Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.
com
MemengaruhiPhysalis angulatapada retinoblastoma
Efek pro-apoptosis dan anti-proliferatif dariPhysalis
angulataekstrak daun pada sel retinoblastoma
Marsha Dechastra Chairissy, Lely Retno Wulandari, Hidayat Sujuti
Departemen Ilmu Penyakit Mata Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya Malang 65145, Indonesia
Korespondensi ke:Lely Retno Wulandari. Departemen
Oftalmologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya,
Malang 65145, Jawa Timur, Indonesia. lelyretnowulandari@
gmail.com
Diterima: 17-12-2018 Diterima: 17-04-2019
Abstrak
● TUJUAN: Untuk menyelidiki pengaruh dariPhysalis angulata
ekstrak daun pada apoptosis dan proliferasi sel retinoblastoma.
Meskipun beberapa penelitian sebelumnya membuktikan potensi
antikankerPhysalis angulata; Namun, penelitian tertentu yang
membuktikan manfaatnya pada sel kanker retinoblastoma masih
terbatas.
● METODE: Penelitian ini menggunakan sebuahin-vitrostudi
eksperimental dengan menerapkan kultur garis sel
retinoblastoma manusia Y79 yang diperoleh dari American
Type Culture Collection (ATCC; 10801 University Boulevard
Manassas, VA 20110, USA). Sel dibagi menjadi 4 kelompok.
Kelompok I merupakan kelompok kontrol tanpa pemberian
Physalis angulataekstrak daun. Sedangkan, kelompok II, II
dan IV terlibat dengan 25, 50, dan 100 µg/mLPhysalis angulata
ekstrak daun masing-masing. Setelah inkubasi 24 jam,
dilakukan pemeriksaan dengan uji proliferasi sel
mikrotetrazolium (MTT) dan deteksi apoptosis Annexin V.
Analisis statistik dilakukan dengan uji Tukey.
● HASIL:Physalis angulataekstrak daun meningkatkan
apoptosis dan secara signifikan mengurangi jumlah sel hidup
pada sel retinoblastoma, seiring dengan peningkatan dosis
yang diberikan. Berdasarkan uji Tukey didapatkan perbedaan
bermakna pada kelompok perlakuan pada dosis 50 µg/mL (P
=0,025) dan 100 µg/mL (P=0,001) dalam pengukuran apoptosis.
Pengukuran proliferasi juga menunjukkan penurunan yang
signifikan dalam jumlah sel hidup pada kelompok perlakuan
50µg/mL (P=0,004), dan pada kelompok perlakuan 100 µg/mL (
P=0,000). Sedangkan dosis 25 µg/mL menunjukkan perbedaan
yang tidak bermakna pada kedua pengukuran. Peningkatan
apoptosis dan penurunan jumlah sel hidup terjadi pada dosis
100 µg/mL. Penurunan jumlah sel hidup (dalam pengukuran
proliferasi) disebabkan oleh proliferasi yang terhambat atau
peningkatan apoptosis.
1402
· Penelitian dasar·
● KESIMPULAN:Physalis angulataekstrak daun meningkatkan
apoptosis pada kultur sel retinoblastoma, membutuhkan penelitian
lebih lanjut untuk menghambat proliferasi.
● KATA KUNCI:Physalis angulata; apoptosis; proliferasi; sel
retinoblastoma
DOI:10.18240/ijo.2019.09.05
Kutipan:Chairissy MD, Wulandari LR, Sujuti H. Efek pro-apoptosis
dan anti-proliferatifPhysalis angulataekstrak daun pada sel
retinoblastoma.Int J oftalmol2019;12(9):1402-1407
PERKENALAN
R etinoblastoma diduga sebagai keganasan intraokular primer
yang kebanyakan terjadi pada anak-anak, dengan kejadian
umum di seluruh dunia berkisar 8000 anak per tahun. Ini adalah fakta
yang tak terkalahkan bahwa negara-negara maju telah selamat dari
harapan hidup yang tinggi; sedangkan negara-negara berkembang
dan miskin telah menderita dengan temuan kurang dari
50%[1-3].
Patogenesis retinoblastoma diawali dengan gangguan regulasi
siklus sel yang menyebabkan pertumbuhan sel retina abnormal.
Pada retinoblastoma, mutasi atau inaktivasi protein penekan
tumor termasuk protein retinoblastoma (pRB) dan faktor
transkripsi p53[4]. Baik pRB dan p53 memungkinkan dua jalur
utama penekanan tumor yang mengendalikan respons seluler
terhadap rangsangan onkogenik seperti kesalahan dalam
pembelahan sel, kerusakan DNA, dan sinyal mitogenik yang tidak
sesuai. Masing-masing jalur ini memiliki regulator dan efektor
tertentu untuk menghentikan siklus sel atau bahkan menginduksi
apoptosis[5]. Inaktivasi pRB menghalangi sel untuk memasuki fase
proliferasi sehingga terjadi replikasi DNA yang tidak terkontrol
dan hasil replikasi yang tidak sempurna[6]. Jalur pRB belaka tidak
cukup untuk menginduksi pembentukan tumor. Disregulasi pada
jalur p53 juga akan menginduksi antiapoptosis dan pertumbuhan
sel yang berlebihan[7].
