NASKAH PUBLIKASI

EFEK PLATELET-RICH PLASMA TERHADAP KEMAMPUAN

PROLIFERASI SEL HDF

Disusun oleh:

ANNISA APRILIA ATHIRA

1102014029

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS YARSI
TAHUN 2018
 LEMBAR PERSETUJUAN

Telah disetujui oleh dosen pembimbing, naskah publikasi dari:

Nama : Annisa Aprilia Athira

NPM : 1102014029

Fakultas : Kedokteran

Universitas : YARSI

Tingkat : Pendidikan Sarjana 1

Judul : Efek Platelet-Rich Plasma Terhadap Kemampuan

Proliferasi Sel HDF dan Ditinjau Menurut Islam
Pembimbing Klimis : DR. Restu Syamsul Hadi, M.Kes

Diajukan sebagai salah satu syarat mendapatkan gelar Sarjana Kedokteran.

Jakarta, 3 April 2018

Pembimbing Klinis Peneliti,

DR. Restu Syamsul Hadi, M.Kes Annisa Aprilia Athira

ii
 EFEK PLATELET-RICH PLASMA TERHADAP KEMAMPUAN
PROLIFERASI SEL HDF

Annisa Aprilia Athira1, Restu Syamsul Hadi2

ABSTRAK

Latar Belakang: Luka terjadi karena rusaknya struktur dan fungsi anatomi normal
akibat proses patologis yang mengenai organ tertentu. Penyembuhan luka yang
optimal membutuhkan proses kompleks yang menggabungkan peristiwa biologi dan
molekuler yang mencakup proliferasi sel, diferensiasi, dan angiogenesis. Platelet Rich
Plasma (PRP) merupakan suatu fraksi plasma darah yang mengandung konsentrasi
trombosit 3-5 kali diatas normal, yang dibuat dengan cara sentrifugasi whole blood .
PRP menurut definisinya, memiliki tingkat supra-fisiologis trombosit yang dapat
diaktifkan untuk menghasilkan konsentrasi factor pertumbuhan yang tinggi. Hal ini
dikatakan bahwa PRP dapat bertindak secara sinergis untuk mempromosikan
proliferasi sel. Tujuan penelitian ini adalah untuk melihat efek Platelet Rich Plasma
terhadap kemampuan proliferasi sel HDF.
Metode: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental yang dilakukan secara in
vitro, menggunakan 3 variasi dosis PRP yaitu, 2,5%, 5%, 10%, dan 3 dosis PPP,
2,5%, 5%, 10% untuk melihat kemampuan proliferasi Human Dermal Fibroblast Cell
(HDF Cell),kemudian diukur dalam 18 jam dengan uji CCK-8. Absorbansi dihitung
menggunakan microplate reader dengan panjang gelombang 450 nm, dan dianalisis
menggunakan Microsoft Excel dan SPSS.
Hasil: Pada penelitian ini terlihat bahwa Platelet Rich Plasma dan Platelet Poor
Plasma 2,5%,5%,10% dapat meningkatkan kemampuan proliferasi Sel Human
Dermal Fibroblast, yaitu proliferasi tertinggi terjadi pada perlakuan PPP dengan dosis
5%, dan proliferasi terendah terjadi pada perlakuan PPP dengan dosis 2,5%.
Simpulan: Platelet Rich Plasma dapat meningkatkan kemampuan proliferasi sel HDF
secara bermakna.

Kata Kunci: Platelet Rich Plasma, Proliferasi, Human Dermal Fibroblast

1
Mahasiswa Fakultas Kedokteran, Universitas YARSI
2
Staff Pengajar bagian Anatomi, Lembaga Penelitian Sel Punca, Universitas YARSI

ABSTRACT
Background: Wound occur because of damage to normal anatomical structures and
functions due to pathological processes that affect certain organs. Optimal wound
healing requires complex processes that combine biological and molecular events
that include cell proliferation, differentiation, and angiogenesis. Platelet Rich Plasma
(PRP) is a blood plasma fraction containing platelet concentrations 3-5 times above
normal, made by centrifugation whole blood. PRP by definition, has a supra-
physiological level of platelets that can be activated to produce high concentrations
of growth factors. It is said that PRP can act synergistically to promote cell
proliferation. The purpose of this study was to see the effect of Platelet Rich Plasma
on HDF cell proliferation ability.

