Diterjemahkan dari bahasa Galisia ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Penelitian Klinis

Isi tersedia di PubMed

www.clinicalandtranslationalinvestigation.com PERM SETIAP HARI

Rev Inves Clin. 2018; 70: 32-39 ASLI AR TIKEL

Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh direproduksi atau difotokopi tanpa izin tertulis sebelumnya dari penerbit. © Permanyer 2018
AKTIVITAS SITOKSIK KACANG HITAM (PHASEOLUS
VULGARIS L.) EKSTRAK DAN TS Saya
FRAKSI FLAVONOID DI KEDUA DALAM KACA
DAN HIDUP MODEL LIMPHOMA
Ulysses Aregueta-Robles1, Oscar R. Fajardo-Ramírez1, Luis Villala1.2*, Janet A. Gutiérrez-Urib José e3.4,
Hernández-Hernández1, Rosa del Carmen López-Sánchez1, Sean-Patrick Scott1 dan Sergio Serna-
Saldívar3

1Tecnológico de Monterrey, Escuela de Medicina dan Ciencias de la Salud, Monterrey, NL; 2Institut Keamanan dan
Layanan Sosial untuk Pekerja Negara Bagian Sonora (ISSSTESON), Pusat Medis Dr. Ignacio Chavez, Putranya .;3 mosilo,
Tecnológico de Monterrey, Centro de Biotecnologia-FEMSA, Monterrey, NL; 4Tecnológico de Monterrey, Pu Puebla, eblsebuah,
Meksiko

ABSTRAK

Latar belakang: Kacang hitam (Phaseolus vulgaris L.) adalah biji kacang-kacangan yang sangat umum dalam makanan Meksiko. mantan traktat
Flavonoid dan minyak mentah dari tanaman yang berbeda telah dilaporkan sebagai agen yang efektif untuk kemoprevensi dan saya garis S. Kami

sitotoksisitas pada beberapa sel kanker yang meneliti efek ekstrak kulit kacang hitam (BBE) dan fraksi flavonoidnya (FF) pada sel JADILAH dan FF

limfoma.Metode: B dicirikan dengan kromatografi cair kinerja tinggi. Uji viabilitas dan aliran sitometri dilakukan pada model tikus yang. Sirip sekutu, a
dihasilkan untuk mengujiin vivo pengaruh kedua pecahan. Hasil: Baik BBE dan FF menghambat proliferasi sel dengan cara yang gadis
perbandingan kecil

bergantung pada dosis. Selain itu, sel mengalami apoptosis, dan populasi seluler pada fase S meningkat setelah fraksi ini. Selanjutnya, posingin
tikus yang diobati dengan BBE atau FF meningkatkan kelangsungan hidup secara keseluruhan masing-masing 5 atau 6 hari, bersama mpmunculnya
dengan kelompok plasebo (p = 0,056).Diskusi: BBE dan FF memiliki aksi sitotoksik dengan mendorong sel OCI-Ly7 ke dalam apoptosis juga
sebagai

yang menghalangi perkembangan ke fase G2 / M. Selain itu, perawatan BBE dan FF efektif dalam model xenograft.

Kata kunci: Flavonoid. Ekstrak kacang hitam. Limfoma.Phaseolus vulgaris.

PENGANTAR dewasa, mewakili 30-40% dari semua kasus1. Saya anak laki-laki,

Pada limfoma adalah penyebab ketiga dan Deatipis

Limfoma sel B besar difus (DLBCL) adalah jenis limfoma keempat pria dan wanita dari produksi ekonomitive usia
non-Hodgkin (NHL) yang paling umum di (25-45 tahun), masing-masing2.

Penulis yang sesuai:

* Luis Villela
Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Monterrey, Teknologi
Gedung CITES, Lantai 3 kan Kedua penulis memberikan kontribusi yang sama.

Av. Orang bodoh Prieto No. 3000 Barat

Kol. Dokter Diterima untuk diterbitkan: 06-09-2017
CP 64710, Monterrey, NL, Meksiko Disetujui untuk diterbitkan: 12-06-2017
Email: Villela@itesm.mx doi: 10.24875 / RIC.17002395

32
 Ulises Aregueta-robles, dkk.: AKTIVITAS SITOKSIK EKSTRAK KACANG HITAM PADA SEL LIMPHOMA SM ODELS

Sehubungan dengan tingkat kelangsungan hidup (SR) untuk garis sel limfoma agresif. Selain itu, menyerap efek ee nilai

Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh direproduksi atau difotokopi tanpa izin tertulis sebelumnya dari penerbit. © Permanyer 2018
entitas ini, respons awal terhadap pengobatan adalah faktor apoptosis potensial merekain vitro sebagai sebagai dengan baik

kunci. Pasien dengan respons parsial atau refrakter kemampuan mereka untuk mengganggu siklus sel. dian, kami
terhadap siklofosfamid, hidroksidaunorubisin, vincristine T menguji efeknya pada model xenograft yang dancom-
(oncovin) dan prednison (CHOP) memiliki SR pendek dikupas dengan kontrol referensi plasebo dan (kita ed sebagai

