Peraturan Mesenchymal Stem

Sel Diferensiasi
12
David Cook dan Paul Genever

Abstrak
Sebuah populasi sel stroma multipoten ada dalam sumsum tulang dan jaringan
dewasa lainnya, yang mampu berdiferensiasi menjadi jaringan tulang yang berbeda
seperti tulang, tulang rawan dan lemak. Sel-sel ini sering disebut sebagai sel batang
mesenchymal (MSC) dan menawarkan fi potensi terapi signifikan tidak bisa,
terutama dalam aplikasi ortopedi, tetapi juga dapat memiliki peran yang lebih luas
dalam pengobatan regeneratif, pengobatan kanker, sebagai anti-in ammatories fl,
imunosupresif dan kendaraan untuk gen terapi / protein. Banyak perhatian telah
difokuskan pada pemahaman MSC biologi dan regulasi diferensiasi untuk
membantu mewujudkan aspirasi klinis. Di sini kita meninjau beberapa faktor
penentu molekul kunci dari fungsi MSC, dengan penekanan pada pengendalian
faktor transkripsi dan sel-sel jalur sinyal yang mengatur diferensiasi MSC.

Kata kunci

sel batang mesenchymal • Osteogenesis • khondrogenesis • adipogenesis

• kontrol transkripsi

12.1 pengantar

12.1.1 Origins MSC

Usulan untuk keberadaan populasi sel stroma / sel

batang mesenchymal multipoten (MSC) adalah pertama
D. Masak • P. Genever (*)
put depan oleh
Departemen Biologi (Area 9), University of York, Wentworth
Way, York, YO10 5DD, UK e-mail: paul.genever@york.ac.uk Friendenstein dan rekan [ 1 ], Yang melaporkan populasi sel
stroma sumsum tulang yang mampu

