pada m/z 957, [M-Glc-H]- pada m/z 795, [M-Glc-Gal-H]- pada m/z
633, dan mirip dengan 38, fragmen aglikon [Soyasapogenol B–H]- pada
m/z 457. Hasilnya sesuai dengan 36 dan37 Spektrum MS disediakan
oleh (Jin dkk., 2007). Senyawa berbasis soyasapogenol B lainnya yang
ada dalam ekstrak adalah turunan DDMP: soyasaponin g (47) dan g (49
). Mereka diidentifikasi berdasarkan adanya sinyal aglikon
[Soyasapogenol B + DDMP-H]- pada m/z 583. Soyasaponin kelompok E
diwakili oleh soyasaponin Be (45), yang memberikan sinyal ion pseudo-
molekul padam/z 939 dan diidentifikasi berdasarkan ion fragmentaris:
[M–H2OH]- pada m/z 921, [M–H2O–CO2-H]- pada m/z 877, [M–H2O–CO2
-Rha-H]- pada m/z 731, [M–H2O–Rha-Gal-H]- pada m/z 613 dan fragmen
aglikon [Soyasapogenol EH]- pada m/z 455. Kromatogram dalam MS-
digambarkan dengan puncak beranotasi (Gambar 1).
3.2. Pengaruh PPX pada proliferasi UPEC
Uji proliferasi dilakukan untuk mengevaluasi pengaruh potensial PPX
terhadap pertumbuhan UPEC NU14. Hasil yang diperoleh (Gambar 2.)
menunjukkan bahwa ekstrak (31-1000 g/mL) tidak mempengaruhi proliferasi
bakteri setelah 24 jam waktu inkubasi. Setelah 24 jam, secara statistik
D.Popowski dkk. Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053

Tabel 1
UHPLC-MSnanalisis hidroalkohol Pericarpium Phaseoli ekstrak PPX. Data MS diperoleh dalam mode ionisasi negatif – ion pseudo-molekul [MH]- dan ion fragmentaris (MS2
dan MS3), referensi ke senyawa yang diidentifikasi sementara. b – sinyal dasar; huruf tebal – ion induk untuk MS3.pseudo-molekul.

Puncak RT Menggabungkan Spektrum [M- NONA2[m/z] NONA3[m/z] Ref.

tidak. [menit] maks [nm] H]-

1 4.6 asam protocatechuic hexoside 199, 250, 315 297, 225, 163,153 153
295, 320
2 7.4 P-turunan coumaroyl dari 204, 312 355 337,209, 191b 209b Francioso dkk.
turunan asam caffeic asam (2019)
3 10.5 tetrahidroksiheksana-dioat 286, 320 525 481, 345b, 257, 161
4 10.7 turunan asam caffeic 211, 268, 443 425, 384, 335, 281, 237, 143
315sh
5 12.6 turunan asam caffeic asam dikarboksilat 210, 286 363 319, 275, 257
6 14.0 yang tidak teridentifikasi 191, 220, 239 145
277, 314
7 17.6 senyawa tak dikenal 216, 260 563 501, 461, 419b
8 21.0 senyawa tak dikenal 219, 309 563 545b, 517, 503, 445, 387, 321, 175
9 27.9 senyawa tak dikenal 219, 278 245 203
10 29.8 kuersetin-3-HAI- 218, 265, 350 741 723,609, 591, 475, 343, 301b, 271 463, 343b, 301, Harga dkk. (1998)
xylosylrhamnoglucoside 255, 179
11 31.4 kuersetin 3-HAI-xylosylglucoside 220, 265, 350 595 463, 445, 299b, 271, 179 343, 301b, 179 Lin dkk. (2008)
12 33.7 senyawa tak dikenal 216, 271, 325 467 365, 323b, 305
13 34.0 senyawa tak dikenal 270, 335 575 529, 367, 179
14 34.6 kaempferol 3-HAI- 265, 338 725 593, 459, 285b 327b, 285, 229 Harga dkk. (1998)
xylosylrhamnosyl-glucoside
15 35.0 rutin 216, 256, 352 609 301 Harga dkk. (1998)
16 35.8 kuersetin 3-HAI-glukosida 220, 265, 350 463 301 271, 255, 211, Harga dkk. (1998)
179b, 151, 107
17 36.6 senyawa tak dikenal 288 573 527, 365
18 36.9 kuersetin 3-HAI-glukuronida 216, 254, 477 301 273.179b, 151, Harga dkk. (1998)
300, 352 107
19 40.2 kaempferol 3-HAI-rutinoside 221, 265, 341 593 285 Harga dkk. (1998)
20 40.5 quercetin mallonylhexoside 220, 264, 345 549 505 463, 301, 179
21 42.0 kaempferol 3-HAI-glukuronida 221, 266, 332 461 285 157b, 197, 163 Harga dkk. (1998)
22 45.3 flavonoid yang tidak teridentifikasi 221, 269, 341 475 299b, 175 284b
23 48.0 senyawa tak dikenal 266 (sh), 306 673 355
24 48.9 flavonoid tidak terdefinisi 288, 335 590 567
25 51.4 flavonoid tidak terdefinisi 221, 285, 339 509 465, 403, 329b, 267, 241, 223
26 59.1 saponin tak dikenal 221 1265
27 61.2 saponin tak dikenal 221 1249
28 62.8 faseosida I 221 1251 1233, 1189, 1089, 1029, 909, 891b, 867, 819, 733, Kinjo dkk. (1998)
657, 569, 473, 383
29 63.8 saponin tak dikenal 221, 343 1235 1217b, 1173, 1027, 865
30 66.7 saponin tak dikenal 221, 277 1259
31 67.1 asam lemak bebas yang tidak teridentifikasi 221 327 309, 291b, 251, 211195, 183 195b
32 68.3 saponin tak dikenal 221 957 941.895.793.749.689.607.541.473.357
33 69,4 saponin tak dikenal 222 973 953, 909b, 825, 763, 645, 601, 555, 469, 403
34 71.1 saponin tak dikenal 222 955 937, 893, 747, 629, 539, 471
35 76.1 saponin tak dikenal 223 953 935, 892, 807, 745, 627, 609, 565, 537b, 469
36 76,5 saponin tak dikenal 223 1021 947, 795, 695, 633, 537, 519, 479, 405, 301
37 76.4 soyasaponin V (Ba) 223 957 941,795, 597, 525b, 455 633, 437 (Jin dkk., 2007;
Kinjo et al., 1998) (
38 76.7 soyasaponin I (Bb) 223 941 923b, 879.795, 733, 615, 525, 457, 359 Jin dkk., 2007;
Kinjo et al., 1998)
39 77.5 saponin tak dikenal 223 1027 984
40 77.9 saponin tak dikenal 223, 275 875 919, 875, 729, 593, 521b, 451, 367
41 78.1 saponin tak dikenal 223 925 907, 863, 779, 717, 581, 509b, 439
42 78.3 soyasaponin III (Bb') 223 795 778, 615b, 525, 457, 409, 356, 301 Shiraiwa dkk.
(1991)
43 79.1 saponin tak dikenal 223 1011 995, 967, 951, 867, 803, 685b, 595, 525, 421
44 79.2 asam lemak bebas yang tidak teridentifikasi 223 311 293, 275, 223, 171
45 79.5 soyasaponin 223 939 921, 877, 731, 613b, 523, 455, 391, 307 Bianco dkk.
(2018)
46 80.2 saponin tak dikenal 223 779 599, 527, 509b, 439, 337
47 80.3 soyasaponin g 223 1083 1065, 983, 921, 896, 723, 651b, 564 Bianco dkk.
(2018)
48 81.0 saponin tak dikenal 223 923 905, 861, 715, 579, 507b, 437
49 81.2 soyasaponin g 223 1067 1049, 1005, 969, 921, 879, 741, 679, 651b, 583, Bianco dkk.
437, 377 (2018)
50 87.7 senyawa tak dikenal 280, 339 301 283, 219b, 205
51 89.6 senyawa tak dikenal 223, 285, 343 625 558, 301b