(median: 10 bulan)3. Pada pasien yang menerima rejimen siklofosfamid) dengan pemberian oral.
pengobatan dengan rituximab antibodi monoklonal (R-
CHOP), SR meningkat sebesar 10%4. Oleh karena itu,
penelitian molekul terapeutik baru untuk meningkatkan BAHAN DAN METODE
respons awal dan, akibatnya, SR adalah wajib.
Persiapan BBE dan FF
Beberapa obat yang diperoleh dari sumber alami telah
ditambahkan ke skema kemoterapi DLBCL. Vincristine, BBE disiapkan seperti yang dijelaskan oleh tidak Uribe

sebuah molekul yang diisolasi dari tanaman endemik
Madagaskar bernama Madagascar periwinkle (Catharanthus
roseus), saat ini digunakan untuk mengobati leukemia dan
limfoma Hodgkin, di antara tumor lainnya. Molekul lain,
doxorubicin, diperoleh dari Streptomyces peucetius dan
Gutiérr et al.10, sedangkan FF diperoleh dengan lving 2 g
melarutkan BBE kering dalam 20 mL metanol memiliki salah,
(DEQ M Mexico) diikuti dengan sonikasi 510 ) untuk
(Branson® 8 5 menit, kemudian 20 mL air sulingsa dded
tiga wa dan dihomogenkan dengan sonikasi menit Itu

merupakan bagian dari rejimen untuk kanker payudara, selama 5 campuran lagi disentrifugasi pada 800masuk jika tidak
leukemia, dan limfoma5. Dalam konteks ini, beberapa g selama 5 menit (C Allegra dan Beckman ernmenunggu
laporan telah menyarankan bahwa senyawa fenolik yang Coulter®) dan sup diperoleh kembali MeOH, ing 18
sebuah C

diturunkan dari makanan mungkin memiliki efek dan kaya flavonoid diperoleh kembali dengan apa ers®,
antineoplastik potensial dengan membalikkan, mengelusi 10 mL larutan 60% Me flavonoid kaki dengan
menghambat atau menunda perkembangan tumor.6. kemudian dikeringkan dengan lyop (Freezone fratindakan
Kacang hitam (Phaseolus vulgaris L.), biji yang biasa Benchtop 20,5 L, Labconco®). OH. Itu
dikonsumsi dalam makanan Meksiko, sangat kaya akan hiliz tindakan
flavonoid, polifenol, tanin, saponin, pitosterol, dan
antioksidan lainnya.7. Beberapa penelitian telah melaporkan
bahwa ekstrak kulit kacang hitam (BBE) adalah agen
pelindung terhadap kerusakan DNA akibat bahan kimia di Identifikasi dan kuantifikasi raphy
sumsum tulang dan sel darah tepi.in vivo8, serta kromatografi cair kinerja tinggi paman n
memberikan perlindungan terhadap karsinogenesis usus (HPLC) dari flavonoid
besar pada tikus9. Efek sitotoksiknya telah diuji pada
beberapa lini sel tumor seperti payudara (MCF-7),
2
hati Baik BBE dan FF dianalisis menurut prosedur itu pro-
(HepG2), usus besar (CaCo), dan leher rahim (HeLa).7.10. lalat, itu
yang dijelaskan oleh Guajardo et al.19. Ekstrak Bri
(BBE atau FF) dilarutkan dalam 80% m sampai et hanol
Beberapa penulis telah memfraksinasi BBE untuk konsentrasi 1 mg/mL sebelum dimasukkan ke injetindakan
mengisolasi molekulnya dan mengkarakterisasi sifat achimalam
dalam sistem HPLC. Analisis HPLC adalah dengan
antineoplastiknya. Satu studi menunjukkan bahwa fraksi elusi gradien menggunakan (A) air yang ke pH 2
BBE yang kaya saponin merangsang sistem kekebalan ), sebuah d (B)
disesuaikan dengan asam trifluoroasetat (Sigma,
tubuh melawan sel kanker11.12. Tanin kacang hitam St. Louis, MO asetonitril kadar HPLC (Merck, ermtahun)
menghambat proliferasi sel usus besar, prostat, dan garis Darmstadt, G sebagai fase gerak pada laju alir min. Itu
sel payudara13.14. Selain itu, fraksi flavonoid (FF) dan molekul 0,5 mL / kolom yang digunakan adalah Zorbax 150 mm
tunggal flavonoid menghambat pertumbuhan sel dan SB) -Aq 4,6 × dan 3,5 m (Agilent, USA) Fraksinasi achimalam
memicu apoptosis pada sel kanker prostat manusia (PC-3)15, dilakukan dengan kondisi gradien pada suhu kembali s fo-
serta memiliki efek proapoptosis terhadap garis sel CCRF- kamar terendah: 20% B selama 6 menit pertama,dan B dengan-

CEM, Daudi, HeLa dan adenokarsinoma paru16-18. meningkatkan konsentrasi menjadi 50% pada 12 30 menit

menit dan menjadi 100% pada Pada akhir kondisin, saya inisial
Dalam penelitian ini, kami menyelidiki efek sitotoksik pemisahan kromatografi diperoleh kembali te e quili-
BBE metanol dan fraksi flavonoidnya terhadap untuk mencapai akurasi kolom dulu 5 L