G. Hime dan H. Abud (eds.), Transkripsi dan Peraturan Translational dari Stem Sel, 213
Kemajuan dalam Experimental Medicine dan Biologi 786, DOI 10,1007 / 978-94-007-6621-1_12, © Springer Science +
Media Bisnis Dordrecht 2013
214
Gambar. 12.1 Potensi MSC. MSC adalah sel multipoten mampu
pembaharuan diri, dan diferensiasi menjadi beberapa garis keturunan
mesenchymal, termasuk osteoblas, osteosit, kondrosit dan adiposit.
MSC membedakan melalui
menghasilkan tulang setelah transplantasi heterotopic. Kelompok
yang sama kemudian menunjukkan bahwa prekursor ini adalah
bagian dari fi broblast seperti sel-sel mampu membentuk koloni,
disebut colonyforming broblasts Unit fi (CFU-Fs), ketika dipilih
oleh kepatuhan terhadap permukaan plastik [ 2 ]. kerja berikutnya
menunjukkan kemampuan sel-sel berbudaya berasal dari satu
CFU-F untuk berkembang biak in vitro, whist mempertahankan
kemampuan mereka untuk berdiferensiasi menjadi osteoblas,
adiposit dan kondrosit [ 3 ]. Bersama-sama, data ini adalah
karakteristik dari keunggulan dua stemness; kemampuan untuk
diri memperbaharui, dan untuk berdiferensiasi menjadi beberapa
garis keturunan, akibatnya sel-sel ini datang untuk dikenal sebagai
sel batang mesenchymal (Gambar. 12.1 ). Sejak MSCs penemuan
mereka telah menghasilkan banyak kepentingan dalam biomedis
lapangan sebagai sumber untuk terapi sel induk, dengan relatif
sederhana ex vivo ekspansi mereka, kapasitas multilineage dan
potensi untuk transplantasi autologous. Memang, uji klinis telah
dilakukan pada pasien dengan osteogenesis imperfecta, di mana
tulang alogenik MSC berasal sumsum diberikan kepada
D. Cook and P. Genever
serangkaian sel progenitor berkomitmen, dan tahap dibedakan sebelum fi
nal pematangan menjadi berkomitmen penuh sel tersembuhkan
dibedakan (Diadaptasi dari Caplan dan Bruder [ 106 ])
pasien setelah transplantasi sumsum tulang. MSC
engraftment ditunjukkan dan peningkatan ditandai dalam
pemulihan pasien terdeteksi [ 4 ]. Penggunaan MSC di teknik
jaringan juga merupakan daerah ilmiah bunga fi c besar,
dengan beberapa kelompok menghasilkan perancah novel
dan prosedur pengiriman untuk perbaikan jaringan. teknik
jaringan melibatkan generasi perancah biokompatibel yang
dibiakkan sebelum menanamkan ke pasien, dan dalam
kasus MSC ini memerlukan pemahaman menyeluruh dari
proses diferensiasi untuk memastikan fungsi yang benar dari
konstruk ditanamkan.
Studi tentang MSC in vivo dan isolasi populasi MSC telah
terhalang oleh kurangnya fi c penanda permukaan sel spesifik
untuk immuno-fenotip identifikasi. sel induk mesenchymal
manusia berbudaya melakukan mengungkapkan panel penanda
permukaan sel, seperti CD105, CD73 dan CD90, dan kurangnya
CD45, CD34 dan CD14 [ 5 ], Namun ini bisa menjadi oleh donor,
isolation- dan bagian-tergantung dan mungkin tidak mewakili
benar in vivo populasi MSC. Karena Kesulitan dalam
mengidentifikasi MSC in vivo,
12 Peraturan Mesenchymal Stem Sel Diferensiasi
sebagian besar pekerjaan mempelajari sifat-sifat dari MSC
telah dilakukan dengan menggunakan MSC berbudaya dipilih
oleh kepatuhan plastik budaya. Namun, ini menimbulkan
masalah tersendiri, dengan spesies yang berbeda, teknik
isolasi, kondisi budaya dan situs donor menghasilkan
peningkatan kompleksitas dalam sistem. Selain itu, beberapa
studi diferensiasi MSC telah dilakukan tidak dengan sel
primer, tetapi dengan garis sel seperti C3H10T1 / 2 [ 6, 7 ] Dan proses khondrogenesis juga telah dikembangkan secara in
MC3T3-E1 untuk osteogenesis, dan MC3T3-L1 untuk
adipogenesis, mencegah ekstrapolasi langsung dari temuan
ke MSC manusia. Selain kesulitan-fi dif dihadapkan dengan
variasi intersample, ada masalah tambahan memiliki populasi
MSC yang sangat heterogen.
MSC yang didefinisikan oleh kemampuan mereka untuk
mematuhi plastik dan kemampuan untuk berdiferensiasi menjadi
osteoblas, adiposit dan kondrosit. MSC secara klasik berasal dari
sumsum tulang [ 3 ], Namun mereka kini telah diisolasi dari berbagai kondrosit matang melalui urutan langkah ned de fi, awalnya
jaringan stroma dewasa [ 8 ], Dengan sumber-sumber yang lebih
umum untuk analisis in vitro diferensiasi menjadi sumsum tulang,
jaringan adiposa, dan periosteum.
12.1.2 In Vitro Diferensiasi MSC
MSC memiliki kemampuan untuk berdiferensiasi menjadi
osteoblas, adiposit dan kondrosit oleh definisi, dan
berbagai metode telah dikembangkan untuk meniru proses
ini in vitro. Osteoblas berkembang melalui serangkaian
tahapan, diprakarsai oleh proliferasi sel, diikuti oleh
ekstraseluler pematangan matriks dan mineralisasi matriks.
Perubahan-perubahan dalam aktivitas selular berkorelasi
dengan pola pematangan sel-sel dari osteoprogenitors
berkomitmen untuk pra dan akhirnya osteoblast
tersembuhkan dibedakan. Proses pematangan sel dapat
diinduksi secara in vitro dengan penambahan protein bm
(BMP), sering BMP-2 [ 9 ], Atau penambahan koktail
diferensiasi deksametason, askorbat dan
b - glycerophosphate [ 10 ]. Sementara kedua metode ini mampu
menginduksi diferensiasi osteogenik MSC, ada kemungkinan
bahwa mereka bertindak melalui mekanisme yang berbeda untuk
menghasilkan respon yang sebanding. Seperti osteoblas,
adiposit matang meskipun serangkaian semakin berkomitmen
215
jenis sel, sebelum menjadi adiposit tersembuhkan dibedakan,
mengungkapkan adiposit spesifik penanda seperti FABP4 dan
5 [ 11 ] Dan membentuk vesikel lipid. Dalam adipogenesis vitro
dapat diinduksi dalam MSC dengan penambahan koktail
diferensiasi
deksametason, isobutylmethylxanthine
(IBMX), indometasin dan insulin. Metode untuk menginduksi
vitro. diferensiasi khondrogenik in vivo membutuhkan
kondensasi awal dari MSC, yang menirukan in vitro dengan
kultur MSC sebagai pelet Micromass. diferensiasi
khondrogenik kemudian dapat disebabkan oleh adanya
transformasi pertumbuhan factor b ( TGF- b )
mengakibatkan munculnya fenotipe kondrosit-seperti yang
ditandai dengan peningkatan regulasi molekul fi c tulang
rawan-spesifik seperti kolagen tipe II dan IX, aggrecan,
versican, biglycan, dan decorin [ 12 ]. Membedakan
MSC berdiferensiasi menjadi tahap nonhypertrophic
proliferatif disebut kondroblas. Tahap ini ditandai dengan
perubahan dari kolagen tipe-I untuk mengetik-II, IX dan
ekspresi XI dan sangat memesan organisasi columnar.
Tahap ini kemudian diikuti oleh tahap hipertrofi, ditandai
dengan ekspresi kolagen tipe-X, yang sangat penting untuk
invasi vaskular, diferensiasi osteoblas, dan pembentukan
tulang.
12.2 Faktor transkripsi
di MSC Diferensiasi
12.2.1 Osteogenesis
Berbagai faktor transkripsi yang diketahui terlibat dalam
regulasi osteogenesis [ 13 ], Dengan dua menjadi Runx2
lebih banyak dipelajari (Cbfa1) dan Osterix. Runx2 dianggap
sebagai faktor transkripsi utama mengendalikan komitmen
osteoblas dan diferensiasi. Runx2 adalah anggota dari
keluarga gen kerdil-domain dan dinyatakan dalam sel
mesenchymal awal perkembangan tulang dan seluruh
diferensiasi osteoblas dengan studi molekuler dan genetik
menunjukkan perlunya dalam diferensiasi osteoblas sel
mesenchymal [ 14- 16 ]. Runx2 itu diidentifikasi
216
sebagai faktor transkripsi penting dalam osteogenesis oleh
yang mengikat ke cis-elemen pada gen osteocalcin dan
ekspresi dipaksa dalam sel-sel prekursor osteoblas,
MC3T3-E1, menyebabkan transkripsi osteoblas spesifik gen fi c
osteocalcin dan kolagen 1A1. Penelitian lebih lanjut
menunjukkan bahwa berlebih dari Runx2 dapat menginduksi
osteogenesis in vitro dan in vivo. Hal ini ditunjukkan oleh
peningkatan penanda osteoblastik, osteopontin dan
osteocalcin,
meningkat alkali fosfatase
(ALP) berekspresi dan mineralisasi in vitro, penyembuhan
sementara in vivo menunjukkan dipercepat cacat
tengkorak kritis berukuran [ 17 ]. Sebaliknya, Runx2 tikus
nol menunjukkan tidak adanya lengkap ossi fi kasi, karena
penangkapan pematangan osteoblas [ 15 ]. Lebih karya
terbaru juga telah terlibat Runx2 di trans-diferensiasi
preadipocytes menjadi osteoblas. Takahashi (2011),
menunjukkan bahwa lebih ekspresi Runx2 di garis sel
praadiposit, 3T3-E1, mengakibatkan penurunan penanda
adiposit PPAR g 2 dan C / EBP Sebuah dan peningkatan
penanda osteogenik seperti ALP, osteocalcin dan tulang
sialoprotein 2 (BSP) [ 18 ]. Ini trans-diferensiasi semakin
ditingkatkan dengan penambahan deksametason atau
berlebih dari protein kinase fosfatase-1 mitogen-diaktifkan
(MKP-1). Status fosforilasi Runx2 juga penting.
Deksametason, sebuah glukokortikoid sintetik, bertindak
untuk meningkatkan aktivitas Runx2 dengan mengurangi
jumlah tingkat phosphoserine Runx2 melalui MKP-1 [ 19 ].
Sementara yang lain telah menunjukkan fosforilasi Runx2
pada tirosin, theonine dan serin residu meningkat selama
deksametason diinduksi osteogenesis [ 20 ].
Osterix ( OSX) adalah faktor lain yang penting transkripsi
yang terlibat dalam komitmen osteoblas, dengan osx-de fi
sien tikus menunjukkan tidak adanya osteoblas dan
pembentukan tulang yang rusak [ 21 ]. Namun, OSX muncul
untuk bertindak hilir Runx2 sebagai OSX tidak dinyatakan
dalam Runx2 tikus null, tapi ekspresi Runx2 tetap di OSX
tikus nol [ 21 ]. Studi menjadi efek dari berlebih dari OSX yang dinyatakan sementara PPAR g 2 dibatasi untuk jaringan
sedikit kurang jelas, dengan beberapa kelompok
menunjukkan bahwa OSX berlebih adalah mencukupi untuk
menginduksi osteogenesis [ 22, 23 ], Di mana sebagai Kurata
et al. [ 24 ] Mencatat bahwa OSX berlebih mampu memulai
D. Cook and P. Genever
osteogenesis, ditunjukkan oleh ekspresi penanda awal, namun gagal
untuk menghasilkan osteoblas tersembuhkan dibedakan [ 24 ].
faktor transkripsi lain yang menarik dalam kaitannya
dengan osteogenesis adalah Msx / Dlx keluarga faktor
transkripsi. Dlx dan Msx yang homeodomain transkripsi
faktor homolog dengan
Drosophila gen c homeobox distal-kurang dan otot
spesifik. Dlx5 dan 6 dinyatakan dalam pola yang sangat
mirip di seluruh hampir semua elemen rangka [ 25 ].
Selanjutnya, overekspresi Dlx5 dapat mempercepat
diferensiasi osteoblas in vitro [ 26 ]. Sebaliknya, Dlx5
knockout tikus memiliki kraniofasial dan sensorik cacat
tulang [ 27 ], Sementara KO ganda Dlx5 dan 6 memiliki
cacat yang lebih parah [ 28 ], Menunjukkan redundansi
parsial atau kompensasi antara dua faktor transkripsi.
Dlx3 juga terlibat dalam diferensiasi osteogeneic,
dengan ekspresi Dlx3 pada embrio tikus dikaitkan
dengan pembentukan tulang baru dan regulasi
diferensiasi osteoblas. Selanjutnya, Dlx3 dinyatakan
dalam ex vivo osteoblas, sementara berlebih dan RNAi
knock down akibat peningkatan dan penurunan
osteogenesis masing-masing [ 29 ]. Berbeda dengan
faktor transkripsi Dlx, Msx2 dinyatakan dalam prekursor
osteogenik berkembang biak, dan bukan sel dibedakan [ 29
]. Berlebih dari Msx2 dicegah diferensiasi osteogenik
dan mineralisasi, sedangkan berlebih dari mRNA
antisense mengakibatkan proliferasi menurun dan
ditingkatkan osteogenesis [ 30 ].
12.2.2 adipogenesis
reseptor Peroksisom proliferator diaktifkan - g
( PPAR g ) adalah reseptor hormon nuklir, diduga menjadi
pengatur master adipogenesis. Ada dua isoform dari PPAR g . dihasilkan
oleh situs sambatan alternatif. PPAR g 1 adalah ubiquitously
adiposa dan tampaknya menjadi stimulator lebih kuat dari
adipogenesis [ 31 ]. PPAR g ditemukan sebagai pemain kunci
dalam adipogenesis melalui interaksinya dengan 5 ¢ - fl
wilayah Anking dari gen P2 adiposit, gen mampu
merangsang adiposit
12 Peraturan Mesenchymal Stem Sel Diferensiasi 217

