Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305

www.elsevier.com/locate/ejphar

Efek vaskular dariMangifera indicaEkstrak L. (Vimang)

Amada E. BeltranA, Yolanda AlvarezA, Fabiano E. XavierA, Raquel HernanzA, Janet RodriguezB,
Alberto J. NúñezB, Marı́a J. AlonsoA, Mercedes SalaicesA,*
ADepto. de Farmacologı́a y Terapéutica, Facultad de Medicina, Universidad Autónoma de Madrid, C/ Arzobispo Morcillo 4, Madrid 28029, Spanyol
BCentro de Quı́mica Farmacéutica, PO Box. 16042, Atabey, Playa, Ciudad de la Habana, Kuba

Diterima 1 Juli 2004; diterima 13 Juli 2004

Abstrak

Efek dariMangiferia indicaEkstrak L. (Vimang), dan mangiferin (a C-glucosylxanthone of Vimang) pada isoform inducible dari
siklooksigenase (siklooksigenase-2) dan ekspresi nitric oxide synthase (iNOS) dan pada respon vasokonstriktor diselidiki dalam sel otot polos
pembuluh darah dan resistensi mesenterika arteri, masing-masing, dari tikus Wistar Kyoto (WKY) dan hipertensi spontan (SHR). Vimang (0,5–
0,1 mg/ml) dan mangiferin (0,025 mg/ml) menghambat interleukin-1H (Ekspresi iNOS yang diinduksi 1 ng/ml lebih banyak di SHR daripada di
WKY, dan ekspresi siklooksigenase-2 lebih banyak di WKY daripada di SHR. Vimang (0,25–1 mg/ml) mengurangi noradrenalin (0,1–30 AM)- dan
U46619 (1 nM–30AM)- tetapi bukan kontraksi yang diinduksi KCl (15–70 mM). Mangiferin (0,05 mg/ml) tidak mempengaruhi kontraksi yang
diinduksi noradrenalin. Sebagai kesimpulan, aksi antiinflamasi Vimang akan terkait dengan penghambatan ekspresi iNOS dan
siklooksigenase-2, tetapi tidak dengan efeknya pada respons vasokonstriktor. Perubahan regulasi kedua enzim pada hipertensi akan
menjelaskan perbedaan yang diamati pada efek Vimang.
D2004 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.

Kata kunci:Vimang; Mangiferin; iNOS; Siklooksigenase-2; Sel otot polos pembuluh darah; Arteri resistensi mesenterika, tikus