Salah satu kelemahan terapi retinoblastoma saat ini diindikasikan untuk
membatasi kisaran indeks terapi yang memungkinkan terjadinya toksisitas
pada jaringan normal. Selain itu, tingkat kekambuhan yang tinggi
menyebabkan sejumlah besar kegagalan pengobatan. Saat ini, beberapa
penelitian terkait telah dilakukan dengan mengembangkan agen antitumor
(salah satunya adalah pRB) untuk menargetkan mekanisme yang dapat
menekan perkembangan tumor. Dua utama

Strategi yang dikembangkan dengan target gen RB1
sebagai terapi kanker adalah memanfaatkan mutasi gen
RB1 dan mengaktifkan kembali fungsi tumor suppressor
dari RB1.[8-10]. Physalis angulataadalah tanaman, terbukti
memiliki atribut fotokimia mengatasi potensi anti-kanker
[11] . Salah satu zat aktif antikanker berhasil diisolasi dari
Physalis angulataekstrak daun adalah physalin, yang
merupakan turunan dari glikosida flavonoid. Selain itu,
ditemukan kandungan lain seperti luteolin, karotenoid,
dan withanolides. Selain efek antikanker,Physalis angulata
ekstrak daun juga diyakini memiliki potensi antiparasit,
anti-inflamasi, antimikroba, anti-inflamasi, dan
imunosupresif[12].
Beberapa penelitian terkait telah membuktikan potensi
antikanker dariSudut Physalis[13-22]. Namun, belum ada
penelitian yang membuktikan manfaatnya pada sel kanker
retinoblastoma. BAHAN DAN METODE
Rancangan penelitian ini melibatkan sebuahin vitro
eksperimental dalam kultur garis sel retinoblastoma yang
terlibat dengan Physalis angulataekstrak daun. Penelitian
dilakukan di Laboratorium Biomedik Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya, pada Oktober 2018.
Sampel penelitian ini adalah kultur sel retinoblastoma yang
diperoleh dari American Type Culture Collection (ATCC; 10801
University Boulevard Manassas, VA 20110, USA). Kultur sel
dibagi menjadi empat kelompok, yaitu kelompok kontrol
(tanpa pajanan), kelompok perlakuan 1 (dengan pajanan 25
µg/mLPhysalis angulataekstrak daun), kelompok perlakuan 2
(dengan paparan 50 µg/mLPhysalis angulataekstrak daun),
dan kelompok perlakuan 3 (dengan paparan 100 µg/mL
Physalis angulataekstrak daun).
Kriteria inklusi melibatkan kultur sel dengan karakteristik
garis sel retinoblastoma Y79 (ATCC®HTB18™) ditandai dengan
kluster multiseluler atau kluster mirip anggur. Sedangkan
kriteria eksklusi meliputi kultur sel tanpa karakteristik sel
retinoblastoma, kultur sel yang tumbuh ke dalam selama
masa inkubasi atau kultur sel dengan kontaminasi bahan
kimia, mikroorganisme, atau jamur yang mengalami
kesalahan selama perawatan.
Physalis angulataekstrak daun diperoleh dari ekstraksi dengan pelarut
etanol absolut dengan menggunakan alat ekstraktor soxhlet. Ekstrak
cair diencerkan untuk memperoleh konsentrasi dengan dosis 25 µg/
mL, 50 µg/mL, dan 100 µg/mL.
Proliferasi dan apoptosis sel retinoblastoma melibatkan
pertumbuhan sel retinoblastoma yang dihitung dengan metode
uji proliferasi sel microtetrazolium (MTT) dan dengan kit deteksi
apoptosis Flowcytometri Annexin V (untuk mengetahui
persentase sel hidup).
Prosedur Penelitian
Proses kultur sel retinoblastomaRetinoblastoma
Int J Oftalmol, Vol. 12, No. 9, Sep.18, 2019 www.ijo.cn
Telp: 8629-82245172 8629-82210956 Email: ijopress@163.com
jaringan sel dicuci 3 kali dengan salin buffer fosfat (PBS) steril
dalam aliran laminar. Jaringan dicacah dalam media bebas serum
untuk mendapatkan ukuran 1x1 mm2. Suspensi jaringan
(centrifuge) diputar dengan kecepatan 1200 rpm selama 7 menit.
Supernatan dibuang, sedangkan pelet disuspensikan kembali dan
diputar kembali. Pelet disuspensikan kembali dengan media
kultur dan dipipet. Jaringan dimasukkan ke dalam cawan kultur
dan diinkubasi pada suhu 37℃, 95% dengan tingkat kelembaban
udara 5% CO2selama 24 jam.
