Hindawi

StemCells International
Volume 2019, ID Artikel 1358267 , 20 halaman
https://doi.org/10.1155/2019/1358267

Artikel Penelitian
Pengaruh Produk Turunan Darah pada Potensi
Diferensiasi Kondrogenik dan Osteogenik Sel Punca
Mesenkim Turunan Adiposa Berasal dari Tiga
Lokasi Berbeda

Markus Neubauer, 1,2 Olga Kuten, 2 Christoph Stotter, 2,3 Karina Kramer, 2
Andrea De Luna, 2 Thomas Muellner, 2,4 Zsombor Lacza, 2,5 dan Stefan Nehrer 1,2
1 Departemen Ortopedi, Klinik Universitas Krems, Mitterweg 10, 3500 Krems, Austria
2 Danube University Krems, Pusat Pengobatan Regeneratif dan Ortopedi, Dr. Karl-Dorrek-Str. 30, A-3500 Krems, Austria
3 Departemen Ortopedi dan Traumatologi, Landesklinikum Baden-Mödling, Waltersdorfer Str. 75, 2500 Baden, Austria
4 Departemen Ortopedi dan Traumatologi, Rumah Sakit Evangelic Wina, Hans-Sachs-Gasse 10 - 12 1180 Wina, Austria

5 Universitas Pendidikan Jasmani, Alkotás u. 44, Budapest, Hongaria H-1123

Korespondensi harus ditujukan kepada Stefan Nehrer; stefan.nehrer@donau-uni.ac.at Markus

Neubauer dan Olga Kuten memberikan kontribusi yang sama untuk pekerjaan ini.

Diterima 21 Agustus 2019; Direvisi 1 November 2019; Diterima 29 November 2019; Dipublikasikan 31 Desember 2019

Editor Tamu: Francesco De Francesco

Hak Cipta © 2019 Markus Neubauer dkk. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah Lisensi Atribusi Creative Commons,
yang mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi yang tidak dibatasi dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan benar.

Latar Belakang. Sel induk mesenkim yang diturunkan dari adiposa (AD-MSCs) dari jaringan lemak dipertimbangkan “ limbah bedah ” selama
operasi sendi dapat memberikan sumber yang manjur untuk pengobatan regeneratif. Intra-artikular, jaringan lemak homolog (Ho ff Sebuah ' bantalan
lemak, lemak kantong) mungkin memiliki perbedaan kondrogenik dan osteogenik yang lebih baik ff potensiasi dibandingkan dengan
ekstra-artikular, lemak nonhomologous. Produk darah mungkin lebih meningkatkan potensi ini. Metode. AD-MSC diisolasi dari jaringan lemak
3 donor dari masing-masing 3 lokasi, selama penggantian lutut total. Sel terisolasi dianalisis melalui fl aliran sitometri. Sel dilengkapi dengan
produk darah: dua jenis plasma kaya trombosit (EPRP - PRP disiapkan dengan adanya EDTA; CPRP - PRP disiapkan dengan adanya sitrat), serum
hiperakut (hipACT), dan serum betis janin standar (FCS) sebagai kontrol positif. Viabilitas sel ditentukan dengan uji XTT, dan kemajuan di ff erentiasi
diuji melalui pewarnaan histologis dan pemantauan spesies fi c ekspresi gen. Hasil. Produk darah meningkatkan metabolisme sel ex vivo.
Kondrogenesis ditingkatkan oleh EDTA-PRP dan osteogenesis oleh sitrat PRP, sedangkan serum hiperakut meningkatkan keduanya. ff erentiations
sebanding. Ini fi Penemuan konsisten dalam analisis histologis serta ekspresi gen. Konsentrasi produk darah yang lebih rendah dan di yang
lebih pendek ff periode erensiasi mengarah pada hasil histologis yang superior untuk kondrogenesis. Kedua tipe PRP memiliki perbedaan ff salah
biologis e ff dll tergantung pada konsentrasi, sedangkan serum hiperakut tampaknya lebih konsisten e ff dll, terlepas dari konsentrasi yang
digunakan.
Kesimpulan. ( i) Metode preparasi produk darah, (ii) jenis antikoagulan, (iii) di ff waktu erentiasi, dan (iv) konsentrasi produk darah memiliki arti fi
tidak bisa masuk fl pengaruh pada viabilitas sel induk dan perbedaannya ff potensiasi, mendukung tidak ada penggunaan antikoagulasi, di
lebih pendek ff erentiation time, dan menurunkan konsentrasi produk darah. Produk darah bebas sel seperti serum hiperakut dapat dianggap
sebagai suplemen alternatif dalam pengobatan regeneratif, terutama untuk terapi sel punca.
2 Stem Cells International
1. Perkenalan
Lesi chondral dan osteochondral berkembang menjadi degenerasi sendi,
menyebabkan osteoartritis, dan berkontribusi pada kebutuhan potensial
untuk TJR [1, 2]. Ortopedi regeneratif bertujuan untuk pengawetan sendi
dan regenerasi tulang rawan artikular untuk menunda atau menghindari
TJR sepenuhnya.
Karena arsitektur fisiologis tulang rawan artikular, tanpa
ujung pembuluh darah atau saraf, kapasitas regeneratif
intrinsiknya terbatas [3, 4]. Kebutuhan klinis ini mengarah pada
pengembangan terapi yang berkelanjutan untuk meregenerasi
tulang rawan hialin.
Transplantasi kondrosit autologus adalah pendekatan
pengobatan yang dipelajari secara mendalam untuk memenuhi
permintaan ini [5 - 7]. Kendati demikian, keterbatasannya seperti
perlunya prosedur bedah dua langkah atau dedi ff potensiasi dari
kondrosit yang dibudidayakan secara ex vivo mendorong pengembanganAngka 1: MRI lutut sagital dengan sumber lemak periartikular (kuning - lemak
novel, sebaiknya prosedur satu langkah [8].
MSC telah menjadi fokus penelitian selama beberapa
tahun terakhir untuk aplikasi regeneratif dan pengawet
sendi terutama karena (i) di ff potensi erensiasi menjadi
jaringan kondrogenik - antara lain seperti lemak dan
jaringan osteogenik - serta (ii) modulasi fitur MSC '
secretome terdiri dari faktor pertumbuhan, sitokin, dan vesikula
ekstraseluler [9, 10].
MSCs ada di berbagai jaringan seperti sumsum tulang atau
jaringan adiposa [11, 12]. BMA adalah lokasi pemanenan MSC
tradisional karena manipulasi sel minimal yang diperlukan serta
kemungkinan untuk a “ titik perawatan ” aplikasi [13]. ADMSC
memberikan keuntungan yang sama sambil secara elegan
melewatkan komorbiditas yang cukup besar dari panen BMA.
Nilai tambahan ini meningkatkan minat yang luas pada aplikasi
klinis AD-MSC.
Selama operasi artroskopi atau lutut terbuka, berbagai sumber
lemak yang kemungkinan menghasilkan AD-MSC dapat diakses
(Gambar 1). Lemak subkutan terletak tepat di bawah kulit, mudah
didapat dan biasanya tersedia dalam jumlah banyak (kuning).
Bantalan lemak prefemoral (kantong supratroklear) terletak pada
aspek anterior femur, tepat di atas trochlea (merah). Selanjutnya,
bantalan lemak infrapatellar (juga dikenal sebagai Ho ff Sebuah ' s fat
pad) terletak di dalam sendi lutut dan fi Ini adalah ruang di belakang
tendon patela antara patela, kondilus femoralis, dan dataran tinggi
tibia (biru). Bantalan lemak infrapatellar dapat divisualisasikan dan
diakses selama operasi artroskopi. Memanfaatkan jaringan adiposa
dengan cara ini melebihi kebutuhan untuk sedot lemak dan dengan
demikian menghilangkan risiko komorbiditas terkait [14, 15].
Itu fi uji klinis pertama pada tahun 2011 menggabungkan
AD-MSC dengan produk turunan darah autologus untuk lebih
meningkatkan kemungkinan terapi ff dll [16, 17]. Alasan untuk
suplementasi produk darah adalah untuk meningkatkan
pertumbuhan sel punca di sendi [18, 19].
Produk darah baru-baru ini menjadi pengobatan yang banyak
digunakan dalam pengobatan regeneratif [20]. Alasan yang
mendasari adalah untuk memisahkan komponen darah dengan
sentrifugasi yang mungkin berguna secara terapeutik - trombosit, fi brin, suplementasi ini juga pada sendi [17, 18, 32, 33]. Data in vitro yang baik diperlukan
faktor pertumbuhan, dll. - dari mereka yang tidak (misalnya, eritrosit)
[20, 21]. Paling terkenal dan banyak digunakan adalah PRP. Namun,
PRP ' Protokol produksi yang heterogen membuat perusahaan
subkutan; merah - lemak kantong prefemoral / supratroklear; biru - bantalan
lemak infrapatellar / Ho ff Sebuah ' s lemak).
rabilitas di ffi kultus. Di ff komposisi yang berbeda mungkin
menargetkan spesies fi c proses biologis yang menunjukkan perlunya
pemahaman yang luas tentang mekanisme tindakan biologis yang
mendasari. PRP juga dilaporkan mengandung proin fl komponen
inflamasi seperti leukosit atau fi brin [22, 23]. hypACT adalah produk
darah yang baru dikembangkan tanpa sel dan fi brin yang
mengandung sitokin yang dilepaskan selama pembekuan darah [24]
yang dapat berfungsi sebagai alternatif untuk PRP ' Produk.
Rintangan peraturan terkait penggunaan “ jaringan
nonhomologous ” seperti “ tanam ” komponen jaringan adiposa
subkutan menjadi sendi membuat strategi yang menjanjikan ini
semakin menantang [25].
Data praklinis menunjukkan bahwa produk turunan darah
mendukung pemeliharaan proliferasi sel, serta sifat sel punca
dan di ff karakteristik erentiation dalam pengaturan in vitro [26,
27]. Selain itu, kombinasi platelet lysate dan plasma manusia
dapat mengurangi penuaan AD-MSCs dalam kultur [27]. Spesi
media yang diperkaya PRP fi secara berkala terbukti
meningkatkan di chondrogenic ff erentiasi AD-MSCs [28].
Selain itu, literatur memberikan data yang menunjukkan di
chondrogenic yang lebih baik ff potensiasi intra-artikular
“ homolog ” jaringan adiposa seperti Ho ff Sebuah ' Pad
lemak dibandingkan dengan AD-MSC jaringan subkutan
menunjukkan pentingnya pilihan lokasi panen [29 - 31].
Meskipun banyak data praklinis yang menyelidiki e ff efek
produk darah serta e ff Efek lokasi pada regeneratif dan di ff
potensiasi ADMSCs, kurangnya studi menyelidiki potensi
sinergis e ff dll dari kombinasi serbaguna dari keduanya.
Kesenjangan dalam pengetahuan ini sangat penting
untuk membuat konsep penelitian ini.
Data klinis yang berhubungan dengan sel punca yang diturunkan dari adiposa
dan e ff Efek pada regenerasi tulang rawan tidak fokus pada perbandingan AD-MSC
dari di ff lokasi yang berbeda tetapi hanya menyelidiki jaringan subkutan sebagai
sumber [17, 18]. Demikian juga, aplikasi AD-MSC dengan suplemen produk darah
tidak terwakili dengan baik meskipun penelitian menunjukkan potensi keunggulan
untuk (i) mendemonstrasikan manfaatnya fi ts dari penggunaan sinergis dari
suplemen produk darah bersama
Stem Cells International
dengan pilihan lokasi panen untuk (ii) membantu merancang rezim pengobatan yang
dioptimalkan untuk uji klinis dengan mempertimbangkan lokasi panen dan
suplementasi produk darah yang ideal.
Alasan untuk penelitian ini adalah bahwa ADMSC homolog
dalam jaringan adiposa dipertimbangkan “ limbah bedah ” selama
artroskopi atau operasi lutut terbuka dapat menjadi sumber
autologus untuk penggunaan regeneratif. Cara aplikasi ini akan
melampaui rintangan regulasi, menggunakan jaringan homolog
dengan potensi di unggul ff potensiasi, dan dapat lebih
ditingkatkan dengan suplementasi produk darah.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk (i) membandingkan di
chondrogenic dan osteogenic ff erentiasi AD-MSCs dari 3 lokasi lemak
(Ho ff Sebuah ' Bantalan lemak, femur distal / lemak kantong, dan
lemak subkutan) dan untuk (ii) mendemonstrasikan e ff efek dari tiga
produk darah (EPRP, CPRP, dan hypACT) di ff potensiasi dalam
pengaturan in vitro (Gambar 2).
2. Bahan-bahan dan metode-metode
2.1. Panen Sel. Jaringan adiposa diambil dari 3 donor
(1 laki-laki, 2 perempuan, usia rata-rata ± SD = 71: 3 ± 2: 9 tahun) dari 3
lokasi masing-masing (2 jaringan intra-artikular: Ho ff Sebuah ' bantalan
lemak, femur distal / lemak kantong; 1 jaringan ekstra-artikular: lemak
subkutan) selama TJR, menghasilkan 9 kelompok. Jaringan disimpan di
+ 8 ° dalam solusi PBS. Satu dari tiga donor menerima suntikan
lutut intra-artikular yang mengandung kortikosteroid
(Diprophos ® ( Betamethason) 0: 5ml = 1/2 botol diencerkan
1ml = 1 botol dari Xyloneural® (Lidocaine)) sedangkan dua
donor lainnya menerima suntikan intra-artikular yang
mengandung hyaluronan murni (Hialurom® (Hyaluronate
30mg / 2ml)). Persetujuan tertulis diperoleh dari semua
subjek. Penelitian ini disetujui oleh Komite Etik Rumah Sakit
Evangelic Wina (Suara Positif: 03.05.2018).
2.2. Isolasi dan Kultur Sel. Jaringan adiposa dicincang dengan pisau
bedah, ditimbang, dan dicerna dalam larutan kolagenase (nomor
katalog: C0130, Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) (9000 unit kolagenase I
/ 15ml DMEM / 10 g lemak) selama 2 jam di 37 ° C. Pencernaan diikuti
oleh fi ltrasi (Corning® 40 μ m Cell Strainer, nomor katalog: 431750,
Durham, USA) dan netralisasi dengan media tanam MSC standar
(DMEM, glukosa tinggi, GlutaMAX ™ Suplemen, piruvat, nomor
katalog: 31966047, Gibco Life Technologies Europe Bv, Bleiswijk,
Belanda) dengan tambahan antibiotik 2% Penicillin / Streptomycin
(nomor katalog: P4333, Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim,
Jerman) dan 1% Amphotericin B (nomor katalog: A2942,
Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, Jerman), 10% serum anak
sapi (nomor katalog: 11550356, Gibco ™, quali fi ed, heat inactivated,
Gibco Life Technologies Europe Bv, Bleiswijk, Netherlands), 1% asam
amino nonesensial (nomor katalog MEM NEAA: 11140050, Gibco Life
Technologies Europe Bv, Bleiswijk, Belanda), dan bFGF 1ng / ml
(Fibroblast Growth Factor- Dasar, manusia, nomor katalog: F0291,
Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, Jerman). Setelah
sentrifugasi berikut (700 × g selama 10 menit), supernatan dibuang
dan sel yang tersisa disemai dengan kepadatan 10.000 sel / cm3 2 di
media tanam MSC standar. Sel dikultur sampai mencapai
3
Penyumbang
Lokasi Subkutan.
Ho ff a Lemak kantong
1. FACS
Inkubasi
dengan BDP
(FCS) - EPRP - CPRP - hypACT
Percobaan 2. XTT
3. Osteog. Di ff.
4. Kondrogen. Di ff.
Angka 2: Desain studi. BDP = produk turunan darah; kondrogen. =
kondrogenik; CPRP = plasma kaya trombosit sitrat; EPRP = plasma
kaya platelete EDTA; FACS = fl pemilahan sel yang diaktifkan
uoresensi; FCS = serum anak sapi janin; hipakt = serum hiperakut;
osteogeni. = osteogenik; subkutan = subkutan; XTT = uji aktivitas
metabolik.
sekitar 80-90% con fl uency, dengan sel yang tidak melekat dibuang
setelah 24 jam dan kemudian setiap 2-3 hari. Sel dipisahkan dengan
Accutase (nomor katalog: SCR005, SigmaAldrich Chemie GmbH,
Steinheim, Jerman), disentrifugasi, dan diencerkan dalam media
pembekuan (10% DMSO (nomor katalog: D8418, Sigma-Aldrich Chemie
GmbH, Steinheim, Jerman) dan 90% FCS (nomor katalog: 11550356, Gibco ™)).
1 juta sel dalam 1ml media pembekuan dikumpulkan dalam cryovial dan
disimpan dalam wadah pembekuan sel bebas alkohol dalam -80 ° C freezer
semalaman. Sampel hari berikutnya dipindahkan ke tangki nitrogen cair
tempat mereka disimpan dalam fase uap nitrogen.
Bagian 1 - diperoleh setelah membelah sel setelah isolasi dari
jaringan asli - kemudian segera digunakan untuk eksperimen atau
diawetkan dalam kriopreservasi dalam nitrogen cair. Akibatnya,
hanya sel dari P1 atau P2 yang digunakan untuk percobaan.
Untuk mencairkan sel, sampel segera dipindahkan
dari nitrogen cair ke 37 ° C water bath untuk
< 1 menit. Sampel yang telah dicairkan diencerkan menggunakan media
tanam standar MSC yang telah dihangatkan dan disentrifugasi. Jika
viabilitas setelah pencairan> 70%, sel disemai dengan kepadatan
10.000 sel / cm 2 di media tanam MSC standar.
2.3. Persiapan Produk Darah
2.3.1. Serum Hiperakut. hypACT disiapkan seperti yang dijelaskan dalam
Kardos et al. [34]. Brie fl y, darah lengkap diambil dari 8 pendonor sehat
(25 - 45 tahun) dengan perangkat hypACT (nomor katalog: 700194,
OrthoSera, Krems an der Donau, Austria) menurut pabrikan ' protokol.
Sampel segera disentrifugasi pada 1710 × g selama 5 menit pada suhu
kamar. Setelah sentrifugasi, bagian atas (kaya trombosit
fi bekuan brin) dan lapisan bawah terbentuk. Lapisan bawah,
terutama yang mengandung sel darah merah, telah dihilangkan.
2.3.2. Plasma Kaya Trombosit. Seluruh darah dari 8 donor
yang sama seperti pada kasus preparasi hypACT, diambil
4 Stem Cells International