terjadi peningkatan yang signifikan dari tingkat proliferasi UPEC di semua
kelompok yang diobati PPX, yang mungkin dijelaskan dengan adanya
konstituen nilai gizi dalam ekstrak. Serupa, tetapi kurang menonjol, efek
tersebut telah dilaporkan sebelumnya untuk ekstrak air dari akar restharrow
(Deipenbrock dkk., 2020).
3.3. Pengaruh PPX pada viabilitas viabilitas T24
Pengaruh PPX pada viabilitas sel kandung kemih T24 setelah 1,5 jam dan 24
jam dievaluasi dengan uji MTT (Mosmann, 1983). Untuk data yang diperoleh
setelah 1,5 jam dalam uji MTT, tidak ada efek sitotoksik dari ekstrak

5
D.Popowski dkk. Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053

Gambar 1. UHPLC-MSnanalisis hidroalkohol Pericarpium Phaseoli ekstrak PPX. Kromatogram puncak dasar telah direkam dalam mode ionisasi negatif. Puncak diberi label
dengan nomor majemuk masing-masing sesuai dengan data yang ditampilkan diTabel 1.

Gambar 2. Pengaruh PPX pada proliferasi uropathogenic E. coliregangan NU14 selama 24 jam, diwakili oleh kerapatan optik (OD λ.= 640 nm) dari suspensi bakteri.
Gentamycin (0,2 M) digunakan sebagai kontrol positif. Data didasarkan pada tiga eksperimen independen dengann=6 ulangan teknis. Hasil dinyatakan sebagai mean±
SEM.