spesifik ekspresi gen c. Hal ini kemudian terbukti dinyatakan
sangat awal dalam diferensiasi adiposit, dengan overekspresi
paksa dari PPAR g menginduksi adipogenesis di broblasts fi
berbudaya [ 32 ]. Menariknya, induksi ini tidak terbatas pada
sel-sel broblastic fi; baris sel myoblastic juga dapat
transdifferentiated ke adiposit [ 33 ]. Sekali lagi percobaan
pelengkap telah dilakukan, di mana PPAR g telah dihapus di
broblasts fi, sehingga mengurangi adipogenesis (<2%
12.2 ). Proses ini jelas melalui generasi PPAR g dan C / EBP Sebuah
efisiensi) bahkan dengan penambahan C / EBP Sebuah . regulator
lain adipogenesis [ 34 ]. Hasil ini dan lain-lain menyarankan
PPAR g adalah baik mencukupi dan sangat diperlukan untuk
diferensiasi adipogenic. sementara PPAR g secara luas
dianggap master regulator dari adipogenesis, itu juga telah
terlibat dalam regulasi timbal balik dari adipogenesis dan
osteogenesis. Akune et al. [ 35 ] Menunjukkan bahwa sel-sel
induk embrionik dari PPAR homozigot g - defisiensi tikus
secara spontan akan berdiferensiasi menjadi osteoblas,
sedangkan PPAR g haploinsuf defisiensi mengakibatkan
pembentukan tulang ditingkatkan dengan peningkatan
osteogenesis dari nenek moyang sumsum tulang baik in vivo
dan ex vivo [ 35 ].
CAAT / penambah protein pengikat (C / EBPs )
adalah anggota dari kelas ritsleting dasar-leucine faktor
transkripsi, yang berfungsi sebagai homo atau heterodimer
dengan anggota C / EBP keluarga lainnya. Ada tiga C / EBPs
yang berperan dalam adipogenesis, C / EBP Sebuah , b dan d . yangmenunjukkan keterlibatannya dalam jalur ini [ 42 ]
C / EBP Sebuah
memiliki peran yang paling menonjol. Sebuah demonstrasi
dramatis efek ini ditunjukkan oleh overekspresi C / EBP Sebuahdalam PPAR yang g
dalam sel broblastic fi, mengakibatkan induksi adipogenesis
pada hingga 50% dari sel-sel [ 36 ]; sebaliknya antisense
berkurang sebelum terminal diferensiasi [ 39 ]. C / EBP b dan d
bertindak di awal proses diferensiasi untuk relay sinyal
hormonal, yang menyebabkan aktivasi C / EBP Sebuah [ 39 ].
transduksi sinyal ini mungkin berfungsi melalui aktivasi
PPAR g . melalui C / EBP situs mengikat dalam promotor
PPAR. PPAR ini g ekspresi kemudian berpikir untuk
mengaktifkan C / EBP Sebuah . yang kemudian memasuki
umpan balik yang positif, meningkatkan ekspresi PPAR g ( Ara.
baris sel nol [ 40, 41 ], Di mana PPAR g sel nol gagal untuk
mengekspresikan C / EBP Sebuah meskipun yang normal awal
diferensiasi [ 40 ]. Selain itu, C / EBP Sebuah broblasts fi nol
telah mengurangi tingkat PPAR g ekspresi, yang dapat
diselamatkan oleh transfeksi retroviral dan ekspresi C / EBP Sebuah
[ 41 ]. Diperkirakan bahwa umpan balik positif ini
mempertahankan ekspresi dua faktor transkripsi yang penting
ini melalui diferensiasi terminal dari adiposit.
faktor transkripsi lain catatan untuk efek
pro-adipogenic adalah Sterol peraturan protein
mengikat unsur - 1 (SREBP1 ) / diferensiasi adiposit dan
tekad faktor-1 (Add1). ekspresi negatif dominan
SREBP1 di 3T3-L1 (jalur pre-adiposit) sel tajam ditekan
diferensiasi adipogenic, sementara berlebih dari
SREBP1 di fi baris broblastic, NIH-3T3, meningkat
adipogenesis secara sinergis dengan PPAR g berlebih,
(Gambar. 12.2 ). SREBP1 diberikannya itu pro efek
adipogenic melalui interaksi dengan E-kotak domain
daerah promotor, yang memungkinkan pengaturan lebih lanjut dari PPAR

mRNA knockdown mengakibatkan berkurang adiposa g ekspresi gen [ 43 ].

fenotipe dalam sel 3T3-L1 dibedakan [ 37 ]. Hasil yang sama Seperti osteogenesis, ada juga faktor-faktor transkripsi
diperoleh pada model tikus, di mana C / EBP Sebuah Ekspresi yang terlibat dalam penghambatan adipogenesis. C / protein
dibatasi ke hati, menunjukkan penurunan jaringan adiposa [ 38 homolog EBP (daging )
]. Ketika mempelajari tingkat endogen C / EBPs, selama negatif mengatur adipogenesis melalui interaksi dengan C
/ EBPs. CHOP10 misalnya mengikat C / EBP b awal
adipogenesis sel berbudaya, tercatat bahwa C / EBP Sebuah dinyatakan
terlambat dalam proses diferensiasi segera sebelum aktivasi selama diferensiasi, mencegah dari mengikat PPAR g . sehingga
dari banyak gen fi c adipo-spesifik, sedangkan C / EBP b dan d menunda diferensiasi terminal dari adiposit,
memungkinkan untuk awal ekspansi klonal langkah [ 44 ].
Kegiatan SREBP1 juga negatif diatur selama
adipogenesis, oleh pengikatan Inhibitor DNA mengikat
hanya transiently menyatakan, mengumpulkan selama (Id ) protein yang mencegah SREBP1
tahap awal diferensiasi, sebelum
218 D. Cook and P. Genever

Gambar. 12.2 Peran Wnt dan BMP dalam komitmen garis turunan
osteoblas / adiposit. Wnt signaling sangat penting untuk keputusan
komitmen MSC antara osteoblas dan adiposit, bertindak melalui
penghambatan PPAR g untuk mencegah adipogenesis dan mengaktifkan
osteogenesis
melalui Runx2. BMP menginduksi diferensiasi osteogenik dari MSC
melalui Dlx5 dan Runx2. BMP komponen sinyal Smad1 / 5 juga dapat
diarahkan untuk fokus transkripsi oleh Runx2

dari mengikat ke urutan peraturan E-kotak DNA [ 45 ]. diferensiasi khondrogenik sampai sel menjadi hipertrofi, di mana
faktor transkripsi lain yang penting dalam regulasi ia dengan cepat mematikan [ 48 ]. Persyaratan untuk Sox9 jelas
negatif adipogenesis adalah GATA mengikat faktor ditunjukkan dalam bekerja dengan Akiyama et al. [ 49 ], Di mana
transkripsi penghapusan ekspresi Sox9 dalam sel mesenchymal tunas
( Gatas ) keluarga. GATA2 dan 3 telah terbukti dinyatakan dalam anggota tubuh menyebabkan tidak adanya lengkap kondensasi
pra-adipocytes, dan regulasi bawah mereka mengarah ke mesenchymal khondrogenik pada tungkai berkembang,
adipogenesis ditingkatkan. ekspresi paksa GATA2 dan 3 sementara penghapusan gen Sox9 di kondensasi mesenchymal
mencegah saklar dari pra-adipocytes matang adiposit, sebagian mengarah pada penangkapan khondrogenesis pada tahap ini [ 49
melalui mengikat langsung ke PPAR g [ 46 ], Tetapi juga melalui ]. Hasil ini jelas menunjukkan bahwa Sox9 sangat penting untuk
pembentukan kompleks protein dengan C / EBP Sebuah atau b [ 47
khondrogenesis, dan memainkan peran penting dalam kedua
]. kondensasi mesenkim dan untuk kemajuan khondrogenik.