1
Method: This was an experimental study conducted in vitro, using 3 variations of
PRP dose ie 2.5%, 5%, 10%, and 3 doses of PPP, 2.5%, 5%, 10% to see proliferative
ability Human Dermal Fibroblast Cell (HDF Cell), then measured in 18 hours with
CCK-8 test. Absorbance was calculated using a microplate reader with a wavelength
of 450 nm, and analyzed using Microsoft Excel and SPSS.
Results: In this study, it was shown that Platelet Rich Plasma and Platelet Poor
Plasma 2.5%, 5%, 10% could increase the proliferation ability of Human Dermal
Fibroblast Cells, ie the highest proliferation occurred at 5% PPP treatment, and
lowest proliferation occurred treatment of PPP with a dose of 2.5%.
Conclusion: Platelet Rich Plasma can increase the ability of HDF cell proliferation
significantly.

Keywords: Platelet Rich Plasma, Proliferation, Human Dermal Fibroblast

1
Medical Student of YARSI University
2
Department of Anatomy Faculty of Medicine, Stem Cell Research Center YARSI
University

Pendahuluan
Luka terjadi karena rusaknya struktur Platelet Rich Plasma (PRP)
dan fungsi anatomi normal akibat merupakan suatu fraksi plasma darah
proses patologis yang berasal dari yang mengandung konsentrasi
internal maupun eksternal dan trombosit 3-5 kali diatas normal, yang
mengenai organ tertentu (Setyarini EA dibuat dengan cara sentrifugasi whole
et.al., 2013). blood.
Penyembuhan luka adalah proses Platelet-Rich Plasma (PRP) telah
penggantian dan perbaikan fungsi dipergunakan secara klinis sebagai
jaringan yang rusak. Sifat campuran faktor pertumbuhan yang
penyembuhan pada semua luka adalah mudah disiapkan yang dapat
sama dengan variasi bergantung pada membantu penyembuhan luka,
lokasi, keparahan dan luas cidera angiogenesis, dan pembentukan
(Hardjito K et.al., 2012) jaringan (Araki, J et al, 2011) Karena
Namun, kemampuan tubuh terhadap proses persiapan yang cepat dan
proses penyembuhan luka dapat memerlukan peralatan khusus yang
terhambat, terutama pada penyakit minimal, PRP dapat diterapkan untuk
kronis. Untuk itu, dibutuhkan pasien dengan waktu yang cepat. PRP
tembusan baru untuk dapat juga dikabarkan dapat memberikan
meningkatkan kecepatan penyembuhan peningkatan yang signifikan terhadap
luka (Roubelakis et al, 2014). penyembuhan pada luka yang
kompleks. (Vilella et al, 2010).