1. Perkenalan prostanoid, disintesis oleh isoform yang diinduksi dari

Vimang adalah ekstrak air yang diperoleh dari kulit
batangMangifera indicaL. (Anacardiaceae). Di Kuba, ekstrak
ini digunakan untuk meningkatkan kualitas hidup pasien
yang menderita stres yang meningkat (Guevara et al., 1998).
Ekstrak mengandung campuran komponen yang
ditentukan dan distandarisasi seperti polifenol, terpenoid,
steroid, asam lemak dan unsur mikro (Núñez-Selles et al.,
2002), mangiferin menjadi polifenol utama yang ada.
Komponen ini telah dilaporkan memiliki sifat sitotoksik,
antineoplastik (Muanza et al., 1995; Guha et al., 1996),
antioksidan (Born et al., 1996; Leiro et al., 2003), dan
aktivitas antiinflamasi (Garrido et al., 2001).
Proses peradangan melibatkan spektrum mediator
kimia yang luas, termasuk oksida nitrat (NO) dan
* Penulis yang sesuai. Tel.: +34 91 497 53 99; faks: +34 91 497 53 02.
Alamat email:mercedes.salaices@uam.es (M. Salaices).
0014-2999/$ - lihat materi depanD2004 Elsevier BV Semua hak dilindungi undang-undang.
doi:10.1016/j.ejphar.2004.07.073
NO sintase (iNOS) dan siklooksigenase
(siklooksigenase-2). Peristiwa vaskular yang terkait
dengan reaksi inflamasi meliputi dilatasi arteriol kecil,
yang mengakibatkan peningkatan aliran darah dan
peningkatan permeabilitas. Dalam pembuluh darah
yang sehat, NO dan prostanoid sebagian besar dibentuk
oleh isoform konstitutif NOS dan siklooksigenase. Baru-
baru ini, beberapa penulis menemukan bahwa otot
polos vaskular mengekspresikan siklooksigenase, dan
menghasilkan prostanoid yang dapat terlibat dalam
modulasi respons vaskular.Swierkosz et al., 1995; Cirino
et al., 1996; Briones et al., 2002b).
Hipertensi dianggap sebagai penyakit inflamasi kronis
(Virdis dan Schiffrin, 2003) dengan peningkatan kadar
sitokin proinflamasi darah (Wu et al., 1994; Chou et al.,
1998). Selain itu, hipertensi eksperimental telah
dikaitkan dengan perubahan fungsi dan ekspresi
siklooksigenase-2 (Henrion et al., 1997; Garcı́a-Cohen et
al., 2000, Briones et al., 2002b) dan berbagai isoform dari
298 AE Beltran dkk. / Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305
NOS (Wu et al., 1994; Chou et al., 1998, Pacheco et al.,
2000; Briones et al., 2002a).
Dalam penelitian ini, kami menyelidiki efek Vimang
dan mangiferin (C-glucosylxanthone hadir dalam
ekstrak) pada ekspresi siklooksigenase-2 dan iNOS
dalam sel otot polos pembuluh darah dari arteri
mesenterika dari normotensive, Wistar Kyoto (WKY) dan
hipertensi spontan ( SHR) tikus. Selain itu, efek pada
respon vasokonstriktor yang diinduksi oleh noradrenalin
di arteri resistensi mesenterika dari kedua strain
dievaluasi.
2. Bahan dan metode
Tikus WKY dan SHR jantan berumur enam bulan diperoleh
dari koloni yang dipelihara di Animal Quarters of the BFakultas
KedokteranQdariBUniversidad Autonoma de MadridQ.Tekanan
darah sistolik dicatat dengan sphygmomanometer otomatis
menggunakan perangkat metode manset ekor yang diletakkan
di ekor tikus yang telah dilatih sebelumnya, yang telah
menghabiskan 1 jam di ruang hangat pada suhu 378C, dan
ditahan. Pengukuran tekanan darah diulang setidaknya tiga
kali, dan rata-rata tekanan darah sistolik dihitung: 146F4 untuk
WKY,n=6, dan 220F5 untuk SHR, n=6 (berartiFSEM, dalam mm
Hg;PB0,05). Untuk percobaan, tikus dibunuh dengan cara
dipenggal. Tempat tidur vaskular mesenterika telah dihapus
dan ditempatkan di tempat dingin (48C) Larutan Krebs–
Henseleit (KHS) digelembungkan dengan O2 95%.2–5% CO22
campuran. Arteri mesenterika superior dan cabang
keempatnya masing-masing dibedah untuk kultur sel dan
percobaan reaktivitas.
2.1. Budaya sel
Kultur primer sel otot polos pembuluh darah tikus
diperoleh sesuai dengan metode yang dijelaskan di tempat
lain (Redondo et al., 1995). Secara singkat, arteri
mesenterika dari empat WKY atau SHR dipotong menjadi
potongan-potongan kecil, ditempatkan di media Eagle
Dulbecco yang dimodifikasi (DMEM, Gibco, Grand Island,
NY, USA) dengan albumin serum sapi 0,1% (Sigma, St. Louis,
MO, USA) dan 4 mg/ml kolagenase (tipe II, Sigma), dan
diinkubasi selama 90 menit pada 378C dalam atmosfer CO
yang dilembabkan2(5%) dan udara (95%). Suspensi sel yang
dihasilkan dicuci tiga kali dengan sentrifugasi dan kemudian
disuspensikan kembali dalam DMEM ditambah dengan 10%
fetal calf serum (Gibco), 100 U/ml penisilin, 100Ag/ml
streptomisin, dan 2,5Ag / ml amfoterisin B (Sigma). Sel
dicirikan sebagai otot polos dengan pewarnaan
imunositokimia dengan antibodi monoklonal spesifik otot
polosA-aktin. Sel diinkubasi selama 24 jam dengan atau
tanpa 1 ng/ml interleukin-1Hdengan ada dan tidak adanya
Vimang (0,1, 0,2 dan 0,5 mg/ml) atau mangiferin (0,025 mg/
ml). Kultur dari garis yang diperlakukan secara identik
antara bagian 4 dan 5 digunakan.
2.2. analisis noda barat
Setelah perawatan yang tepat, sel otot polos pembuluh
darah dicuci dua kali dalam buffer dingin (25 mmol/l Tris-
HCl, 1 mmol/l EDTA, pH 7,4). Sel-sel dikerok dan dilisiskan
dalam buffer homogenisasi berikut: 1 mM sodium vanadat,
1% sodium dodecyl sulfate (SDS), 10 mM Tris-HCl, pH 7,4.
Protein dari seluruh sel lisat (12Ag) dipisahkan pada gel
SDS-poliakrilamid 7,5% dan dipindahkan secara
elektroforesis ke membran polivinilidena difluorida dalam
buffer transfer Tris-Glycine dengan metanol 20% dalam Sel
Trans-Blot Bio-Rad (Laboratorium Bio-Rad, Hercules, CA,
USA) . Membran diblokir selama 90 menit pada suhu kamar
dengan 5% susu kering tanpa lemak dalam salin buffer Tris
(dalam mM): 10 Tris, 100 NaCl, pH 7,5 yang mengandung
0,1% Tween 20, dan diinkubasi dengan antibodi monoklonal
tikus anti-iNOS (1:10.000; Transduction Laboratories,
Lexington, UK), antibodi poliklonal kelinci anti-
siklooksigenase-2 (1:250; Cayman Chemical, Ann Arbor, MI,
USA) atau antibodi anti-siklooksigenase-1 (1:100; Santa Cruz
Bioteknologi) selama 75 menit pada suhu kamar. Selaput
dicuci bersih dan diinkubasi dengan lobak peroksidase-
coupled anti-tikus (1:2, 000; Laboratorium Transduksi) atau
antibodi imunoglobulin G anti-kelinci (1:2.000; Laboratorium
Transduksi) selama 1 jam. Setelah pencucian menyeluruh,
protein yang terikat divisualisasikan dengan peningkatan
chemiluminescence (ECL) (Amersham International, Little
Chalfton, Jerman) dan paparan film Kodak X-OMAT. Sinyal
pada imunoblot dikuantifikasi dengan menggunakan
program komputer (NIH Image V1.56). Membran yang sama
digunakan untuk menentukanA-ekspresi aktin
menggunakan antibodi monoklonal tikus (1:3.000.000,
Boehringer Mannheim, Mannheim, Jerman) untuk
mengoreksi jumlah protein yang dimuat per jalur.
Homogenat makrofag tikus yang dirangsang digunakan
sebagai kontrol positif untuk iNOS dan siklooksigenase-2 dan
trombosit tikus untuk siklooksigenenase-1.
2.3. Eksperimen reaktivitas
Segmen cincin, panjang 2 mm, dari arteri resistensi
mesenterika dipasang di miografi ruang ganda kapal
kecil untuk pengukuran ketegangan isometrik. Dua
kabel tungsten (40Am diameter) dimasukkan melalui
lumen segmen dan dipasang sesuai dengan metode
yang dijelaskan olehMulvany dan Halpern (1977).
Setelah periode kesetimbangan 30 menit dalam KHS
teroksigenasi pada suhu 378C dan pH = 7,4, segmen
direntangkan ke diameter lumen optimal untuk pengembangan
tegangan aktif. Ini ditentukan berdasarkan rasio tegangan
dinding lingkar dalam segmen dengan mengatur lingkar
dalamnya,L0, hingga 90% dari apa yang akan dimiliki pembuluh
darah jika terkena tegangan pasif yang setara dengan yang
dihasilkan oleh tekanan transmural 100 mm Hg (Mulvany
 AE Beltran dkk. / Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305 299