12.2.3 khondrogenesis Selanjutnya, Sox9 itu diidentifikasi sebagai bagian dari

Seperti dengan kedua adipogenesis dan osteogenesis, ada
master regulator jelas khondrogenesis, Sox9 . Sox9 adalah
anggota dari keluarga faktor transkripsi yang mengandung
HMG-jenis DNA domain mengikat, dan dinyatakan melalui-
triad gen Sox yang mencukupi untuk induksi khondrogenesis
dalam sel batang embrio [ 50 ]. Dua anggota lain dari keluarga
Sox dari faktor transkripsi juga berperan dalam
khondrogenesis L - Sox5 dan Sox6 . L-Sox5 dan Sox6 berbeda
dari Sox9 dalam bahwa mereka tidak memiliki sebuah
12 Peraturan Mesenchymal Stem Sel Diferensiasi
transactivation domain dan karena itu tidak mempengaruhi
ekspresi gen secara langsung, namun diduga mengubah
ekspresi gen melalui perekrutan aktivator transkripsi lainnya [
51 ]. L-Sox5 dan Sox6 yang coexpressed dengan Sox9
selama khondrogenesis dan karena itu berbagi pola ekspresi
dengan penanda COL2A1 khondrogenik, mendorong studi
lanjut ke peran faktor transkripsi ini dalam khondrogenesis.
L-Sox5- dan fi sien tikus cacat Sox6-de hadir khondrogenik,
dengan sistem gugur ganda menghasilkan fenotipe yang
lebih parah, menyarankan beberapa redundansi. Namun,
berbeda dengan tikus fi sien Sox9-de, Sox5 / 6-de fi sien
tikus yang mengembangkan kondensasi mesenchymal
khondrogenik [ 52 ], Melibatkan peran mereka sebagai nanti
dalam proses diferensiasi. Diperkirakan bahwa faktor tiga
Sox transkripsi ini bekerjasama untuk mengaktifkan
kondrosit-spesifik penanda, dengan ditingkatkan ekspresi
reporter COL2A1 ketika semua tiga gen Sox yang
coexpressed dalam sel non-khondrogenik [ 53 ]. Demikian
pula tiga Sox protein telah terbukti secara kooperatif
mengaktifkan Col11A2 kondrosit penanda [ 54 ].
Sebagaimana dibahas di atas, Sox faktor transkripsi yang
diperlukan untuk perkembangan khondrogenesis, tapi
selama ekspresi triad Sox juga menyebabkan
khondrogenesis penangkapan di sel pra-hypertrophic
mencegah diferensiasi terminal [ 50 ]. Diperkirakan bahwa
penghambatan diferensiasi terminal ini setidaknya sebagian
karena aksi dua gen, S110A1 dan S100B, anggota keluarga
protein S100 yang membawa Ca 2+ - mengikat motif EF-tangan. pengembangan, proliferasi sel dan nasib sel [ 61 ]. Wnt
Protein ini diekspresikan selama tahap proliferatif dan
pra-hipertrofik akhir khondrogenesis, dan ketika
diekspresikan dalam khondrogenesis menghambat terminal
langkah diferensiasi. Selain itu, ekspresi protein S100B
responsif terhadap triad Sox melalui elemen penambah
dalam 5 ¢ fl Anking wilayah [ 55 ].
Seperti dijelaskan di atas, Runx2 adalah pengatur master
osteogenesis, tetapi juga memiliki peran penting dalam
mengatur khondrogenesis. Bukti awal untuk ini disajikan pada
tikus nol Runx2 digunakan untuk mengidentifikasi fungsinya
dalam osteogenesis. Tercatat bahwa tikus ini juga memiliki
cacat tulang rawan serta cacat tulang lebih jelas [ 56 ]. Runx2
tikus nol memiliki kekurangan kondrosit hipertrofik,
219
menyiratkan peran penting untuk Runx2 dalam langkah ini.
Tingkat ekspresi dari Runx2 berada pada tingkat tertinggi dalam
kondrosit selama hipertrofi tahap [ 56 ], Dan berlebih dari Runx2
selama hipertrofi disebabkan pematangan ditingkatkan dan
peningkatan endokhondral ossi fi kasi [ 57 ].
12.3 Signaling Persiapan Pengendalian
MSC Diferensiasi
Beberapa jalur sinyal juga telah ditemukan untuk terlibat
dalam komitmen keturunan dan perilaku MSC. Sebagai
contoh, studi telah mengidentifikasi keterlibatan protein
bm (BMP), Hedgehog (Hh) dan pensinyalan Wnt
(Gambar. 12.3 ) Dalam regulasi MSC diferensiasi [ 58- 60 ].
12.3.1 Wnt Signaling Pathway
Wnt signaling telah terlibat oleh beberapa studi untuk
memainkan peran penting dalam regulasi fungsi tulang,
dan diferensiasi osteoblas tertentu dan aktivitas. molekul
Wnt adalah keluarga kaya sistein disekresikan
glyco-lipoprotein yang mengatur banyak proses termasuk
signaling bertindak melalui dua jalur diketahui, jalur
kanonik melibatkan b - catenin, dan b - jalur
catenin-independen disebut jalur non-kanonik. Canonical
ligan Wnt memediasi efek mereka dengan mengikat
reseptor mereka frizzled (FZD) dan co-reseptor, reseptor
lowdensity lipoprotein protein terkait (LRP) 5 dan 6. Hal ini
menyebabkan aktivasi intraseluler kusut yang pada
gilirannya menghambat kompleks kehancuran protein. Hal
ini menyebabkan stabilisasi dan nuklir translokasi b - catenin,
menginduksi transkripsi gen melalui keluarga tinggalin /
TCF faktor transkripsi. Dengan tidak adanya Wnt signaling,
kompleks kerusakan tidak terhambat dan karena itu dapat
melakukan fungsinya untuk memfosforilasi b - catenin,
melalui glikogen sintase kinase 3 b ( GSK3 b ) menyebabkan
degradasi oleh ubiquitination (Gambar. 12.3A ).
220 D. Cook and P. Genever

Gambar. 12.3 Jalur sinyal. ( Sebuah ) The Canonical Wnt signaling pembelahan proteolitik untuk represor transkripsi. Di hadapan
cascade. Canonical Wnt signaling memediasi efeknya dengan mengikat Hedgehog ligan, signaling dimediasi melalui pengikatan Hedgehog
reseptor mereka frizzled ( FZD ) dan coreceptors, LRP 5/6. Hal ini untuk reseptor mereka Patched ( ptc ). Hal ini menyebabkan
menyebabkan aktivasi intraseluler acak-acakan ( dvl ) yang, pada gilirannya, penghambatan protein transmembran kedua, dihaluskan ( Smo ), lega.
menghambat glikogen sintase kinase-3 b ( GSK3 b ). Hal ini menyebabkan Smo kemudian mampu menghambat kompleks sinyal Hedgehog
stabilisasi dan nuklir translokasi b - catenin, menginduksi transkripsi gen mencegah fosforilasi protein Gli, priming mereka untuk aktivasi
melalui keluarga tinggalin / TCF faktor transkripsi. Dengan tidak adanya transkripsi. ( c ) TGF b / BMP signaling cascade. TGF b / sinyal BMP
Wnt signaling, kompleks yang mengandung GSK3 b phophorylates b - catenin,melalui reseptor di permukaan sel yang memfosforilasi dan
mengaktifkan masing-masing R-Smads mereka, yang pada gilirannya
yang mengarah ke kemudian dapat mengikat Co-Smad (Smad 4). R-Smad ini / Co-Smad
degradasi oleh ubiquitination. ( b ) The Hedgehog signaling cascade. kompleks maka dapat memasuki nukleus di mana ia berinteraksi
Dalam tidak adanya ligan Hedgehog signaling kompleks Hedgehog dengan faktor transkripsi untuk menginduksi ekspresi gen
memfosforilasi keluarga Gli faktor transkripsi, yang mengarah ke
degradasi atau

12.3.2 Wnt Signaling di Lineage density) dengan hilangnya mutasi fungsi dalam co-reseptor
Komitmen LRP5 [ 62 ]. Sebaliknya, mutasi pada N-terminus dari LRP5
yang mengurangi afinitas dengan pensinyalan Wnt inhibitor
Peran Wnt signaling dalam peraturan tulang adalah pertama Dkk1 berhubungan dengan massa tulang yang tinggi [ 58 ].
diidentifikasi pada pasien sindrom pseudoglioma osteoporosis (ditandai pengamatan ini telah diperkuat dengan menggunakan model
dengan mineral tulang yang rendah tikus
12 Peraturan Mesenchymal Stem Sel Diferensiasi 221

di mana LRP5 berlebih [ 63 ] Dan mengurangi penghambatan Wnt non-canonical Wnt signaling jalur, yang disebabkan oleh
signaling oleh sFRP1 knock down [ 64 ] Menghasilkan hasil yang Wnt5a, sebagai penggerak osteogenesis di MSC manusia,
sama dengan massa peningkatan dan kepadatan tulang. mampu menghambat efek dari aktivitas Wnt3a.