diamati (Gambar 3). Selain itu, efek ekstrak setelah 24 jam juga
dievaluasi. Eksperimen MTT menunjukkan bahwa PPX setelah 24 jam
menyebabkan sedikit penurunan viabilitas sel T24. Namun, tidak ada
korelasi tergantung konsentrasi yang signifikan yang diamati (Supple-
bahan pemikiran, Gambar S1), dan dengan demikian, penurunan dapat
dihubungkan dengan kekurangan akurasi dan presisi dari metode yang
dipilih. Selain itu, pengamatan morfologi sel setelah 1,5 jam dan 24 jam
inkubasi PPX dengan sel tidak menunjukkan adanya perubahan
morfologi sel.
3.4. Pengaruh PPX dari adhesi bakteri UPEC NU14 ke sel kandung
kemih T24
Pengaruh PPX pada adhesi UPEC berlabel FITC ke sel kandung kemih T24
manusia dipantau setelah 1,5 jam inkubasi dalam tiga protokol inkubasi
yang berbeda seperti yang dijelaskan dalam 2.5.5. Penurunan yang
signifikan dari adhesi bakteri ke sel inang diamati selama
co-inkubasi UPEC dengan sel inang T24 (Gambar 4) serta selama
pra-inkubasi T24 dengan PPX, diikuti dengan penambahan UPEC berikutnya
(Gambar 5). Efek antiperekat yang diamati ternyata bergantung pada
konsentrasi. Tes dengan pra-inkubasi UPEC dengan PPX tidak menunjukkan
pengaruh apapun pada adhesi bakteri (data tidak ditampilkan).
Dengan demikian, c disimpulkan bahwa efek antiadhesive PPX disebabkan oleh pengaruh
spesifik saya ekstrak pada sel inang. Hasil yang diperoleh menunjukkan bahwa PPX
uji ind memiliki aktivitas antiperekat yang lebih rendah terhadap sel kandung
adhesi kemih UPEC ke T24 dibandingkan dengan ekstrak lain yang dijelaskan
baru-baru ini saya dalam sistem pengujian yang sama dan yang telah diakui memiliki
sangat tinggi aktivitas antiperekat seperti misalnya ekstrak hidroalkohol dari nosa
spi akar (Deipenbrock dkk., 2020), Agropyron membalas L. akar hai dkk.,
(Beydokt 2017), berangkat dari Orthosiphon stamineus, Betula sp., sebuah sp. (
danUrtikus Rafsanjany dkk., 2013).
3.5. keledai ssment permeabilitas konstituen PPX menggunakan Caco-2 rs
monolay
p data yang dibenci menunjukkan hasil percobaan PPX mentah di HBSS

6
D.Popowski dkk. Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053

Gambar 3.Viabilitas sel T24 dalam uji MTT setelah 1,5 jam inkubasi dengan PPX (0,25-2 mg/mL). UTC - kontrol yang tidak diobati, Triton - kontrol positif, DMSO 5% - kontrol
positif. **** -p <0,001, ** -p <0,01 versus UTC. Data telah diperoleh dalam tiga percobaan independen dengann=6 ulangan. Hasilnya dinyatakan sebagai mean±SEM.

Gambar 4.Adhesi UPEC ke sel T24 (protokol inkubasi bersama) setelah 1,5 jam inkubasi dengan PPX (0,25-2 mg/mL). UTC - kontrol yang tidak diobati, **** -p <0,0001, *** -
P <0,001, * -p <0,05 versus UTC. Data telah diperoleh dalam tiga percobaan independen dengan dua pengulangan teknis. Hasilnya dinyatakan sebagai mean ±SEM.

Gambar 5.Adhesi UPEC ke sel T24 (protokol pra-inkubasi T24) setelah 1,5 jam inkubasi dengan p < PPX (0,25–2 mg/mL). UTC - kontrol yang tidak diobati, **** -p <0,0001, ** - nts
0,01, * -p <0,05 versus UTC. Data telah diperoleh dalam tiga percobaan independen ±SEM. dengan dua pengulangan teknis. Hasilnya dinyatakan sebagai mean

diterapkan di sisi donor, tanpa fraksinasi atau isolasi senyawa murni. Larutan uji
adalah 1 mg/mL berdasarkan uji MTT (Gambar 6). Nilai TEER dipantau secara
online menggunakan perangkat cellZscopeE untuk memastikan integritas lapisan
tunggal yang digunakan dalam percobaan. Nilai TEER adalah ca. 300 /cm2dalam
semua percobaan. Untuk membuat data mentah
diperoleh dari analisis UHPLC-MS lebih mudah dibaca, sinyal MS
dan kromatogram dikurangi dengan hasil analisis sampel blanko.
(HBSS) dan Setelah itu, alat finder digunakan untuk menetapkan puncak
data ke kromatografi MS, dan hasilnya secara otomatis d dengan
membandingkan perpustakaan yang berisi senyawa secara tentatif

7
D.Popowski dkk. Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053

Gambar 6.Viabilitas sel Caco-2 dengan uji MTT setelah 24 jam inkubasi dengan PPX (0,5 hingga 5 mg/mL). UTC - kontrol yang tidak diobati; TritonX - kontrol positif; **** -p
< 0,001 versus UTC. Data telah diperoleh dalam tiga percobaan independen dengann=6 ulangan. Hasilnya dinyatakan sebagai mean±SEM.

diidentifikasi setelah analisis ekstrak mentah. Mengingat transportasi sisi 4. Diskusi