dalam VACUETTE 9ml K3EDTA (nomor katalog: 454217; Greiner Fisher Scienti fi c, Waltham, USA) dengan kepadatan 6250 per cm 2
Bio-One, Kremsmünster, Austria) dan VACUETTE 9ml 9NC (2000 sel / sumur) dan tumbuh selama 48 jam dalam 100 μ l
Trinatriumcitrat 3.2% tabung pengumpul darah (nomor katalog: media tanam standar. 48 jam setelah penyemaian (hari 0),
455322; Greiner Bio-One, Kremsmünster, Austria) dan media tanam standar diganti dengan 100 μ l mengandung 10%
disentrifugasi pada 440 × g selama 10 menit pada suhu kamar. dari setiap produk darah (EPRP, CPRP, dan serum hiperakut)
Tiga lapisan terbentuk di dalam tabung: (i) lapisan bawah (sel atau 10% FCS sebagai kelompok kontrol. Untuk suplementasi
darah merah), (ii) lapisan tengah (dengan bu ff y melapisi), dan PRP, 2U / ml heparin (nomor katalog: 3909969, Gilvasan GmbH,
(iii) lapisan atas (plasma). PRP miskin leukosit diperoleh dengan Wina, Austria) ditambahkan untuk menghindari pembekuan.
aspirasi lapisan plasma tanpa lapisan tengah (bu ff mantel y). Aktivitas metabolik AD-MSCs diselidiki dengan uji XTT (nomor
Aspirasi dipindahkan ke dalam tabung elang 15ml dan katalog: 11465015001 , Roche Diagnostics GmbH, Mannheim,
disentrifugasi lagi pada 1700 × g selama 10 menit. Pelet platelet Jerman) menurut pabrikan ' protokol. Untuk setiap perlakuan, 3
yang terbentuk disuspensi ulang dalam 50% supernatan sumur digunakan sebagai kontrol untuk background absorbansi
platelet-poor-plasma yang tersisa. (medium dengan / tanpa produk darah) dan 5 sumur digunakan
Produk darah dikumpulkan dan segera digunakan untuk eksperimen atau untuk pengukuran absorbansi untuk setiap suplementasi pada
disimpan pada suhu -80 ° C untuk digunakan nanti. suatu spesies. fi c titik waktu. Absorbansi relatif diukur dengan
menggunakan pembaca pelat (Synergy 2, BioTek Instruments,
2.4. Di ff erentiasi (Osteogenik dan Kondrogenik). Penyakit Inc., Vermount, USA). Absorbansi diukur pada 492 nm, dengan
osteogenik ff erentiasi dilakukan di 6-well culture plates panjang gelombang referensi 690nm. Pengukuran selesai
dalam 2D monolayer culture dan dalam sistem kultur pelet dilakukan pada hari ke 0, 1, 3, dan 6. Nilai yang diperoleh
untuk chondrogenic di ff erentiation. Waktu inkubasi dalam setelah pengukuran absorbansi dibagi dengan nilai absorbansi
media tanam standar adalah 2-4 hari (hingga sel mencapai dari hari ke 0 sehingga didapatkan nilai 1 untuk hari ke 0 dan
90-100% con fl kegunaan untuk osteogenesis). Di ff Proses nilai perubahan lipat pada hari ke 1, 3, dan 6.
diferensiasi diinduksi dengan penambahan faktor-faktor
khusus dan di ff suplemen serum yang salah: EPRP, CPRP
(dengan tambahan 2U / ml heparin (nomor katalog: 2.6. FACS. Aliran sitometri dengan spesifikasi garis keturunan
3909969, Gilvasan GmbH, Wina, Austria)), serum MSC manusia fi spidol c - positif untuk CD73, CD105, dan CD90
hiperakut, dan FCS. Media osteogenik berikut dan negatif untuk CD34, CD11b, CD19, CD45, dan HLA-DR - dilakukan
digunakan: Gibco DMEM, glukosa tinggi, GlutaMAX ™ Suplemen,
untuk mendemonstrasikan spesi sel induk fi kota selain
piruvat (nomor katalog: 10569010), deksametason keterikatannya pada plastik sebelum di ff percobaan
100nM (nomor katalog: D4902, Sigma-Aldrich Chemie erentiation [35]. AD-MSC dikultur hingga 90% penipu fl uency
GmbH, Steinheim, Jerman), 50 μ g / ml asam askorbat dalam media tanam standar. Media diganti setiap 3 hari. Sel
(nomor katalog: A4403, Sigma-Aldrich Chemie GmbH, dipisahkan dengan Accutase (nomor katalog: A6964,
Steinheim, Jerman), dan 10mM β- gliserol fosfat Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Schnelldorf, Jerman),
(nomor katalog: G9422, Sigma-Aldrich Chemie GmbH, disentrifugasi di FACS bu ff eh (1% ( v / v) FCS di phosphatebu ff ered
Steinheim, Jerman). saline (PBS)), dan diwarnai dengan antibodi, seperti yang
Berikut ini digunakan untuk di chondrogenic ff erentiasi: dijelaskan pada Tabel 1 (nomor katalog: 562245, BD Stem-
Gibco DMEM, glukosa tinggi, GlutaMAX ™ Suplemen, piruvat fl ow hMSC Analysis Kit, BD Biosciences, St. Louis, USA). Sampel
(nomor katalog: 10569010, LifeTech Austria, Wina, Austria), diinkubasi dengan antibodi selama 30 menit pada suhu kamar
1% ITS (Suplemen Media Cair ITS (100 ×), nomor katalog: dalam kegelapan.
I3146, Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, Jerman), 100 Analisis aliran sitometri dilakukan dengan menggunakan
nM deksametason (nomor katalog: D4902, Sigma-Aldrich FC500 Flow Cytometer (Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Itu
Chemie GmbH, Steinheim, Jerman), 50 μ g / ml asam askorbat fl aliran dilakukan pada sel hidup dan gerbang negatif dipasang
(nomor katalog: A4403, Sigma-Aldrich Chemie GmbH, pada kontrol isotipe.
Steinheim, Jerman), 1% asam amino nonesensial (nomor
katalog MEM NEAA: 11140050, Gibco Life Technologies 2.7. Ekstraksi RNA dan Reaksi Rantai Polimerase Waktu
Europe Bv, Bleiswijk, Belanda), 5ng / ml TGFbeta -3 (nomor Nyata Kuantitatif (qRT-PCR)
katalog: AF-100-36E, PeproTech, New York, USA), dan 4%
metil selulosa (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Steinheim, 2.7.1. Ekstraksi RNA. Setelah di ff erentiasi, sel dikumpulkan
Jerman) dengan penambahan 1% atau 5% di ff suplementasi dan dikumpulkan secara berkelompok dalam 200 μ l PBS. Sel
produk darah yang salah atau FCS. 250.000 sel induk yang dihomogenisasi dengan menambahkan manik-manik
diturunkan dari adiposa dicampur dengan media keramik (nomor katalog MagNA Lyser Green Beads:
khondrogenik dan ditempatkan dalam tabung polipropilen 03358941001 , Roche Diagnostics, Basel, Swiss) dalam
15ml. Untuk membentuk pelet, sampel disentrifugasi perangkat MagNA Lyser (Roche ™ MagNA Lyser Benchtop
dengan kecepatan tertinggi 4164 × g selama 10 menit. Homoginizaton System). Homogenisasi (6500 rpm, 20 detik)
Di ff percobaan erentiation berlangsung 3 minggu, diulang dua kali dengan fase pendinginan 2 menit di antara
dan spesi fi c di ff media erentiasi diganti 2 kali seminggu. (8-12 C °). RNA diisolasi menggunakan Kit Isolasi RNA Murni
Tinggi (nomor katalog: 11828665001 , Roche Diagnostics
2.5. Uji Aktivitas Metabolik (Uji XTT). AD-MSC diunggulkan GmbH, Mannheim, Jerman) menurut pabrikan ' protokol. RNA
dalam pelat 96-sumur (nomor katalog: 260860, Thermo dielusi dan disimpan pada -80 ° C sampai sintesis cDNA.
Stem Cells International
Meja 1: Aliran antibodi sitometrik.
Penanda positif
Koktail negatif
mIgG1, κ PerCP-Cy5.5 / mIgG1, κ APC / mIgG1, κ FITC (untuk penanda positif)
Kontrol isotipe
2.7.2. Analisis Ekspresi Gen. Sintesis cDNA dilakukan dengan
menggunakan Kit Sintesis cDNA Transcriptor First Strand (nomor katalog:
04379012001 , Roche, Basel, Swiss). RT-qPCR dilakukan menggunakan
FastStart Essential DNA Probes Master Kit (nomor katalog: 06402682001 ,
Roche, Basel, Swiss) dalam rangkap tiga menggunakan LightCycler® 96
dari Roche. 1 μ l produk cDNA, FastStart Probe Master 2x, probe hidrolisis ( fi Jerman).
konsentrasi akhir 250nM), dan primer ( fi konsentrasi akhir 900nM)
digunakan untuk ampli PCR fi kation. Primer untuk setiap gen dirancang
untuk menjangkau intron untuk mengecualikan kontaminasi genom
dalam produk PCR dan dirancang menggunakan Desain Pengujian
Sistem ProbeLibrary Universal. Secara total, delapan gen dianalisis:
kolagen tipe 2 (COL2AB), kolagen tipe 1 (COL1), SOX9, matriks
metaloproteinase-3 (MMP3), alkalin fosfatase (ALPL), faktor transkripsi
terkait runt 2 (RUNX2), dan osteocalcin (OCN). Urutan primer yang
digunakan disajikan pada Tabel 2. GAPDH digunakan sebagai gen
housekeeping. Kondisi PCR dioptimalkan untuk suhu anil dan nomor
siklus terbatas (40) untuk memastikan bahwa pembentukan produk
berada dalam kisaran responsif.
2.8. Histologi. Pewarnaan kondrogenik dilakukan dengan
Alcian Blue (nomor katalog: A3157, Sigma-Aldrich Chemie
GmbH, Schnelldorf, Jerman), Hematoxylin (Mayer ' s
Hematoxylin, nomor katalog: S3309, DakoCytomation,
Carpinteria, USA), dan Eosin (nomor katalog: 230251,
Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Schnelldorf, Jerman).
Pellet dikeringkan, ditempatkan pada cetakan dasar (Fisherbrand ™ Cetakan
Dasar Sekali Pakai, nomor katalog: 22-363-
554, Fisher Scienti fi c, Hampton, AS), fi diisi dengan matriks
jaringan beku (Tissue-Tek® OCT ™, nomor katalog: 4583, Sakura
Finetek, Alphen aan den Rijn, Belanda), dan ditransfer ke -80 ° C
setidaknya selama 24 jam. Pelet beku dipotong (6 μ ketebalan m)
pada perangkat cryostat (Cryostar NX70, Thermo Fisher Scienti fi c,
Waltham, USA) dan ditempatkan pada slide kaca berperekat
(Thermo Scienti fi c ™ SuperFrost Plus ™, nomor katalog:
10149870, Thermo Fisher Scienti fi c, Waltham, AS). Slide
dikeringkan dan fi diperbaiki dalam aseton dingin (-20 ° C) selama
10 menit.
Pewarnaan dalam larutan Alcian Blue (nomor katalog:
A3157, Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Schnelldorf, Jerman)
berlangsung selama 30 menit. Bagian dicuci dalam air keran
selama 1 menit dan didehidrasi melalui etanol 95% dan 2
perubahan etanol absolut, masing-masing selama 3 menit.
Slide dibersihkan dengan xylene, dipasang dengan xylene,
dan ditutup dengan kaca. Glikosaminoglikan tulang rawan
tampak biru.
Hematoxylin (Mayer ' s Hematoxylin, nomor katalog:
S3309, DakoCytomation, Carpinteria, USA) dan Eosin
(nomor katalog: 230251, Sigma-Aldrich Chemie GmbH,
5
CD105 PerCP-Cy5.5 / CD73 APC / CD90 FITC
CD45 / CD34 / CD11b / CD19 / HLA-DR
mIgG1, κ PE / mIgG2a, κ PE (untuk koktail negatif)
Schnelldorf, Jerman) pewarnaan dilakukan menurut
pabrikan ' protokol (DakoCytomation).
Gambar diambil dengan mikroskop cahaya (Mikroskop
DM-1000, Leica Microsystems) dan diproses menggunakan
software Leica Manager (Leica Microsystems, Wetzlar,
2.9. Pewarnaan Osteogenik dengan Alizarin Red. Sel dulu fi diperbaiki
dengan larutan formalin (nomor katalog: HT501128,
SigmaAldrich Chemie GmbH, Schnelldorf, Jerman) larutan
10%, dengan waktu inkubasi 30 menit pada suhu kamar. Itu fi
larutan xative telah dihapus, dan sampel dicuci dengan PBS.
Sel diwarnai dengan 2% Alizarin Red Stain Solution (Alizarin
Red S, nomor katalog: A5533, Sigma-Aldrich Chemie GmbH,
Schnelldorf, Jerman). 2 g Alizarin Red dilarutkan dalam
100ml akuades, fi disaring, dan pH disesuaikan dengan nilai
4,3. Sel ditutup dengan larutan pewarna selama 30 menit
pada suhu kamar. Setelah larutan dikeluarkan, sel dicuci
dengan air dan dianalisis di bawah mikroskop. Area
mineralisasi tampak merah. Gambar diambil dengan
mikroskop cahaya (Mikroskop DM-1000, Leica
Microsystems). Gambar diproses menggunakan perangkat
lunak Leica Manager (Leica Microsystems, Wetzlar, Jerman).
Setelah itu, sel yang diwarnai diinkubasi dengan 10% asam
asetat selama 30 menit dan dikumpulkan dengan pengikis
sel dan vortex. Sampel kemudian dipanaskan pada suhu 85 ° C
selama 10 menit, didinginkan, dan disentrifugasi pada
20.000 × g selama 15 menit. Supernatan dinetralkan dengan
10% amonium hidroksida. Absorbansi diukur pada panjang
gelombang 405nm dengan pembaca pelat (Synergy 2,
BioTek Instruments, Inc., Vermount, USA).
2.10. Statistik. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan
GraphPad Prism fi lima perangkat lunak. Hasil PCR dianalisis
menggunakan uji ANOVA yang dikombinasikan dengan posttest
perbandingan ganda Tukey-Kramer. Data aktivitas metabolik
dianalisis menggunakan ANOVA dua arah dan posttest
Bonferroni. Asumsi ANOVA adalah veri fi ed. p < 0:05 dianggap
signifikan fi tidak bisa. Data disajikan sebagai rata-rata ± SEM.
3. Hasil
3.1. Persiapan Produk Darah. Serum hiperakut, EPRP, dan CPRP
dibuat dari darah utuh dari 8 donor yang sama; Namun, hal ini
mengungkapkan di ff isi sel darah yang salah (Tabel 1). Semua produk
darah memiliki konsentrasi sel darah merah dan sel darah putih
yang jauh lebih rendah dibandingkan dengan nilai normal untuk
jumlah sel darah perifer [36]. Oleh karena itu, EPRP dan CPRP adalah
PRP miskin leukosit. Serum hiperakut memiliki konsentrasi
trombosit yang sangat rendah, sedangkan konsentrasi PLT di EPRP
6 Stem Cells International