Dalam upaya untuk menjelaskan dasar molekuler untuk Baru-baru ini, penelitian telah difokuskan pada
respon ini untuk Wnt, banyak studi telah dilakukan menggunakan mengartikan ini variasi jelas dalam menanggapi canonical
berbagai aktivator dan inhibitor jalur pensinyalan Wnt baik in vivo Wnt signaling. Eijken et al. [ 71 ] Digunakan garis sel
dan in vitro. Salah satu proses dimana pensinyalan Wnt dapat manusia janin osteoblastik, yang mereka menghasilkan
bertindak untuk meningkatkan pembentukan tulang adalah non-membedakan dan membedakan penduduk, melalui
melalui stimulasi pembangunan osteoblas. Penghambatan GSK3 b penambahan glukokortikoid sintetik deksametason [ 71 ],
aktivitas enzim menggunakan molekul LiCl atau kecil, Sementara Quarto et al. [ 72 ] Digunakan berbagai sel
menyebabkan peningkatan b - catenin translokasi nuklir, manusia dan multipoten mouse dan pra-osteoblastik untuk
dirangsang tikus prekursor mesenchymal untuk berdiferensiasi mempelajari pengaruh manipulasi Wnt pada osteogenik
menjadi osteoblas [ 6, 7 ]. GSK3 b terlibat dalam jalur lain dan diferensiasi [ 72 ]. Studi-studi ini, antara lain [ 73 ] Telah
karena itu dapat menyebabkan efek ini melalui cara lain selain menunjukkan bahwa respon terhadap Wnt signaling
jalur Wnt, namun Wnt3a, Wnt1, Wnt10 [ 65 ] Dan konstitutif aktif b - tergantung pada tingkat aktivasi dan negara diferensiasi sel
catenin juga merangsang osteoblastogenesis, sementara Dkk1 target. Secara kolektif tampaknya canonical Wnt
mengurangi osteoblas diferensiasi [ 66 ]. Selanjutnya, bekerja di merangsang diferensiasi sel-sel berkomitmen untuk garis
keturunan osteogenik, namun dapat menghambat
vivo telah menunjukkan bahwa pemberian LiCl, sebuah GSK3 b inhibitor,
untuk C57BL / 6 tikus selama 4 minggu secara dramatis diferensiasi sel multipoten, dan mencegah diferensiasi
meningkatkan tingkat pembentukan tulang [ 67 ]. Salah satu rute terminal osteoblas dewasa.
dengan yang Wnt diduga untuk mempromosikan osteogenesis
adalah melalui stimulasi langsung ekspresi Runx2 [ 68 ] (Gambar. 12.2
). Gaur et al. [ 68 ] Identifikasi ed situs mengikat TCF dalam Canonical Wnt signaling juga baik belajar dengan
promotor Runx2 dan menunjukkan peningkatan ekspresi Runx2 kaitannya dengan diferensiasi adipogenic, dengan beberapa
dalam menanggapi co-ekspresi TCF dan protein Wnt kanonik. penelitian yang menunjukkan penurunan adipogenesis
dengan Wnt signaling [ 74 ], Baik in vivo dan in vitro. Setelah
stimulasi Wnt kanonik, adipogenesis sel 3T3-L1 benar-benar
terhambat. Canonical aktivasi Wnt tidak mempengaruhi
ekspresi faktor transkripsi adiposit awal, C / EBP b

Namun, sementara ada banyak bukti pada tikus in vivo dan dan d . tapi blok C / EBP Sebuah dan PPAR g dan AP2 gen
in vitro untuk peran Wnt dalam mendorong diferensiasi hilir [ 75 ] (Gambar. 12.2 ). Penghambatan PPAR g dianggap
osteogenik, penelitian di MSC manusia jauh lebih sedikit melalui aktivasi ayam ovalbumin promotor hulu transkripsi
meyakinkan dan mudah. Perbedaan ini jelas ditunjukkan oleh faktor II, yang mengarah ke perekrutan mediator
pekerjaan yang dilakukan oleh Boland et al. [ 69 ], Yang pembungkaman reseptor hormon retinoid dan tiroid
menunjukkan bahwa Wnt3a AC media, yang mengarah ke co-represor kompleks. Ini mengikat PPAR yang g gen,
canonical Wnt signaling, menyebabkan penghambatan mempertahankan kromatin dalam keadaan
diferensiasi osteogenik ditunjukkan oleh berkurangnya ALP hypoacetylated menekan ekspresi [ 76 ]. Sebaliknya,
mRNA dan aktivitas dan penurunan mineralisasi [ 69 ]. Diinduksi ekspresi inhibitor Wnt, mengurangi endogen Wnt,
sinyal Wnt Bagaimanapun muncul untuk meningkatkan tingkat menyebabkan diferensiasi adipogenic spontan
proliferasi MSC manusia, sementara pada saat yang pra-adiposit [ 75 ]. Karya ini, bersama dengan temuan
mengurangi sama apoptosis (Gambar. 12.2 ). Hasil serupa telah terkait fi, identifikasi es canonical Wnt sebagai saklar
ditunjukkan dalam MSC manusia dengan menginduksi penting dalam keputusan keturunan MSC, dengan
pensinyalan Wnt pada tahapan yang berbeda dari jalur kanonik, canonical Wnt menjaga sel-sel dalam keadaan multipoten
termasuk LRP5 dan TCF1 [ 70 ]. Menariknya penelitian tersebut sampai hasil penghapusan terkoordinasi di adipogenesis.
juga mengidentifikasi Baru-baru ini, pekerjaan telah
222 D. Cook and P. Genever

dilakukan mempelajari hubungan antara adipogenesis dan penurunan COL1A1. Namun, Wnt penghambatan tidak
osteogenesis dalam menanggapi canonical Wnt signaling [ 77 menginduksi ekspresi Col10A1 [ 80 ], Menunjukkan Wnt
]. Liu et al. [ 77 ] Mampu menunjukkan bahwa MSCs manusia penghambatan dapat menginduksi diferensiasi kondrosit awal,
di bawah osteogenik ganda dan kondisi adipogenic, istimewa tetapi tidak memiliki efek fi nal pematangan dan hipertrofi
dibentuk osteoblas dalam menanggapi administrasi Wnt3a. (Gambar. 12.4 ).
Tanggapan ini terbukti disebabkan diferensial penghambatan
dua proses diferensiasi, di mana adipogenesis benar-benar
dihambat pada stimulasi Wnt rendah, dan osteogenesis 12.3.3 Hedgehog Signaling Pathway
hanya sebagian terhambat. Hal ini menunjukkan bahwa
dalam kondisi ganda diferensiasi keturunan, perbedaan jalur sinyal lain juga dipelajari terbukti terlibat dalam
kepekaan terhadap penghambatan Wnt dapat mengubah perkembangan tulang adalah landak (Hh) jalur [ 81- 83 ].
keseimbangan dan menggeser komitmen dari adiposit Hedgehog itu pertama ditemukan di Drosophila sebagai gen
menuju osteoblas. Karya ini berkorelasi dengan yang tunggal yang mengatur banyak aspek yang beragam dari
dibahas sebelumnya, di mana PPAR g - sel fi sien embrio stem embrio dan dewasa pola. Hh sinyal sejak itu telah
de spontan akan berdiferensiasi menjadi osteoblas [ 35 ], ditemukan untuk hadir dalam sel mamalia, tetapi berbeda
Lagi melibatkan Wnt signaling elemen peraturan sebagai awalnya bahwa ada tiga protein Hh; Sonic landak (Shh),
penting dari keputusan keturunan dan komitmen. Desert landak (DHH), dan landak India (Ihh). Beberapa
redundansi fungsional dapat dilihat antara jenis ini, namun
mereka mengungkapkan ekspresi yang berbeda pro fi les
dengan sedikit tumpang tindih [ 84 ].