apikal ke basolateral (A ke B), hanya rutin (15) diidentifikasi di sisi akseptor
setelah 1 jam inkubasi. Pada sampel yang diambil setelah 2 dan 3 jam
inkubasi senyawa yang paling melimpah pada PPX mentah adalah saponin (
26, 35, 38, 45) dan asam lemak (31) juga hadir dalam larutan sisi basolateral (
Gambar 7). Dalam kasus pengangkutan produk alami yang ada di PPX dalam
arah yang berlawanan (B ke A), percobaan menunjukkan bahwa tidak ada
senyawa yang ada di media di sisi apikal setelah 1 jam. Setelah 2 jam
inkubasi, sinyal kecil dari35terdeteksi, dan setelah satu jam lagi
konsentrasinya di sisi akseptor naik. Selain itu, dalam sampel yang diambil
setelah 3 jam adanya flavonoid: rutin (15), kaempferol 3-HAI-rutinosida (19),
dan24dikonfirmasi, serta asam lemak bebas yang tidak teridentifikasi (31)
dan sinyal yang lebih rendah dari saponin I (Bb,38) (Gambar 8).
Evaluasi komposisi kimia ekstrak olahan menggunakan UHPLC-
DAD-MSnanalisis mengungkapkan adanya 51 senyawa utama.
Beberapa produk alami, terutama flavonoid (10, 11, 14–16, 18, 19dan21
), dilaporkan sebelumnya (Lin et al., 2008;Harga dkk., 1998). Selama
analisis, beberapa flavonoid lain terdeteksi (20, 22, 24–27).
Menggabungkan20awalnya diidentifikasi sebagai quercetin
malonylhexoside. Ini adalah laporan pertama tentang senyawa khusus
ini dalam polong kacang biasa. Terlepas dari flavonoid, turunan asam
fenolik diidentifikasi dalam sampel yang dianalisis (1–6dan12). Adanya
asam fenolat dalamPericarpium Phaseoli sebelumnya dilaporkan oleh
(Łabuda et al., 2017) tetapi tidak dilakukan analisis mendalam yang
mengarah pada karakterisasi senyawa yang terjadi. Kelompok besar
ketiga senyawa yang terdeteksi dalam penelitian ini adalah saponin
triterpen. senyawa26–30, 32–43dan45–49termasuk dalam kelompok
fitokimia ini berdasarkan data yang diperoleh. Adanya senyawa28,

Gambar 7.Eksperimen transpor PPX searah dari apikal (sisi donor) ke kromatogram basola dalam sisi teral (sisi akseptor) (A ke B). Hasil yang dinyatakan sebagai puncak
mode negatif (BPC (− )) sampel campuran sisi donor yang diambil sebelum inkubasi t. Semua hasil dasar percobaan (0 jam) dan sisi akseptor setelah 1, 2, dan 3 jam
dikurangi dengan analisis sampel kosong. Teks di atasTabel 1. puncak menunjukkan nomor majemuk dan identifikasi tentatif sebagai