Meja 2: Primer yang digunakan dalam reaksi berantai polimerase waktu nyata.

Amplicon (bp) Suhu anil. ( ° C)

Penanda osteogenik
GAPDH
Maju: 5 ′ - ACATCGCTCAGACACCATG-3 ′ 143 60
Terbalik: 5 ′ - TGTAGTTGAGGTCAATGAAGGG-3 ′
ALPL
Maju: 5 ′ - GATGTGGAGTATGAGAGTGACG-3 ′ 133 59
Terbalik: 5 ′ - GGTCAAGGGTCAGGAGTTC-3 ′
RUNX2
Maju: 5 ′ - TTCACCTTGACCATAACCGTC-3 ′ 148 61
Terbalik: 5 ′ - GGCGGTCAGAGAACAAACTAG-3 ′
COL1A1
Maju: 5 ′ - TCCAAACCACTGAAACCTCTG-3 ′ 167 62
Terbalik: 5 ′ - CCCCTGGAAAGAATGGAGATG-3 ′
OCN
Maju: 5 ′ - GGCGCTACCTGTATCAA TGG-3 ′ 106 59
Terbalik: 5 ′ - TCAGCCAACTCGTCACA GTC-3 ′
Penanda kondrogenik
GAPDH
Maju: 5 ′ - CTCTGCTCCTCCTGTTCGAC-3 ′ 112 60
Terbalik: 5 ′ - ACGACCAAATCCGTTGACTC-3 ′
COL1A1
Maju: 5 ′ - GGGATTCCCTGGACCTAAAG-3 ′ 63 61
Terbalik: 5 ′ - GGAACACCTCGCTCTCCAG-3 ′
COL2AB
Maju: 5 ′ - GCACCTGCAGAGACCTGA-3 ′ 116 62
Terbalik: 5 ′ - GGGTCAATCCAGTAGTCTCCAC-3 ′
SOX9
Maju: 5 ′ - TACCCGCACTTGCACAAC-3 ′ 73 59
Terbalik: 5 ′ - TCTCGCTCTCGTTCAGAAGTC-3 ′
MMP3
Maju: 5 ′ - CAAAACATATTTCTTTGTAGAGGACAA-3 ′ 91 58
Terbalik: 5 ′ - TTCAGCTATTTGCTTGGGAAA-3 ′

sekitar 3-4 kali lebih banyak dan sekitar 2 kali lebih banyak
pada CPRP dibandingkan whole blood.
3.2. FACS - Sel Punca yang Diisolasi dari Ketiga Lokasi
Mengekspresikan Penanda MSCM Positif. Sebagian besar sel
yang diisolasi dari ketiga lokasi mengekspresikan penanda
permukaan sel induk mesenkim positif (CD73, CD90, dan CD105)
[37] dan tidak mengekspresikan penanda yang khas untuk sel
induk hematopoietik, makrofag monosit, leukosit, dan limfosit (
CD45, CD34, CD11b, CD19, dan HLA-DR) (Gambar 3, Tabel 3)
[35]. Oleh karena itu, metode isolasi adalah su ffi efisien untuk
mendapatkan populasi sel induk adiposa.
3.3. XTT - hypACT dan CPRP Meningkatkan Aktivitas Metabolik
AD-MSC Ex Vivo. Peningkatan aktivitas metabolik tertinggi mengenai
perubahan lipatan diamati di kedua kelompok lokasi intraartikular
Ho ff Sebuah ' Bantalan lemak dan lemak kantong tidak tergantung
pada subkelompok produk darah. Sel yang diturunkan subkutan
menunjukkan perubahan lipatan paling sedikit. Pola peningkatan
aktivitas berkaitan dengan perubahan lipatan per hari dan kelompok
serupa pada kedua struktur intra-artikular dibandingkan dengan sel
yang diturunkan dari subkutan.
Perubahan paling sedikit secara keseluruhan dalam aktivitas
metabolik diamati di subkelompok EPRP secara konsisten di
semua lokasi.
Stem Cells International 7

CD90 CD73 CD105 CD45 / CD34 /

CD11b / HLA-DR
1,0 juta

1,5K 1,5K
1,5K
800K 1,5K

Menghitung
Menghitung
99,0% 96,2%
1,0K

Menghitung
600K

Menghitung
1,0K 1,0K

SS-A :: SS
98,1%
1,0K 0,6%

D1
400K
500 500 500
200K 500

0 0 0 0
0 50K 100K 150K 200K 250K 100 101 102 103 104 105 106 101 102 103 100 104 105 106 0
100 101 102 103 104 105 106
FS-H :: FS
Comp-FL1-A :: FITC Comp-FL6-A :: APC Comp-FL4-A :: Cv5.5 101 102 103 100 104 105 106

1,0 juta Comp-FL2-A :: PE

1,2K 1,5K
800K 99,5%
1,5K 99,5% 1,5K 4,74%

Menghitung
83,2%
Ho ff a

Menghitung
900

Menghitung
SS-A :: SS

600K

Menghitung
1,0K
1,0K 1,0K

D2
400K 600

500
300 500 500
200K

0 0 0
0
0 50K 100K 150K 200K 250K 101 102 103 100 104 105 106 0
100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106
100 101 102 103 104 105 106
FS-H :: FS Comp-FL1-A :: FITC Comp-FL4-A :: Cv5.5
Comp-FL6-A :: APC Comp-FL2-A :: PE
1,0 juta 1,5K
1,5K
99,2% 1,5K 99,3% 85,3% 1,5K 0,71%
800K
Menghitung

Menghitung
1,0K

Menghitung

Menghitung
1,0K
SS-A :: SS

600K 1,0K 1,0K

D3
400K
500 500
500 500
200K

0 0 0 0 0
0 50K 100K 150K 200K 250K 100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106
FS-H :: FS
Comp-FL1-A :: FITC Comp-FL6-A :: APC Comp-FL4-A :: Cv5.5 Comp-FL2-A :: PE

CD90 CD73 CD105 CD45 / CD34 /

1,0 juta
CD11b / HLA-DR
800K 800 99,3% 74,2%
86,7% 800 800 800 0,05%
600K 600
SS-A :: SS

Menghitung

Menghitung

Menghitung
600 600

Menghitung
600

D1
400K 400
400 400
400
200K 200
200 200
200
0 0
0 0
0 50K 100K 150K 200K 250K 101 102 103 100 104 105 106
100 101 102 103 104 105 106 101 102 103 100 104 105 106 0
FS-H :: FS Comp-FL1-A :: FITC Comp-FL6-A :: APC 100 101 102 103 104 105 106
Comp-FL4-A :: PECY5.5
1,0 juta 2.0K
Comp-FL2-A :: PE
2.0K 2.0K
84,3% 2.0K
92,8% 91,1%
800K 0,06%
Kantong

1,5K
Menghitung

1,5K
Menghitung

Menghitung

1,5K 1,5K

Menghitung
600K
SS-A :: SS

1,0K

D2
1,0K 1,0K
1,0K
400K
500
500 500 500
200K
0
0 0 0 0
101 102 103 100 104 105 106
0 50K 100K 150K 200K 250K 100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106
Comp-FL1-A :: FITC 100 101 102 103 104 105 106
FS-H :: FS Comp-FL6-A :: APC Comp-FL4-A :: Cv5.5 Comp-FL2-A :: PE
1,0 juta

1,5K 1,5K 96,5% 1,5K 1,5K

800K 0,06%
98,4% 87,2%
Menghitung

Menghitung

Menghitung

Menghitung
SS-A :: SS

600K 1,0K 1,0K 1,0K 1,0K

D3
400K
500 500 500 500
200K

0 0 0 0
0
0 50K 100K 150K 200K 250K 100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106
FS-H :: FS Comp-FL1-A :: FITC Comp-FL6-A :: APC Comp-FL4-A :: Cv5.5 Comp-FL2-A :: PE

CD90 CD73 CD105 CD45 / CD34 /

1,0 juta
CD11b / HLA-DR
800K
1,5K 1,5K 99,9% 1,5K 94,6% 1,5K 0,24%
99,6%
600K
SS-A :: SS

Menghitung

Menghitung

Menghitung

Menghitung

1,0K 1,0K 1,0K 1,0K

400K
D1

200K 500 500 500 500

0
0 50K 100K 150K 200K 250K 0 0 0 0
FS-H :: FS
100 101 102 103 104 105 106 101 102 103 100 104 105 106 101 102 103 100 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106
Comp-FL1-A :: FITC Comp-FL6-A :: APC Comp-FL4-A :: Cv5.5
800 800 Comp-FL2-A :: PE
1,0 juta 800 95,6%
94,0%
77,6% 1,0K
800K 600 600
Subkutan

600 0,34%
Menghitung

800
Menghitung

Menghitung

Menghitung

600K
SS-A :: SS

400 400 400

D2

600
400K
400
200 200 200
200K
200
0 0
0 100 101 102 103 104 105 106 0 0
0 50K 100K 150K 200K 250K 100 101 102 103 104 105 106
100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106
FS-H :: FS Comp-FL1-A :: FITC Comp-FL6-A :: APC Comp-FL4-A :: Cv5.5 Comp-FL2-A :: PE
1,0 juta
1,2K
1,2K
96,4%
99,4% 96,4% 1,0K 1,2K 0,09%
800K 900
Menghitung

Menghitung

900
800
Menghitung

900
Menghitung

600K
SS-A :: SS

D3

600 600
600
400K 600
400
300 300
200K 300
200

0 0 0 0 0
0 50K 100K 150K 200K 250K 100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106
100 101 102 103 104 105 106 100 101 102 103 104 105 106
FS-H :: FS
Comp-FL1-A :: FITC Comp-FL4-A :: Cv5.5 Comp-FL2-A :: PE
Comp-FL6-A :: APC