dan Halpern, 1977). Diameter lumen efektif, dihitung
sebagaiL0/P,lebih rendah (PB0,05) di segmen dari
hipertensi (235,0F4.2AM,n=12) daripada tikus
normotensif (256.0F5.0AM,n=11).
Setelah itu, segmen dicuci tiga kali dengan KHS dan
dibiarkan seimbang selama 30 menit; kontraktilitas segmen
kemudian diuji dengan paparan awal K-tinggi+larutan (120
mM K+-KHS yang identik dengan KHS kecuali NaCl diganti
dengan KCl dengan basis molar yang sama).
Kehadiran endotelium ditentukan oleh kemampuan 10A
M asetilkolin untuk menginduksi relaksasi setidaknya 60%
dan 30% dari kontraksi yang diinduksi oleh noradrenalin
pada konsentrasi yang menghasilkan hampir 50% dari
kontraksi maksimum yang diinduksi oleh 75 mM KCl di
segmen WKY dan SHR, masing-masing (Briones et al., 2000).
Setelah ada atau tidak adanya endotelium ditentukan, kurva
konsentrasi-respons untuk noradrenalin (0,1-30 AM),
U46619 (1 nM–30AM) atau KCl (7,5–70 mM) dilakukan
dengan penambahan kumulatifnya). Dua kurva berurutan
dilakukan pada interval 1 jam; kurva untuk noradrenalin
dan U46619 serupa, sedangkan kurva kedua untuk KCl lebih
besar dari yang pertama. Untuk menyelidiki efek Vimang
dan mangiferin pada respons vasokonstriktor, percobaan
berpasangan (noradrenalin atau U46619) atau tidak
berpasangan (KCl) dilakukan dan 0,25, 0,5 atau 1 mg/ml
Vimang atau 0,05 mg/ml mangiferin ditambahkan 30 menit
sebelum kurva konsentrasi-respon kedua terhadap
noradrenalin, U46619 atau KCl.
Dalam beberapa eksperimen, efek Vimang (0,25–1 mg/ml) pada
segmen yang dikontrak sebelumnya dengan noradrenalin pada
konsentrasi yang menghasilkan hampir 50% dari kontraksi
maksimum yang diinduksi oleh 75 mM KCl dianalisis.
Pada akhir percobaan, segmen dicuci dan KHS
diganti dengan 120 mM K+-KHS; setelah kontraksi
stabil, papaverin 0,1 mM ditambahkan. Respon
maksimum arteri (2.1F0,1 dan 2,8F0,1 mN/mm untuk
WKY dan SHR masing-masing,n=11–
12,PB0,05) ditentukan dari perbedaan antara nada yang
dihasilkan oleh 120 mM K pertama+administrasi dan yang
dihasilkan oleh 0,1 mM papaverine.
2.4. Analisis data dan statistik
Respons vasokonstriktor dihitung sebagai tegangan dinding
aktif (dihitung sebagai peningkatan kekuatan dinding pembuluh
darah di atas level istirahat dibagi dua kali panjang segmen
pembuluh darah) dan dinyatakan sebagai persentase dari respons
maksimum. Respon maksimum (emaks) dan logaritma negatif dari
konsentrasi noradrenalin yang menghasilkan 50% dari respon
maksimum (pD2nilai), dihitung dari masing-masing kurva
konsentrasi-respons individu menggunakan Perangkat Lunak
GraphPad Prism (San Diego, CA, USA).

Gambar 1. Efek inkubasi dengan Vimang atau mangiferin pada ekspresi protein iNOS dalam sel otot polos pembuluh darah dari tikus normotensif (WKY)
dan hipertensi (SHR) tanpa adanya (kontrol) atau adanya interleukin (IL) -1H (n=3–4). Hasil (berartiFSEM) dinyatakan sebagai rasio antara sinyal untuk
protein iNOS dan sinyal untukA-aktin. *PB0,05 vs kontrol,+PB0,05 vs IL-1H.Bercak representatif juga ditampilkan.
300 AE Beltran dkk. / Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305

Untuk membandingkan efek obat yang berbeda
pada respon noradrenalin atau U46619 di arteri dari
kedua strain, beberapa hasil dinyatakan sebagaiB
perbedaan area di bawah kurva konsentrasi-respons
Q (dAUC) untuk noradrenalin, dalam situasi kontrol
dan eksperimental. AUC dihitung dari plot kurva
respons konsentrasi individu; perbedaan dinyatakan
sebagai persentase AUC dari situasi kontrol.
Data ekspresi protein dinyatakan sebagai rasio antara
sinyal pada imunoblot yang sesuai dengan protein yang
dipelajari danA-sinyal aktin.
Semua nilai dinyatakan sebagai saranaFSEM dari jumlah
tikus yang ditunjukkan dalam setiap kasus. Perbedaan yang
signifikan secara statistik antara rata-rata dihitung dengan
Student yang tidak berpasanganT-tes. Perbedaan antara
kurva konsentrasi-respon dianalisis dengan analisis varians
dua arah (ANOVA) diikuti oleh BonferroniT-tes. Nilai
probabilitas kurang dari 5% (PB0,05) dianggap signifikan.
2.5. Obat-obatan dan bahan kimia
Kandungan KHS (mM): 115 NaCl, 25 NaHCO3, 4,7
KCl, 1,2 MgSO4D7H2O, 2,5 CaCl2, 1,2 KH2PO4, 11,1
glukosa dan 0,01 Na2EDTA. Obat yang digunakan
adalah: noradrenalin hidroklorida, asetilkolin klorida,
papaverin hidroklorida, natrium metavanadat,
dithiothreitol, interleukin-1Htikus rekombinan
(Sigma); Tween 20, Tris, SDS dan akrilamida
(Laboratorium Bio-Rad), U46619 (Calbiochem-
Novabiochem, Bad Soden, Jerman), metanol (Merck
KGaA, Darmstadt, Jerman). Vimang dan mangiferin
dipasok oleh Pusat Kimia Farmasi (Kuba). Larutan
obat dibuat dalam air suling kecuali noradrenalin,
yang dilarutkan dalam larutan garam (0,9%-NaCl)-
asam askorbat (0,01% b/v). Larutan stok disimpan
pada -208C, dan pengenceran yang sesuai dibuat
pada hari percobaan.