Canonical Wnt signaling juga berpengaruh dalam

diferensiasi MSC ke kondrosit. Hal ini ditunjukkan oleh Hari Semua protein Hh sinyal melalui reseptor yang sama
et al. [ 78 ] Yang dihasilkan tikus dengan induksi ektopik dari dan sinyal jalur. The Hh jalur dipicu oleh pengikatan
kanonik sinyal Wnt di tunas anggota tubuh berkembang. Hedgehog ke reseptornya, Patched (Ptc). Dengan tidak
Tikus-tikus ini menunjukkan peningkatan ossi fi kasi dan adanya interaksi Hh, Ptc bertindak untuk menghambat
aktivitas protein 7-transmembran, dihaluskan (Elective).
pembentukan kondrosit berkurang. Selanjutnya, inaktivasi b - catenin,
oleh karena itu mencegah canonical Wnt, menciptakan Sebaliknya, di hadapan Hh mengikat Ptc, Elective represi
fenotipe yang berlawanan, dengan diferensiasi kondrosit diringankan mengarah ke sinyal transduksi dan konversi
ektopik, dan mengurangi osteogenesis [ 78 ]. Dalam karya dari keluarga Gli faktor transkripsi ke keadaan aktivasi.
vitro juga con fi rms peran Wnt signaling di khondrogenesis, Ada tiga protein Gli pada mamalia, Gli1, 2 dan 3,
dengan overekspresi Wnt8c, 9a atau dibandingkan dengan faktor transkripsi tunggal,

b - catenin menyebAkan ditingkatkan kondrosit hipertrofi di Ci, di Drosophila [ 85 ].