Angka 3: Hasil aliran sitometri. Hijau = CD90; merah muda terang = CD73; merah muda tua = CD105; oranye = penanda negatif ' koktail
CD45 / CD34 / CD11b / CD19 / HLA-DR (CD = cluster dari di ff erentiasi; D = donor).
8 Stem Cells International
Meja 3: Jumlah sel dalam produk darah (RBC - sel darah merah,
WBC - sel darah putih, PLT - trombosit, dan MPV - berarti volume
trombosit).
RBC (10 6 / μ l) WBC (10 3 / μ l) PLT (10 3 / μ l) MPV ( fl)
hypACT 0,03 0.18 3 6.5
EPRP 0,05 0,75 834 10.8
CPRP 0,04 1.23 505 9.8
Ho ff Sebuah ' Sel induk bantalan lemak menunjukkan tanda fi aktivitas
metabolik yang jauh lebih tinggi pada hari ke-3 pada kelompok yang
dilengkapi dengan CPRP dan dengan serum hiperakut pada populasi
yang diisolasi dari lemak subkutan. Pada hari ke 6, subkelompok CPRP
dan hypACT menunjukkan tanda-tanda yang signifikan fi aktivitas
metabolik yang jauh lebih besar dibandingkan dengan FCS dan EPRP di
ketiga lokasi ( p < 0:05). Di ff hubungan antara subkelompok hypACT dan
CPRP pada hari ke-6 tidak signifikan fi tidak dapat di populasi sel induk
mana pun (Gambar 4).
3.4. Histologi - EPRP dan hypACT Meningkatkan Chondrogenic
Di ff erentiation Sedangkan CPRP dan hypACT Enhanced
Osteogenic Di ff erentiation
3.4.1. Chondrogenic Di ff erentiation. Potongan histologis setelah
di chondrogenic ff Erentiasi disajikan pada Gambar 5 (a) dan 5 (b).
Gambar mikroskopis ini menunjukkan keberhasilan,
kondrogenik di ff erentiation.
Dalam penilaian kualitatif, ukuran pellet tidak berbeda-beda ff
berbeda di antara kelompok. Begitu juga dalam penilaian
kualitatif, tampilan histologis di ff ers di antara kelompok. Irisan
histologis berasal dari Ho ff Sebuah ' Pelet bantalan lemak
menunjukkan penipu fi morfologi ECM yang dibutuhkan. Sampel
yang diturunkan dari subkutan menunjukkan di ff penggunaan
dan komposisi ECM yang heterogen. Sampel yang diturunkan
dari kantong lemak menunjukkan di ff gunakan tetapi morfologi
ECM homogen. Banyak fi Sures dan pulau jaringan yang hancur
dapat ditemukan pada struktur ekstra-artikular yang berasal
dari lemak subkutan. Selanjutnya, pada kelompok dengan
konsentrasi produk darah 1%, gambaran histologis ECM tidak
jelas fi ned dan homogen. Sampel yang diturunkan dari subkutan
juga dipotong setelah sepuluh hari di ff erentiation. Di pendek ini ff
periode erentiation menunjukkan sebuah con fi tampilan
histologis morfologi ECM yang ned dan homogen.
3.4.2. Osteogenic Di ff erentiation. Pewarnaan Alizarin Merah
menunjukkan mineralisasi paling intens pada kelompok yang
diberi suplemen hipACT dan CPRP terlepas dari lokasi
pemanenan. Sebaliknya, kelompok yang diberi suplemen FCS
dan EPRP menunjukkan intensitas pewarnaan yang paling
sedikit di antara semua populasi sel induk. Ini fi Temuan
konsisten dalam analisis gambar makroskopik dan mikroskopis
(Gambar 6 (a) dan 6 (b)). Kuanti itu fi kation akumulasi Alizarin
Red berhubungan dengan pengamatan mikroskopis (Gambar 6
(b)).
3.5. PCR - EPRP dan hypACT Meningkatkan Ekspresi Gen
Kondrogenik Sedangkan CPRP dan hypACT Sama-sama
Meningkatkan Ekspresi Gen Osteogenik
3.5.1. Kondrogenik. Sebelum analisis ekspresi gen, primer
dirancang dan diuji dengan sukses mengenai nilai suhu
yang dioptimalkan untuk anil primer.
COL2AB tidak diekspresikan di salah satu dari tiga lokasi pada
hari 0, itulah mengapa nilai setelah di tiga minggu ff periode
erentiation ditampilkan dalam tingkat ekspresi relatif daripada
dalam perubahan lipatan.
Di ff Perbedaan tingkat ekspresi gen (gen terkait
kondrogenik khas: COL2AB dan SOX9 dan gen tambahan:
MMP3 dan COL1A1) dianalisis berkaitan dengan (i) lokasi
panen, (ii) suplementasi produk darah, dan (iii)
konsentrasi produk darah.
Mengenai lokasi, pengamatan umum untuk sel-sel yang berasal
dari struktur intra-artikular (Ho ff a, kantong) menunjukkan tingkat
ekspresi yang lebih tinggi untuk gen khondrogenik khas (COL2AB,
SOX9) dibandingkan dengan sel yang diturunkan dari struktur ekstra
artikular lemak subkutan. Sel turunan subkutan tidak menunjukkan
ekspresi COL2AB dalam kelompok produk darah dan kadar SOX9
yang lebih rendah dibandingkan dengan struktur intraartikular.
Terkait produk darah, subkelompok EPRP menunjukkan tanda
yang signifikan fi ekspresi COL2AB yang jauh lebih tinggi di Ho ff sel
turunan a. Selain itu, subkelompok EPRP menunjukkan perubahan
lipatan SOX9 yang lebih tinggi dalam sel dari kedua struktur
intra-artikular yang signifikan. fi tidak bisa dalam kasus Ho ff Sebuah ' s
sel. CPRP menunjukkan ekspresi gen kondrogenik paling sedikit
(SOX9, COL2AB) di antara semua 3 suplemen produk darah di semua
lokasi.
Mengenai konsentrasi produk darah, EPRP1% mengarah ke
suatu signi fi ekspresi COL2AB jauh lebih tinggi dibandingkan dengan
EPRP5% di Ho ff sel turunan a. Untuk ekspresi SOX9, EPRP5%
mengarah ke signi fi tingkat ekspresi yang jauh lebih tinggi
dibandingkan dengan EPRP1%. Sebaliknya CPRP5% menunjukkan
signifikansi fi tidak bisa menurunkan ekspresi SOX9 dibandingkan
dengan CPRP1%. Ini fi Temuan konsisten baik pada sel yang
diturunkan dari kantong dan subkutan. subkelompok hypACT tidak
menunjukkan signifikansi fi tidak bisa ff perbedaan dalam ekspresi
SOX9 untuk 1% versus 5% di ketiga lokasi.
Gen katabolik MMP3, penting dalam pemecahan
kolagen, diekspresikan di antara semua 3 lokasi pada hari ke
0 dan signifikan. fi segera turun setelah 3 minggu ff erentiation.
Pengecualian hanya ditemukan di subkelompok CPRP5%
untuk sel turunan kantong di mana MMP3 secara signifikan
diregulasi.
COL1A1 diekspresikan secara signifikan fi jauh lebih tinggi dengan
suplementasi EPRP5% di Ho ff sel turunan a dibandingkan dengan semua
grup lain di lokasi ini. Demikian juga, serum hiperakut5% menyebabkan
signi fi ekspresi COL1A1 yang jauh lebih tinggi dalam sel yang diturunkan
dari subkutan (Gambar 7).
3.5.2. Osteogenik. Gen spesi fi c untuk di ff stadium yang
berbeda dari penyakit osteogenik ff erentiasi dianalisis
selama 21 hari ff periode erentiasi: OCN, ALPL, RUNX2, dan
COL1A1 (kolagen 1).
Ekspresi OCN pada hari ke 0 cenderung nol; oleh karena itu, data
OCN ditampilkan dalam tingkat ekspresi relatif daripada dalam
perubahan lipat.
Secara keseluruhan, sel berasal dari Ho ff Sebuah ' Bantalan lemak masing-masing
menunjukkan perubahan lipatan tertinggi atau tingkat ekspresi relatif.
Stem Cells International 9
Metabolik ativitas (XTT, Abs, perubahan lipat)

Metabolik ativitas (XTT, Abs, perubahan lipat)

Metabolik ativitas (XTT, Abs, perubahan lipat)
ns ns
15 25 10
⁎⁎⁎ ⁎ ⁎
ns
20
⁎⁎⁎ ⁎⁎⁎ ⁎
10
⁎ ⁎⁎⁎ 15
5
10
5
5

0 0 0

Hari ke-3
Hari ke-3
Hari ke-3

Hari 0

Hari 1

Hari 6
Hari 0

Hari 1

Hari 6
Hari 0

Hari 1

Hari 6

Sel induk bantalan lemak Ho a Sel induk kantong Sel induk lemak subkutan

FCS EPRP
hypACT CPRP

Angka 4: Aktivitas metabolisme. CPRP = plasma kaya trombosit sitrat; EPRP = plasma kaya platelete EDTA; FCS = serum anak sapi janin; hipakt
= serum hiperakut; ns = nonsigni fi tidak bisa. Hasil dinyatakan sebagai rata-rata ± SD. ∗ mewakili p < 0:05, ∗∗ mewakili p < 0:01, dan
∗∗∗ mewakili p < 0:001.

Ekspresi OCN tertinggi diamati pada kelompok hypACT dan pogenik [43], kondrogenik [44 - 46], dan osteogenic di ff erensiasi dari
CPRP di ketiga lokasi. Tingkat ekspresi itu signifikan fi lebih tinggi MSCs [45, 47]. Oleh karena itu, dasar pemikiran untuk penelitian ini
dalam dua kelompok ini pada hari ke-21 dibandingkan dengan hari adalah untuk memperluas pengetahuan untuk optimalisasi rejimen
ke-10 dalam sel yang diturunkan dari Ho ff Sebuah ' s dan jaringan pengobatan sel punca adiposa yang dikombinasikan dengan produk
subkutan. Sel turunan kantong menunjukkan tingkat ekspresi relatif darah autologus dalam uji klinis. Sel punca dapat diberikan kepada
minimal secara keseluruhan. pasien sesuai dengan penggunaan jaringan yang homolog ke lokasi
Perubahan lipat ALPL turun dalam kasus Ho ff sel yang diturunkan kerusakan - lemak sendi dan intraartikular dalam kasus ini - versus
dari hari ke 10 sampai hari ke 21. Penurunan ini signifikan fi tidak bisa di penggunaan nonhomologous yang saat ini diterapkan (lemak
lokasi ini untuk sel yang dilengkapi hipACT-, EPRP-, dan CPRP. Dua lokasi subkutan). Pendekatan ini dapat memberikan kesempatan kepada
lainnya menunjukkan perubahan lipatan yang kurang menonjol secara ahli bedah ortopedi untuk menggunakan
keseluruhan tanpa tanda fi tidak bisa ff erences. “ limbah bedah ” serta untuk melewati rintangan regulasi untuk
RUNX2 menunjukkan penurunan perubahan lipatan antara hari ke-10 dan hari transplantasi sel nonhomologous [25].
ke-21 pada sel yang dilengkapi dengan CPRP dan hypACT yang keduanya berasal dari Dalam penelitian ini ditunjukkan oleh fl Alur sitometri bahwa isolasi
Ho ff Sebuah ' s dan lemak subkutan. Penurunan ini signifikan fi cant untuk suplementasi sel punca dari kedua sumber jaringan lemak intra-artikular yang diteliti - Ho
CPRP di Ho ff Sebuah ' s sel. ff Sebuah ' bantalan lemak dan lemak kantong yang kurang dipelajari serta
Perubahan COL1A1 kali lipat adalah yang tertinggi untuk CPRP dan hipACT dari lemak subkutan - mengakibatkan populasi sel punca
di Ho ff sel turunan a pada hari ke 21. Peningkatan dari hari ke 10 hingga hari ke mengekspresikan penanda permukaan sel punca yang khas.
21 sangat signifikan fi tidak bisa dalam kasus CPRP. Ho ff Sebuah ' Sel s yang Para penulis memutuskan untuk memasukkan CD34
dilengkapi dengan hypACT hampir tidak menunjukkan perubahan apa pun sebagai penanda negatif antara lain karena rekomendasi kertas
antara hari ke 10 dan hari ke 21. Perubahan lipatan di dua lokasi lainnya relatif posisi dari ISCT [35]. Alasan untuk menyatakan CD34 sebagai
rendah. Namun, sebuah signi fi Peningkatan yang tidak dapat dilakukan dari penanda negatif untuk MSCs adalah ekspresi yang diketahui
hari ke 10 sampai hari ke 21 diamati pada sel subkutan yang dilengkapi dan oleh karena itu perbedaan dengan sel induk atau sel
dengan CPRP (Gambar 8). progenitor hematopoietik serta sel endotel [35]. Namun,
literatur yang lebih baru menunjukkan bahwa CD34 juga dapat
4. Diskusi diekspresikan oleh MSC, serta AD-MSC [48 - 51]. Lebih spesifik fi Akhirnya,
makalah tersebut menunjukkan bahwa kepositifan CD34 secara
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk bertahap hilang selama kultur dan kepatuhan plastik [49].
mendemonstrasikan di ff erences dalam di osteogenic Kepositifan CD34 mungkin a “ penduduk jaringan ” fitur sel hanya
dan chondrogenic ff potensiasi AD-MSCs yang berasal [50]. Sebagai kesimpulan, penulis mengikuti rekomendasi ISCT
dari struktur intra-artikular versus ekstra-artikular dan untuk menggunakan CD34 dalam komposit penanda MSC
untuk fi cial e ff efek suplementasi produk darah ke negatif karena dua alasan:
ADMSC di ff erentiation.
Proses isolasi dan budidaya sel induk lebih mudah (i) Dalam banyak makalah yang membahas peran CD34, AD-
dibandingkan dengan kondrosit primer atau osteoblas [38, MSC diisolasi dari apa yang disebut fraksi stromalvaskular dan
39]. Di osteogenik dan kondrogenik ff Potensi erensiasi MSCs oleh karena itu diambil dengan sedot lemak atau metode
dalam hubungannya dengan kemampuan engrafting sangat serupa [48, 49]. Ini di ff Protokol pemanenan dan pemrosesan
penting untuk tulang rawan [17, 40, 41] dan regenerasi yang salah dapat membuat perbandingan dengan hasil
tulang in vivo [42]. Literatur saat ini menjelaskan contoh makalah ini menantang berkaitan dengan subpopulasi
manfaat fi cial e ff efek suplementasi produk darah pada adi- imunofenotipik.
10 Stem Cells International

FCS 1% FCS 5% hypACT 1% hypACT 5%

Alcian Blue
100 • m 50 • m 100 • m
50 • m 50 • m
50 • m 100 • m 100 • m
DIA

100 • m
100 • m 50 • m 50 • m 50 • m
100 • m 100 • m
50 • m
Ho ff a

EPRP 1% EPRP 5% CPRP 1% CPRP 5%

H&E Alcian Blue

100 • m
50 • m 100 • m 50 • m 50 • m 100 • m 50 • m
100 • m

50 • m 100 • m 50 • m 100 • m
100 • m 100 • m
50 • m 50 • m

FCS 1% FCS 5% hypACT 1% hypACT 5%

H&E Alcian Blue

100 • m 50 • m 50 • m 100 • m
100 • m 50 • m 100 • m 50 • m

50 • m 100 • m
100 • m 50 • m
100 • m 50 • m 50 • m
Kantong

100 • m

EPRP 1% EPRP 5% CPRP 1% CPRP 5%

H&E Alcian Blue

50 • m 50 • m 50 • m 50 • m
100 • m 100 • m 100 • m 100 • m

50 • m 50 • m
50 • m
100 • m 50 • m 100 • m 100 • m
100 • m

FCS 1% FCS 5% hypACT 1% hypACT 5%

H&E Alcian Blue

100 • m 50 • m 50 • m
100 • m 50 • m
100 • m 50 • m 100 • m

100 • m 50 • m 100 • m
Subkutan

50 • m 50 • m 100 • m 50 • m
100 • m

EPRP 1% EPRP 5% CPRP 1% CPRP 5%

H&E Alcian Blue

100 • m 50 • m 100 • m 50 • m
100 • m 50 • m
50 • m
100 • m

100 • m
100 • m 50 • m 100 • m 50 • m
50 • m
50 • m
100 • m

(Sebuah)