Gambar 2. (A) Efek Vimang atau mangiferin pada ekspresi protein siklooksigenase-2 dalam sel otot polos vaskular dari tikus normotensif (WKY) dan
hipertensi (SHR) tanpa adanya (kontrol) atau adanya interleukin (IL) -1H (n=4). Hasil (berartiFSEM) dinyatakan sebagai rasio antara sinyal untuk protein
siklooksigenase-2 (COX-2) dan sinyal untukA-aktin. *PB0,05 vs kontrol,+PB0,05 vs IL-1H.Bercak representatif juga ditampilkan. ( B ) Blot representatif yang
menunjukkan efek Vimang (5 mg / ml) pada ekspresi protein siklooksigenase-1 (COX-1) dalam sel otot polos pembuluh darah dari tikus normotensif
(WKY) dan hipertensi (SHR) (n=3).
 AE Beltran dkk. / Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305 301

3. Hasil
3.1. Efek Vimang dan mangiferin pada ekspresi iNOS
dan siklooksigenase-2
Ekspresi iNOS tidak terdeteksi pada sel otot polos pembuluh
darah yang tidak distimulasi dari kedua strain dengan tidak
adanya atau adanya 0,5 mg/ml Vimang atau 0,025 mg/ml
mangiferin (Gambar 1). Inkubasi sel dengan interleukin-1H (1
ng/ml) selama 24 jam menyebabkan peningkatan serupa pada
kadar protein iNOS dalam sel otot polos pembuluh darah dari
kedua strain. Peningkatan ini dihambat oleh Vimang (0,5, 0,2
dan 0,1 mg/ml) dengan cara yang tergantung konsentrasi dan
oleh mangiferin (0,025 mg/ml). Efek penghambatan Vimang
pada ekspresi protein iNOS lebih besar pada pembuluh darah
sel otot polos dari SHR daripada dari WKY (Gambar 1). Dengan
demikian, 0,5 dan 0,2 mg/ml menghapuskan ekspresi iNOS
dalam sel otot polos pembuluh darah dari SHR sedangkan pada
WKY, ekspresi iNOS hanya dihapuskan pada 0,5 mg/ml.
Ekspresi siklooksigenase-2 basal terdeteksi dalam sel
otot polos vaskular dari WKY dan SHR; penambahan 0,5 mg/
ml Vimang atau 0,025 mg/ml mangiferin saja ke media tidak
mengubah ekspresi siklooksigenase-2 (Gambar 2). Inkubasi
sel dengan interleukin-1H (1 ng/ml) selama 24 jam
meningkatkan kadar protein siklooksigenase-2 dalam sel
otot polos pembuluh darah dari kedua strain. Pada sel otot
polos pembuluh darah dari WKY, peningkatan ini dihambat
oleh Vimang (0,5, 0,2 dan 0,1 mg/ml) dan oleh mangiferin
(0,025 mg/ml). Dalam sel otot polos vaskular dari tikus
hipertensi, peningkatan siklooksigenase-2

Gambar 3. Efek Vimang pada kurva konsentrasi-respons untuk noradrenalin di segmen arteri mesenterika dari normotensif (WKY,n=6–13) dan hipertensi
(SHR,n=9–11) tikus. Hasil (berartiFSEM) dinyatakan sebagai persentase dari respon maksimum. *PB0,05 vs kontrol. Sisipan menunjukkan perbedaan area
di bawah kurva konsentrasi-respons (dAUC) untuk noradrenalin tanpa adanya (kontrol) dan keberadaan Vimang di segmen arteri mesenterika dari tikus
WKY dan SHR. Hasil (berartiFSEM) dinyatakan sebagai persentase AUC dalam situasi kontrol. *PB0,05 vs WKY.
302 AE Beltran dkk. / Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305

(Emaks: 147,8F11,5% dan 144,3F6,6% dari respon maksimal; pD2:

Gambar 4. Efek mangiferin pada kurva konsentrasi-respons untuk
noradrenalin di segmen arteri mesenterika dari normotensif (WKY,
n=4) dan hipertensi (SHR,n=4) tikus. Hasil (berartiFSEM) dinyatakan
sebagai persentase dari respon maksimum.
ekspresi dihambat oleh mangiferin (0,025 mg/ml) dan oleh 0,5
dan 0,2 mg/ml, tetapi tidak oleh 0,1 mg/ml, dari Vimang.
Vimang (0,5 mg/ml) tidak mengubah ekspresi protein
5.79F0,06 dan 5,78F0,05 untuk WKY dan SHR, masing-masing,n=
10–14,PN0,05). Inkubasi dengan Vimang (1, 0,5 dan 0,25 mg/ml)
menginduksi pengurangan kontraksi yang ditimbulkan oleh
noradrenalin, baik di WKY maupun SHR (Gambar 3). Efek
penghambatan ini, yang serupa untuk konsentrasi Vimang
berbeda yang digunakan, lebih besar di arteri dari WKY
daripada di SHR, seperti yang dapat disimpulkan dari
perbandingan dAUC (Gambar 3). Berbeda dengan yang
ditemukan pada Vimang, mangiferin (0,05 mg/ml) tidak
mengubah kontraksi noradrenalin di arteri dari kedua strain (
Gambar 4). Efek Vimang pada kontraksi yang diinduksi
noradrenalin bukanlah efek toksik karena respons NA dapat
direproduksi setelah mencuci Vimang (hasil tidak ditampilkan).
Di sisi lain, pada segmen yang dikontrak sebelumnya dengan
noradrenalin, Vimang (0,25–1 mg/ml) tidak menimbulkan efek
apa pun baik pada WKY maupun SHR (hasil tidak ditampilkan).
U46619 (1 nM–30AM) menginduksi respons kontraktil
yang lebih besar di segmen dari SHR daripada dari WKY (E
maks: 66.46F9,73% dan 94,93F7,86% dari respon maksimal,PB

klooksigenase-1 dalam sel otot polos pembuluh darah dari kedua
strain (Gambar 2).
3.2. Efek Vimang dan mangiferin pada respons
kontraktil
Noradrenalin (0,1–30AM) menginduksi respons vasokonstriktor
yang bergantung pada konsentrasi yang serupa pada segmen arteri
resistensi mesenterika dari kedua strain
0,05; pD2: -6.83F0,18 dan -6,58F0,19, PN0,05, masing-masing
untuk WKY dan SHR,n=12–13). Inkubasi dengan Vimang (1
mg/ml) menginduksi pengurangan kontraksi yang
ditimbulkan oleh U46619 pada WKY dan SHR (Gambar 5).
Efek penghambatan yang diinduksi oleh Vimang serupa di
segmen dari kedua galur (Gambar 5). Kontraksi yang
diinduksi oleh KCl (15-70 mM) serupa pada kedua galur dan
tetap tidak berubah setelah inkubasi Vimang (1 mg/ml) (
Gambar 5).