cewek kondrosit sternum atas. aktivasi Wnt Canonical
menyebabkan penurunan Sox9 dan COL2A1 ekspresi, whist
meningkatkan penanda hipertrofi Col10A1 dan Runx2.
Canonical Wnt diberikannya efek ini, setidaknya sebagian,
melalui aktivasi tinggalin / TCF dari Runx2 dan pada
gilirannya menginduksi ekspresi Col10A1 [ 79 ]. Temuan ini
berkorelasi dengan orang-orang dalam budaya MSC
manusia, di mana penghambatan canonical Wnt signaling
oleh disekresikan protein frizzled-terkait dan Dickkopf
penyebab berlebih khondrogenesis ditingkatkan, dengan up
regulasi COL2A1, Sox9 dan ekspresi glikosaminoglikan, dan
Smo diberikannya efeknya pada transduksi sinyal
dengan menghambat kompleks landak sinyal, terutama
terdiri dari glikogen sintase kinase, protein kinase A dan
kasein kinase (GSK3 b . PKA dan CSK, masing-masing).
Dalam kondisi tidak aktif, ketika aktivitas Elective dihambat
oleh Ptc, ini tindakan kompleks untuk memfosforilasi faktor
transkripsi Gli, priming protein Gli degradasi atau
pembelahan proteolitik. Hal ini memiliki efek keseluruhan
meningkatkan bentuk represor transkripsi protein Gli,
mencegah transkripsi gen sasaran. Sebaliknya, pelepasan
penghambatan Smo, dengan Hh mengikat Ptc, hasil
12 Peraturan Mesenchymal Stem Sel Diferensiasi
Gambar. 12.4 diferensiasi khondrogenik MSC. Shh dan BMP bertindak
bersama-sama untuk menghasilkan umpan balik positif dengan Sox9
dan Nkx3.2, merangsang diferensiasi MSC ke dalam kondrosit
prehypertrophic, sementara Wnt signaling menghambat inisiasi
diferensiasi khondrogenik. pensinyalan Wnt adalah namun diperlukan
untuk beralih antara kondrosit prehypertrophic dan hipertrofik
di penghambatan sinyal kompleks Hedgehog, dan
karena itu mencegah fosforilasi protein Gli. Negara Gli
dominan karena itu dikonversi ke activatory, yang
mengarah ke transkripsi gen target (Gambar. 12.3b ).
12.3.4 Hh Signaling di Lineage
Komitmen
India landak (Ihh) signaling sangat diperlukan untuk
pengembangan osteoblas selama endokhondral ossi fi kasi.
Hal ini mencolok ditampilkan di Ihh - / -
tikus, yang menunjukkan kegagalan total pembangunan
osteoblas dalam tulang endokhondral [ 82 ]. Selanjutnya,
manipulasi genetik Smo, mengakibatkan penghapusan
Smo dari sel-sel perichondral menggunakan sistem
Cre-loxP, mengakibatkan kegagalan osteoblas
diferensiasi [ 81 ]. Selain ini dalam percobaan vivo, peran
223
menyebabkan berkurangnya ekspresi Sox9 dan peningkatan Col10A1.
Ihh ekspresi dalam kondrosit prehypertrophic merangsang beralih ke
kondrosit hipertrofik, namun juga menyebabkan ekspresi PTHrP di
perichondrium sekitarnya, yang pada gilirannya menghambat hipertrofi
di tepi terkemuka ekstremitas berkembang, menghasilkan umpan balik
negatif posisional
dari Hh sinyal dalam komitmen mesenchymal telah
dipelajari in vitro. Induksi jalur landak, dengan
penambahan protein Hh rekombinan, di C3H10T1 / 2
sel, induksi osteogenesis, dengan aktivitas ALP
terdeteksi setelah hanya 2 hari pengobatan [ 83 ].
Sekarang ada juga bukti untuk interaksi antara jalur Hh
dan Wnt dalam kaitannya dengan osteogenesis. Ihh - / - tikus
menunjukkan terganggu Wnt signaling fenotip di E14.5 dan
E16.5, dengan adanya nuklir b - catenin pewarnaan dalam sel
perichondral, dibandingkan dengan pewarnaan positif dari
jenis tikus liar [ 83 ]. Untuk menyelidiki hubungan fungsional
antara Hh dan sinyal Wnt sebagaimana disimpulkan oleh Ihh -
/- tikus, kelompok yang sama yang digunakan in vitro
C3H10T1 / 2 Model diferensiasi, di mana Ihh berlebih
menyebabkan ekspresi ALP dalam sel
Ihh-mengekspresikan. diferensiasi osteogenik ini namun
berkurang ~ 50% ketika sel-sel co-transfected dengan
224
baik Dkk atau double konstruksi Tcf4 negatif. Selain itu, Wnt5a ,
Wnt7b dan 9a Wnt tingkat mRNA yang secara signifikan
diinduksi atas kontrol dalam menanggapi 24-48 jam
pengobatan Hh. Badan ini bekerja menunjukkan bahwa Hh
sinyal tindakan hulu Wnt signaling dan bahwa pensinyalan Wnt
diperlukan, setidaknya sebagian, untuk potensi osteogenik
merangsang dari Hh.
Ihh juga terlibat dalam beralih antara sebelum dan
hipertrofi diferensiasi, di mana ia berpikir untuk bertindak
dengan paratiroid terkait hormon protein (PTHrP) untuk
menghasilkan umpan balik negatif yang mengatur
timbulnya hipertrofi. Ihh sinyal oleh kondrosit
berkembang, menargetkan perichondrium sekitarnya, di
mana itu mengarah ke ekspresi PTHrP. PTHrP kemudian matriks [ 87 ], Sedangkan pemblokiran BMP sinyal baik
sinyal ke kondrosit pra-hipertrofik mencegah inisiasi
hipertrofik diferensiasi [ 86 ]. Hal ini mendalilkan bahwa
tingkat Ihh / PTHrP signaling diatur jarak antara wilayah
bersama dan timbulnya hipertrofi (Gambar. 12.4 ).
12.3.5 TGF b - superfamili Signaling
Persiapan
The TGF b - superfamili mengandung banyak faktor
transkripsi dan morfogen, termasuk dua keluarga yang
terlibat dalam diferensiasi MSC, TGF b
dan BMP. Sebagai anggota yang TGF b -
superfamili, baik TGF b dan BMP merupakan ligan
disekresikan dimer, yang umumnya ada sebagai
homodimers. Pengikatan ligan ini untuk reseptor yang
berhubungan, mengarah ke fosforilasi Smads reseptor
(R-Smads). Hal ini pada gilirannya menyebabkan
interaksi R-Smads dengan SMAD4 (Co-Smad), dan
translokasi ke nukleus. Di sini Smads berinteraksi
dengan faktor transkripsi untuk mengaktifkan ekspresi
gen. R-Smads yang spesifik untuk baik TGF b sinyal atau meningkatkan ekspresi tipe II dan X kolagen dalam budaya
BMP sinyal, dengan Smads 2/3 untuk TGF b dan Smads
1/5/8 untuk BMP, menghasilkan spesifisitas antara dua
jalur. Inhibitor Smads (I-Smads) juga berperan dalam
jalur ini dengan menghasilkan loop kontrol umpan balik
(Gambar. 12.3c ).
D. Cook and P. Genever
12.3.6 TGF b - superfamili Signaling
di Lineage Komitmen
BMP yang pertama diidentifikasi sebagai protein yang
mampu merangsang pembentukan tulang endokhondral dan
meningkatkan diferensiasi osteoblas in vitro [ 87 ]. Namun
sekarang diketahui bahwa BMP memainkan peran penting
dalam berbagai proses embrio, termasuk gastrulasi,
perkembangan saraf dan fungsi sel endotel [ 88, 89 ]. Ulasan
ini akan berkonsentrasi pada peran BMP pada diferensiasi
MSC. Sebagaimana dinyatakan di atas, penerapan
rekombinan BMP untuk in vitro hasil budaya pra-osteoblas
meningkat osteoblastogenesis, ditunjukkan oleh
meningkatnya ALP, ekspresi osteocalcin dan mineralisasi
penangkapan osteogenesis dan mencegah kematian sel
terprogram osteoblas dewasa. BMP dianggap
untuk menginduksi diferensiasi osteoblas melalui
aktivasi Runx2 [ 90 ]. karya terbaru dalam beberapa baris sel
tikus telah menunjukkan bahwa peningkatan aktivitas Runx2
dalam menanggapi BMP tidak langsung dan bertindak
melalui Dlx5 [ 91 ]. Runx2 juga diduga berinteraksi dengan
Smad1 dan 5. kompleks Smad-Runx2 ini diarahkan oleh
Runx2 menargetkan sinyal ke fokus sub-nuklir di mana
target gen untuk kedua faktor transkripsi yang hadir. Hal ini
menunjukkan bahwa Smad transkripsi aktivasi setidaknya
sebagian tergantung pada faktor-faktor penargetan Runx2 [ 92
]. Sangat menarik untuk dicatat bahwa stimulasi BMP2 dari
Dlx5 merangsang ekspresi osterix independen dari Runx2,
melibatkan Dlx2 sebagai regulator penting dari awal dan
akhir BMPinduced osteogenesis [ 93 ].
BMP tidak hanya menginduksi diferensiasi osteoblas, tetapi
juga memiliki karakteristik pro-khondrogenik, dan telah terbukti
lempeng pertumbuhan [ 94 ]. BMP mengerahkan efeknya pada
khondrogenesis melalui khondrogenik tuan regulator Sox9.
Manik-manik direndam dalam BMP4 ditanamkan ke eksplan tikus
rahang bawah yang disebabkan pembentukan tulang rawan ektopik
di posisi proksimal dari eksplan. Daerah-daerah yang sama juga
memiliki peningkatan regulasi
12 Peraturan Mesenchymal Stem Sel Diferensiasi
faktor Sox9 transkripsi, yang melibatkan perannya
di BMP diinduksi khondrogenesis.
Menariknya, manik-manik BMP4-direndam tidak
menginduksi khondrogenesis di posisi rostral, meskipun
regulasi serupa up Sox9. Namun, peningkatan regulasi yang
homeodomain transkripsi faktor Msx2 juga terlihat di
sekitarnya manik-manik, dan untuk tingkat yang jauh lebih
besar di wilayah rostral dari eksplan. Selanjutnya, ekspresi
ektopik dari Msx2 mencegah BMP4 diinduksi
khondrogenesis, dan mengurangi khondrogenesis endogen
[ 95 ]. Badan ini bekerja menunjukkan bahwa BMP induksi
khondrogenesis melalui Sox9, juga bergantung pada
ekspresi Msx2, menghasilkan ambang batas untuk
khondrogenesis, sehingga memberikan sarana untuk
regulasi posisi dari khondrogenesis in vivo.
Khondrogenesis juga bergantung pada kompleks cross-talk
antara BMP dan Shh / Ihh jalur sinyal. Salah satu faktor
transkripsi yang menarik dalam regulasi khondrogenesis
adalah protein homeobox, Nkx3.2. Shh signaling memulai
ekspresi Nkx3.2, sementara sinyal BMP bertindak untuk
mempertahankan ekspresi [ 96 ], Yang memungkinkan aktivitas langsung pada gen penting dalam diferensiasi osteoblas.
transkripsi represor dari Nkx3.2 untuk memblokir aktivitas
inhibitor khondrogenesis BMP-diinduksi. Menariknya, Nkx3.2
juga bertindak untuk menekan aktivitas Runx2 yang mencegah
timbulnya diferensiasi [ 97 ]. Selanjutnya, Nkx3.2 dapat