33
Rev berinvestasi klin. 2018; 70: 32-39
baik BBE atau FF. Setiap kromatogram direkam pada 360 nm
(bandwidth-16) dan 280 nm. Senyawa BBE dan FF dianalisis
dengan HPLC LC / MSD-TOF (Agilent Technologies,
Waldbrunn, Jerman) untuk mengkonfirmasi identitas
flavonoid. Pada kedua analisis, standar myricetin, quercetin,
dan kaempferol (Sigma, St. Louis, MO) digunakan untuk
mengukur flavonoid yang ada dalam BBE dan FF seperti
yang dilaporkan sebelumnya.10.19.
Budaya sel
Garis sel turunan DLBCL (OCI-Ly7) disediakan oleh
Profesor Ricardo Dalla Favera dari Universitas Columbia,
(New York, NY). Sel NIH-3T3 dan VERO diperoleh dari
ATCC (CRL-1658 dan CCL-81). Sel dikultur dalam IMDM,
(Invitrogen, Carlsbad, CA) dilengkapi dengan 10% serum
janin sapi, (Invitrogen, Carlsbad, CA), 1% pen-strep; dan
dipertahankan pada 37 ° C dalam 5% atmosfer CO.
2
Tes sitotoksisitas
Sel OCI-Ly7 dikultur dalam pelat buram putih 96-sumur
(Corning, Pittston, PA), dengan kepadatan 2 × 104 sel /
sumur. Sel terkena konsentrasi berbeda dari BBE, FF
atau CTX (90% murni per standar referensi USP,
Laboratorios Sanfer SA De CV, Meksiko), digunakan
sebagai kontrol positif. Setelah 24 jam, viabilitas seluler
dipantau menggunakan reagen CellTiter-Blue (Promega,
Madison, WI). Untuk mengevaluasi efek pada sel normal,
garis sel NIH-3T3 dan VERO diekspos ke ekstrak dalam
kondisi yang sama.
Apoptosis dan uji siklus sel
Sel dilapisi dalam pelat 12-sumur (Costar, Wilkes Barren, PA)
dengan kepadatan 2 × 105 sel / sumur dan terpapar baik BBE
atau FF menggunakan IC yang diperoleh
50
dalam uji
sitotoksisitas. Setelah inkubasi 24 jam, sel-sel ditripsinisasi
dan dicuci dengan saline buffer fosfat dingin (PBS); jumlah
sel apoptosis ditentukan dengan menggunakan kit uji
apoptosis annexin V (AV) -FITC / PI (Miltenyi Biotech, Auburn,
CA). Minimal 1 × 104 peristiwa direkam menggunakan sistem
FACS Canto ™ II (BD, San Jose, CA). Intensitas fluoresensi
untuk AF dan PI diperoleh dan dianalisis dalam perangkat
lunak FACSDiva (BD Biosciences). Positif ganda (AF dan PI)
atau tunggal
34
Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh diproduksi atau difotokopi tanpa izin tertulis sebelumnya dari penerbit. © Permanyer 2018
positif (AF) ditetapkan sebagai sel apoptosis. Untuksel siklus
analisis, Cell CycleTESTkan ditambah reage DNA (Sannt k itu BD
Jose, CA) digunakan. Sebanyak 1 × 104 malam nts adalah
ditangkap dan histogram fluoresensi PI digunakan intekota
untuk menentukan distribusi fase utama sel dalammasuk tiga
siklus (persentase G1 vs. S vs. G2 sel dalam setiap / M). Itu
siklus ditentukan oleh ModFit LT 3.2, Verity ed menggunakan
Software House (T ME). Semua percobaan operasi daging,
dijalankan dalam rangkap tiga.
Ketegangan tikus dan kondisi kandang
Air steril diberikan dengan trimetoprim dan titit ional
dan Es ekor
sulfametoksazol sebagai antibiotik laktat sebagai
bagian dari protokol untuk infeksi oportunistik. logikabersama
Pada akhir protokol expe, hewan yang , 2 010),
digunakan sebagai kontrol negatif anestesi dan al guide-
euthanasia dengan campuran K (100 mg/mL, / Icr Hsd-
Laboratorios Aranda, Qro, Mex Xylacine (20 mg/ dari
tidak ada
mL, 25 mL Laboratorios Ara Mexico). mg ketamd ho digunakan
16 mg xilasin per kg berat badan masuk ke regiotidak ada dengan
anterolateral dari setiap lim caudal diikuti oleh dan Es ekor
dislokasi serviks setelah mencit p tidak adanya logika bersama
refleks motorik dan tanda-tanda periorbital Mex° C ± 2 ° C
Xylacine (20 mg / mL, 25 mL Laboratorios Ara rk csiklus
Mexico). Dosisnya adalah 200 mg ketam 16 mg ent terlambat
xilasin per kg berat badan adm ke daerah nts, tikus
anterolateral dari setiap lim caudal diikuti oleh ondition
dislokasi serviks setelah tikus tidak adanya dan makanan
refleks motorik dan tanda-tanda periorbital. Mex, T eklad
Xylacine (20 mg / mL, 25 mL Laboratorios Ara lemmasuk
Mexico). Dosisnya adalah 200 mg ketam 16 mg pra
phy-
xilasin per kg berat badan adm ke daerah avmenghindari
anterolateral dari setiap lim caudal diikuti oleh gigi pelek
dislokasi serviks setelah tikus tidak adanya dertelah pergi
refleks motorik dan tanda-tanda periorbital. danSaya
ikon) dan
nda, Qro,
ine dan
inistered
bm uscle,
Tidak ada apa-apa masuk
.
Model dan perawatan xenografting
Untuk menghasilkan model hewan, sel phoma darilim-
suspensi (1 × 107 sel tersuspensi dalam 30 0 L dari
 Ulises Aregueta-robles, dkk.: AKTIVITAS SITOKSIK EKSTRAK KACANG HITAM PADA SEL LIMPHOMA SM ODELS