2
Berbagai factor pertumbuhan yang
dikeluarkan oleh trombosit mengawali
dan mengatur penyembuhan luka yang
dilepaskan akibat peningkatan dan
pengaktifan dari trombosit, termasuk
Platelet Derived Growth Factor
(PDGF), Transforming, Growth Factor
Beta (TGF-β), Basic Fibroblast Growth
Factor (bFGF), Vascular Endothelial
Growth Factor (VEGF), Epidermal
Growth Factor (EGF), Insulin-like
Growth factor (IGF) (Vicki L et al,
2014)
Pada proses penyembuhan luka, sel
fibroblast menghasilkan kolagen yang
mengandung berbagai factor
pertumbuhan seperti TGF-β, IGF, dan
PDGF (Yu, 2015).
PRP menurut definisinya, memiliki
tingkat supra-fisiologis trombosit yang
dapat diaktifkan untuk menghasilkan
konsentrasi factor pertumbuhan yang
tinggi. Hal ini dikatakan bahwa PRP
dapat bertindak secara sinergis untuk
mempromosikan proliferasi sel. Tujuan
penelitian ini adalah untuk melihat
efek dari Platelet Rich Plasma terhadap
kemampuan proliferasi sel HDF.
Metode
Penelitian ini merupakan penelitian
eksperimental dengan cara in vitro
dengan menggunakan populasi sel
Human Dermal Fibroblast yang berasal
dari biorepository Universitas Yarsi.
Pengambilan dan persiapan PRP
Sebanyak 10 ml darah vena diambil
dan dicampurkan dengan antikoagulan
sitrat dekstrosa dormula A (ACD-A).
Darah di sentrifugasi untuk pertama
kali selama 7 menit dan kecepatan
1500 rpm, dengan cara putaran lambat
yang membuat pemisahan darah
menjadi 3 lapisan. Sentrifugasi kedua
dilakukan dengan cara putaran cepat
menggunakan kecepatan 4800 rpm
selama 10 menit yang menghasilkan
lapisan PRP dan PPP Dengan pipet,
lapisan PRP diambil dan di pindahkan
ke tabung reaksi untuk di isolasi PRP
dan PPP dipanaskan dengan suhu 40o
selama 30 menit untuk mencegah
terbentuk jelly
Kultur Sel
Sel Human Dermal Fibroblast ditanam
pada well 96 dengan kepadatan 10.000
sel/well sebanyak 5 kelompok ulangan.
Sel HDF yang sudah 70% konfluens
diberi perlakuan PRP dengan 3 dosis ,
2,5%, 5%, 10%, dan 3 dosis PPP,
2,5%, 5%, 10%. Setelah di inkubasi
selama 18 jam , proliferasi sel diukur
dengan uji CCK-8.
2
 Hasil serum dan kontrol non serum adalah
Hasil Proliferasi sel HDF terhadap 0,200 yang berarti distribusi data rata.
pengaruh pemberian Platelet Rich Hasil yang didapatkan dari Uji
Plasma dan Platelet Poor Plasma Normalitas Kolmogrov-Smirnov ini
dapat dilihat pada gambar 4.1. Pada dapat menjadi acuan untuk dilakukan
penelitian ini terlihat bahwa Platelet uji korelasi Pearson, dimana setelah
Rich Plasma dan Platelet Poor Plasma dilakukan Uji Korelasi Pearson
2,5%,5%,10% dapat meningkatkan menunjukan hasuk koefisien korelasi
kemampuan proliferasi Sel Human 0,584 dengan nilai P 0.022 (P <0.05)
Dermal Fibroblast. Data dibawah ini yang berarti pemberian PRP terhadap
merupakan hasil perhitungan sel proliferasi sel HDF memiliki hasil
dengan menggunakan microplate yang bermakna.
reader yang sebelumnya sel telah Untuk mengukur perbedaan
diberi reagen CCK-8 untuk proliferasi Proliferasi yang bermakna antara
dan dianalisa menggunakan Microsoft perbedaan konsentrasi pemberian PRP,
Excel. Dari grafik dapat dilihat bahwa dilakukan uji Annova. Hasil yang
proliferasi tertinggi terjadi pada didapatkan pada uji Anova bahwa tiap
perlakuan PPP dengan dosis 5%, dan konsentrasi Platelet-rich Plasma
proliferasi terendah terjadi pada mempunyai makna secara statistic
perlakuan PPP dengan dosis 2,5%. dengan nilai 0.011 karena untuk hasil
PROLIFERASI SEL HDF bermakna harus didapatkan nilai P
1.4 <0.05
1.2
1
0.8
OD

0.6 Pembahasan
0.4
0.2 Setiap sel akan mengalami fase
0
KS NS PRP PRP PRP PPP PPP PPP proliferasi yang merupakan proses sel
2,5 5 10 2,5 5 10
untuk memperbanyak diri dengan
PERLAKUAN
membelah menjadi dua buah sel yang
Uji statistik dilakukan untuk sama (Berridge, M.J, 2014). Proliferasi
melihat pengaruh pemberian PRP Sel diatur oleh faktor-faktor
terhadap proliferasi sel HDF. Uji pertumbuhan yang mentransduksi
Normalitas dilakukan untuk melihat sinyal untuk mempromosikan sel
pemerataan data dan hasil yang masuk kedalam siklus sel yang baru
didapatkan pada uji normalitas kontrol (Mandai K, et al, 2015).