8
D.Popowski dkk.
Gambar 8.Eksperimen transpor PPX searah dari basolateral (sisi donor) ke sisi apikal (sisi akseptor) (B ke A). Hasil dinyatakan sebagai kromatogram puncak basa dalam
mode negatif (BPC (− )) dari sampel campuran sisi donor yang diambil sebelum percobaan (0 jam) dan sisi akseptor setelah 1, 2, dan 3 jam inkubasi. Semua hasil dikurangi
dengan analisis sampel kosong. Keterangan di atas puncak menunjukkan nomor majemuk dan identifikasi sementara seperti diTabel 1.
37, 38, 45, 47dan49sebelumnya dikonfirmasi di berbagai bagian kacang
biasa (Bianco dkk., 2018;Jin dkk., 2007;Kinjo et al., 1998).
Menggabungkan42sebelumnya terdeteksi pada kedelai tetapi tidak
pada kacang biasa (Shiraiwa dkk., 1991). Penelitian saat ini tidak
mengkonfirmasi keberadaan phaseoloside D, yang sebelumnya
diisolasi dariPhaseolus vulgaris(Chirva et al., 1970). Analisis UHPLC-
DAD-MS tidak memungkinkan identifikasi penuh dari banyak senyawa
yang terdeteksi. Namun, metode kualitatif yang dikembangkan
menyediakan alat yang ampuh untuk analisis fitokimia kacang umum
di masa depan dan dapat dianggap sebagai pengantar untuk
standarisasi mendalam obat tanaman obat ini.
Uji permeabilitas menggunakan model Caco-2 mengungkapkan
bahwa beberapa senyawa, termasuk flavonoid dan saponin, mampu
melintasi lapisan tunggal sel dan dapat dideteksi dengan metode
UHPLC-DAS-MS. Mengingat angkutan rutin (15), hasilnya sesuai dengan
penyelidikan permeabilitas senyawa murni yang dilaporkan
sebelumnya (Rastogi dan Jana, 2016).
Sejauh pengetahuan kami, tidak ada penelitian yang dilakukan dengan
fokus pada transportasi usus dari saponin yang diselidiki menggunakan
model sel. Hasil penelitian menunjukkan kemungkinan perbedaan rasio
penghabisan dalam fraksi saponin. Namun, itu harus dikonfirmasi dalam
percobaan permeabilitas senyawa yang diisolasi. Berdasarkan percobaan
yang telah dilakukan, dapat diketahui bahwa kandungan flavonoid dan
soyasaponin yang terkandung dalamPericarpium Phaseoli ekstrak dapat
diserap dari saluran pencernaan setelah asupan oral. Kedua kelompok
senyawa ini dapat dianggap sebagai konstituen bioavailable dan bioaktif
potensial. Namun, karena soyasaponin diketahui dimetabolisme oleh
mikrobiota usus menjadi bentuk aglikon – soyasapogenol (Kamo et al., 2014
), bentuk yang dimetabolisme harus diperhitungkan, yang dapat diuji
menggunakan campuran metabolit atau metabolit yang diisolasi setelah
inkubasi PPX dengan mikrobiota usus.ex vivodalam percobaan lebih lanjut.
Produk alami memiliki potensi yang tidak dapat disangkal untuk menawarkan
kemungkinan baru dan inovatif untuk mengatasi target molekuler baru selama
pencarian antiinfeksi baru, tidak hanya melawan bakteri yang menginfeksi tetapi
juga dengan mempengaruhi interaksi patogen-inang dengan berinteraksi dengan
struktur membran sel dari sel inang. Dengan demikian, penyelidikan rinci,
9
Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053
serta investigasi ulang bahan herbal yang terpinggirkan atau digunakan
secara tradisional dengan ilmu pengetahuan yang sampai saat ini belum
cukup rasional, dapat menjadi alat yang menjanjikan untuk identifikasi
target molekuler baru dan produk alami yang menjanjikan. Namun, untuk
menilai asal usul efek menguntungkan ini, dan untuk membenarkan dan
mendukung masing-masing bahan herbal pilihan tradisional, sangat penting
untuk secara akurat mengkarakterisasi komposisi kimia dari ekstrak
tumbuhan tertentu, untuk menyelidiki potensi bioavailabilitas senyawa
penanda yang khas dan relevan dari ini. ekstrak dan untuk menyelidikiin
vitro bioaktivitas. Dalam penyelidikan produk alami dengan potensi anti-ISK,
diuretik, anti-inflamasi, antimikroba, antiadhesive dan Tamm-Horsfall
merangsang dari aktivitas ginjal telah ditunjuk sebagai efek potensial yang
mendasari untuk menjelaskan aktivitas klinis. Obat diuretik meningkatkan
volume urin, yang mungkin bermanfaat karena permukaan yang terinfeksi
dibilas untuk menghilangkan sebagian patogen infeksius dari sistem saluran
kemih (Shih-Bin dkk., 2006). Tindakan anti-inflamasi mengurangi kerusakan
jaringan yang disebabkan imunologis pada uroepithelium. Agen
antimikroba dan antiadhesive mengurangi proliferasi bakteri dan kolonisasi
permukaan epitel saluran kemih. Aktivitas antiadhesif fitokimia mungkin
berhubungan dengan interaksi dengan protein membran luar bakteri
(seperti dalam kasusAgropyron membalas TanahZea maysekstrak L.; IC25630
g/mL, resp. IC50 1040 g/mL), serta dengan mempengaruhi epitel kandung
kemih (seperti yang diamati untuk ekstrak dariBetula sp.,Orthosiphon
stamineusBENTH. danUrtikasp.; IC50 415, 1330 g/mL, resp IC25580 g/mL) (
Rafsanjany dkk, 2013, 2015a). Aktivitas antiadhesive ekstrak dariO. stamina