media) diberikan secara intraperitoneal seperti yang Sifat sitotoksik

Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh direproduksi atau difotokopi tanpa izin tertulis sebelumnya dari penerbit. © Permanyer 2018
dijelaskan sebelumnya oleh Schimdt et al.20. Sel yang
digunakan untuk injeksi dipertahankan dalam fase log BBE menunjukkan sebuah Cyto beracun
tergantung dosis
dengan viabilitas sekitar 98%. Model hewan untuk limfoma berpengaruh pada kultur OCI-Ly7 dengan lat ICac beberapa-
ditandai dengan analisis histopatologi menggunakan 0,131 ± 0,004 mg/mL. Sebuah respon diamati Yaribu
50
pewarnaan hematoxylin dan eosin, bersama dengan pada sel yang terpapar t (IC 0,154 ± 0,007 mg / atau dia FF
imunohistokimia untuk CD79a dan BCL-6 untuk mL), sedangkan IC 0,745 ± 0,035 mg / mL, untuk CTX
50: 50
mengkonfirmasi jenis tumor. Setelah dilakukan menunjukkan bahwa b tion (BBE dan FF) lebih lainnya pecahan-

karakterisasi, mencit menjalani perlakuan dan dibagi sitotoksik (p <0,0005) (Gbr. 1). sebuah CTX
menjadi empat kelompok: Kelompok plasebo yang hanya
mendapat PBS, satu kelompok yang mendapat FF (15 mg/
tikus/hari, menggunakan pelet tikus sebagai wahana), Spesifisitas sel tumor merupakan salah satu ciriduadahulu
kelompok lain yang mendapat BBE ( 20 mg / tikus / hari, yang paling banyak ditemukan pada obat untukdia sebelumnya,
menggunakan pelet hewan pengerat sebagai kendaraan), terapi kanker; t kami mengekspos sel non- ERO) ke
dan kelompok kontrol yang menerima CTX (ip Pada 150 mg / kanker (NIH-3T3 dan ekstrak kami V. Untuk bersama ncen-
kg berat badan); jadwal administrasi adalah satu suntikan tujuan ini, kami menggunakan rasio tinggi BBE es dari hidup-

setiap 3 hari dengan total 7 aplikasi21. Berat badan dan
perilaku tikus dipantau selama percobaan. Setelah kematian
hewan, tumor diekstraksi dan menjalani analisis patologis.
Waktu kelangsungan hidup terdaftar sejak implantasi
tumor.
(1 mg / mL), dan persentase dalam sel adalah ± 7. 33%
95,31% ± 6,38% dan 90,17% di NIH Sel -3T3 dan th makhluk
VERO, masing-masing, sangat berbeda dari Ly7 sel
ncen-
viabilitas yang ditemukan di OCI- (1,17% ± 0,18),aku bersama
ve
masing-masing ± 4,36% di dan sel VERO Hasil ini adalah

bahwa sel tumor cenderung signifikan m sitive NIH- 3T3

terhadap fraksi yang diperoleh dari sel B hitam SHberhutang
Analisis statistik non-kanker. jam tanpa-
rata-rata dibandingkan

Perangkat lunak Matlab® 2010 digunakan untuk analisis

statistik. Semuain vitro pengujian dilakukan dalam
rangkap tiga data pelaporan sebagai mean dan standar50
deviasi. IC dihitung dengan variasi persamaan Hill22. Uji aliran cytometry
Untuk apoptosis dan siklus sel, perbedaan statistik dinilai
menggunakan metode two-tailedT-test untuk menguji Setelah memaparkan sel tumor ke BBE th dan IC 50
hipotesis nol tidak ada perbedaan antara populasi. menggunakan uji sitotoksisitas yang diperoleh,ve itu
Perbedaan antara volume dan berat tumor dievaluasi kami mengamati 41,6% sel positif untuk kedua molecule
melalui analisis ANOVA. Dalam model hewan, perbedaan AV, yang diekspresikan di permukaan sel selamadaripop-
statistik antara perlakuan dari kurva Kaplan – Meier tosis tahap awal, dan propidium iodida (PI), pada
mengikat

dievaluasi menggunakan uji log-rank (Statistik SPSS 19 molekul DNA dalam sel dengan kerusakan te s tanda
digunakan dalam pengujian ini). p 0,05 dianggap membran atau la apoptosis (Gbr. 2B). Sementarapopositif
signifikan. 44,6% adalah untuk kedua penanda dalam sel ARA.2C),
yang terpapar FF (hanya 7,4% sel adalah AV danve Kapan
PI posisi mereka terpapar kendaraan (PBS) (p ARA.2A)
HASIL <0,0001 dan p <0,001) alm ilar diamati dalam selost sim-
terkena cyclop mide (CTX) (Gbr. 2D). hosfa-
Karakterisasi kandungan flavonoid

Analisis kromatografi FF mengidentifikasi tiga flavonoid

terglikosilasi: myricetin 3-O-glucoside pada konsentrasi Analisis siklus sel
11,29 mg / g, sedangkan quercetin 3-O galactoside dan
kaempferol 3-O glucoside masing-masing pada Mengenai tahap siklus sel, tion normal sel OCI- jarak ribu-
konsentrasi 97,68 dan 1,00 mg / g .19.23. Ly7 fase log (diperlakukan dengan adalah vehicle)
24,51% ± 0,63% di G1, 65,16% ± 0,8 8% di S,