Gambar 5. Efek Vimang pada kurva konsentrasi-respons untuk U46619 dan KCl di segmen arteri mesenterika dari normotensif (WKY,n=12) dan hipertensi
(SHR,n=13) tikus. Hasil (berartiFSEM) dinyatakan sebagai persentase dari respon maksimum. *PB0,05 vs kontrol. Sisipan menunjukkan perbedaan area di
bawah kurva konsentrasi-respons (dAUC) ke U46619 tanpa adanya (kontrol) dan keberadaan Vimang di segmen arteri mesenterika dari tikus WKY dan
SHR. Hasil (berartiFSEM) dinyatakan sebagai persentase AUC dalam situasi kontrol.
 AE Beltran dkk. / Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305
4. Diskusi
Vimang adalah ekstrak air dari kulit batangM. indicaL.
dengan sifat antioksidan dan antiinflamasi (Martı́nez et al.,
2000); namun, mekanisme dasar yang terlibat dalam efek
Vimang tidak jelas. Baru-baru ini, analisis fitokimia ekstrak
ini telah menyebabkan isolasi polifenol yang berbeda yang
meliputi asam fenolik, ester fenolik, flavan-3-ols dan
xanthone (mangiferin) (Núñez-Selles et al., 2002). Beberapa
polifenol adalah senyawa aktif biokimia dengan sifat
antiinflamasi, antikarsinogenik, dan penangkal radikal
bebas (Lin dan Lin, 1997). Dalam penyelidikan sebelumnya,
ditunjukkan bahwa Vimang menunjukkan aksi yang kuat
pada fase kedua uji nyeri yang diinduksi formalin dan
bahwa efek ini lebih kuat daripada indometasin,
penghambat aktivitas siklooksigenase yang diketahui (
Garrido et al., 2001). Dalam penelitian ini, kami
menunjukkan bahwa Vimang menghambat interleukin-1H-
menginduksi ekspresi iNOS dan siklooksigenase-2 dalam sel
otot polos pembuluh darah, suatu efek yang akan terkait
dengan aksi antiinflamasinya yang kuat.
Menurut analisis fitokimia, sangat mungkin bahwa beberapa
prinsip aktif hadir dalam Vimang, yang dikenal dengan aktivitas
antioksidan dan antiinflamasinya (Arts et al., 2000; Lin et al.,
2000), dapat bertanggung jawab atas efek penghambatan pada
ekspresi siklooksigenase-2 atau iNOS yang diamati dalam
penelitian ini. Mangiferin, polifenol utama yang ada dalam
ekstrak (sekitar 7%), juga menghambat ekspresi
siklooksigenase-2 dan iNOS dalam sel otot polos vaskular dari
tikus WKY, menunjukkan bahwa senyawa ini akan terlibat dalam
efek penghambatan yang diberikan pada ekspresi protein ini
oleh Vimang. Sejalan dengan hal ini, mangiferin menurunkan
produksi NO atau tingkat mRNA iNOS pada makrofag yang
teraktivasi.Garcia et al., 2002; Leiro et al., 2003). Selain itu, ada
bukti yang mendukung aktivitas antiinflamasi dan antioksidan
mangiferin (Muruganandan et al., 2002; Garcia et al., 2002;
Leiro et al., 2003). Di sisi lain, laporan lain juga telah
memberikan bukti bahwa beberapa flavonoid seperti (-)-
epigallocathecin-3-gallate mampu menekan ekspresi iNOS dan
siklooksigenase-2 dalam makrofag yang diaktifkan LPS dengan
menurunkan pengaturan faktor nuklir-NB (NF-NB) (Lin dan Lin,
1997; Liang et al., 1999). Seperti disebutkan sebelumnya, gallate
dan methyl-gallate adalah beberapa polifenol turunan yang ada
di Vimang. Sesuai dengan temuan di atas, penelitian dari
laboratorium kami yang menggunakan lini sel Hela telah
menunjukkan bahwa Vimang menghambat NF-NAktivasi B
(Garrido, komunikasi pribadi). Diketahui bahwa NF-NFaktor B
memainkan peran penting dalam induksi promotor gen
siklooksigenase-2 dan iNOS (Barnes dan Karin, 1997).
Penghambatan NF-NAktivasi B dengan demikian dapat terlibat
dalam mekanisme molekuler Vimang.
Ekspresi berlebih dari siklooksigenase-2 atau iNOS
telah terlibat dalam patogenesis banyak penyakit (
Kroncke et al., 1998; Dubois et al., 1998). Hipertensi
dianggap sebagai penyakit inflamasi kronis (Virdis dan
303
Schiffrin, 2003) dengan peningkatan kadar sitokin
proinflamasi dalam darah. Regulasi abnormal ekspresi
protein vaskular iNOS dan siklooksigenase-2 telah
dijelaskan pada hipertensi (Henrion et al., 1997; Chou et
al., 1998, Garcı́a-Cohen et al., 2000; Briones et al.,
2002a,b). Pada penelitian sebelumnya, ditemukan
peningkatan yang lebih tinggi pada ekspresi protein
iNOS yang diinduksi oleh interleukin-1Hdalam sel otot
polos vaskular dari tikus hipertensi daripada di sel-sel
tersebut dari tikus normotensif (Pacheco et al., 2000).
Sebaliknya, dalam penelitian ini, interleukin-1H
menginduksi ekspresi iNOS dan siklooksigenase-2 yang
serupa dalam sel otot polos vaskular dari kedua strain.
Perbedaan pada lapisan vaskular (aorta atau
mesenterika) yang digunakan untuk mendapatkan sel
otot polos vaskular pada kedua studi akan menjelaskan
perbedaan ini. Mirip dengan apa yang diamati pada sel
otot polos vaskular dari tikus normotensif, Vimang
menghambat ekspresi iNOS dan siklooksigenase-2 di
SHR; Namun, efek pada ekspresi iNOS lebih besar
sedangkan pada ekspresi siklooksigenase-2 lebih rendah
pada sel otot polos pembuluh darah dari SHR
dibandingkan dengan WKY. Selain itu, mangiferin juga
menghambat ekspresi siklooksigenase-2 dan iNOS. Ada
kemungkinan bahwa perubahan regulasi kedua enzim
setelah hipertensi akan menjelaskan perbedaan ini,
Meskipun pada pembuluh sehat NO dan prostanoid
terutama dihasilkan oleh isoform konstitutif NOS dan
siklooksigenase, juga telah ditemukan bahwa otot polos
vaskular mengekspresikan siklooksigenase-2 dan
prostanoid yang dihasilkan dapat terlibat dalam modulasi
respons vaskular.Swierkosz et al., 1995; Cirino et al., 1996;
Briones et al., 2002b). Selain efek penghambatan Vimang