Ekstraksi dariPhysalis angulatadaunSebanyak 100 g serbuk
daun kering (simplisia) dariPhysalis angulatadaun diperoleh
dari Balai Tanaman Obat di Materia Medika, Kota Batu,
Malang. Serbuk sampel kering direndam dengan etanol
hingga volume mencapai 900 mL. Dikocok dan dibiarkan
semalaman hingga mengendap (proses maserasi).
Supernatan disaring untuk mendapatkan filtrat. Pemisahan
antara pelarut etanol dan ekstrak dilakukan dengan
menggunakan rotary evaporator dengan suhu 70℃-80℃
untuk mendapatkan padatan berminyak dariPhysalis angulata
daun-daun. Pengenceran lebih lanjut dilakukan dengan
menggunakan DMSO <0,05% (v/v) untuk tujuan studi
farmakologis. Prosedur uji proliferasi MTTBermacam-
macamPhysalis angulatakonsentrasi ekstrak ditambahkan ke
96 well-plate dan diinkubasi dalam inkubator dengan 5% CO2
2pada 37 ℃ selama 24 jam. Setelah inkubasi berakhir, medium
danPhysalis angulataekstrak dihilangkan dan ditambahkan ke
masing-masing wellplate dengan 10 µL reagen MTT (TACS
MTT Cell Proliferation assay®4890-25 Cat-K) dengan
konsentrasi 0,5 mg/mL dalam kondisi gelap.
Inkubasi dilakukan pada suhu 37℃ selama 4 jam hingga
terbentuk formazan. Pengamatan kondisi sel dilakukan
dengan mikroskop terbalik. Formazan dielusi dari sel
dengan 150 µL DMSO. Pembacaan hasil dilakukan dengan
ELISA microplate reader pada absorbansi 550 nm.
Proliferasi sel retinoblastoma dinyatakan dalam bentuk
persentase dengan rumus sebagai berikut:
Pengukuran Apoptosis menggunakan Annexin VBermacam-
macam Physalis angulatakonsentrasi ekstrak ditambahkan ke 24
well-plate dan diinkubasi dalam inkubator dengan 5% CO22pada
37 ℃ selama 24 jam. Setelah sel dikeluarkan dari inkubator,
media danPhysalis angulataekstrak diaspirasi. Selanjutnya,
Dulbecco's phosphate-buffered saline (D-PBS),
ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) dan tripsin ditambahkan
di setiap pelat sumur diikuti dengan inkubasi selama 2 menit
dalam CO2.2inkubator. Setelah itu, semua aspirat ditempatkan
pada Eppendorf Multipette®plus (Jerman) dan disentrifugasi pada
2500 rpm selama 5 menit. Sel di setiap Eppendorf dicuci
1403
MemengaruhiPhysalis angulatapada retinoblastoma

Tabel 1 Rerata hasil pengamatan apoptosis dan proliferasi kultur sel retinoblastoma pada kelompok kontrol dan
kelompok perlakuan
95% CI
Parameter Kelompok N Rata-rata±SD Min. Maks.
Batas bawah Batas atas
Apoptosis K 6 0,86±0,18 0,63 1.15 0,67 1.05
P1 6 1,06±0,31 0,74 1.57 0,73 1.39
P2 6 1,33±0,17 1.09 1.52 1.15 1.51
P3 6 1,54±0,34 1.04 2.03 1.19 1.89
Proliferasi K 6 89,65±1,18 88.22 91.35 88.41 90.88
P1 6 87,84±1,01 86.41 88.88 86.76 88.90
P2 6 86,77±1,75 84.39 89.33 84.94 88.61
P3 6 84,80±1,01 82.95 86.05 83.74 85.86

dengan PBS dingin. Sel disentrifugasi dengan kecepatan 1500

rpm pada suhu 4℃. Annexin V, Streptavidin dan propidium iodida
(PI; Annexin V Kit Deteksi Apoptosis Biotin e-Biosience kucing.
No.BMS500BT/300) ditambahkan ke dalam sel dan diinkubasi
selama 10 menit pada suhu 4℃ dalam gelap. Langkah terakhir
dilakukan dengan menambahkan 300 µL staining buffer pada
masing-masing wellplate. Analisis dilakukan dengan
menggunakan flowcytometry. Analisis statistikUji normalitas
masing-masing kelompok dilakukan dengan uji Kolmogorov-
Gambar 1 Apoptosis sel retinoblastoma diberikanPhysalis angulata
Smirnov dan uji homogenitas data dilakukan dengan uji Levene.
ekstrak daun.
Untuk menentukan apoptosis dan proliferasi sel retinoblastoma
antara masing-masing perlakuan digunakan analisis dengan one
way ANOVA. Untuk membandingkan data dari masing-masing
kelompok, digunakan uji Tukey yang menunjukkan hasil
signifikan jikaP<0,05. HASIL
Pengeluaran utamaDari hasil analisis statistik diketahui adanya
pengaruh dariPhysalis angulata ekstrak daun salam terhadap
apoptosis sel retinoblastoma dalam menurunkan jumlah sel
hidup pada kelompok perlakuan dengan dosis 25, 50, dan 100 µg/
mL. Semakin tinggi dosis, semakin tinggi efeknya dalam
Gambar 2 Proliferasi sel retinoblastoma diberikanPhysalis
meningkatkan apoptosis dan menghambat jumlah sel hidup pada
angulataekstrak daun.
sel retinoblastoma (Tabel 1).