dinilai karena downregulasi jalur pendamping-pengantar dan perakitan
fimbrial (Beydokhti dkk., 2019). Sampel urin manusia dikumpulkan setelah 7
hari asupan hidroetanolVaccinium macrocarponekstrak menyebabkan
hilangnya 49% adhesi UPEC ke sel T24 dibandingkan dengan sampel kontrol
(Rafsanjany dkk., 2015b). Telah dilaporkan bahwa target utama ekstrak
cranberry di satu sisi adalah induksi protein Tamm-Horsfall di ginjal (Scharf
dkk., 2019) dan di sisi lain interaksi senyawa ekstrak (terutama flavonoid)
dengan domain pengikat mannose tipe 1 fimbrial adhesi FimH dari UPEC (
Scharf dkk., 2020). Ekstrak dariApium graveloensmemiliki signifikan
D.Popowski dkk.
aktivitas penghambatan terhadap strain UPEC NU14 dan UTI89 adhesi
ke sel T24 pada 500 g/mL dan asupan pretreatment ekstrak ini
mengurangi beban bakteri di kandung kemih setelah inokulasi
transurethral suspensi UPEC pada tikusin vivo(Sarshar et al., 2018).
Data yang diperoleh menunjukkan potensi anti-perekat dari bahan
tanaman yang dievaluasi. Bioaktivitas dikaitkan dengan penghambatan
adhesi UPEC ke sel kandung kemih manusia daripada dengan pengaruh
langsung pada proliferasi UPEC viabilitas T24. Mekanisme molekuler dari
aktivitas yang dilaporkan belum dapat dijelaskan. Namun, bioaktivitas yang
diamati agak lemah dibandingkan dengan data yang dilaporkan sebelumnya
(lihat di atas). Ekstrak menunjukkan aktivitas sedang dengan IC50 > 2 mg/mL,
yang harus dianggap sebagai nilai yang tinggi. Namun, tidak menutup
kemungkinan bahwa konsumsi ekstrak kacang polong secara teratur dapat
menyebabkan akumulasi produk alami dalam urin yang diekskresikan pada
tingkat yang dapat menunjukkan bioaktivitas terhadapE. coliinfeksi. Aspek
ini harus diverifikasi lebih lanjutin vivostudi.
5. Kesimpulan
Hasil analisis kromatografi menunjukkan bahwa penyusun utama
Pericarpium Phaseoli ekstrak hidroetanol adalah triterpen saponin,
flavonoid, dan turunan asam fenolat. Ekstrak menunjukkan aktivitas
antiadhesive tergantung konsentrasi yang signifikan secara statistik
terhadap UPEC. Berdasarkan perbandingan hasil percobaan pra dan
coincubation, dapat disimpulkan bahwa aktivitas antiadhesive ekstrak
berhubungan dengan pengaruh pada sel epitel. Beberapa
soyasaponin, diidentifikasi dalam ekstrak, serta rutin dan asam lemak
bebas, mampu melintasi monolayer sel Caco-2. Eksperimen
berlawanan arah menunjukkan kemungkinan perbedaan dalam laju
transpor penghabisan di antara kelompok-kelompok senyawa yang ada
dalam ekstrak. Hasil penelitian menunjukkan bahwa flavonoid dan
saponin merupakan konstituen ekstrak yang paling melimpah dan
mampu melewati sawar usus, dan akhirnya,El-Hawiet et al., 2010;
Jaiswal dkk., 2019). Namun, karena asupan oral ekstrak, kemungkinan
biotransformasi produk alami di saluran pencernaan dan aktivitas
antiadhesive metabolit yang dihasilkan dengan cara ini harus dievaluasi
dalam penyelidikan lebih lanjut.
ucapan terima kasih
Proyek ini didukung secara finansial oleh hibah penelitian Pusat
Sains Nasional Polandia, OPUS 15 No. 2018/29/B/NZ7/01873. Proyek ini
dilakukan dengan menggunakan infrastruktur CePT yang dibiayai oleh
Dana Pembangunan Regional Eropa dalam Program Operasional
“ekonomi inovatif” untuk 2007–2013. Magang ilmiah Karolina Anna Paw
ł.owska di Universitas Munster sebagian didukung oleh inisiatif
Erasmus +. Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada Bapak
Dominik Grą.ka atas bantuannya dalam persiapan ekstrak dan analisis
UHPLC awal.
Lampiran A. Data tambahan
Data tambahan untuk artikel ini dapat ditemukan online di https://doi.
org/10.1016/j.jep.2021.114053.
Kontribusi penulis
Dominik PopowskiInvestigasi, Visualisasi, Penulisan - Review &
Editing Karolina A. Pawł.owska: Investigasi, Visualisasi, Penulisan -
Review & Editing Aleksandra Kruko Investigasi, Visualisasi Melanie
Deipenbrock Penyelidikan Jakub P. Piwowarski Konseptualisasi,
Metodologi, Sumber Daya, Penulisan - Review & Editing Andreas
Hensel Metodologi, Koreksi Naskah, Sumber Daya, Konseptualisasi
Matthias F. Melzig Metodologi, Sumberdaya Sebastian Granika:
Konseptualisasi, Metodologi, Sumber Daya, Penulisan -
10
Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053
Tinjauan & Pengeditan, Administrasi proyek
Referensi
Bahadori, M., Motamedifar, M., Derakhshandeh, A., Firouzi, R., Motamedi Boroojeni, A.,
Alinejad, M., Naziri, Z., 2019. Keterkaitan genetik dariEscherichia coli populasi feses dan
strain yang menyebabkan infeksi saluran kemih pada pejamu yang sama. Mikrobiol. 8, 1–8.
https://doi.org/10.1002/mbo3.759.
Beydokhti, SS, Bangau, C., Dobrindt, U., Hensel, A., 2019.Orthosipon staminaekstrak
memberikan penghambatan adhesi bakteri dan sistem pendamping-usher uropathogenic