pada ekspresi iNOS dan siklooksigenase-2, senyawa ini juga
mengurangi respon vasokonstriktor yang diinduksi oleh
noradrenalin dan oleh tromboksan A2
analog, U46619, tetapi tidak dengan KCl di cincin arteri
resistensi mesenterika dari WKY dan SHR. Hasil ini
menunjukkan bahwa efek Vimang pada respons
vasokonstriktor spesifik untuk mekanisme transduksi sinyal
reseptor. Kami sebelumnya telah melaporkan bahwa respon
noradrenalin pada jenis arteri ini dimediasi oleh prostanoid
kontraktil yang berasal dari siklooksigenase-2 (Briones et al.,
2002b). Efek penghambatan Vimang pada respons
vasokonstriktor dapat dikaitkan dengan kemampuannya untuk
mengurangi ekspresi siklooksigenase-2; namun, fakta bahwa
mangiferin menghambat ekspresi siklooksigenase-2 tetapi
bukan respons terhadap noradrenalin dan bahwa Vimang tidak
memengaruhi ekspresi basal isoform ini dalam sel otot polos
pembuluh darah menghilangkan kemungkinan ini. Selain itu,
hasil ini menunjukkan bahwa efek Vimang pada respon
vasokonstriktor dan ekspresi siklooksigenase-2 dan iNOS
mungkin dimediasi oleh senyawa yang berbeda. Telah
dijelaskan bahwa flavonoid dapat menghambat kedua jalur 5-
lipoksigenase/siklooksigenase dari sintesis eikosanoid.
Laughton et al., 1991) dan laporan terbaru telah menunjukkan
304 AE Beltran dkk. / Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305
bahwa Vimang menghambat produksi leukotriene B4dan
prostaglandin E2dalam kalsium ionofor dan makrofag yang
distimulasi lipopolisakarida, masing-masing (Delgado et al.,
2001). Di sisi lain, efek penghambatan yang kuat dari Vimang
pada kontraksi yang diinduksi oleh U46619 dan fakta bahwa
prostanoid kontraktil berpartisipasi dalam kontraksi
noradrenalin di arteri ini (Briones et al., 2002b) menunjukkan
bahwa beberapa senyawa yang ada dalam ekstrak akan
memiliki sifat antagonis reseptor TP non-kompetitif. Semua
temuan ini dapat menjelaskan efek penghambatan Vimang
pada respon vasokonstriktor terhadap noradrenalin. Efek
Vimang pada respons terhadap noradrenalin lebih sedikit pada
segmen resistensi mesenterika dari tikus hipertensi
dibandingkan pada segmen dari tikus normotensi. Partisipasi
prostanoid kontraktil yang lebih rendah dalam respons
noradrenalin yang dijelaskan dalam arteri resistensi
mesenterika dari SHR (Briones et al., 2002b) dapat menjelaskan
perbedaan efek Vimang.
Kesimpulannya, Vimang dan mangiferin
menghambat ekspresi iNOS dan siklooksigenase-2
dalam sel otot polos pembuluh darah. Hasil ini dapat
membantu menjelaskan sifat antiinflamasi Vimang
dan menunjukkan bahwa mangiferin adalah
komponen antiinflamasi aktif Vimang. Namun,
Vimang juga mengurangi respons vasokonstriktor,
suatu efek yang tidak mendukung sifat
antiinflamasinya. Fakta bahwa mangiferin tidak
menunjukkan efek vasodepresor menunjukkan
bahwa efek penghambatan Vimang pada respon
vasokonstriktor dan ekspresi siklooksigenase-2 dan
iNOS akan dimediasi oleh senyawa yang berbeda.
Polifenol yang berbeda, seperti asam galat, katekin
dan turunan galat, hadir dalam ekstrak mungkin
berpartisipasi dalam efek Vimang. Namun,
Terima kasih
Studi ini didukung oleh hibah dari DGICYT (BXX2000-0153
dan SAF2003-00633) dan FISS (C03/01). Amada E. Beltrán
adalah penerima beasiswa dari Ministerio de Educación,
Cultura y Deportes (Spanyol) dan Fabiano E. Xavier
didukung oleh CAPES. Kami berterima kasih kepada Dr. M.
Carmen Fernández-Criado atas perawatan hewan.
Referensi
Arts, IC, van de Putte, B., Hollman, PC, 2000. Catechin isi dari
makanan yang biasa dikonsumsi di Belanda: Bagian I. Buah-buahan,
sayuran, makanan pokok, dan makanan olahan. J.Agri. Makanan Kimia. 48,
1746–1751.
Barnes, PJ, Karin, M., 1997. Faktor nuklir-NB: transkripsi penting
faktor dalam penyakit peradangan kronis. N.Engl. J.Med. 336,
1066–1071.
Lahir, M., Carrupt, PA, Zini, R., Brée, F., Tillement, JP, Hostettmann, K.,
Testa, B., 1996. Perilaku elektrokimia dan aktivitas antioksidan dari
beberapa polifenol alami. Helv. Chim. UU 79, 1147–1158.
Briones, A., Alonso, MJ, Marı́n, J., Balfagón, G., Salaices, M., 2000.
Pengaruh hipertensi pada ekspresi oksida nitrat sintase dan efek
vaskular lipopolisakarida pada arteri mesenterika tikus. Sdr. J.
Pharmacol. 131, 185–194.
Briones, AM, Alonso, MJ, Hernanz, R., Miguel, M., Salaices, M.,
2002a. Perubahan jalur oksida nitrat di arteri serebral dari tikus
hipertensi spontan. J. Kardiovaskular. Pharmacol. 39, 378–388.
Briones, AM, Alonso, MJ, Hernanz, R., Tovar, S., Vila, E., Salaices, M.,
2002b. Hipertensi mengubah partisipasi prostanoid kontraktil dan anion
superoksida dalam efek lipopolisakarida pada arteri mesenterika kecil.
Sains Kehidupan. 71, 1997–2014.
Chou, TC, Yen, MH, Li, CY, Ding, YA, 1998. Perubahan nitrat
ekspresi oksida sintase dengan penuaan dan hipertensi pada tikus.
Hipertensi 31, 643–648.
Cirino, G., Sorrentino, R., Cicala, C., Sorrentino, L., Pinto, A., 1996.
Indometasin dan tromboksan A2/prostaglandin H2antagonis SQ 29.548
mengganggu kontraksi in vitro dari cincin aorta tikus lipopolisakarida yang
diobati secara ex vivo. J. Sinyal Sel Mediator Lipid. 13, 177–187. Delgado, R.,
Garrido, G., Gónzalez, D., Herrera, A., Beltrán, A., Lemus, Y.,
Rodrı́guez, J., Quintero, G., Lodeiro, L., Tamayo, D., Sironi, M., Ledon,
N., Romay, C., Garcı́a, D., Nuñez, AJ, 2001.Mangifera indica
L. extract (Vimang) sebagai antioksidan alami dengan sifat