35
Rev berinvestasi klin. 2018; 70: 32-39

Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh diproduksi atau difotokopi tanpa izin tertulis sebelumnya dari penerbit. © Permanyer 2018
Gambar 1. Tes viabilitas sel. Sel OCI-Ly7 terkena beberapa konsentrasi baik ekstrak kulit kacang hitam fraksi flavonoid (FF), (BBE), itu
siklofosfamid (CTX), atau Vehicle (DMSO) selama 24 jam.

dan 10,33% ± 1,23% di G2 / M (Gbr. 2E). Penambahan DISKUSI

BBE pada kultur sel mengubah distribusi menjadi 21,4%
± 0,91% pada G1, 77,15% ± 0,93% pada S, dan 1,53% ± DLBCL mewakili subtipe yang paling umum terhitung dari
NHL,
0,88% pada G2/M (Gbr. 2F), sedangkan pada sel yang 30-40% dari semua yang baru didiagnosis Di Amerika dan C huruf "E"
terpapar FF, distribusinya adalah 21,5% ± 0,82% di G1, Serikat, 8000 kematian per tahun disebabkan oleh itu seperti digunakan

77,91% ± 0,87% di S, dan 0,59% ± 0,27% di G2 / M (Gbr. penyakit ini. NHL sch terapeutik saat ini mencakup em untuk
2G). Menariknya, pengobatan dengan CTX menghasilkan pemberian doxorubicin cristine, dua molekul yang sebuah d vin-
distribusi yang sama pada fase G1 dan S (masing-masing diperoleh dari alam aku aktif rces.
21,69% ± 0,76% dan 62,62% ± 0,52%) dibandingkan
dengan kontrol, tetapi lebih banyak sel (15,4% ± 0,43%) Dalam hal ini, 60% dari semua antikanker yang eh narkoba
yang ditangkap di G2 / M ( Gambar 2H). disetujui di AS selama 2010, diperoleh dari nalami
sumber24. Diketahui bahwa diet alami memiliki ry com-
efek kemoprevensi dengan menghambat, memblokir raja,
in vivo analisis sitotoksisitas membalikkan, atau memperlambat proses atauf mobilCina
genesis. Dalam konteks ini, BBE telah menjadi ed fatau itu
Semua tikus yang diinokulasi menunjukkan karakteristik sifat antineoplastik kami secara luas8. Fitokimia aku bersama
tenda
pertumbuhan tumor dalam nodus dibandingkan dengan (tanin, flavonoid, saponin, dan ekstrak fitosterols) o untuk ini
tikus yang tidak diinokulasi. Analisis histopatologi telah dikaitkan dengan penghambatan pro sel lifer tindakan
menegaskan bahwa jaringan neoplastik berhubungan kanker dan pemulungan radikal bebas). juga7, 9.

dengan proliferasi difus limfosit besar yang

menunjukkan ekspresi nuklir positif BCL-6 dan ekspresi Dalam penelitian ini, analisis kromatografi FF dari mendapatkan ained
membran positif untuk CD79a (Gbr. 3A-C). Menariknya, BBE P. vulgaris L., mengidentifikasi tiga m olepetunjuk
pemberian oral baik BBE atau FF meningkatkan SR (myricetin 3-O glukosida, quercetin 3-O gluko samping , dan
dibandingkan dengan kelompok tikus yang diobati kaempferol 3-O glukosida). Dalam konteks ini, Ch bahasa inggris dkk.
dengan plasebo (p = 0,056); mengejutkan, responnya menggambarkan FF dariGynostemma pentaphyll um com-
mirip dengan kelompok yang diobati dengan CTX (Gbr. terdiri dari 8 molekul, dua di antaranya quercetin pantai tif,
4). SR untuk kelompok FF adalah 33,3 hari (interval de dan menunjukkan efek sitotoksik pada prostat cdaneh sel
kepercayaan [CI]: 95%: 28,1–38,5), sedangkan untuk BBE line (PC-3)15. Selanjutnya, Jeganathan et al. tiga reputasi orted
dan CTX adalah 33,8 (CI 95%: 28,3–39,5) dan 33,1 (CI 95%: flavonol yang sama yang terkandung dalamKakak dia inen-
28,4–37.8 ) hari, masing-masing. SR pada kelompok unta L. (Myricetin 3-O glucoside, Quercetin 3- side, oh gluco-
plasebo adalah 26,7 hari (95% CI: 23,7-29,8). dan Kaempferol 3-O glucoside), dalam lebar ely digunakan

36
 Ulises Aregueta-robles, dkk.: AKTIVITAS SITOKSIK EKSTRAK KACANG HITAM PADA SEL LIMPHOMA SM ODELS

Gambar 2. Analisis aliran cytometry. Hasil apoptosis (Annexin-V/PI) sel yang terpajan pembawa (A), hu kacang hitam (BBE) (B), lls e ekstrak
fraksi flavonoid (FF) (C), dan siklofosfamid (CTX). Selain itu, kandungan DNA dianalisis dalam tiga sel kendaraan (E), BBE (F), FF makan d dengan

Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh direproduksi atau difotokopi tanpa izin tertulis sebelumnya dari penerbit. © Permanyer 2018
(G), dan CTX (H).