3
Pada penelitian ini, Sel HDF ditanam menggunakan putaran cepat dan
pada 96 well dan telah diberi perlakuan putaran lambat. Trombosit akan
PRP 2,5 %, 5%, 10% dan PPP menghasilkan factor pertumbuhannya
2,5%,5%,10% selama 28 jam. Hasil sesaat setelah teraktivasi. Kira-kira
Proliferasi Sel HDF diuji dengan Cell 70% factor pertumbuhan yang
Counting Kit-8 yang memungkinkan dihasilkan pada 10 menit pertama, dan
pengujian kolorimetrik yang sensitif hampir 100% dalam 1 jam pertama
untuk menentukan jumlah sel yang (Amrichová J et al, 2014). Dari
layak untuk uji proliferasi dan hasil penelitian didapatkan Proliferasi
sitotoksisitas. Setelah itu dihitung Sel HDF yang diberi perlakuan PRP
absorbansi nya menggunakan dengan berbagai konsentrasi
microplate reader. mengalami peningkatan. Sel HDF yang
PRP telah banyak diterapkan diberi perlakuan PPP PRP memiliki
dan diperlajari untuk terapi perbaikan hasil proliferasi yang lebih tinggi
jaringan yang menghasilkan beberapa dibandingkan control. Hal ini dapat
keunggulan diabdingkan teknik dan dijelaskan seperti penelitian yang
produk lainnya. Penggunaan klinis dilakukan (Yu et al, 2015) bahwa sel
PRP tidak menyebabkan kejadian tendon yang diberi perlakuan PRP
buruk atau komplikasi pasca operasi memasuki fase S pada tingkat yang
(Kotsovilis et al., 2010). Sementara itu, lebih tinggi dibandingkan control yang
persiapan PRP cepat, sederhana, tidak diberikan PRP, hal ini
nyaman dan ekonomis (Rutkowski et menunjukkan bahwa PRP memodulasi
al., 2008). Selanjutnya, PRP memiliki formasi atau aktivitas kompleks cyclin-
berbagai factor pertumbuhan yang Cdk. PRP meningkatkan induksi
tinggi, yang dapat mengaktifkan proses regulasi A1- dan 2, dan sel-sel T1, A2
yang berbeda (Monteiro et al,. 2012). dan B1 pada sel tendon. Pembentukan
Persiapan dengan metode yang dan pengaktifan kompleks cyclin E-
berbeda dapat mempengaruhi Cdk2 menghasilkan fosforilasi Rb,
perbedaan jumlah trombosit, aktivasi yang menyebabkan aktivasi gen fase S
platelet dan factor pertumbuhan yang melalui bantuan factor transkripsi E2F.
terkandung didalam Platelet Rich Selain itu, aktivasi cyclin A-Cdk2/1
Plasma (Amrichová J et al, 2014). dan cyclin B-Cdk1 penting untuk
Pada penelitian ini, dilakukan metode pengembangan sel melalui fase S dan
dengana dua kali sentrifugasi G2/M. Dengan demikian, peningkatan

4
kadar siklin dan Cdk yang diamati, Plasma dalam meningkatkan
menunjukkan bahwa PRP memberikan kemampuan proliferasi sel HDF
efek yang positif pada proliferasi sel
tendon dengan mempromosikan DAFTAR PUSTAKA
perkembangannya melalui siklus sel. Al Bagami, Mohammed, Hakim Ouled
Haddou, Ingrid Marcq,
Pada Tabel 4.1 dapat dilihat Véronique Debuysscher,
Christèle Ossart, Aline Regnier,
bahwa hasil proliferasi tertinggi Jean-Pierre Marolleau and
terdapat pada PPP 5%, hal ini dapat Hicham Bouhlal Centre
Hospitalier Universitaire, France.
terjadi karena tingginya faktor 2015. Comparison between
pertumbuhan yang terkandung didalam healthy donor-derived bone
marrow mesenchymal stem cells
PPP, yaitu IGF-1 dan BMP-2, dan BM-MSCS and human dermal
sebanding dengan yang ditemukan di fibroblasts: Impact on clinical
applications of HMSCS J Stem
PRP (Amrichová J et al, 2014). Cell Res Ther 2015, 5:7
Amrichová J Tímea Špaková, Ján
Hal ini membuktikan bahwa Platelet Rosocha, Denisa Harvanová,
Darina Bačenková, Marek
Rich Plasma dan Platelet Poor Plasma
Lacko, Slavomír Horňák. Effect
dapat meningkatkan kemampuan of PRP and PPP on proliferation
and migration of human
proliferasi Sel Human Dermal
chondrocytes and synoviocytes in
Fibroblast. Namun, diperlukan vitro. Cent. Eur. J. Biol. • 9(2) •
2014 • 139-148 DOI:
penelitian lebih lanjut tentang berbagai
10.2478/s11535-013-0255-0
konsentrasi optimal.
Araki J, Jona M, Eto H, Aoi N, Kato
H, Suga H, Doi K, Yatomi
Y, Yoshimura K. Optimized
Preparation Method Of Platelet-
Kesimpulan Concentrated Plasma And
Platelet Rich Plasma dapat Noncoagulating Platelet-Derived
Factor Concentrates:
meningkatkan kemampuan proliferasi Maximization Of Platelet
sel HDF secara bermakna. Concentration And Removal Of
Fibrinogen. Tissue Engineering:
Part C Volume 18, Number 3,
Saran 2012 Mary Ann Liebert, Inc.
Doi: 10.1089/Ten.Tec.2011.0308
Diperlukan penelitian lebih lanjut Arora NS, Ramanayake T, Ren YF,
untuk mengetahui kadar optimal Romanos GE (2010) Platelet-
rich plasma in sinus
Platelet Rich Plasma dan Platelet Poor augmentation procedures: a
systematic literature review:
Part II. Implant dentistry 19(2):