antinociceptive dan anti-inflamasi. Minerva Med. 92, 98–102.
Dubois, RN, Abramson, SB, Crofford, L., Gupta, RA, Simon, LS, van
de Putte, LB, Lipsky, PE, 1998. Cyclooxygenase dalam biologi dan
penyakit. FASEB J.12, 1063–1073.
Garcia, D., Delgado, R., Ubeira, FM, Leiro, J., 2002. Modulasi tikus
fungsi makrofag olehMangifera indicaL. mengekstrak Vimang dan
mangiferin. Int. imunofarmaka. 2, 797–806.
Garcı́a-Cohen, EC, Marı́n, J., Dı́ez-Picazo, LD, Baena, AB, Salaices,
M., Rodrı́guez-Martı́nez, MA, 2000. Stres oksidatif yang diinduksi olehtert-
butil hidroperoksida menyebabkan vasokonstriksi di aorta dari hipertensi
dan tikus tua: peran isoform siklooksigenase-2. J. Pharmacol. Exp. Ada.
293, 75–81.
Garrido, G., Gonzalez, D., Delporte, C., Backhouse, N., Quintero, G.,
Núñez-Selles, AJ, Morales, MA, 2001. Efek analgesik dan anti-
inflamasi dariMangifera indicaekstrak L. (Vimang). Phytother.
Res. 15, 18–21.
Guevara, GM, Tamayo, BD, González, LS, Paez, BE, Oceguera,
J., Núñez-Sellés, AJ, 1998. Studi etnofarmakologisMangifera
indica L.ekstrak (QF-808). Abstrak Kongres Internasional
Pertama Farmakologi '98, Ed. ORTOP, La Habana, 19–23 Oktober
1998, hal. 45.
Guha, S., Ghosal, S., Chattopadhyay, U., 1996. Antitumor, imunomodulator
efek latory dan anti-HIV dari mangiferin, glucosylxanthone
alami. Kemoterapi 42, 443–451.
Henrion, D., Dechaux, E., Dowell, FJ, Maclour, J., Samuel, JL, Levy, BI,
Michel, JB, 1997. Perubahan dilatasi yang diinduksi aliran pada arteri resistensi
mesenterika tikus yang diobati dengan L-NAME dan hubungan parsialnya
dengan induksi siklooksigenase-2. Sdr. J. Pharmacol. 121, 83–90. Kroncke, KD,
Fehsel, K., Kolb-Bachofen, V., 1998. Oksida nitrat yang dapat diinduksi
sintase pada penyakit manusia. Klinik. Exp. Imunol. 113, 147–156.
Laughton, MJ, Evans, PJ, Moroney, MA, Hoult, JR, Halliwell, B.,
1991. Penghambatan mamalia 5-lipoksigenase dan siklooksigenase oleh
flavonoid dan aditif makanan fenolik. Hubungan dengan aktivitas
antioksidan dan kemampuan mengurangi ion besi. Biokimia. Pharmacol.
42, 1673–1681.
Leiro, JM, Alvarez, E., Arranz, A., González-Siso, I., Orallo, F., 2003.
Efek in vitro mangiferin pada konsentrasi superoksida dan ekspresi
sintase oksida nitrat yang dapat diinduksi, faktor nekrosis tumor-A
dan mengubah faktor pertumbuhan-Hgen. Biokimia. Pharmacol. 65,
1361–1371.
Liang, YC, Huang, YT, Tsai, SH, Lin-Shiau, SY, Chen, CF, Lin, JK,
1999. Penekanan siklooksigenase dan nitrat oksida sintase yang dapat
diinduksi oleh apigenin dan flavonoid terkait pada makrofag tikus.
Karsinogenesis 20, 1945–1952.
 AE Beltran dkk. / Jurnal Farmakologi Eropa 499 (2004) 297–305
Lin, YL, Lin, JK, 1997. (-)-Epigallocatechin-3-gallate memblokir
induksi nitrit oksida sintase dengan menurunkan aktivitas regulasi
lipopolisakarida yang diinduksi oleh faktor transkripsi-NB.Mol. Pharmacol.
52, 465–472.
Lin, JK, Chen, PC, Ho, CT, Lin-Shiau, SY, 2000. Penghambatan
xantina oksidase dan penekanan spesies oksigen reaktif intraseluler
dalam sel HL-60 oleh theaflavin-3-3Vdigallate, (-) epigallocatechin-3-
gallate, dan propylgallate. J.Agri. Makanan Kimia. 48, 2736–2743.
Martı́nez, G., Delgado, R., Pérez, G., Garrido, G., Núñez, AJ, León, OS,
2000. Evaluasi aktivitas antioksidan in vitro dariMangifera indica
ekstrak L. (Vimang). Phytother. Res. 14, 424–427.
Muanza, DN, Euler, KL, Williams, L., Newman, DJ, 1995. Penyaringan
untuk aktivitas antitumor dan anti-HIV dari sembilan tanaman obat dari
Zaire. Int. J. Farmakologi. 33, 98–106.
Mulvany, MJ, Halpern, W., 1977. Kontraktil sifat arteri kecil
resistensi pembuluh darah pada tikus hipertensi dan normotensi spontan.
Sir. Res. 41, 19–26.
Muruganandan, S., Gupta, S., Kataria, M., Lal, J., Gupta, PK, 2002.
Mangiferin melindungi kerusakan oksidatif yang diinduksi streptozotocin
pada jaringan jantung dan ginjal pada tikus. Toksikologi 176, 165–173.
Núñez-Selles, AJ, Vélez, HT, AgQero, J., Gónzalez, J., Naddeo, F., De
Simone, F., Rastrelli, L., 2002. Isolasi dan analisis kuantitatif
305
antioksidan fenolik, gula bebas, dan poliol dari Mangga (Mangifera indica
L.) rebusan berair kulit batang yang digunakan di Kuba sebagai suplemen
nutrisi. J.Agri. Makanan Kimia. 50, 762–766.
Pacheco, ME, Marı́n, J., Manso, AM, Rodrı́guez-Martı́nez, MA,
Briones, A., Salaices, M., Redondo, J., 2000. Induksi nitrat oksida
sintase oleh ouabain dalam sel otot polos pembuluh darah dari tikus
normotensif dan hipertensi. J. Hipertensi. 18, 877–884.
Redondo, J., Peiró, C., Rodrı́guez-Mañas, L., Salaices, M., Marı́n, J.,
Sánchez-Ferrer, CF, 1995. Stimulasi endotel pompa natrium pada
kultur otot polos pembuluh darah. Hipertensi 26, 177–185.
Swierkosz, TA, Mitchell, JA, Warner, TD, Blotting, RM, Vane, JR,
1995. Co-induksi nitrit oksida sintase dan siklooksigenase:
interaksi antara nitrit oksida dan prostanoid. Sdr. J. Pharmacol.
114, 1335–1342.
Virdis, A., Schiffrin, EL, 2003. Peradangan vaskular: peran dalam
penyakit pembuluh darah pada hipertensi? Kur. Opin. Nefrol. Hipertensi. 12,
181–187.
Wu, CC, Szabó, C., Chen, SJ, Thiemermann, C., Vane, JR, 1994.
Aktivasi guanylyl cyclase yang larut oleh faktor selain oksida nitrat atau
karbon monoksida berkontribusi terhadap hiporeaktivitas vaskular
terhadap agen vasokonstriktor di aorta tikus yang diobati dengan
endotoksin. Biokimia. Biofisika. Res. Komunal. 201, 436–444.