Physalis angulataekstrak daun salam meningkatkan apoptosis sel Hasil SekunderHipotesis penelitian ini menyatakan bahwa:
retinoblastoma yang dilakukan pada uji one way ANOVA Physalis angulataekstrak daun cenderung memiliki efek pro-
menunjukkan bahwa nilai signifikansi untuk apoptosis adalah apoptosis dibandingkan dengan efek anti-proliferatifnya
0,001 (<0,05). Selain itu, uji Tukey mengidentifikasi kelompok karena tingkat apoptosis dua kali lipat. Sementara itu, tidak
perlakuan yang menandai perbedaan dosis pengobatan 50 µg/mL ada penurunan laju sel hidup saat proliferasi sel diukur.
(P=0,025), dan 100 µg/mL (P=0,01); sedangkan, dosis 25 µg/mL DISKUSI
menunjukkan perbedaan yang tidak signifikan (P=0,555; Gambar Beberapa penelitian sebelumnya telah membuktikan potensi
1). Physalis angulataekstrak daun salam melawan proliferasi sel antikanker dariPhysalis angulata[13-22]. Namun, studi tertentu yang
retinoblastoma yang dilakukan pada uji one way ANOVA berhubungan dengan manfaat sel kanker retinoblastoma masih
menunjukkan nilai signifikansi proliferasi adalah 0,000 (<0,05). terbatas. dalam penelitian ini, peneliti mempromosikan kebaruan
Selain itu, uji Tukey mengidentifikasi kelompok perlakuan yang dengan mempelajari efek dariPhysalis angulataekstrak daun pada
menandai perbedaan dosis pengobatan 50 µg/mL (P=0,004), dan apoptosis dan proliferasi sel retinoblastoma. Selain itu, mekanisme
100 µg/mL (P=0,00); sedangkan, dosis 25 µg/mL menunjukkan utama kerusakan kanker adalah kondisi tidak seimbang antara
perbedaan yang tidak signifikan (P=0,097; Gambar 2). apoptosis dan proliferasi.
Apoptosis adalah mekanisme kematian sel terprogram sementara sel
1404

proliferasi adalah proses di mana sel berkembang biak dengan
tumbuh dan membelah diri menjadi dua. Pada tumor terjadi proses
proliferasi yang berlebihan tanpa diimbangi dengan proses apoptosis.
Para peneliti melakukan perhitungan apoptosis dengan
menggunakan Annexin V, sebagai metode kuantitatif untuk
menghitung apoptosis, berdasarkan fenomena phosphatidylserine
yang dilepaskan selama apoptosis dan kemampuan Annexin V untuk
berikatan dengan phosphatidylserine berafinitas tinggi. Pada sel mati,
lapisan dalam terikat secara ekstrinsik dengan Annexin V karena
hilangnya integritas membran plasma, menyebabkan Annexin V juga
mengikat sel nekrotik. Selain itu, untuk membedakan antara sel mati
dan sel apoptosis, PI ditambahkan ke suspensi sel. Oleh karena itu, sel
mati dan sel apoptosis dibedakan dengan pelabelan ganda Annexin V
dan PI dan dianalisis dengan flow cytometry[8,23]. Dari analisis data
dalam penelitian ini diperoleh distribusi data yang normal dan uji
homogenitas varians data dengan uji Lavene ternyata signifikan
menandai varian data yang homogen. Karena varian datanya normal
dan homogen, maka digunakan uji Tukey untuk mengetahui
pengaruh yang berbeda dariPhysalis angulataekstrak daun sel kultur
retinoblastoma pada kelompok perlakuan. Analisis data dengan uji
Tukey menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05), seperti pada
kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dengan dosis 50 µg/mL (P
=0,025) dan dosis 100 µg/mL (P=0,01). Sementara itu, tidak ada
perbedaan yang signifikan (P=0,555) antara kelompok kontrol dan
kelompok perlakuan dengan dosis 25 µg/mL. Dengan demikian,
disimpulkan bahwa administrasi dariPhysalis angulataekstrak daun
dapat meningkatkan apoptosis pada sel retinoblastoma. Dari hasil
analisis, dosis 100 µg/mL mempengaruhi peningkatan apoptosis
paling besar dibandingkan dengan dosis lainnya. Hal ini sejalan
dengan penelitian Handayani[13]yang menyatakan bahwa ekstrak
etanol dariPhysalis angulatadapat menghambat pertumbuhan sel
kanker payudara dengan cara menurunkan ekspresi protein c-Myc,
meningkatkan protein p53 liar dan protein Apaf-1, menurunkan
jumlah mitosis, dan meningkatkan jumlah apoptosis. Hal ini sejalan
dengan penelitian yang dilakukan oleh Ooiet al[14]yang menegaskan
bahwaPhysalis angulata ekstrak dapat menginduksi apoptosis pada
sel kanker payudara manusia T-47D melalui jalur yang bergantung
pada c-myc-, p53-, dan caspase-3. Banyak metode dalam menghitung
proliferasi sel, seperti metode penghitungan langsung dengan
tryphan blue dan metode MTT assay. Penghitungan langsung adalah
metode sederhana untuk menilai integritas membran sel dengan
kemampuan kurang sensitif. Dasar pengujian enzimatik dalam MTT
assay dilakukan untuk mengukur kemampuan sel hidup berdasarkan
aktivitas mitokondria dari kultur sel. Pada penelitian ini, sel hidup
diukur dengan metode MTT assay karena beberapa keunggulan,
seperti: relatif lebih cepat, sensitif, dan lebih akurat jika dibandingkan
dengan metode penghitungan langsung. Di samping
Int J Oftalmol, Vol. 12, No. 9, Sep.18, 2019 www.ijo.cn
Telp: 8629-82245172 8629-82210956 Email: ijopress@163.com
Dengan kedua metode di atas, proliferasi sel dapat diukur dengan
memeriksa satu atau lebih penanda spesifik di dalam sel seperti Brdu,
Ki-67 atau PCNA.