Angka 5: Lanjutan.
Stem Cells International
FCS 1%
Alcian Blue
100 • m 50 • m
DIA
100 • m
Subkutan
50 • m
100 • m
EPRP 1%
Alcian Blue
50 • m
100 • m
DIA
50 • m
100 • m
Angka 5: (a) Hasil histologi dari di chondrogenic ff erentiation. CPRP = plasma kaya trombosit sitrat; EPRP = plasma kaya platelete EDTA; FCS =
serum anak sapi janin; H & E = hematoksilin dan eosin; hypACT = serum hiperakut. (b) Hasil histologi - 10 hari di ff erentiasi sel yang diturunkan
dari subkutan. CPRP = plasma kaya trombosit sitrat; EPRP = plasma kaya platelete EDTA; FCS = serum anak sapi janin; H & E = hematoksilin dan
eosin; hypACT = serum hiperakut.
(ii) Peran berbeda CD34 untuk pembentukan jaringan
kapasitas dan biologi masih kurang diketahui [49]
Kriopreservasi harus diperhitungkan sebagai faktor pembatas.
Sel P1 digunakan secara langsung setelah isolasi atau
dikriopreservasi, dicairkan, dan dikultur lagi untuk percobaan lebih
lanjut seperti yang dinyatakan sebelumnya. Kriopreservasi telah
terbukti di fl memengaruhi MSC ' nilai terapeutik sehubungan dengan
gangguan aktivitas imunosupresif, peningkatan fitur proapoptosis,
dan gangguan potensi regeneratif [52 - 54]. Studi yang lebih baru
menunjukkan bahwa MSC mempertahankan di ff kapasitas erentiasi sel tetangga [62]. Tulang rawan tidak mengandung pembuluh
dan juga fitur imunomodulator setelah kriopreservasi, tetapi itu a “ pengaktifan
darah, oleh karena itu masuk fl ammation dan fi Pembentukan
kembali ” jangka waktu setidaknya 24 jam setelah pencairan
bermanfaat fi cial [55]. Sel P2 kami setelah pencairan memiliki waktu
lebih dari 24 jam “ mengaktifkan kembali ” sebelum percobaan
dimulai.
Passaging juga harus diperhitungkan sebagai faktor pembatas. Namun,
sebagian besar rekomendasi untuk meneruskan MSC untuk penggunaan klinis
adalah untuk P3-5 [56]. Percobaan kami dilakukan dengan sel yang dipanen
hanya pada P1 dan P2 dan oleh karena itu secara sempurna terletak dalam
kerangka bagian yang direkomendasikan sehubungan dengan penggunaan
klinis.
Faktor pembatas lain mungkin pemberian obat intra-artikular ke
donor ' lutut. Kortikosteroid telah terbukti menurunkan MSC ' viabilitas dan
potensi regeneratif dengan cara yang bergantung pada dosis [57, 58].
Hyaluronan terbukti membantu mempertahankan MSC ' batang dan
berpotensi (bersama) merangsang kondrogenesis [59, 60]. Faktor
perancu ini perlu diperhitungkan untuk interpretasi hasil yang disajikan.
Namun, potensi yang dijelaskan di atas e ff Efeknya mungkin kurang
menonjol karena fakta bahwa pasien menerima suntikan terakhir
setidaknya 6 bulan sebelum TJR. Selain itu, konsentrasi bahan farmasi
dalam sendi tidak dapat dievaluasi dengan tepat tetapi kemungkinan
besar akan diencerkan dalam sinovial. fl uid. Aktivitas metabolik diukur
melalui uji XTT dan suplementasi dengan
11
Hari 10
FCS 5% hypACT 1% hypACT 5%
100 • m 50 • m
100 • m 50 • m 100 • m
50 • m
50 • m
50 • m 100 • m
50 • m
100 • m
EPRP 5% CPRP 1% CPRP 5%
100 • m 50 • m 50 • m
100 • m 50 • m
100 • m
50 • m
100 • m 100 • m
50 • m 50 • m
100 • m
(b)
produk darah terbukti memiliki stimulasi e ff ect kemungkinan
mendukung kelangsungan hidup sel. Ini fi nding mendukung
rekomendasi untuk penggunaan gabungan terapi sel induk bersama
dengan produk darah. Suplementasi ini dapat meningkatkan
persentase sel yang hidup. Sel induk ' proliferasi tampaknya penting
dalam terapi berbasis sel. Sel induk embrio berkembang biak
dengan kecepatan tinggi selama perkembangan, sedangkan sel
induk dewasa berkembang biak dengan siklus in vivo yang agak
lambat [61]. Juga, dalam kasus jaringan tulang rawan, proses
regenerasi didasarkan pada stimulasi proliferasi dan sintesis matriks
bekuan brin tidak dapat menyebabkan penyembuhan. Untuk alasan
itu, meningkatkan proliferasi MSC di lokasi cedera dapat
mempercepat regenerasi [63, 64]. Pertimbangan ini menjelaskan
kebutuhan untuk peningkatan laju proliferasi MSC, sambil
mempertahankan fenotipe tertentu mereka [65]. Dalam studi ini,
kami mempresentasikan stimulasi e ff efek serum hiperakut dan
CPRP pada AD-MSC ' aktivitas metabolisme. Menghubungkan hasil
tersebut dengan pengamatan sebelumnya yaitu MSCs ' karakteristik
dipertahankan setelah suplementasi dengan hypACT dan PRP, kami
dapat menyimpulkan bahwa produk darah memiliki manfaat fi cial e ff dll.
pada viabilitas sel induk dan multipotensinya.
Laporan saat ini menyajikan divergen e ff efek plasma kaya
trombosit pada di chondrogenic ff erentiasi [44, 66 - 69]; Dengan
demikian, penelitian ini bertujuan untuk membandingkan
potensi kondrogenik di ff sumber sel punca adiposa saat ini
dikombinasikan dengan berbagai produk darah. Lingkungan 3D
kepadatan tinggi untuk kondrogenesis sel induk meniru
interaksi serupa dengan yang diamati pada kondensasi
prartilago selama perkembangan embrio [70]; Oleh karena itu,
model kultur sel pelet 3D didirikan untuk mengevaluasi di ff potensiasi.
Berdasarkan literatur saat ini, tiga jenis fi c spidol untuk di ff tahap
yang berbeda dari kondrogenesis dipilih. Gen pro fi file untuk
tahap chondrogenesis awal mirip dengan file tersebut
12 Stem Cells International

FCS hypACT EPRP CPRP

50 • m 50 • m 50 • m 50 • m

50 • m 50 • m 50 • m 50 • m

50 • m 50 • m 50 • m 50 • m

(Sebuah)

Ho ff a Kantong Subkutan
FCS

FCS

FCS
hypACT
hypACT

hypACT

EPRP
EPRP

EPRP

CPRP
CPRP

CPRP

25 ns 25
25
⁎ ns
Absorbansi (405 nm)

Absorbansi (405 nm)

Absorbansi (405 nm)

20 20 20 ⁎
ns ⁎
15 ⁎ 15 ⁎ 15
10 ⁎ 10 10
5 5 5
0 0 0
FCS

EPRP

FCS

EPRP

FCS

EPRP
CPRP

CPRP

CPRP
hypACT

hypACT

hypACT

Sel induk bantalan lemak Ho a Sel induk kantong Sel induk subkutan

(b)

Angka 6: (a dan b) Hasil histologi dari osteogenic di ff erentiation. (a) Gambar mikroskopis. (b) Gambar makroskopis dan kurva ekstraksi pewarna di
bawah ini. CPRP = plasma kaya trombosit sitrat; EPRP = plasma kaya platelete EDTA; FCS = serum anak sapi janin; hipakt = serum hiperakut;
sc = subkutan. Hasil dinyatakan sebagai rata-rata ± SD. ∗ mewakili p < 0:05, ∗∗ mewakili p < 0:01, dan ∗∗∗ mewakili p < 0:001.
Pewarnaan dilakukan setelah 21 hari. Hasil ekstraksi pewarna dinormalisasi ke kelompok FCS.
Stem Cells International 13

COL2AB (tidak ada perubahan lipat) COL2AB (tidak ada perubahan lipat) COL2AB (tidak ada perubahan lipat)
2.5 2.5
##

Tingkat ekspresi relatif [2 • CT]

Tingkat ekspresi relatif [2 • CT]
Tingkat ekspresi relatif [2 • CT]

2.0 2.0

1.5 1.5
ns
1.0 1.0
##

0,5 # ⁎⁎⁎ 0,5

0.0 0.0 0

FCS 1%

FCS 5%
FCS 1%

FCS 5%

EPRP 1%

EPRP 5%
EPRP 1%

EPRP 5%

CPRP 1%

CPRP 5%
CPRP 1%

CPRP 5%
FCS 1%

FCS 5%

EPRP 1%

EPRP 5%

hypACT 1%

hypACT 5%
hypACT 1%

hypACT 5%
CPRP 1%

CPRP 5%
hypACT 1%

hypACT 5%

Hari 0
Hari 0
Hari 0

Sel induk bantalan lemak Ho a Sel induk kantong Sel induk lemak subkutan

Perubahan SOX 9 kali lipat Perubahan SOX 9 kali lipat Perubahan SOX 9 kali lipat
150 150 150
##
⁎
#
Lipat perubahan vs. hari ke 0

Lipat perubahan vs. hari ke 0

Lipat perubahan vs. hari ke 0

100 100 100
ns

ns ns
50 50 ## 50
##

#
⁎
0 0 0
FCS 1%

FCS 5%

EPRP 1%

EPRP 5%

CPRP 1%

CPRP 5%
hypACT 1%

hypACT 5%
FCS 1%

FCS 5%

EPRP 1%

EPRP 5%

FCS 1%

FCS 5%
CPRP 1%

CPRP 5%

EPRP 1%

EPRP 5%
hypACT 1%

hypACT 5%

CPRP 1%

CPRP 5%
hypACT 1%

hypACT 5%
Hari 0
Hari 0

Hari 0
Sel induk bantalan lemak Ho a Sel induk kantong Sel induk lemak subkutan

MMP3 MMP3 MMP3

6 6 ##
6
⁎⁎
Lipat perubahan vs. hari ke 0

Lipat perubahan vs. hari ke 0

Lipat perubahan vs. hari ke 0

4 4 4

2 2 2
## ##
##
##

0 0 0
FCS 1%

FCS 5%
FCS 1%

FCS 5%

EPRP 1%

EPRP 5%
FCS 1%

FCS 5%

EPRP 1%

EPRP 5%
EPRP 1%

EPRP 5%

CPRP 1%

CPRP 5%
CPRP 1%

CPRP 5%
CPRP 1%

CPRP 5%

hypACT 1%

hypACT 5%
hypACT 1%

hypACT 5%
hypACT 1%

hypACT 5%

Hari 0
Hari 0
Hari 0

Sel induk bantalan lemak Ho a Sel induk kantong Sel induk lemak subkutan

COL1A1 COL1A1 COL1A1

100 100 100
##
⁎⁎
80 80 80
Lipat perubahan vs. hari ke 0

Lipat perubahan vs. hari ke 0

Lipat perubahan vs. hari ke 0

60 60 60

40 40 40 #
# #
#
20 20 20 ⁎

0 0 0
FCS 1%

FCS 5%
FCS 1%

FCS 5%

EPRP 1%

EPRP 5%
EPRP 1%

EPRP 5%

CPRP 1%

CPRP 5%
CPRP 1%

CPRP 5%
FCS 1%

FCS 5%

hypACT 1%

hypACT 5%
EPRP 1%

EPRP 5%

hypACT 1%

hypACT 5%
CPRP 1%

CPRP 5%
hypACT 1%

hypACT 5%

Hari 0
Hari 0
Hari 0

Sel induk bantalan lemak Ho a Sel induk kantong Sel induk lemak subkutan

Angka 7: Ekspresi gen untuk di chondrogenic ff eksperimen erentiasi. COL1A1 = gen kolagen 1A1; COL2AB = gen kolagen 2; CPRP = plasma kaya
trombosit sitrat (hitam); EPRP = plasma kaya platelete EDTA (abu-abu); FCS = serum anak sapi janin (biru); hypACT = serum hiperakut (merah); MMP3 =
gen matriks metaloproteinase-3. Hasil dinyatakan sebagai rata-rata ± SD. # menunjukkan tanda fi tidak bisa ff erensi dalam ekspresi gen antara di ff kelompok
perlakuan yang salah. # mewakili p < 0:05, ## mewakili p < 0:01, dan ### mewakili p < 0:001. ∗ menunjukkan tanda fi tidak bisa ff erensi dalam ekspresi
gen dalam satu kelompok perlakuan. ∗∗ mewakili p < 0:01 dan ∗∗∗ mewakili p < 0:001.
 14

Lipat perubahan vs. hari ke 0 Lipat perubahan vs. hari ke 0 Lipat perubahan vs. hari ke 0
Tingkat ekspresi relatif [2 • CT]

0
5
0

0
5
0
1
2
3
4
5

10
15
20
20
40
60
80

10
15
Hari 0 Hari 0 Hari 0 Hari 0

#
#
Hari 10 FCS Hari 10 FCS Hari 10 FCS Hari 10 FCS

ns

#
Hari 21 FCS Hari 21 FCS Hari 21 FCS Hari 21 FCS

dan ∗∗∗ mewakili p < 0:001.

Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT

ns
⁎⁎⁎

⁎⁎
#

Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT

ALPL

ns
RUNX2

COL1A1
Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP

⁎⁎
OCN (tidak ada perubahan lipat)

Sel induk bantalan lemak Ho a

Sel induk bantalan lemak Ho a

#
Sel induk bantalan lemak Ho a
Hari 21 EPRP Hari 21 EPRP

Sel induk bantalan lemak Ho a

Hari 21 EPRP Hari 21 EPRP

Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP

⁎
#⁎⁎⁎
⁎⁎⁎

⁎⁎ #
##

Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP

Lipat perubahan vs. hari ke 0 Lipat perubahan vs. hari ke 0 Lipat perubahan vs. hari ke 0
Tingkat ekspresi relatif [2 • CT]
0
1
2
3
4
5

0
5

0
5
20
40
60
80

10
15

10
15
20
Hari 0 Hari 0 Hari 0 Hari 0

Hari 10 FCS Hari 10 FCS Hari 10 FCS Hari 10 FCS

#
Hari 21 FCS Hari 21 FCS Hari 21 FCS Hari 21 FCS

Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT

#

Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT

ALPL

RUNX2

COL1A1
Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP

ns
Sel induk kantong

Sel induk kantong

Sel induk kantong

Sel induk kantong

ns
OCN (tidak ada perubahan lipat)

Hari 21 EPRP Hari 21 EPRP Hari 21 EPRP Hari 21 EPRP

Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP

##

⁎⁎⁎

Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP

Lipat perubahan vs. hari ke 0 Lipat perubahan vs. hari ke 0 Lipat perubahan vs. hari ke 0
Tingkat ekspresi relatif [2 • CT]

0
5
0
1
2
3
4
5

0
5
0

10
15
20
10
15
20
40
60
80

Hari 0 Hari 0 Hari 0 Hari 0

Hari 10 FCS Hari 10 FCS Hari 10 FCS Hari 10 FCS

dalam ekspresi gen antara di ff kelompok perlakuan yang salah. # mewakili p < 0:05, ## mewakili p < 0:01, dan
⁎ #

Hari 21 FCS Hari 21 FCS Hari 21 FCS Hari 21 FCS

Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT Hari 10 hypACT

⁎⁎⁎
#

Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT Hari 21 hypACT

ALPL

RUNX2

COL1A1
ns

Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP Hari 10 EPRP

OCN (tidak ada perubahan lipat)

Hari 21 EPRP
Sel induk lemak subkutan

Hari 21 EPRP Hari 21 EPRP Hari 21 EPRP

Sel induk lemak subkutan

Sel induk lemak subkutan

Sel induk lemak subkutan

Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP Hari 10 CPRP
⁎⁎⁎

# # # mewakili p < 0:001. ∗ menunjukkan tanda fi tidak bisa ff erensi dalam ekspresi gen dalam satu kelompok perlakuan. ∗∗ mewakili p < 0:01
##

Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP Hari ke 21 CPRP

⁎⁎ #

Angka 8: Ekspresi gen untuk osteogenic di ff eksperimen erentiasi. ALPL = alkali fosfatase; COL1A1 = gen kolagen 1A1; CPRP = plasma kaya
Stem Cells International

trombosit sitrat (hitam); EPRP = plasma kaya platelete EDTA (abu-abu); FCS = serum anak sapi janin (biru); hypACT = serum hiperakut (merah);
OCN = osteocalcin; RUNX2 = faktor transkripsi terkait runt 2. Hasilnya dinyatakan sebagai rata-rata ± SD. # menunjukkan tanda fi tidak bisa ff erensi
Stem Cells International
dalam sel prekursor dan termasuk misalnya ekspresi MMP3 dan COL1. Pada
tahap selanjutnya, sel menunjukkan peningkatan progresif dalam penanda
kondroprogenitor, yang meliputi SOX9, diikuti oleh kondrosit dewasa yang
mengekspresikan COL2 [71]. Ditunjukkan bahwa sel berasal dari struktur
intraartikular, terutama Ho ff Sebuah ' bantalan lemak, memiliki di chondrogenic
yang lebih besar ff potensiasi dibandingkan dengan struktur ekstra-artikular.
Mempertimbangkan tingkat ekspresi SOX9 dan COL2, sel induk diisolasi dari
Ho ff Sebuah ' Bantalan lemak mencapai tahap kondrogenesis lebih lanjut
dibandingkan dengan sel induk dari kantong dan lemak subkutan.
Berdasarkan keduanya - ekspresi gen dan deposisi glikosaminoglikan di bagian
histologis - hipakt bersama dengan EPRP terbukti meningkatkan kondrogenesis
lebih lanjut. Anehnya, EPRP - hampir tidak digunakan dalam pengaturan klinis
karena diketahui negatif e ff efek pada viabilitas sel [43, 72] - menunjukkan
keunggulan terkait kondrogenesis dibandingkan dengan CPRP. Mekanisme
biologis penyebab potensial mungkin fitur pengkhelat pada EDTA,
memerangkap ion kalsium bebas yang telah dijelaskan untuk menghambat
kondrogenesis [73]. Demikian juga dengan
“ tidak terikat ” ion kalsium bebas dalam kasus CPRP mungkin
menjelaskan hasil khondrogenik inferior baik dalam histologi
maupun ekspresi gen. Juga, akumulasi trombosit dalam pelet
khondrogenik yang dilengkapi dengan CPRP dapat mengubah
kualitas jaringan pembentuk. Mekanisme biologis lain mungkin
dilaporkan ff erence dalam konsentrasi faktor pertumbuhan
antara CPRP dan EPRP serta serum hiperakut [24, 43]. Itu
kembali fl dipengaruhi oleh di ff Ekspresi gen yang salah dan
deposisi glikosaminoglikan lebih menyukai suplementasi
dengan EPRP1% daripada 5% yang menghasilkan akumulasi
trombosit yang lebih tinggi dalam struktur pelet dan kualitas
ECM yang lebih rendah. Anehnya, konsentrasi serum hiperakut
sepertinya tidak ada artinya fi tidak bisa masuk fl pengaruh
ekspresi gen serta pembentukan ECM dalam pelet. Menurut
literatur, konsentrasi faktor pertumbuhan di luar tingkat kritis
mungkin memiliki sisi yang serius-e ff ects [74, 75]. Graziani dkk.
menunjukkan bahwa penggunaan PRP pekat memiliki
penghambatan e ff dll pada proliferasi sel [75]. Broderick dkk.
dan Harten dan Svach mengamati bahwa dengan tingkat TGF- β 1
atau VEGF, pembentukan jaringan dihambat [76, 77].
Tes tambahan tentang di chondrogenic ff Waktu erensiasi
dilakukan dengan memanfaatkan sel yang diambil dari lemak
subkutan yang menunjukkan hasil histologis paling sedikit. Di
pendek ff periode erentiasi terbukti mengarah pada hasil
histologis yang lebih baik. Karena produk darah yang diterapkan
secara klinis tidak mungkin tinggal di sendi dalam waktu lama,
ini fi Penemuan mungkin menjadi argumen yang mendukung
untuk desain uji klinis yang bertujuan untuk frekuensi aplikasi
yang lebih rendah.
Shen et al. mempresentasikan di ff Potensi osteogenik sel punca
yang ada diisolasi dari jaringan plasenta [78], membuktikan bahwa
pemilihan sumber sel punca merupakan langkah penting dalam
terapi sel punca. Juga, literatur yang berhubungan dengan promosi
e ff Efek produk darah pada osteogenesis masih sedikit.
Arpornmaeklong dkk. menunjukkan bahwa konsentrasi PRP yang
tinggi menghambat osteogenic di ff erentiasi [79]. Studi lain
menunjukkan bahwa PRP meningkatkan kapasitas proliferatif sel
mirip osteoblas; Namun, konsentrasi trombositnya tepat
15
tidak spesifik fi ed [80]. Di sisi lain, Kobayashi et al. melaporkan
peningkatan migrasi osteoblas dan ekspresi penanda
osteogenik COL1, ALPL, dan RUNX2, tetapi tidak ada ff Efek pada
proliferasi osteoblas [81]. Contoh-contoh ini kembali fl Mempengaruhi
masalah hasil perawatan PRP yang sangat berbeda. Namun,
dokter yang menangani ortopedi regeneratif perlu merawat
cacat tulang, misalnya, dalam kasus lesi lamella tulang
subkondral, untuk ffi meregenerasi tulang rawan secara efisien
atau mengelola nonunion tulang untuk memberikan dua
contoh.
Penyakit osteogenik ff erentiasi adalah proses kompleks yang
dicirikan oleh ekspresi berbagai gen yang berhubungan dengan
osteogenesis, yang levelnya bergantung pada waktu selama
fase osteogenesis berikut. RUNX2 dianggap sebagai gen kontrol
pusat untuk mengaktifkan program osteoblastogenesis [82].
Studi con fi rm ekspresi RUNX2 tinggi pada tahap awal induksi
osteogenik dan sebuah signi fi tidak bisa turun selama di ff erentiasi
menjadi osteoblas dewasa; selain itu, RUNX2 tidak terdeteksi
selama di ff erentiasi osteoblas menjadi osteosit [83, 84].
Berbagai penelitian telah menunjukkan bahwa ALPL dapat
bertindak sebagai indikator awal aktivitas seluler dan di ff erentiasi
[85]. Dalam studi Ozawa et al., Ekspresi gen ALP dari MSCs
menunjukkan tingkat puncak pada hari ke 12, yang kemudian
menurun [86]. Zernik dkk. juga menunjukkan bahwa aktivitas
ALP merupakan penanda awal di ff erentiasi ke garis keturunan
osteogenik [87]. OCN muncul segera sebelum permulaan
mineralisasi. Tingkat OCN meningkat dengan kemajuan
mineralisasi pada tahap akhir di osteoblastik ff erentiation. Oleh
karena itu, OC adalah spesies tertentu fi penanda c untuk
mineralisasi dan penanda fenotipe osteoblas yang baik [86].
COL1 adalah komponen penting dari matriks ekstraseluler
tulang; Namun, protein ini tidak dapat dianggap sebagai spesi
tulang fi c karena dapat diidentifikasi fi ed dalam berbagai jenis sel
yang tidak terkait. Namun, COL1 telah terbukti memainkan
peran di di ff erensiasi fenotipe osteoblas [85].
Dalam studi ini, quanti fi kation mineralisasi mengungkapkan bahwa
osteogenic di ff diferensiasi adalah yang paling maju dalam kelompok yang
dilengkapi dengan CPRP dan hypACT. Analisis gen yang berhubungan dengan
osteogenesis memungkinkan perkiraan kemajuan osteogenik di ff diferensiasi
antara di ff kelompok suplementasi produk darah yang salah. CPRP dan hypACT
mengekspresikan level osteocalcin yang lebih tinggi dibandingkan dengan
EPRP dan FCS. Selain itu, gen berspesifikasi fi c untuk di sebelumnya ff tahap
erentiation, ALPL dan RUNX2, ditunjukkan penurunan ekspresi dari hari ke 10
sampai hari ke 21, terutama pada kelompok CPRP dan hypACT dan dengan
demikian memberikan bukti lebih lanjut untuk ff dll dari produk darah pada
osteogenesis.
Di ini ff Aktivitas biologis EPRP dan CPRP saat ini dapat dijelaskan
kembali dengan chelating. e ff Efek EDTA, karena diketahui bahwa
kandungan ion kalsium pada media kultur dapat signifikan fi meningkatkan
penyakit osteogenik secara cepat ff erentiasi dan mineralisasi [88].
Penelitian ini bertujuan untuk memperluas pengetahuan
dasar tentang di ff potensiasi MSC yang dipanen dari jaringan
adiposa intra-artikular versus ekstra-artikular di bawah
suplementasi produk darah untuk mendorong kemajuan
dalam perawatan terapeutik baru terkait AD-MSC. Faktor
pembatas relativiasi disajikan fi Temuan mungkin adalah
tingginya usia pendonor, jumlah pendonor yang sedikit, dan
16 Stem Cells International

terjemahan yang menantang dari in vitro fi temuan terhadap terapi GAPDH: Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase
atau uji coba in vivo. Namun, literatur menunjukkan bahwa usia hypACT: Serum hiperakut
pasien tidak mungkin menjadi faktor pembatas untuk “ potensi ISCT: Masyarakat Internasional untuk Terapi Seluler
regeneratif ” dari sel induk yang dipanen [30]. 3 lokasi per donor MMP3: Matriks metaloproteinase-3
mengarah ke 9 subkelompok yang menyediakan dasar halus untuk MPV: Rata-rata volume trombosit
analisis statistik yang baik guna mendukung hasil. Juga, tujuan dari MSC: Bagian sel induk mesenkim atau
studi in vitro ini terutama untuk memperluas pengetahuan dasar OCN: Osteocalcin
yang membantu merancang uji klinis yang lebih canggih daripada P: progenitor
bertujuan untuk penerjemahan klinis langsung. PLT: Trombosit
PRP: Plasma kaya trombosit

5. Kesimpulan qRT-PCR: Ekstraksi RNA dan reaksi berantai polimerase

waktu nyata kuantitatif
Seluruh kultur sel induk yang diturunkan dari adiposa RBC: sel darah merah
muncul di ff dipisahkan ke garis keturunan yang diinginkan, RUNX2: Faktor transkripsi terkait Runt 2
berdasarkan karakterisasi fenotipik dan analisis histologis. SD: Standar deviasi
Beberapa garis keturunan tidak ada. SOX9: Faktor transkripsi SOX9
Dalam kasus serum hiperakut, “ alam ” kaskade koagulasi tidak TJR: Penggantian sendi total
tertunda atau membungkuk sehingga menghasilkan produk darah TGF- β 1: Mengubah faktor pertumbuhan
autologus yang tidak mengandung trombosit dan tingkat faktor SAYURAN: Faktor pertumbuhan endotel
pertumbuhan yang lebih rendah dibandingkan dengan plasma yang WBC: vaskular Sel darah putih.
kaya trombosit [24]. Sehubungan dengan pertimbangan yang
disebutkan di atas untuk mekanisme biologis, komposisi biokimia
hipACT mungkin menjadi alasan ff Efek baik pada kondrogenesis dan Ketersediaan Data
osteogenesis tidak seperti EPRP atau CPRP yang hanya
Tidak berlaku (semua data disertakan).
menunjukkan peningkatan e ff efek untuk satu jalur diferensiasi yang
berbeda.
Pilihan antikoagulan dalam produk darah tampaknya Persetujuan Etis
penting untuk MSC di ff erentiasi dan dengan demikian
mengubah proses regeneratif. Produk darah bebas sel tanpa Persetujuan etis diberikan pada 03.05.2018 dari
antikoagulan mungkin bisa menjadi alternatif. Selain itu, Komite Etik Rumah Sakit Evangelic Wina.
konsentrasi produk darah yang mengacu pada volume total
tampaknya penting untuk kondrogenesis, cenderung lebih
menyukai konsentrasi yang lebih rendah. Ini mungkin menjadi Persetujuan

masalah yang relevan untuk aplikasi klinis produk darah karena

produk yang umum digunakan sulit untuk disesuaikan
konsentrasinya. Selain itu, durasi paparan produk darah
tampaknya meningkat fl mempengaruhi kondrogenesis,
mendukung periode yang lebih pendek.
Yang disajikan fi Temuan menyelidiki biologi AD-MSC
intraartikular yang dilengkapi dengan produk darah autologus
dalam pengaturan praklinis. Tujuannya adalah untuk
memperluas pengetahuan dasar seputar AD-MSCs untuk
membuat pendekatan terapeutik baru untuk mengobati kondisi
patologis mulai dari regenerasi tulang rawan hingga
osteoartritis serta cacat tulang.
Persetujuan tertulis diperoleh dari semua subjek.
Konflik kepentingan
ZL memiliki saham di perusahaan startup OrthoSera GmbH,
yang memegang hak paten atas serum hyperacute. OK dan
ZL sebagian dipekerjakan oleh OrthoSera GmbH. SN adalah
bagian dari dewan penasihat OrthoSera GmbH, sebuah startup
dan spin-o akademis ff perusahaan mengembangkan teknologi
serum hiperakut untuk aplikasi klinis.