Escherichia coli —sebuah studi transkriptomik. aplikasi Mikrobiol. Bioteknologi. 103, 8571–
8584.https://doi.org/10.1007/s00253-019-10120-w.
Beydokthi, SS, Sendker, J., Brandt, S., Hensel, A., 2017. Obat tradisional yang digunakan
tanaman melawan infeksi saluran kemih tanpa komplikasi: ester asam kumarat heksadesil
dari rimpangAgropyron membalas (L.) P. Beauv. dengan aktivitas antiadhesive terhadap
uropathogenicE. coli. Fitoterapia 117, 22-27.https://doi.org/10.1016/j. fitote.2016.12.010.
Bianco, G., Pascale, R., Carbone, CF, Acquavia, MA, Cataldi, TRI, Schmitt-
Kopplin, P., Buchicchio, A., Russo, D., Milella, L., 2018. Penentuan kedelaisaponin
dalam kacang Fagioli di Sarconi (Phaseolus vulgarisL.) oleh LC-ESI-FTICR-MS dan
evaluasi aktivitas hipoglikemiknya. anal Bioanal. Kimia 410, 1561–1569.https://
doi.org/10.1007/s00216-017-0806-8.
Deipenbrock, M., Sendker, J., Hensel, A., 2020. Ekstrak akar berair dari Ononis spinosa
memberikan aktivitas anti-perekat terhadap uropatogenik Escherichia coli. Planta Med. 86,
247–254.https://doi.org/10.1055/a-1089-8645.
Dodoens, R., 1608. Herbarius sering merusak van Rembertus dodonaeus. Plantijn –
Moretus.
El-Hawiet, AM, Toaima, SM, Asaad, AM, Radwan, MM, El-Sebakhy, NA, 2010.
Konstituen kimia dari Astragalus annularisforssk. DanA. trimestrisL.,fabaceae. Brazil.
J. Farmakognisi. 20, 860–865.https://doi.org/10.1590/S0102- 695X2010005000047.
Asosiasi Urologi Eropa, 2020. Pedoman EAU 2020 tentang Infeksi Urologi,
Pedoman EU. Arnhem, Belanda. Edn. dipresentasikan pada Kongres Tahunan
EAU Amsterdam Belanda 2020.
Badan Obat Eropa, 2013. Laporan Penilaian Phaseolus vulgaris L., Fructus
Sinus Semina. EMA/HMPC/317317/2012.
Flores-Mireles, AL, Walker, JN, Caparon, M., Hultgren, SJ, 2015. Saluran kemih
infeksi: epidemiologi, mekanisme infeksi dan pilihan pengobatan. Nat. Pdt.
Mikrobiol. 13, 269–284.https://doi.org/10.1038/nrmicro3432.
Foxman, B., 2010. Epidemiologi infeksi saluran kemih. Nat. Pdt. 7,
653–660.https://doi.org/10.1038/nrurol.2010.190.
Foxman, B., Buxton, M., 2013. Pendekatan alternatif untuk pengobatan konvensional akut
infeksi saluran kemih tanpa komplikasi pada wanita. Curr. Menulari. Dis. Rep.15, 124–129.
https://doi.org/10.1007/s11908-013-0317-5.
Foxman, B., Gillespie, B., Koopman, J., Zhang, L., Palin, K., Tallman, P., Marsh, JV,
Spear, S., Sobel, JD, Marty, MJ, Marrs, CF, 2000. Faktor risiko infeksi saluran kemih
kedua di antara wanita perguruan tinggi. Saya. J. Epidemi. 151, 1194–1205.https://
doi.org/10.1093/oxfordjournals.aje.a010170.
Francioso, A., Franke, K., Villani, C., Mosca, L., D'Erme, M., Frischbutter, S., Brandt, W.,
Sanchez-Lamar, A., Wessjohann, L., 2019. Wawasan tentang fitokimia tanaman obat
endemik KubaPhyllanthus orbicularis: fideloside, sebuah bioaktif baru 8-C-glikosil
2,3-dihydroflavonol. Molekul 24, 1-9.https://doi.org/10.3390/molekul24152855.
Helmstädter, A., 2010. Kacang-kacangan dan diabetes:Phaseolus vulgarispersiapan sebagai
agen antihiperglikemik. J. Med. Makanan 13, 251–254.https://doi.org/10.1089/
jmf.2009.0002.
Jaiswal, SK, Sharma, NK, Bharti, SK, Krishnan, S., Kumar, Amit, Prakash, O.,
Kumar, P., Kumar, Awanish, Gupta, AK, 2019. Fitokimia sebagai uropatognik
Escherichia coli Antagonis FimH: pendekatan in vitro dan in silico. Curr. mol. Med.
18, 640–653.https://doi.org/10.2174/1566524019666190104104507.
Jin, M., Yang, Y., Su, B., Ren, Q., 2007. Penentuan Soyasaponin Ba dan Bb pada
serum manusia dengan kromatografi cair kinerja tinggi yang digabungkan dengan
spektrometri massa tandem ionisasi elektrospray. J. Kromatografi. B. Anal. teknologi. Bioma.
Ilmu Kehidupan 846, 169–175.https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2006.08.043. Johnson, JR,
Weissman, SJ, Stell, AL, Trintchina, E., Dykhuizen, DE, Sokurenko, E.
V., 2001. Analisis klonal dan patotipik dari pola dasarEscherichia coli sistitis mengisolasi
NU14. J. Menginfeksi. Dis. 184, 1556–1565.https://doi.org/10.1086/323891. Kamo, S., Suzuki,
S., Sato, T., 2014. Perbandingan bioavailabilitas (I) antara
soyasaponin dan soyasapogenol, dan (II) antara kelompok A dan B soyasaponin.
Nutrisi 30, 596–601.https://doi.org/10.1016/j.nut.2013.10.017.
Kinjo, J., Hatakeyama, M., Udayama, M., Tsutanaga, Y., Yamashita, M., Nohara, T.,
Yoshiki, Y., Okubo, K., 1998. Analisis profil HPLC oleanene-glucuronides dalam beberapa kacang
yang dapat dimakan. Biosci. Bioteknologi. Biokimia.https://doi.org/10.1271/ bbb.62.429.
Länger, R., 2017. Laporan Penilaian tentangDiuretik spesies44.
Lin, LZ, Harnly, JM, Pastor-Corrales, MS, Luthria, DL, 2008. Polifenol
profil kacang umum (Phaseolus vulgarisL.). Kimia Makanan. 107, 399–410.https://
doi.org/10.1016/j.foodchem.2007.08.038.