Dari analisis data dalam penelitian ini diperoleh distribusi
data normal dan uji homogenitas varians dengan uji Levene
ditemukan signifikan menandai varian data yang homogen.
Karena varian datanya normal dan homogen, maka
digunakan uji Tukey untuk mengetahui perbedaan pengaruh
dariPhysalis angulataekstrak daun sel kultur retinoblastoma
pada kelompok perlakuan. Analisis data menggunakan uji
Tukey menunjukkan perbedaan yang signifikan (P<0,05),
seperti pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan
dengan dosis 50 µg/mL (P=0,004) dan dosis 100 µg/mL (P
=0,00). Sementara itu, tidak ada perbedaan yang signifikan (P
=0,097) antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan
dengan dosis 25 µg/mL. Disimpulkan bahwa administrasi dari
Physalis angulataekstrak daun berpotensi menurunkan
jumlah sel hidup dari sel retinoblastoma. Dari hasil analisis,
dosis 100 µg/mL mengurangi jumlah sel hidup paling besar
dibandingkan dengan dosis lainnya. Penurunan jumlah sel
hidup ini disebabkan oleh proliferasi sel yang terhambat, hal
ini sesuai dengan beberapa penelitian lain yang menyebutkan
hal tersebutPhysalis angulataekstrak dapat mengurangi
proliferasi sel[15-16]. Namun pada penelitian ini terdapat
kemungkinan berkurangnya jumlah sel hidup akibat
meningkatnya jumlah apoptosis. Penelitian oleh Darmaet al[15]
, melaporkan ituPhysalis angulatamemiliki aktivitas sitotoksik
pada sel kanker rahim melalui modulasi ekspresi p53 yang
menyebabkan berhentinya proliferasi sel. Dalam penelitian
yang dilakukan oleh Fitriaet al[16], disebutkan bahwa Physalis
angulataberperan dalam regulasi proliferasi, siklus sel dan
apoptosis sel kanker payudara MDA-MB 231. Physalin dan
withanolides terkandung di dalamnyaPhysalis angulata
ekstrak diduga memberikan mekanisme anti-kanker.
Berdasarkan penelitian, physalin dan withanolides memiliki
efek antiinflamasi, anti kanker, dan anti oksidan. Ada 6 jenis
Physalin diPhysalis angulataekstrak, seperti physalin A, B, D, F,
J dan N. Kandungan physalin tertinggi menghambat bunga
dan daun. Rengifo-Salgado dan Vargas-Arana[12]
telah ditemukan beberapa Withanolides baru, yaitu
physagulin A, B, C dan D yang diperoleh dari ekstrak metanol
Physalis angulatadaun dan batang segar.
Studi lain dilakukan oleh Boonsombatet al[17]disebutkan bahwa
physalins B, D dan F diisolasi dariPhysalis angulata menunjukkan
sitotoksisitas yang kuat terhadap berbagai garis sel tumor,
termasuk KB (Ca nasofaring), A431 (karsinoma epitel), HCT-8
(Duodenum Ca), PC-3 (Ca prostat), dan ZR751 (Ca payudara),
dengan konsentrasi efektif setengah maksimal (EC50) <4 mg/mL.