Penulis ' Kontribusi

Singkatan
Semua penulis memberikan kontribusi penting untuk konsepsi
3D: Tiga dimensi
dan desain protokol ini. Markus Neubauer dan Olga Kuten
AD-MSCs: Sel induk mesenkim yang diturunkan dari adiposa
memiliki kontribusi yang sama. Semua penulis menyetujui
ALPL: Alkali fosfatase
fi versi akhir naskah untuk diserahkan. Semua penulis telah
ANOVA: Analisis varian BMA satu
memberikan persetujuan untuk menerbitkan versi ini.
arah: Aspirasi sumsum tulang
COL1: Kolagen tipe 1
COL2AB: CPRP tipe 2 Ucapan Terima Kasih
kolagen: PRP disiapkan dengan adanya ECM
sitrat: Matriks ekstraselular Studi ini didukung oleh scienti fi c dana dari Evangelic
EPRP: PRP disiapkan di hadapan EDTA Hospital Vienna serta Danube University Krems.
FCS: Serum standar untuk anak sapi janin
Stem Cells International
Referensi
[1] F. Cicuttini, C. Ding, A. Wluka, S. Davis, PR Ebeling, dan
G. Jones, “ Asosiasi cacat tulang rawan dengan hilangnya tulang rawan
lutut pada orang dewasa paruh baya yang sehat: studi prospektif, ”
Arthritis dan Rematik, vol. 52, tidak. 7, hlm.2033 - 2039, 2005.
[2] C. Ding, F. Cicuttini, F. Scott, C. Boon, dan G. Jones, “ Associ-
asi defek tulang rawan lutut prevalen dan insiden dengan
hilangnya tulang rawan tibialis dan patela: studi longitudinal, ” Arthritis [18] J. Pak, JH Lee, WA Kartolo, dan SH Lee, “ Regenerasi tulang rawan
dan Rematik, vol. 52, tidak. 12, hlm.3918 - 3927, 2005.
[3] J. Mollenhauer dan K. Kuettner, “ Tulang rawan artikular, ” di
Prinsip Praktek Ortopedi, R. Dee, L. Hurst, M. Gruber, dan
A. Stephen, Eds., McGraw Hill, New York, edisi ke-2,
1997.
[4] J.-K. Suh, A. Årøen, TS Muzzonigro, M. Disilvestro, dan
FH Fu, “ Cedera dan perbaikan tulang rawan artikular: ilmuwan
terkait fi masalah c, ” Teknik Operatif dalam Ortopedi, vol. 7, tidak. 4,
hlm.270 - 278, 1997.
[5] P. Niemeyer, S. Andereya, P. Angele dkk., “ Stellenwert der
autologen chondrozytentransplantation (ACT) in der behandlung
von knorpelschäden des kniegelenks-empfehlungen der AG secara
klinische geweberegeneration der DGOU, ” Zeitschrift für
Orthopädie und Unfallchirurgie, vol. 151, tidak. 01, hlm.38 -
47, 2013.
[6] M. Brittberg, “ Transplantasi kondrosit autologus, ”
Ortopedi Klinis dan Penelitian Terkait, vol. 367,
hlm. S147 - S155, 1999.
[7] AJ Cassar Gheiti, RE Downey, DP Byrne, DC Molony,
dan KJ Mulhall, “ 25 artikel yang paling banyak dikutip dalam
bedah ortopedi arthroscopic, ” Artroskopi: Jurnal Bedah
Arthroscopic & Terkait, vol. 28, tidak. 4, hlm.548 - 564, 2012.
[8] EM Sayang dan KA Athanasiou, “ Fenotipik cepat
perubahan subpopulasi kondrosit artikular lewat, ”
Jurnal Penelitian Ortopedi, vol. 23, tidak. 2, hlm. 425 - 432,
2005.
[9] D. Zwolanek, M. Satué, V. Proell dkk., “ Melacak mesenchy-
kontribusi sel induk mal untuk regenerasi dalam model
regenerasi tulang rawan imunokompeten, ” JCI Insight, vol. 2,
tidak. 20, 2017.
[10] AJ Sophia Fox, A. Bedi, dan SA Rodeo, “ Ilmu dasar
tulang rawan artikular: struktur, komposisi, dan fungsi, ”
Kesehatan Olahraga: Pendekatan Multidisiplin, vol. 1, tidak. 6,
hlm.461 - 468, 2009.
[11] H. Orbay, M. Tobita, dan H. Mizuno, “ Batang mesenkim
sel yang diisolasi dari adiposa dan jaringan lain: sifat
biologis dasar dan aplikasi klinis, ” Stem Cells International,
vol. 2012, ID Artikel 461718, 9 halaman, 2012.
[12] AG Via, A. Frizziero, dan F. Oliva, “ Sifat biologis dari
sel induk mesenchymal dari di ff sumber yang salah, ” Otot,
ligamen dan tendon jurnal, vol. 2, tidak. 3, hlm.154 - 162, 2012.
[13] M. Neubauer, V. Jeyakumar, T. Muellner, dan S. Nehrer,
“ Konsentrat aspirasi sumsum tulang untuk cacat
chondral: teknik bedah, aplikasi klinis dan ilmu dasar, ”
Annals of Joint, vol. 3, hal. 107, 2018.
[14] YH Kim, SM Cha, S. Naidu, dan WJ Hwang, “ Analisis dari
komplikasi pasca operasi untuk super fi sedot lemak cial:
review dari 2.398 kasus, ” Bedah Plastik dan Rekonstruksi,
vol. 127, tidak. 2, hlm.863 - 871, 2011.
[15] L. Cárdenas-Camarena, “ Lipoaspirasi dan komplikasinya:
operasi yang aman, ” Bedah Plastik dan Rekonstruksi, vol. 112, tidak.
5, hlm.1435 - 1441, 2003.
17
[16] J. Pak, “ Regenerasi tulang manusia di osteonekrosis pinggul dan
tulang rawan manusia pada osteoartritis lutut dengan sel induk yang
diturunkan dari jaringan adiposa autologous: rangkaian kasus, ” Jurnal
Laporan Kasus Medis, vol. 5, tidak. 1, hal. 296, 2011.
[17] J. Pak, JH Lee, N. Pak dkk., “ Regenerasi tulang rawan dalam
manusia dengan sel induk yang diturunkan dari jaringan adiposa dan sel
fraksi pembuluh darah stroma adiposa: status diperbarui, ” Jurnal
Internasional Ilmu Molekuler, vol. 19, tidak. 7, hal. 2146, 2018.
erasi pada manusia dengan sel punca yang diturunkan dari jaringan
adiposa: status terkini dalam implikasi klinis, ” BioMed Research
International, vol. 2016, ID Artikel 4702674, 12 halaman, 2016.
[19] PH Hart, MJ Ahern, MD Smith, dan JJ Finlay-Jones,
“ Bendungan longsor yang dipicu gempa tahun 1786 dan bendungan
selanjutnya pecah fl ood di sungai Dadu, barat daya Cina, ”
Imunologi, vol. 71, tidak. 3-4, hlm.437 - 440, 1995.
[20] DM DohanEhrenfest, I. Andia, MA Zumstein, C.-Q. Zhang,
NR Pinto, dan T. Bielecki, “ Classi fi kation konsentrat trombosit
(plasma kaya trombosit (PRP), kaya trombosit fi brin (PRF))
untuk topikal dan in fi penggunaan ltratif dalam kedokteran
ortopedi dan olahraga: konsensus saat ini, implikasi klinis dan
perspektif, ” Otot, Ligamen dan Tendon Journal, vol. 4, tidak. 1,
hlm. 3 - 9, 2014.
[21] T. Bielecki dan DM Dohan Ehrenfest, “ Plasma kaya trombosit
(PRP) dan kaya trombosit fi brin (PRF): bahan pembantu bedah,
sediaan untuk pengobatan regeneratif in situ dan alat untuk
rekayasa jaringan, ” Bioteknologi Farmasi Saat Ini, vol. 13, tidak. 7,
hlm. 1121 - 1130, 2012.
[22] Y. Zhou, J. Zhang, H. Wu, MV Hogan, dan JH-C. Wang,
“ Di ff erential e ff Efek plasma kaya trombosit murni dan yang
mengandung leukosit (PRP) pada sel induk tendon / progenitor -
implikasi dari aplikasi PRP untuk pengobatan klinis cedera
tendon, ” Penelitian & Terapi Sel Punca, vol. 6, tidak. 1, hal. 173,
2015.
[23] T. Jensen, P. Kierulf, PM Sandset dkk., “ Fibrinogen dan
fi brin menginduksi sintesis proin fl sitokin inflamasi dari sel
mononuklear darah perifer yang terisolasi, ” Trombosis dan
Hemostasis, vol. 97, tidak. 5, hlm.822 - 829, 2007.
[24] D. Kardos, M. Simon, G. Vácz dkk., “ Komposisi
serum hiperakut dan plasma yang kaya trombosit sangat
berbeda ff erent meskipun metode produksi serupa, ” Jurnal
Internasional Ilmu Molekuler, vol. 20, tidak. 3, hal. 721, 2019.
[25] E. Raposio dan R. Ciliberti, “ Penggunaan klinis turunan adiposa
sel induk: masalah legislatif Eropa, ” Annals of Medicine dan
Bedah, vol. 24, hlm.61 - 64, 2017.
[26] PP Van dan NB Vu, “ Perluasan mesenkim secara in vitro
sel induk untuk penggunaan klinis, ” Kemajuan di Stem Cell, vol. 3, tidak.
02, hal. 87, 2016.
[27] J. Phetfong, T. Tawonsawatruk, K. Seenprachawong,
A. Srisarin, C. Isarankura-Na-Ayudhya, dan A. Supokawej,
“ Menggunakan kembali produk darah sebagai suplemen alternatif
dalam optimalisasi kultur sel induk mesenkim yang diturunkan dari
adiposa tingkat klinis, ” Penelitian Tulang & Sendi, vol. 6, tidak. 7, hlm.414 -
422, 2017.
[28] P. Van Pham, KH-T. Bui, D. Ngo dkk., “ Trombosit aktif-
plasma kaya meningkatkan transplantasi sel induk yang diturunkan
dari adiposa e ffi Cedera pada tulang rawan artikular ” Penelitian &
Terapi Sel Punca, vol. 4, tidak. 4, hal. 91, 2013.
[29] JS Park, HN Yang, DG Woo, SY Jeon, dan K.-H. Taman,
“ Promosi kondrogenesis, osteogenesis, dan adipogenesis sel
induk mesenkim manusia dengan pertumbuhan ganda
18
faktor yang dimasukkan ke dalam mikrosfer berlapis nanosfer, ”
Biomaterial, vol. 32, tidak. 1, hlm.28 - 38, 2011.
[30] T. Mochizuki, T. Muneta, Y. Sakaguchi dkk., “ Lebih tinggi
potensi kondrogenik dari fi brous synovium- dan sel-sel yang diturunkan
dari sinovium adiposa dibandingkan dengan sel-sel yang diturunkan dari
lemak subkutan: sifat-sifat yang membedakan sel-sel induk
mesenchymal pada manusia, ” Arthritis dan Rematik, vol. 54, tidak. 3,
hlm.843 - 853, 2006.
[31] MQ Wickham, GR Erickson, JM Gimble, TP Vail, dan
F. Guilak, “ Sel stroma multipoten yang berasal dari bantalan
lemak infrapatellar pada lutut, ” Ortopedi Klinis dan Penelitian
Terkait, vol. 412, hlm. 196 - 212, 2003.
[32] PD Nguyen, TD-X. Tran, HT-N. Nguyen dkk., “ Perbandingan-
pengamatan klinis atif dari mikrofraktur arthroscopic dengan
ada dan tidak adanya injeksi fraksi vaskular stroma untuk
osteoartritis, ” Pengobatan Translasional Sel Punca, vol. 6, tidak.
1, hlm.187 - 195, 2017.
[33] J. Pak, JH Lee, KS Park, dan SH Lee, “ E ffi cacy autolo-
sel induk yang diturunkan dari jaringan adiposa gous dengan matriks
ekstraseluler dan asam hialuronat pada osteoartritis pinggul manusia, ” Penelitian
Biomedis, vol. 28, tidak. 4, hlm. 1654 - 1658, dtk.
[34] D. Kardos, B. Marschall, M. Simon dkk., “ Investigasi
perubahan sitokin pada jaringan sendi lutut osteoartritik sebagai
respons terhadap pengobatan serum hiperakut, ” Sel, vol. 8, tidak. 8,
p. 824, 2019.
[35] M. Dominici, K. le Blanc, I. Mueller dkk., “ Kriteria minimal untuk
de fi mencari sel-sel stroma mesenkim multipoten. Pernyataan
posisi Masyarakat Internasional untuk Terapi Seluler, ”
Sitoterapi, vol. 8, tidak. 4, hlm.315 - 317, 2006.
[36] A. Osei-Bimpong, R. Mclean, E. Bhonda, dan SM Lewis,
“ Penggunaan jumlah sel darah putih dan hemoglobin dalam kombinasi
sebagai e ff layar efektif untuk memprediksi normalitas hitung darah lengkap, ” Jurnal
Internasional Hematologi Laboratorium,
vol. 34, tidak. 1, hlm.91 - 97, 2012.
[37] P. Bourin, BA Bunnell, L. Casteilla dkk., “ Sel stroma dari
fraksi pembuluh darah stroma yang berasal dari jaringan adiposa
dan kultur memperluas sel stroma / punca yang diturunkan dari
jaringan adiposa: pernyataan bersama dari Federasi Internasional
untuk Terapi dan Ilmu Adiposa (IFATS) dan Masyarakat
Internasional untuk Terapi Seluler (ISCT), ” Sitoterapi, vol. 15, tidak.
6, hlm.641 - 648, 2013.
[38] Y. Nam, YA Rim, J. Lee, dan JH Ju, “ Terapi saat ini
strategi untuk regenerasi tulang rawan berbasis sel induk, ” Stem
Cells International, vol. 2018, ID Artikel 8490489, 20 halaman,
2018.
[39] M. van Griensven, J. Zeichen, T. Tschernig, A. Seekamp, dan
H.-C. Pape, “ Sebuah modi fi Metode ed untuk kultur osteoblas manusia
dari spesimen jaringan tulang menggunakan fi lem brin, ” Patologi
Eksperimental dan Toksikologi, vol. 54, tidak. 1, hlm.25 - 29, 2002.
[40] YB Park, CW Ha, JA Kim dkk., “ Berbasis sel satu tahap
perbaikan tulang rawan dalam model kelinci: pelacakan sel dan in vivo
kondrogenesis sel punca mesenkim yang diturunkan dari darah tali
pusat manusia dan komposit hidrogel asam hialuronat, ”
Osteoartritis dan Tulang Rawan, vol. 25, tidak. 4, hlm.570 - 580, 2017.
[41] K. Mizuno, T. Muneta, T. Morito dkk., “ Sinovial eksogen
sel induk melekat pada defek meniskus dan di ff erentiate
menjadi sel tulang rawan, ” Jurnal Ilmu Kedokteran dan Gigi,
vol. 55, tidak. 1, hlm.101 - 111, 2008.
[42] R. Quarto, M. Mastrogiacomo, R. Cancedda dkk., “ Perbaikan
cacat tulang besar dengan penggunaan sel stroma sumsum
tulang autologus, ” The New England Journal of Medicine,
vol. 344, tidak. 5, hlm.385-386, 2001.
Stem Cells International
[43] O. Kuten, M. Simon, I. Hornyák, A. De Luna-Preitschopf,
S. Nehrer, dan Z. Lacza, “ E ff Efek serum hiperakut pada
adipogenesis dan proliferasi sel sel stroma mesenkim, ” Rekayasa
Jaringan Bagian A, vol. 24, tidak. 11-12, hlm.1011 - 1021,
2018.
[44] A. Drengk, A. Zapf, EK Stürmer, KM Stürmer, dan
K.-H. Frosch, “ Di fl pengaruh plasma kaya trombosit pada di
chondrogenic ff erentiasi dan proliferasi kondrosit dan sel
induk mesenkimal, ” Sel, Jaringan, Organ, vol. 189, tidak. 5,
hlm.317 - 326, 2009.
[45] MG Scioli, A. Bielli, P. Gentile, V. Cervelli, dan A. Orlandi,
“ Pengobatan gabungan dengan plasma kaya trombosit dan insulin
mendukung kondrogenik dan osteogenik ff erentiasi sel induk yang
diturunkan dari adiposa manusia dalam sca kolagen tiga dimensi ff tua,
” Jurnal Teknik Jaringan dan Pengobatan Regeneratif, vol. 11, tidak.
8, hlm.2398 - 2410, 2017.
[46] D. Kazemi, A. Fakhrjou, VM Dizaji, dan MK Alishahi,
“ E ff dll kaya trombosit autologus fi brin pada penyembuhan
cacat tulang rawan artikular eksperimental lutut pada model
hewan, ” BioMed Research International, vol. 2014, ID Artikel
486436, 10 halaman, 2014.
[47] M. Kazem-Arki, M. Kabiri, I. Rad dkk., “ Peningkatan
osteogenic di ff erensiasi sel induk yang diturunkan dari adiposa dengan
modi PRP fi ed nano fi brous sca ff tua, ” Sitoteknologi, vol. 70, tidak. 6, hlm.
1487 - 1498, 2018.
[48] K. McIntosh, S. Zvonic, S. Garrett dkk., “ Imunogenisitas
dari sel yang diturunkan dari adiposa manusia: perubahan temporal in vitro, ”
Sel induk, vol. 24, tidak. 5, hlm. 1246 - 1253, 2006.
[49] A. Scherberich, ND di Maggio, dan K. McNagny, “ Familiar
orang asing: ekspresi CD34 dan fungsi putatif dalam sel SVF
jaringan adiposa, ” Jurnal Dunia Sel Punca, vol. 5, tidak. 1, hlm. 1 -
8, 2013.
[50] C.-S. Lin, H. Ning, G.Lin, dan TF Lue, “ Apakah CD34 benar-benar neg-
penanda atif untuk sel stroma mesenkim ?, ” Sitoterapi,
vol. 14, tidak. 10, hlm.1159 - 1163, 2012.
[51] C. Sengenès, K. Lolmède, A. Zakaro ff- Girard, R. Busse, dan
A. Bouloumié, “ Preadiposit di jaringan adiposa subkutan
manusia menampilkan fitur yang berbeda dari sel induk
mesenkim dan hematopoietik dewasa, ” Jurnal Fisiologi
Seluler, vol. 205, tidak. 1, hlm. 114 - 122, 2005.
[52] G. Moll, JJ Alm, LC Davies dkk., “ Apakah pesan cryopreserved
sel stroma enchymal menampilkan gangguan imunomodulator
dan sifat terapeutik ?, ” Sel induk, vol. 32, tidak. 9, hlm.2430 - 2442,
2014.
[53] J. Galipeau, “ Dilema sel stroma mesenkim - melakukan a
uji coba fase III negatif dari sel-sel stroma mesenkim donor acak pada
penyakit graft-versus-host yang resisten terhadap steroid merupakan
lonceng kematian atau benjolan di jalan ?, ” Sitoterapi, vol. 15, tidak. 1,
hlm.2 - 8, 2013.
[54] OG Davies, AJ Smith, PR Cooper, RM Shelton, dan BA
Scheven, “ E ff Efek kriopreservasi pada sel yang diisolasi dari
jaringan adiposa, sumsum tulang dan pulpa gigi, ” Cryobiology, vol.
69, tidak. 2, hlm.342 - 347, 2014.
[55] B. Antebi, AM Asyer, LA Rodriguez, RK Moore,
A. Mohammadipoor, dan LC Cancio, “ Sel induk mesenkim yang
dikriopreservasi mendapatkan kembali potensi fungsionalnya
setelah periode aklimasi 24 jam, ” Jurnal Kedokteran Terjemahan,
vol. 17, tidak. 1, hal. 297, 2019.
[56] T. Jiang, G. Xu, Q. Wang dkk., “ In vitro ekspansi terganggu
batang sel induk mesenchymal bagian awal untuk pengobatan
cacat tulang rawan, ” Kematian & Penyakit Sel, vol. 8, tidak. 6, artikel
e2851, 2017.
Stem Cells International
[57] CC Wyles, MT Houdek, SP Wyles, ER Wagner,
A. Behfar, dan RJ Sierra, “ Di ff sitotoksisitas kortikosteroid
erensial pada sel induk mesenchymal manusia, ” Ortopedi Klinis
dan Penelitian Terkait, vol. 473, tidak. 3, hlm. 1155 - 1164,
2015.
[58] R. Nuzzi, M. Gunetti, D. Rustichelli dkk., “ E ff dll in vitro
paparan obat kortikosteroid, secara konvensional digunakan dalam
pengobatan AMD, pada sel induk mesenchymal, ” Stem Cells
International, vol. 2012, ID Artikel 946090, 11 halaman, 2012.
[59] E. Amann, P. Wol ff, E. Breel, M. van Griensven, dan ER Balmayor,
“ Asam hialuronat memfasilitasi kondrogenesis dan deposisi
matriks dari sel induk mesenkim yang berasal dari adiposa
manusia dan kultur bersama kondrosit manusia, ” Acta
Biomaterialia, vol. 52, hlm.130 - 144, 2017.
[60] TY Wong, C.-H. Chang, C.-H. Yu, dan LLH Huang,
“ Hyaluronan menjaga sel induk mesenchymal diam dan
mempertahankan di ff potensi erentiasi dari waktu ke waktu, ” Penuaan
sel, vol. 16, tidak. 3, hlm.451 - 460, 2017.
[61] E. Fuchs, T. Tumbar, dan G. Guasch, “ Bersosialisasi dengan
tetangga: sel induk dan ceruknya, ” Sel, vol. 116, tidak. 6, hlm
769 - 778, 2004.
[62] F. Hildner, C. Albrecht, C. Gabriel, H. Redl, dan M. van
Griensven, “ Keadaan seni dan perspektif masa depan
regenerasi tulang rawan artikular: fokus pada sel induk yang
diturunkan dari adiposa dan produk turunan trombosit, ” Jurnal
Teknik Jaringan dan Pengobatan Regeneratif, vol. 5, tidak. 4,
hlm. E36 - e51, 2011.
[63] A. Hasan, G. Deeb, R. Rahal dkk., “ Sel induk mesenkim di
pengobatan cedera otak traumatis, ” Perbatasan dalam Neurologi, vol.
8, hal. 28, 2017.
[64] X. Wang, Y. Wang, W. Gou, Q. Lu, J. Peng, dan S. Lu, “ Peran
sel induk mesenkim dalam regenerasi tulang dan perbaikan
fraktur: tinjauan, ” Ortopedi Internasional, vol. 37, tidak. 12,
hlm.2491 - 2498, 2013.
[65] R. Rohban dan TR Pieber, “ Batang mesenkim dan keturunan
sel itor dalam regenerasi: spesi jaringan fi kota dan potensi
regeneratif, ” Stem Cells International, vol. 2017, ID Artikel
5173732, 16 halaman, 2017.
[66] A. Pakfar, S. Irani, dan H. Hanaee-Ahvaz, “ Ekspresi
penanda patologis di chondrogenic di PRP berbasis ff erentiasi sel induk
yang berasal dari adiposa manusia, ” Jaringan & Sel, vol. 49, tidak. 1,
hlm.122 - 130, 2017.
[67] JP Krüger, S. Hondke, M. Endres, A. Pruss, A. Siclari, dan
C. Kaps, “ Plasma kaya trombosit manusia merangsang migrasi
dan kondrogenik di ff erentiasi sel progenitor subkondral
manusia, ” Jurnal Penelitian Ortopedi, vol. 30, tidak. 6, hlm.845 - 852,
2012.
[68] I. Rosadi, K. Karina, I. Rosliana dkk., “ E ff dll manusia
plasma kaya trombosit dan asam L-askorbat pada kemampuan
morfologi, proliferasi, dan kondrogenesis terhadap sel induk yang
diturunkan dari adiposa manusia, ” Ilmu Biomedis Molekuler dan
Seluler, vol. 3, tidak. 1, hal. 26, 2019.
[69] J.-J. Liou, BB Rothrau ff, PG Alexander, dan RS Tuan,
“ E ff dll. plasma kaya trombosit pada di chondrogenic ff erentiasi
sel induk mesenkim yang berasal dari adiposa dan sumsum
tulang, ” Rekayasa Jaringan Bagian A, vol. 24, tidak. 19-20,
hlm.1432 - 1443, 2018.
[70] M. Gong, T. Liang, H. Zhang dkk., “ Ekspresi gen pro fi ling:
identi fi kation ekspresi gen di humanMSC chondrogenic di ff erentiation, bertepatan dengan penekanan fenotipe miogenik tetapi tidak
” American Journal of Translational Research,
vol. 10, tidak. 11, hlm.355 - 3566, 2018.
19
[71] J. Xu, W. Wang, M. Ludeman dkk., “ Di chondrogenic ff erenti-
asi sel induk mesenkim manusia dalam gel alginat tiga
dimensi, ” Rekayasa Jaringan Bagian A, vol. 14, tidak. 5,
hlm.667 - 680, 2008.
[72] M. Simon, B. Mayor, G. Vácz dkk., “ E ff Efek hiperakut
serum pada elemen relung sumsum tulang subkondral
manusia, ” Stem Cells International, vol. 2018, ID Artikel
4854619, 12 halaman, 2018.
[73] LF Mellor, M. Mohiti-Asli, J. Williams dkk., “ Ekstraseluler
kalsium memodulasi di chondrogenic dan osteogenic ff erentiasi sel
punca yang diturunkan dari adiposa manusia: pendekatan baru untuk
rekayasa jaringan osteochondral menggunakan sumber sel punca
tunggal, ” Rekayasa Jaringan Bagian A, vol. 21, tidak. 17-18, hlm.22323 - 2333,
2015.
[74] I. Giusti, S. D ' Ascenzo, A. Mancò dkk., “ Konsentrasi trombosit
dalam plasma kaya trombosit a ff mempengaruhi perilaku tenosit in vitro, ”
BioMed Research International, vol. 2014, ID Artikel 630870, 12
halaman, 2014.
[75] F. Graziani, S. Ivanovski, S. Cei, F. Ducci, M. Tonetti, dan
M. Gabriele, “ The in vitro e ff dll dari di ff konsentrasi PRP yang salah
pada osteoblas dan fi broblast, ” Penelitian Implan Mulut Klinis, vol.
17, tidak. 2, hlm.212 - 219, 2006.
[76] E. Broderick, S. Infanger, T. Turner, dan D. Sumner, Inhibisi
mineralisasi tulang setelah TGF- dosis tinggi β 1 aplikasi,
Transaksi Pertemuan Tahunan ke-49 Masyarakat Riset
Ortopedi, New Orleans, LA, 2003.
[77] RD Harten dan DJ Svach, Fasies pertumbuhan endotel vaskular
tor menghambat pembentukan tulang yang diinduksi DBM, Transaksi
Pertemuan Tahunan ke-49 dari Orthpaedic Research Society, New
Orleans, 2003.
[78] C. Shen, C. Yang, S. Xu, dan H. Zhao, “ Perbandingan osteo-
genic di ff kapasitas erensiasi pada sel punca mesenkim
yang berasal dari membran ketuban manusia (AM), tali
pusat (UC), membran korionik (CM), dan desidua (DC), ”
Sel & Biosains, vol. 9, tidak. 1, hal. 17, 2019.
[79] P. Arpornmaeklong, M. Kochel, R. Depprich, NR Kübler,
dan KK Würzler, “ Di fl pengaruh plasma kaya trombosit (PRP) pada di
osteogenik ff erentiasi sel stroma sumsum tulang tikus. Sebuah in
vitro belajar, ” Jurnal Internasional Bedah Mulut dan Maksilofasial, vol.
33, tidak. 1, hlm. 60 - 70, 2004.
[80] O. García-Martínez, C. Reyes-Botella, L. Díaz-Rodríguez dkk.,
“ E ff dll. plasma kaya trombosit pada pertumbuhan dan pro antigenik fi le
osteoblas manusia dan dampak klinisnya, ” Jurnal Bedah Mulut dan
Maksilofasial, vol. 70, tidak. 7, hlm.1558 - 1564, 2012.
[81] E. Kobayashi, M. Fujioka-Kobayashi, A. Sculean dkk., “ E ff dll
plasma kaya trombosit (PRP) pada gingiva manusia fi perilaku sel
broblast, osteoblas dan ligamen periodontal, ” Kesehatan Mulut
BMC, vol. 17, tidak. 1, hal. 91, 2017.
[82] J. Lian dan G. Stein, “ Runx2 / Cbfa1: peraturan multifungsi
tor pembentukan tulang, ” Desain Farmasi Saat Ini,
vol. 9, tidak. 32, hlm.2677 - 2685, 2003.
[83] J. Xu, Z. Li, Y. Hou, dan W. Fang, “ Mekanisme potensial
mendasari osteogenesis yang diinduksi Runx2 dari sel induk
mesenkim sumsum tulang, ” American Journal of Translational
Research, vol. 7, tidak. 12, hlm.2527 - 2535, 2015.
[84] MH Lee, A. Javed, HJ Kim dkk., “ Peningkatan sementara dari
CBFA1 sebagai respons terhadap tulang morphogenetic protein-2
dan mengubah faktor pertumbuhan β 1 dalam sel miogenik C2C12
cocok ffi cient untuk osteoblas di ff erentiation, ” Jurnal Biokimia
Seluler, vol. 73, tidak. 1, hlm. 114 - 125, 1999.
20 Stem Cells International