SEBUAH B C D

E F G H

Gambar 3. Karakterisasi in vivo model. ( A ) Pewarnaan baik FF dan BBE mampu menginduksi apop yang batuk pasir
hematoxylin dan Eosin dari tumor yang dikeluarkan dari tikus
menghentikan siklus sel dalam fase S, yang juga sarangerak tubuh
yang disuntik dengan suspensi sel OCI-Ly7 menghasilkan
populasi sel limfoma non-Hodgkin agresif klasik. Selain itu, baik memungkinkan flavonoid terglikosilasi dari BBE jawaban onsi-
ekspresi nuklir BCL-6 (B) positif dan ekspresi membran CD79a (C) untuk efeknya. Dalam hal selektivitas, exp kami eripikiran
terdeteksi.
menunjukkan bahwa garis sel tumor adalah motif kembali ensi-
kedua ekstrak daripada sel non-kanker (dan TRUE),NIH- 3T3
yang dapat dijelaskan oleh jumlah sel tumor dengan kecepatan

dibandingkan dengan sel non-kanker.

Hasil uji sitotoksisitas menggunakan FF serupa BBDan dan

dengan penelitian lain. Misalnya diperoleh dari e, t dia FF
B
Rhus vernicflua Stokes menginduksi batuk padaed pop-
SEBUAH

limfoma sel B (BJAB) dan sel T (Jurkat)26. Efekmpmanusia

apoptosis serupa dan fase G2 / M pada sel re st dari
limfoma B manusia (BJA diamati oleh peneliti lainB) adalah
menggunakan nent yang sama pada 100 g / mL po- bersama

.
27

C
Mengenai penghentian siklus sel, hasil kami isyarat itu
tanaman teh (C. sinensis L.) dari Sri Lanka tetapi pada menyarankan kedua perawatan (BBE dan FF) tran apa yang harus

konsentrasi yang berbeda (0,94 mg / g, 1,5 mg / g, dan 1,31 memblokir fase G2 / M karena peningkatan fase dari
S
mg / g, masing-masing)25; tanaman ini telah dilaporkan durasi diamati. Dalam konteks ini, Cheng t al. pub-
memiliki sifat antioksidan, antimikroba, antikanker, anti- mengungkapkan bahwa baik flavonoid dan saponin dari
tidak ada

aterosklerotik, dan anti-proliferatif. diperoleh Gynostemma pentaphyllum mampu india ucing

melakukan apoptosis dan menahan sel kanker pro-
masuk

Dalam penelitian ini, kami menggambarkan efek anti-proliferatif dari stadium S dan G2/M (PC-3)15. Selain itu, mereka untuk dan itu
BBE dan FF pada garis sel limfoma (OCI-Ly7) dengan cara yang kedua fraksi memodulasi ekspresi bagian molekul c yclin A, a
bergantung pada dosis. Selain itu, kami menemukan bahwa dari kompleks yang diperlukan untuk t . ini berlari posisi