Dalam sebuah penelitian yang dilakukan oleh Hsuet al[18], physalin
B diisolasi dariPhysalis angulatamemiliki selektif
1405
MemengaruhiPhysalis angulatapada retinoblastoma
sitotoksisitas untuk sel melanoma. Physalin B dapat menginduksi
apoptosis sel melanoma melalui NOXA, caspase-3, dan jalur yang
dimediasi mitokondria. Wuet al[19]melaporkan bahwa physalin F
menginduksi apoptosis selmelaluijalur mitokondria yang
dimediasi oleh spesies oksigen reaktif (ROS), dan menekan
aktivasi NF-κB dalam sel kanker ginjal. Damu et al[20]pada studinya
menyebutkan bahwa evaluasi biologis withangulatins BH (1-7),
dan physalin minor baru, seperti physalin W, bersama dengan 14
senyawa yang teridentifikasi (withaphysanolide, withaphysalin A,
dihydrowithanolide E, physaprun A, physanolide A, dan physalins
B, D, F, G,
I, J, T, U, dan V) diisolasi dariPhysalis angulatatanaman, memberikan
aktivitas sitotoksik yang luas terhadap sel kanker manusia. Selain itu,
angulatin B, physalins D dan F menunjukkan aktivitas sitotoksik yang
kuat terhadap berbagai lini sel kanker manusia dengan EC50nilai
berkisar antara 0,2-1,6 mg/mL. Studi lain menyebutkan bahwa
withanolides physangulidines A, B dan C diisolasi dariPhysalis
angulatamenunjukkan aktivitas antiproliferatif yang signifikan
terhadap DU145 dalam sel kanker prostat[21]. Studi tentang Reyes-
Reyeset al[22]mendalilkan bahwa physangulidine A, salah satu jenis
withanolide diisolasi dari Physalis angulata, dapat mengganggu siklus
sel dan meningkatkan apoptosis pada sel kanker prostat. Kandungan
ini dianggap sebagai mekanisme anti kankerPhysalis angulatadengan
efeknya dalam meningkatkan apoptosis dan menurunkan proliferasi.
Mekanisme lain yang dicurigai pada efekPhysalis angulataekstrak
sebagai agen pro-apoptosis dan anti-proliferasi adalah kandungan
dariPhysalis angulataekstrak yang memiliki pengaruh pada
siklooksigenase. Dalam sebuah penelitian yang dilakukan oleh Kalsum
et al[24], Physalis angulataekstrak berpengaruh besar terhadap
penurunan kadar siklooksigenase (COX)-1, COX-2 dan PLA-2. Dalam
sebuah penelitian oleh Sutrisnaet al[25], Telah ditemukan bahwa
Physalis angulata ekstrak dapat menurunkan aktivitas COX-2 pada sel
kanker payudara (MCF-7).
Namun, penelitian tentang ekspresi COX-2 pada retinoblastoma
memberikan kontroversi. Dalam sebuah penelitian yang dilakukan
oleh Wanget al[26]tentang ekspresi COX-2 pada mata manusia normal
dan pola ekspresinya pada tumor mata yang dipilih termasuk
retinoblastoma, ditemukan bahwa ada ekspresi COX-2 yang lemah
hingga sedang. Hasil tersebut berbeda dengan penelitian yang
dilakukan oleh Suoza Filhoet al[27], yang menemukan overekspresi
COX-2 pada retinoblastoma manusia yang berdiferensiasi dan tidak
berdiferensiasi. Selain itu, dari penelitian tersebut ditemukan
proliferasi sel retinoblastoma yang dihambat oleh inhibitor COX-2.
Wanget al[26]pada studinya menyebutkan bahwa memfokuskan
retinoblastoma eksofitik di lapisan luar retina, pewarnaan COX-2 yang
lemah hingga sedang ditunjukkan pada sel tumor. Menariknya,
segmen dalam fotoreseptor, yang merupakan bagian dari lapisan luar
retina, telah menunjukkan ekspresi konstitutif yang kuat dari COX-2,
meskipun COX-2 tidak.
1406
diekspresikan dalam lapisan nuklir luar di retina manusia normal.
Peningkatan tumor COX-2 dikaitkan dengan peningkatan
angiogenesis, invasi tumor, dan peningkatan resistensi sel tumor
terhadap apoptosis. Dengan menghambat COX-2, dapat
meningkatkan aktivitas p53, yang pada gilirannya mempromosikan
apoptosis, penghentian siklus sel atau penuaan pada sel yang rusak,
dan menghambat proliferasi[28]. Dengan demikian, ada kemungkinan
bahwa efek dariPhysalis angulata pemberian melalui jalur COX juga
berperan dalam mengurangi proliferatif dan mempromosikan
apoptosis dalam penelitian ini. Dari hasil penelitian ini, peneliti
berasumsi demikian Physalis angulataekstrak daun lebih cenderung
memiliki efek pro apoptosis daripada anti proliferasi. Karena itu,
Physalis angulataekstrak daun lebih cocok sebagai terapi adjuvan
kemoradiasi yang bersifat antiproliferasi pada penggunaan
selanjutnya. Namun, data yang akurat masih terbatas karena perlu
penelitian lebih lanjut dengan kualitas sel yang lebih baik dan masa
inkubasi yang lebih lama (48 atau 72 jam). Selain itu untuk
mendapatkan data proliferasi yang lebih baik, disarankan untuk
melakukan sinkronisasi sel selama 48 jam sebelum dilakukan
pengukuran proliferasi. Hasil dari penelitian ini diharapkan dapat
menjadi dasar penelitian selanjutnya untuk mengetahui potensi dari
Physalis angulatasebagai agen antikanker retinoblastoma.