Mazzariol, A., Bazaj, A., Cornaglia, G., 2017. Gram-negatif yang resistan terhadap banyak obat
bakteri penyebab infeksi saluran kemih: review. J. Ibu. 29, 2–9.https://doi.org/
10.1080/1120009X.2017.1380395.
Messina, V., 2014. Manfaat nutrisi dan kesehatan kacang kering.: layanan penemuan untuk
usaha perpustakaan perguruan tinggi kesehatan alam. Saya. J.klin. nutrisi 100, 437.https://
doi. org/10.3945/ajcn.113.071472.2.
D.Popowski dkk.
Mojaz-Dalfardi, N., Kalantar-Neyestanaki, D., Hashemizadeh, Z., Mansouri, S., 2020.
Perbandingan gen virulensi dan kelompok filogenetik dariEscherichia coli diisolasi
dari infeksi saluran kemih dan flora feses normal. Laporan Gen 20, 100709. https://
doi.org/10.1016/j.genrep.2020.100709.
Mosmann, T., 1983. Uji kolorimetri cepat untuk pertumbuhan dan kelangsungan hidup sel:
aplikasi untuk proliferasi dan tes sitotoksisitas. J. Imun. Metode 65, 55-63. https://
doi.org/10.1016/0022-1759(83)90303-4.
Nickel, JC, 2005. Manajemen infeksi saluran kemih: perspektif historis dan
strategi saat ini: Bagian 2 - manajemen modern. J.Urol. 173, 27-32.https://doi. org/
10.1097/01.ju.0000141497.46841.7a. Farmakope Polandia XI, 2017a. .
hal.4438-4439. Farmakope Polandia XI, 2017b. . hal.4452-4453.
Price, KR, Colquhoun, IJ, Barnes, KA, Rhodes, MJC, 1998. Komposisi dan isi
glikosida flavonol dalam kacang hijau dan nasibnya selama pemrosesan. J. Pertanian. Kimia
Makanan. 46, 4898–4903.https://doi.org/10.1021/jf980687v.
Rafsanjany, N., Lechtenberg, M., Petereit, F., Hensel, A., 2013. Antiadhesi sebagai
konsep fungsional untuk perlindungan terhadap uropathogenicEscherichia coli: studi in vitro
dengan tanaman yang digunakan secara tradisional dengan aktivitas antiadhesive terhadap
uropathognicEscherichia coli. J. Etnofarmaka. 145, 591–597.https://doi.org/ 10.1016/
j.jep.2012.11.035.
Rafsanjany, N., Sendker, J., Lechtenberg, M., Petereit, F., Scharf, B., Hensel, A., 2015a.
Tanaman obat yang digunakan secara tradisional melawan infeksi saluran kemih tanpa
komplikasi: tidak biasa, turunan flavan-4-ol- dan derhamnosylmaysin bertanggung jawab
atas aktivitas antiadhesif ekstrak yang diperoleh dari stigmata Zea mays L. terhadap
uropatogen. Fitoterapia 105, 246–253.https://doi.org/10.1016/j. fitote.2015.07.014.
Rafsanjany, N., Senker, J., Brandt, S., Dobrindt, U., Hensel, A., 2015b. in vivo
konsumsi cranberry memberikan aktivitas antiadhesive ex vivo terhadap uropatogenik yang
didominasi FimHEscherichia coli: gabungan studi in vivo, ex vivo, dan in vitro dari ekstrak
dariVaccinium macrocarpon. J. Pertanian. Kimia Makanan. 63, 8804–8818.https://doi.org/
10.1021/acs.jafc.5b03030.
11
Jurnal Etnofarmakologi 274 (2001) 114053
Rastogi, H., Jana, S., 2016. Evaluasi sifat fisikokimia dan usus
permeabilitas enam polifenol makanan dalam sel adenokarsinoma usus manusia
Caco-2 usus. eur. J. Metabolisme Obat. Farmakokinet. 41, 33–43.https://doi.org/
10.1007/s13318-014-0234-5.
Sarshar, S., Sendker, J., Qin, X., Goycoolea, FM, Karam, MRA, Habibi, M., Bouzari, S.,
Dobrindt, U., Hensel, A., 2018. Ekstrak hidroalkohol antiperekat dariApium graveolensbuah
mencegah infeksi kandung kemih dan ginjal terhadap uropathogenicE. coli. Fitoterapia 127,
237–244.
Scharf, B., Schmidt, TJ, Rabbani, S., Bangau, C., Dobrindt, U., Sendker, J., Ernst, B.,
Hensel, A., 2020. Produk alami antiperekat terhadap uropatogenikE. coli: apa yang
bisa kita pelajari dari ekstrak cranberry? J. Etnofarmaka. 257, 112889.https://doi. org/
10.1016/j.jep.2020.112889.
Scharf, B., Sendker, J., Dobrindt, U., Hensel, A., 2019. Pengaruh ekstrak cranberry pada
protein tamm-horsfall dalam urin manusia dan aktivitas antiadhesivenya terhadap
uropathogenic Escherichia coli. Planta Med. 85, 126-138.https://doi.org/10.1055/
a-0755-7801.
Shih-Bin, S., Jiang-Nan, W., Chih-Wei, L., How-Ran, G., 2006. Mengurangi saluran kemih
infeksi di antara pekerja kamar bersih wanita. J. KESEHATAN WANITA. 15, 870–
877. Shiraiwa, M., Harada, K., Okubo, K., 1991. Komposisi dan struktur “grup B
saponin” pada biji kedelai. pertanian. Biol. Kimia 55, 911–917.https://doi.org/10.1080/
00021369.1991.10870686.
Udani, J., Tan, O., Molina, J., 2018. Tinjauan sistematis dan meta-analisis kepemilikan
penghambat alfa-amilase dari kacang putih (Phaseolus vulgarisl.) pada penurunan berat badan dan
lemak pada manusia. Makanan 7, 1–10.https://doi.org/10.3390/foods7040063.
Van Hellemont, J., 1985. Kompendium Fytotherapeutisch. Farmasi Algemene
Menjalin kedekatan.
Siapa, 2014. Resistensi antimikroba: laporan kesehatan global tentang pengawasan. Banteng. Dunia
Organ Kesehatan. 1–256.https://doi.org/10.1007/s13312-014-0374-3.
Wichtl, M., 1994. Obat Herbal dan Farmasi. Lavoisier.