[85] GR Kirkham dan SH Cartmell, “ Gen dan protein

terlibat dalam regulasi osteogenesis, ” Topik dalam Rekayasa
Jaringan, N. Ashammakhi, R. Reis, dan E. Chiellini, Eds., Vol. 3, hlm. 1 -
22 Tahun 2007.
[86] R. Ozawa, T. Nagasaka, dan M. Ueda, Perbandingan
ekspresi gen yang berhubungan dengan osteogenesis dari sel punca
mesenchymal selama osteoblastik di ff erentiasi yang disebabkan oleh kolagen
Tipe-I dan / atau fi bronektin, vol. 1, 2003.

[87] J. Zernik, K. Twarog, danW. B.Penopang, “ Peraturan basa

fosfatase dan sintesis prokolagen alfa2 (I) selama
pembentukan tulang intramembran awal di mandibula tikus, ” Di
ff erentiation, vol. 44, tidak. 3, hlm.207 - 215, 1990.
[88] S. An, Y. Gao, J. Ling, X. Wei, dan Y. Xiao, “ Ion kalsium pro-
lebih lanjut osteogenic di ff erentiasi dan mineralisasi sel
pulpa gigi manusia: implikasi untuk bahan penutup pulpa, ”
Jurnal Bahan Ilmu Bahan dalam Kedokteran, vol. 23, tidak.
3, hlm.789 - 795, 2012.
 Jurnal Internasional Jurnal dari

Peptida Asam nukleat

Ilmiah Jurnal Internasional Jurnal Internasional

Jurnal Dunia Cel l Biologi Mikrobiologi
H sayan
H d
saya w saya
d Sebuah
n Sebuah w saya Perusahaan Penerbitan Hindawi Hindawi Hindawi Hindawi
w t tp
h ww: / . / h w aw
di ..w dbersama
hnsaya wd m
saya awi.com V. Haiul m
V. Hai l uee 22 0 1 8
3 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018

Ilmu urai Biokimia

Riset Internasional Riset Internasional
Hindawi Hindawi
www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018

Kirimkan manuskrip Anda ke

www.hindawi.com

Maju dalam Genetika

Bioinformatika Riset Internasional
Hindawi Hindawi
www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018

Maju dalam Jurnal Internasional

Sel Punca BioMed
Virolog y Ilmu hewan
Jurnal Internasional
Genomik Internasional Riset Internasional
Hindawi Hindawi Hindawi Hindawi Hindawi
www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018

Ilmu saraf
Jurnal

Enzim Jurnal dari Jurnal dari

Penelitian Penelitian Parasitologi Biologi kelautan Archaea

Hindawi Hindawi Hindawi Hindawi Hindawi
www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018 www.hindawi.com Volume 2018