5
 145–157.
doi:10.1097/ID.0b013e3181cd70
6d
Berridge, M.J. (2014) Cell Signalling
Biology;
doi:10.1042/csb0001001
Bryant, R. A , Clark, R. A. F. (2007).
Skin pathology and types of
damage. In Bryant, R.A., & Nix,
D . P. (Eds.), Acute and chronic
wounds: Current management
concept (3rd ed,. Pp. 100-129)/
St. Louis, MO: Mosby
Cooper, Geoffrey M.., and Robert E..
Hausman. The Cell: A Molecular
Approach. Sunderland, MA:
Sinauer Associates, 2013
Allen G, MD, FACS Assistant
Professor, Department of Plastic
Surgery, Loma Linda University
School of Medicine. 2015.
Wound Healing and Growth
Factors. Medscape Journal
Ghasemi-dehkordi, N. A. P. (2015).
Comparison of human dermal
fibroblasts ( HDFs ) growth rate
in culture media supplemented
with or without basic fibroblast
growth factor ( bFGF ), 487–
495.
https://doi.org/10.1007/s10561-
015-9494-9
Hardjito K, Wijayanti LA, Saputri
NM., 2012. Senam kegel dan
penyembuhan luka jahitan
perineum pada ibu post partum.
2- TRIK: Tunas-Tunas Riset
Kesehatan 2(4): 165-170.
Imantika, E. 2014 Peran Sel Punca
(Stem Cells) Dalam Mengatasi
Masalah Infertilitas Pada
Wanita. Medula, Volume 2,
Nomor 2, Februari 2014
Kotsovilis S, Markou N, Pepelassi E,
et al. 2010; The adjunctive use of
platelet-rich plasma in the
therapy of periodontal
intraosseous defects: a Regenerative medicine for the
systematic review. J Periodontal
Res 45: 428–443.
Mandai, Kenji, Yoshimi Takai. 2015.
Cellular Adhesion in Development
and Disease. Current Topics in
Developmental Biology, 2015
Roubelakis, M. G., Trohatou, O.,
Roubelakis, A., Mili, E.,
Kalaitzopoulos, I., Papazoglou,
G., … Anagnou, N. P. (2014).
Platelet-Rich Plasma (PRP)
Promotes Fetal Mesenchymal
Stem/Stromal Cell Migration and
Wound Healing Process. Stem
Cell Reviews and Reports, 10(3),
417–428.
https://doi.org/10.1007/s12015-
013-9494-8
Rutkowski JL, Thomas JM, Bering
CL, et al. 2008; Analysis of a
rapid, simple, and inex- pensive
technique used to obtain platelet-
rich plasma for use in clinical
practice. J Oral Implantol 34: 25–
33
Setyarini EA, Barus LS, Dwitari A.,
2013. Perbedaan alat ganti
verband antara dressing set dan
dressing trolley terhadap resiko
infeksi nosokomial dalam
perawatan luka post operasi.
Jurnal Kesehatan STIKes Santo
Borromeus 1(1): 11-23.
Taylor DW, Petrera M, Hendry M,
Theodoropoulos JS (2011) A
systematic review of the use of
platelet-rich plasma in sports
medicine as a new treatment for
tendon and ligament injuries.
Clin J Sport Med 21(4):344–352.
doi:10.1097/JSM.0b013e31821d
0f65
Torricelli P, Fini M, Filardo G, Tschon
M, Pischedda M, Pacorini A,
Kon E, Giardino R (2011)
treatment of musculoskeletal
6
 overuse injuries in competition
horses. Int Orthop 35(10):1569–
1576. doi:10.1007/s00264-011-
1237-3
Vicki L Davis 1(2014) Alaeddin B
Abukabda , Nicholas M Radio ,
Paula A Witt-Enderby , William
P Clafshenkel , J Vito Cairone ,
James L Rutkowski. J Oral
Implantol 40 (4), 511-521. 8
2014
Wong T, McGrath JA, Navsaria H
(2007) The role of fibroblasts in
tissue engineering and
regeneration. Br J Dermatol
156:1149–1155
Yu, T.-Y. Yu, J.-H. S. Pang, K. P.-H.
Wu, L.-P. Lin, W.-C. Tseng and
W.-C. Tsai. 2015. Platelet-rich
plasma increases proliferation of
tendon cells by modulating Stat3
and p27 to up-regulate
expression of cyclins and cyclin-
dependent kinases. Cell Prolif.,
2015, 48, 413–420 doi:
10.1111/cpr.12189

Yuliana, Ida, Des Suryani, Jeanne A.

Pawitan. 2012. Terapi Sel Punca
pada Infark Miokard. JKM.
Vol.11 No.2 Februari 2012: 176-
190