Keterbatasan penelitian ini terletak pada jumlah
kepadatan sel yang sangat kecil, karena pertumbuhan sel
retinoblastoma yang lebih lambat. Ada beberapa
kemungkinan penyebab seperti: 1) sel yang digunakan
berada pada pasase keempat (tidak optimal) karena
ketidakstabilan genetik dan pergeseran fenotipe selama
proses kultur sebelumnya; 2) terjadi kesalahan pada
proses penyimpanan atau perlakuan sebelumnya, pada
nitrogen cair, 3) jumlah sel yang dibekukan tidak
mencukupi pada pembibitan sebelumnya. Dengan
demikian, saat proses pencairan dilakukan, jumlah sel
yang diperoleh tidak mencukupi meskipun prosesnya 2
minggu (waktu paruh sel retinoblastoma adalah 40 jam);
4) kurangnya rentang dosis yang digunakan dalam
penelitian ini; Karena itu, Physalis angulataekstrak daun.
Selain itu, struktur kimia dariPhysalis angulatadaun tidak
dipisahkan secara khusus karena kurangnya fasilitas yang
tersedia, waktu dan biaya yang mahal. Kedepannya,
penelitian selanjutnya disarankan untuk memisahkan
struktur kimiawi objek dan pengaruhnya terhadap
apoptosis dan proliferasi pada sel normal.
Penelitian selanjutnya juga disarankan untuk melakukan pemeriksaan
ulang dengan kondisi yang lebih baik dan kualitas sel yang lebih baik.
Penelitian lebih lanjut tentang efek dariPhysalis angulataterhadap
proliferasi ekstrak daun menggunakan Ki-67, BrdU, atau metode
pengukuran lain yang lebih sensitif dan spesifik juga disarankan untuk
melakukan sinkronisasi 48 jam sebelum pengukuran proliferasi untuk
mendapatkan angka proliferasi yang lebih akurat.

Selain itu, penelitian lebih lanjut disarankan untuk mendalami zat aktif
dalamPhysalis angulataekstrak daun secara terpisah (dengan
menggunakan titrasi periodik untuk mengisolasi zat aktif) untuk
mengetahui pengaruh langsung terhadap kultur sel retinoblastoma.
Akhirnya dilakukan penelitian lebih lanjut untuk menentukan dosis efektif
dan dosis toksik serta pengaruhnyaPhysalis angulataekstrak daun pada
kultur sel normal sangat dianjurkan.
UCAPAN TERIMA KASIH
Benturan Kepentingan: Chairissy MD,Tidak ada;Wulandari LR, Tidak
ada;Sujuti H,Tidak ada.
REFERENSI
1 Dimaras H, Corson TW, Cobrinik D, White A, Zhao JY, Munier FL,
Abramson DH, Shields CL, Chantada GL, Njuguna F, Gallie BL.
Retinoblastoma.Nat Rev Dis Primer2015; 1:15021.
2 Rodriguez-Galindo C, Orbach DB, VanderVeen D. Retinoblastoma. Klinik
Pediatr Am Utara2015;62(1):201-223.
3 Vi l legas VM, Hess DJ , Wi ldner A, Gold AS, Murray TG.
Retinoblastoma.Curr Opin Oftalmol2013;24(6):581-588.
4 Dyson NJ. RB1: prototipe penekan tumor dan teka-teki.Gen Dev
2016;30(13):1492-1502.
5 Subramanian M, Jones MF, Lal A. RNA non-coding panjang tertanam
di jalur Rb dan p53.Kanker (Basel)2013;5(4):1655-1675. 6 Dommering
CJ, Mol BM, Moll AC, Burton M, Cloos J, Dorsman JC, Meijers-Heijboer
H, van der Hout AH. Spektrum mutasi RB1 dalam kohort pasien
retinoblastoma nasional yang komprehensif.J Med Genet
2014;51(6):366-374.
7 Chen JD. Penghentian siklus sel dan fungsi apoptosis p53 dalam inisiasi dan
perkembangan tumor.Cold Spring Harb Perspektif Med2016;6(3):a026104. 8
Indovina P, Pentimalli F, Casini N, Vocca I, Giordano A. RB1 peran ganda dalam
proliferasi dan apoptosis: kontrol nasib sel dan implikasi untuk terapi kanker.
Oncotarget2015;6(20):17873-17890.
9 Turhan S. Harapan baru dalam pengobatan retinoblastoma.Int J Hematol Oncol
2014;24(3):202-207.
10 Pascual-Pasto G, Bazan-Peregrino M, Olaciregui NG,et al.
Penargetan terapeutik jalur RB1 pada retinoblastoma dengan VCN
adenovirus onkolitik-01.Sci Transl Med2019;11(476):eaat9321. 11
Kusumaningtyas R, Laily N, Limandha P. Potensi ciplukan (Physalis
angulataL.) sebagai sumber bahan fungsional.Procedia Chem
2015;14:367-372.
12 Rengifo-Salgado E, Vargas-Arana G. Physalis angulata L (Bolsa
Mullaca): tinjauan penggunaan tradisional, kimia dan farmakologi.
Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y
Aromaticas2013;12(5):431-445.
13 Handayani. Pengaruh Ekstrak Etanol Physalis Minima Linn terhadap
Ekspresi Protein C-Myc, Wild Type P53, Apaf-1, Mitosis dan Apoptosis Sel
Kanker Payudara; Penelitian Eksperimental pada Tikus Wistar. Universitas
Airlangga. 2012.
14 Ooi KL, Tengku Muhammad TS, Lim CH, Sulaiman SF. Efek apoptosis dari
Physalis minimaEkstrak L. kloroform dalam sel T-47D karsinoma payudara
manusia dimediasi oleh jalur yang bergantung pada c-myc-, p53-, dan
caspase-3.Integr Kanker Ada2010;9(1):73-83.
Int J Oftalmol, Vol. 12, No. 9, Sep.18, 2019 www.ijo.cn
Telp: 8629-82245172 8629-82210956 Email: ijopress@163.com
15 Darma AP, Ashari RA, Nugroho PA, Monikawati A, Fauzi IA,
Meiyanto AH. Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol Ciplukan Herba (
Physalis angulata L.)Pada sel kanker serviks HeLa melalui
modulasi ekspresi protein p53.Jurnal Saintifika2010;2(2):1-8.
16 Fitria M, Armandari I, Septhea DB, Ikawati AHM, Meiyanto E.
Ekstrak etanol dalam (Physalis angulata L.)Efek sitotoksik dan
menginduksi apoptosis pada MCF-7.Bionatura-Jurnal Kehidupan dan
Ilmu Fisika 2011;13(2):101-107.
17 Boonsombat J, Chawengrum P, Mahidol C, Kittakoop P, Ruchirawat S,
Thongnest S. Steroid physalin 22, 26-seco baru dariPhysalis angulata. Nat
Prod Res2019:1-8.
18 Hsu CC, Wu YC, Farh L, Du YC, Tseng WK, Wu CC, Chang FR.
Physalin B dariPhysalis angulatamemicu jalur apoptosis terkait NOXA
dari sel melanoma A375 manusia.Food Chem Toxicol2012;50
(3-4):619-624.
19 Wu SY, Leu YL, Chang YL, Wu TS, Kuo PC, Liao YR, Teng CM, Pan SL. Physalin F
menginduksi apoptosis sel dalam sel karsinoma ginjal manusia dengan
menargetkan NF-kappaB dan menghasilkan spesies oksigen reaktif.PLoS Satu
2012;7(7):e40727.
20 Damu AG, Kuo PC, Su CR, Kuo TH, Chen TH, Bastow KF, Lee KH,
Wu TS. Struktur, dan hubungan aktivitas struktur-sitotoksik
withanolides dan physalins dari Physalis angulata.J Nat Prod
2007;70(7):1146–1152
21 Lim TK.Kosmos belerang. Tanaman Obat Dan Non Obat Yang Dapat
Dimakan. Dordrecht: Springer Belanda, 2013:287-290.
22 Reyes-Reyes EM, Jin Z, Vaisberg AJ, Hammond GB, Bates PJ. Physangulidine A,
sebuah withanolide dariPhysalis angulata, mengganggu siklus sel dan
menginduksi kematian sel dengan apoptosis pada sel kanker prostat.J Nat Prod
2013;76(1):2-7.
23 Chantika TF. Pengaruh Sel Fibroblas Normal dan Kanker Terhadap
Apoptosis Sel Punca Kanker Payudara dengan Uji Annexin V dan Sitokrom
C. Universitas Indonesia. 2012.
24 Kalsum U, Ali M, Widodo M, Kalim H. Pengaruh ekstrak metanol Physalis
minimapada radang lambung dan pembentukan tukak lambung.J Exp
Integr Med2013;3(4):331.
25 Sutrisna EM, Indwianiastuti, Haryadi. EKSTRAK ETANOL physalis
angulata linn menghambat aktivitas COX-2 pada sel MCF-7in vitro.
Konferensi Internasional: Penelitian dan Penerapan Pengobatan Pelengkap
dan Alternatif Tradisional dalam Perawatan Kesehatan (TCAM)
2012.Surakarta Indonesia. 26 Ekspresi Wang JM, Wu YZ, Heegaard S, Kolko
M. Cyclooxygenase-2 pada mata manusia normal dan pola ekspresinya
pada tumor mata terpilih.Acta oftalmol2011;89(7):681-685.
27 Souza Filho JP, Martins MC, Correa ZM, Odashiro AN, Antecka
E, Coutinho AB, Macedo CR, Vianna RN, Burnier MN Jr. Ekspresi
siklooksigenase 2 pada retinoblastoma: mata enukleasi primer
dan enukleasi setelah perawatan konservatif.Am J Ophthalmol
2006;142(4):625-631.
28 Schetter AJ, Heegaard NH, Harris CC. Peradangan dan kanker:
jalinan jalur microRNA, radikal bebas, sitokin dan p53.
Karsinogenesis2010;31(1):37-49.
1407