37
Rev berinvestasi klin. 2018; 70: 32-39
Gambar 4. Kaplan – kurva kelangsungan hidup limfoma Meier.
Populasi kelangsungan hidup diplot sejak hari ke 20 setelah
inokulasi dan 1 hari sebelum kematian subjek pertama
dilaporkan. Perbedaan statistik antar kelompok dihitung
menggunakan uji chi-kuadrat menurut uji log-rank. Kelompok
ekstrak kulit kacang hitam (BBE) dan kelompok fraksi flavonoid
(FF) tidak berbeda secara statistik dengan kelompok CTX,
dengan nilai p masing-masing 0,42 dan 0,8. Semua kelompok
perlakuan, BBE, FF, dan CTX, diperoleh trend p = 0,056.
(cyclin-A / cdk2)28 dan ekspresi caspase-3, yang
merupakan kunci penting dalam proses apoptosis.
Untuk menguji pengaruh pecahan ini in vivo, kami
mengembangkan model xenografting dan menilainya
menggunakan analisis histologis. Hasil biopsi yang diambil
dari tikus cangkok menunjukkan sel positif untuk CD79a dan
BCL-6 (dua penanda yang umum digunakan untuk DLBCL).
Dengan model hewan yang dikarakterisasi dengan baik,
kelompok mencit yang diberi plasebo mati sekitar hari ke
26,7, sedangkan kelompok yang diberi perlakuan CTX (150
mg/kg ip) mati beberapa hari kemudian (33,1 hari), yang
menunjukkan hasil yang diharapkan. Anehnya, efek
sitotoksik diamati in vitro diamati in vivo juga, karena
kelompok tikus yang menerima BBE atau FF bertahan
masing-masing sekitar 33,3 dan 33,8 hari.
Selain itu, pemberian oral melalui makanan merupakan
keuntungan dan cara pengobatan yang mudah
menggunakan fraksi ini. Pengamatan serupa dilaporkan
menggunakan fraksi alkaloid atau terpenoid yang diberikan
dalam makanan tikus yang dicangkokkan dengan sel
limfoma (DAL) atau kanker paru-paru (L-929); dalam
penelitian ini, fraksi meningkatkan SR sekitar 35,64 ± 1,05
hari dan pengurangan volume tumor diamati29.
Data yang ditunjukkan dalam penelitian kami menjawab
pertanyaan baru tentang komponen dalam BBE dan FF,
khususnya, efek residu gula pada bentuk glikosida yang
diisolasi dari tanaman ini, dan hasil konsentrasi dan/atau
rasio yang berbeda di antara flavonoid.
38
Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh diproduksi atau difotokopi tanpa izin tertulis sebelumnya dari penerbit. © Permanyer 2018
Akhirnya, dalam penelitian ini, kami E a dan FF
menemukan bahwa kedua BB dari P. vulgaris L. ompara-
Memiliki sifat sitotoksik c ble terhadap gema dan untuk
siklofosfamid, terapi kanker mol yang banyak jika
emed
digunakan. Selain itu, ekstrak ini spesifik untuk dan al paling
sel tumor, karena tidak berbahaya bagi sel non-danBENAR
kanker (sel NIH-3T3 a). Pengamatan penting itu t itu
lainnya adalah pemberian ekstrak dalam ng model
xenografti limfoma meningkatkan SR, mirip itu dulu
dengan yang diamati dengan studi pengobatan. Fu rther
siklofosfamid diperlukan untuk mengidentifikasipo Tidak ada apa-apa
komposisi spesifik dari fraksi yang menunjukkanyto beracun
sifat c yang diamati. Misalnya, Oncamex, ceti t-de-
flavonoid yang kaya, telah menunjukkan model pra- di sebuah
klinis aktivitas antitumor30.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Qiong Shenitu sel
yang telah memberikan sumbangan yang sayapedang
disumbangkan oleh Prof. Dalla Favera, dan kepada Mard te chni-
García Cruz atas bantuan administrasi laboratorium. Cá tedra
Studi ini didukung oleh de Hematología y Cáncer dan ir F tidak
Research Cha dan NutriOmics Research Group dari Tectidak adalogis
de Monterrey, dan oleh Consejo Nacional de C iencia y
Tecnología (CONACYT, Meksiko) melalui student ship schmatahari-
no. 39331.
REFERENSI
1. Ahmedin-Jemal DV, Bray F, Center MM, Jacques Ward E, - Ferla dan saya,
Forman D. Statistik kanker global. CA Ca 2011; 61: 69-90. lebih baik J Klinik.
2. Meneses-García A, Ruiz-Godoy L, Beltran-O rteg sebuah SEBUAH,
Sánchez-Cervantes F, Tapia-Conyer R, Mohar A. Princ ipale baru-
plasia ganas di Meksiko dan distribusi geognya Invest grafik sebuah. Putaran
Clin. 2012; 64: 322-9.
3. Villela L, López-Guillermo A, Montoto S, dkk. Prog tures nosti c fe-
dan hasil pada pasien dengan phoma besar difus yang B-cel aku lim-
tidak mencapai rejimen respon yang lengkap. Kanker. ke cemara st-line
2001; 91: 1557-62.
4. Coiffier B, Thieblemont C, Van Den Neste E, dkk. hasil Lonistilah-g
pasien dalam percobaan LNH-98.5, studi pertama yang andoukuran
membandingkan rituximab-CHOP dengan terapi CH OP c hemo-
standar pada pasien DLBCL: sebuah studi oleh kelompok'etud adalah dari
limfoma dewasa. Darah. 2010; 116: 2040-5
5. Zhang Z, Yu X, Wang Z, Wu P, Huang J. Anthracycl tiate ines kekuatan
kekebalan anti-tumor: kesempatan baru untuk ch emoimm-
noterapi. Kanker Lett. 2015; 369: 331-5.
6. Kris-Etherton PM, Hecker CD, Bonanome A, dkk. Bio pound aktif dan kom-
dalam makanan: peran mereka dalam pencegahan penyakit diova skuler
mobil dan kanker. Apakah J Med. 2002; 113 Suppl 9B: 71S- 88S.
7. Aparicio-Fernández X, Reynoso-Camacho R, Castao dkk. - Tost ado E,
Kapasitas antiradikal dan induksi sel apoptosis oleh a aktif HeLa
Phaseolus vulgaris ekstrak. Makanan Tumbuhan 2008; Bersenandungnutrisi
63: 35-40.
 Ulises Aregueta-robles, dkk.: AKTIVITAS SITOKSIK EKSTRAK KACANG HITAM PADA SEL LIMPHOMA
8. Azevedo L, Gomes JC, Stringheta PC, dkk. Kacang hitam (Phaseolus vulgaris
L.) sebagai agen pelindung terhadap kerusakan DNA pada mencit. Kimia
Kimia Makanan. 2003; 41: 1671-6.
9. Bobe G, Barrett KG, Mentor-Marcel RA, dkk. Kacang navy yang dimasak
dengan makanan dan fraksinya melemahkan karsinogenesis usus besar
pada tikus ob / ob yang diinduksi azoxymethane. Kanker Nutrisi. 2008; 60:
373-81.
10. Gutiérrez-Uribe JA, Serna-Saldívar SR, Moreno-Cuevas JE, Hernández-
Brenes C, Guajardo-Touché EM. Penghambatan Pertumbuhan Sel
Kanker oleh Kacang Hitam (Phaseolus vulgaris L.) Ekstrak. Paten
Amerika Serikat US No. 2006024394 / A1; 2006.
11. Berhow MA, Wagner ED, Vaughn SF, Plewa MJ. Karakterisasi dan
aktivitas antimutagenik saponin kedelai. Res. 2000; 448: 11-22.
12. Shi J, Arunasalam K, Yeung D, dkk. Saponin dari kacang-kacangan yang
dapat dimakan: kimia, pengolahan, dan manfaat kesehatan. Makanan J
Med. 2004; 7: 67-78.
13. Bawadi HA, Bansode RR, Trappey A 2dan, Truax RE, Losso JN.
Penghambatan caco-2 usus besar, payudara MCF-7 dan hs578T, dan
proliferasi sel kanker prostat DU 145 oleh tanin kental kacang hitam
yang larut dalam air. Kanker Lett. 2005; 218: 153-62.
14. Kandil FE, Smith MA, Rogers RB, dkk. Komposisi fraksi kaya
proanthocyanidin chemopreventive dari buah cranberry
bertanggung jawab untuk penghambatan 12-O-tetradecanoyl
phorbol-13-acetate (TPA) -induced ornithine decarboxylase (ODC)
aktivitas. J Pertanian Makanan Kimia. 2002; 50: 1063-9.
15. Cheng TC, Lu JF, Wang JS, dkk. Efek antiproliferasi dan mekanisme
apoptosis sel kanker prostat PC-3 oleh flavonoid dan saponin yang
dibuat dariGynostemma pentaphyllum. J Pertanian Makanan Kimia.
2011; 59: 11319-29.
16. Ferguson PJ, Kurowska E, Freeman DJ, Chambers AF, Koropatnick DJ.
Fraksi flavonoid dari ekstrak cranberry menghambat proliferasi garis
sel tumor manusia. J Nutr. 2004; 134: 1529-35.
17. Kameswaran TR, Ramanibai R. Aktivitas antiproliferatif fraksi flavonoid
Indigofera tinctoria adalah melalui penangkapan siklus sel dan jalur
apoptosis di A-549 Sel. J Biol Sci. 2008; 8: 584-90.
18. Son YO, Lee KY, Lee JC, dkk. Efek antiproliferatif dan apoptosis selektif
dari flavonoid yang dimurnikan dariRhus vernicflua stokes pada
garis sel hati yang normal versus yang diubah. Lett beracun. 2005;
155: 115-25.
39
SM ODELS
19. Guajardo-Flores D, García-Patiño M, Serna-Gu Gutiérrez- membakartongkat,
Uribe JA, Serna-Saldívar SO. Kuantifikasi karakter saponin
izatio n dan
Tidak ada bagian dari publikasi ini yang boleh direproduksi atau difotokopi tanpa izin tertulis sebelumnya dari penerbit. © Permanyer 2018
dan flavonoid dalam kecambah, dan kotiledon kacang benih mantel
hitam berkecambah. Tahun 2012; 134: 1312-9. od Kimia
20. Schimdt-Wolf IG, Negrin RS, Kiem HP, Blume KG, W eisspria IL.
Penggunaan model tikus SCID / limfoma manusia t sel o ev adonan
pembunuh yang diinduksi sitokin dengan antitumor kuat c dia aktivitas.
J Exp Med. 1991; 174: 139-49.
21. Man S, Bocci G, Prancis G, dkk. Efek antitumor dalam dosis Es rendah-
m (metronomis) siklofosfamid diberikan c melalui air ontin dengan sungguh-sungguh
minum. Kanker Res. 2002; 62: 273 1-5.
22. Goutelle S, Maurin M, Rougier F, dkk. Persamaan bukit n: a tinjauan
kemampuannya dalam pemodelan farmakologis. F. gelombang m Klinik
Farmakol. 2008; 22: 633-48.
23. Guajardo-Flores D, Serna-Saldívar SO, Gutiérrez Evaluasi - Urib dan JA.
antioksidan dan proliferatif a yang diekstraksi saponin kegiatan yaitu dari
dan flavonol dari b yang berkecambah (Phaseolus kekurangankacang polong
vulgaris L.). Kimia Makanan. 2013; 141: 1497 - 503.
24. DJ Newman, Cragg GM. Produk alam sebagai obat asam ini o f baru
selama 30 tahun dari 1981 hingga 2010. J 2012; 75: Nat Melecut.
311-35.
25. Jeganathan B, Punyasiri PA, Kottawa-Arachchi JD, dan Al. G genetik
variasi flavonol quercetin, myricetin, dan teh kaemp Sri ferol dalam
Lanka (Camellia sinensis L.) dan aspek kesehatannya. - pro moting
Ilmu Pangan Int J. 2016; 2016: 6057434.
26. Lee JC, Lee KY, Kim J, dkk. Ekstrak dariRhus vernic mampuiflua stoke
menghambat pertumbuhan getah bening manusia Foodrumah sebuah sel.
Chem Toxicol. 2004; 42: 1383-8.
27. Jang HS, Kook SH, Son YO, dkk. Flavonoid dimurnikan sakit M Rhus
mondar-mandir
tenggorokan stokes secara aktif menghambat pertumbuhan petunjuk sebuah letusan-
sel dan dalam tosis pada sel osteosarkoma manusia. Biokimiafisik Akta.
Bio 2005; 1726: 309-16.
28. Pagano M, Pepperkok R, Verde F, Ansorge W, Draet A dari G sepeda
diperlukan pada dua titik dalam siklus sel manusia 1992;itu. E MBO J.
11:961-71.
29. Chitra V, Sharma S, Kayande N. Evaluasi antican of Vitex cer a aktivitas
negundo pada hewan percobaan: an in vitro belajar. Int J dan in vivo
Pharm Tech Res. 2009; 1: 1485-9.
30. Martínez-Pérez C, Ward C, Turnbull AK, dkk. Antitum dari atauaktivitas
flavonoid baru pada camex dalam model bre praklinis. Brast kanker
J Kanker. 2016; 114: 905-16.