menginduksi ekspresi Sox9 [ 98 ], Yang pada gilirannya dapat
meningkatkan ekspresi Nkx3.2, menghasilkan umpan balik
yang positif mempertahankan ekspresi faktor
pro-khondrogenik. Singkatnya, BMP bertindak untuk
menginduksi Runx2, merangsang diferensiasi osteogenik,
namun bertindak bersama Shh sinyal selama khondrogenesis,
menghasilkan dan mempertahankan tingkat tinggi Nkx3.2
mengarah ke regulasi down dari Runx2 dan peningkatan Sox9,
yang memungkinkan timbulnya khondrogenesis (Gambar. 12.4 ).
TGF b signaling juga memainkan peran dalam regulasi
diferensiasi MSC. Tidak seperti BMPspeci fi c Smads, TGF b Smads
jangan memaksakan osteogenesis, tetapi sebenarnya tindakan
untuk menekan efek proosteogenic BMP. Penghambatan ini
dimediasi melalui SMAD3, yang berinteraksi dengan Runx2
menekan aktivitas transkripsi nya [ 99 ].
225
Berbeda dengan efek penghambatan ini pada osteogenesis,
TGF b diperlukan untuk in vitro diferensiasi khondrogenik sel
mesenchymal multipoten, bertindak melalui p38, ERK-1, dan
JNK MAP Kinase [ 100 ].
12.4 Regulator tambahan
MSC Diferensiasi
12.4.1 miRNAs di MSC Diferensiasi
Penemuan microRNAs (miRNAs) sebagai mekanisme untuk
mengatur ekspresi gen pada awal 2000-an [ 101 ] Membuka
jalan baru penyelidikan dalam perburuan regulator diferensiasi
MSC. miRNAs kecil RNA non-coding yang mengatur
terjemahan gen protein coding dengan mengikat 3 ¢ diterjemahkan
wilayah dan dalam kebanyakan kasus menyebabkan degradasi
mRNA. Li et al. [ 102 ] Menemukan bahwa berikut diferensiasi
osteoblas BMPinduced, 22 miRNAs bisa terdeteksi sebagai
menurunkan regulasi [ 102 ]. Mereka kemudian menunjukkan
bahwa dua ini miRNAs menurunkan regulasi bertindak
MiR-133 langsung menargetkan Runx2, master regulator dari
osteogenesis, sementara mir-135 bertindak atas SMAD5,
transduser penting dari sinyal BMP. Demikian pula, Hassan et
al. [ 103 ] Menunjukkan bahwa Runx2 negatif mengatur
sekelompok miRNAs, 23a ~ 27a ~ 24-2, dan bahwa miRNAs ini
bertindak untuk menekan osteogenesis dengan menekan
SATB2, protein yang bertindak sinergis dengan Runx2 selama
osteogenesis [ 103 ]. Hal ini berpikir bahwa ini menghasilkan
umpan maju lingkaran, dimana ekspresi Runx2 dapat
de-menekan SATB2, meningkatkan perkembangan osteogenik.
12.4.2 Teknik Stimulasi di MSC Diferensiasi
Pengaruh rangsangan mekanik pada diferensiasi MSC
adalah satu lagi daerah berkembang penelitian.
McMahon et al. [ 104 ] Menunjukkan bahwa MSC tumbuh
di tipe kolagen 3D I-glikosaminoglikan (GAG) scaffold
bisa
226
berdiferensiasi menjadi kondrosit ketika dilengkapi dengan
media induktif. Diferensiasi ini kemudian bisa ditingkatkan
dengan penerapan 10% siklik memuat tarik selama 7 hari,
diukur dengan peningkatan sintesis GAG [ 104 ]. Demikian
pula, Sim et al. [ 105 ] Menciptakan sistem sel chip mikro baru
untuk menerapkan tekanan tekan ke MSC. MSC tumbuh
dalam sistem ini bisa berdiferensiasi menjadi osteoblas
ketika diobati dengan koktail osteogenik, diukur dengan
ekspresi ALP, dan ini lebih ditingkatkan dengan kompresi
siklik intermiten selama 1 minggu [ 105 ].
12,5 Ringkasan
Peraturan diferensiasi MSC adalah kompleks dan
berlapis-lapis, yang terdiri dari kombinasi jalinan
genetik, bio-kimia dan mekanik pengaruh-pengaruh.
Karena karya awal Friedenstein dan rekan [ 1, 2 ],
Kemajuan besar telah dibuat dalam deskripsi molekul
kontrol MSC, tapi tantangan yang tetap. Ada kurangnya
konsensus di bidang teknik isolasi MSC yang tepat,
terutama disebabkan oleh tidak adanya MSC penanda
yang benar-benar selektif dan diadopsi secara
universal. Oleh karena itu banyak pekerjaan bergantung
pada penggunaan populasi MSC-seperti heterogen sel,
diurutkan, agak kasar mungkin, dengan kepatuhan
mereka untuk permukaan plastik. model transgenik
telah memberikan wawasan menembus ke dalam faktor
penentu genetik pembangunan tulang jaringan dan
organisasi, tetapi antar-spesies variasi MSC bertahan
dalam tikus dan manusia. Namun, ada kepercayaan
umum, didukung oleh tekad mengagumkan dan
penelitian berbakat, bahwa kendala tersebut dan
lain-lain akan diatasi,
Referensi
1. Friedenstein AJ, Piatetzky S II, Petrakova KV (1966)
Osteogenesis di transplantasi sel sumsum tulang. J Embryol Exp
Morphol 16 (3): 381-390
2. Friedenstein AJ, Chailakhjan RK, Lalykina KS (1970)
Perkembangan koloni fi broblast di
D. Cook and P. Genever
budaya monolayer dari hamster sumsum tulang dan sel-sel limpa.
Sel Tissue Kinet 3 (4): 393-403
3. Pittenger MF et al (1999) potensi multilineage sel batang
mesenchymal manusia dewasa. Ilmu 284 (5411): 143-147
4. Horwitz EM et al (2002) Terisolasi tulang alogenik berasal
sumsum sel mesenchymal menanamkan dan merangsang
pertumbuhan pada anak dengan osteogenesis imperfecta:
implikasi untuk terapi sel tulang. Proc Natl Acad Sci USA 99 (13):
8932-8937
5. Dominici M et al (2006) kriteria minimal untuk mendefinisikan sel
multipoten mesenchymal stroma. Masyarakat internasional untuk
terapi seluler pernyataan sikap. Cytotherapy 8 (4): 315-317
6. Jackson A et al (2005) analisis Gene array gen Wntregulated di
C3H10T1 / 2 sel. Tulang 36 (4): 585-598
7. Kulkarni NH et al (2006) Secara lisan bioavailable GSK3alpha / beta
ganda inhibitor meningkatkan penanda diferensiasi sel in vitro dan
massa tulang in vivo. J tulang Miner Res 21 (6): 910-920
8. da Silva Meirelles L, Chagastelles PC, Nardi NB (2006) sel induk
Mesenchymal berada di hampir semua organ pasca-natal dan
jaringan. J Sel Sci 119 (Pt 11): 2204-2213
9. Banerjee C et al (2001) peraturan Diferensial dari dua Runx2
pokok / Cbfa1 n-terminal isoform dalam menanggapi
morphogenetic tulang protein-2 selama pengembangan dari
fenotip osteoblas. Endokrinologi 142 (9): 4026-4039
10. Jaiswal N et al (1997) diferensiasi osteogenik dari dimurnikan,
mesenchymal manusia sel induk budaya-diperluas in vitro. J Sel
Biochem 64 (2): 295-312
11. Samulin J et al (2008) Differential ekspresi gen dari asam lemak
mengikat protein selama adipogenesis babi. Comp Biochem
Physiol B Biochem Mol Biol 151 (2): 147-152
12. Pelttari K, Steck E, Richter W (2008) Penggunaan sel punca
mesenchymal untuk khondrogenesis. Cedera 39 (suppl 1):
S58-S65
13. Marie PJ (2008) Faktor-faktor transkripsi mengendalikan
osteoblastogenesis. Arch Biochem Biophys 473 (2): 98-105
14. Ducy P et al (1997) Osf2 / Cbfa1: aktivator transkripsi
diferensiasi osteoblas. Sel 89 (5): 747-754
15. Komori T et al (1997) Target gangguan hasil Cbfa1 di kurangnya
lengkap pembentukan tulang karena penangkapan pematangan
osteoblas. Sel 89 (5): 755-764
16. Xiao ZS et al (1998) struktur Genomic dan isoform ekspresi dari
mouse, tikus dan faktor transkripsi Cbfa1 / Osf2 manusia. Gene
214 (1-2): 187-197
17. Zheng H et al (2004) Cbfa1 / osf2 tertransduksi sel stroma sumsum
tulang memfasilitasi pembentukan tulang in vitro dan in vivo. Calcif
Tissue Int 74 (2): 194-203
18. Takahashi T (2011) Ekspresi dari Runx2 dan MKP-1 merangsang
transdifferentiation dari preadipocytes 3T3-L1 menjadi osteoblas
pembentuk tulang in vitro. Calcif Tissue Int 88 (4): 336-347
19. Phillips JE et al (2006) osteogenesis glukokortikoid-induced
negatif diatur oleh Runx2 / Cbfa1 serin fosforilasi. J Sel Sci 119
(Pt 3): 581-591
12 Peraturan Mesenchymal Stem Sel Diferensiasi
20. Shui C et al (2003) Perubahan Runx2 / Cbfa1 ekspresi dan
aktivitas selama diferensiasi osteoblastik sel-sel sumsum stroma
tulang manusia. J tulang Miner Res 18 (2): 213-221
21. Nakashima K et al (2002) Novel seng fi ngercontaining
transkripsi faktor osterix diperlukan untuk diferensiasi osteoblas
dan pembentukan tulang. Sel 108 (1): 17-29
22. Wu L et al (2007) diferensiasi osteogenik dari adiposa berasal
sel induk dipromosikan oleh berlebih dari osterix. Mol Sel
Biochem 301 (1-2): 83-92
23. Tu Q, Valverde P, Chen J (2006) Osterix meningkatkan proliferasi
dan potensi osteogenik dari sel-sel stroma sumsum tulang.
Biochem Biophys Res Commun 341 (4): 1257-1265
24. Kurata H et al (2007) Osterix menginduksi ekspresi gen
osteogenik tetapi tidak diferensiasi sel batang mesenchymal
janin manusia utama. Tissue Eng 13 (7): 1513-1523
25. Chen X et al (1996) Dlx5 dan Dlx6: sebuah dilestarikan
pasangan evolusi gen homeobox murine dinyatakan dalam
kerangka embrio. Ann NY Acad Sci 785: 38-47
26. Tadic T et al (2002) Ekspresi dari Dlx5 di sel calvarial ayam
mempercepat diferensiasi osteoblastik. J tulang Miner Res 17
(6): 1008-1014
27. Depew MJ et al (1999) Dlx5 mengatur pembangunan daerah dari
lengkungan branchial dan kapsul sensorik. Pembangunan 126
(17): 3831-3846
28. Robledo RF et al (2002) The Dlx5 dan Dlx6 gen homeobox
penting untuk kraniofasial, aksial, dan pengembangan kerangka
apendikularis. Gen Dev 16 (9): 1089-1101
29. Hassan MQ et al (2004) Dlx3 regulasi transkripsi diferensiasi
osteoblas: perekrutan temporal Msx2, Dlx3, dan Dlx5 protein
homeodomain untuk kromatin dari gen osteocalcin. Mol Sel Biol
24 (20): 9248-9261
30. Dodig M et al (1999) ektopik Msx2 menghambat berlebih dan
Msx2 antisense merangsang diferensiasi osteoblas calvarial.
Dev Biol 209 (2): 298-307
31. Mueller E et al (2002) analisis genetik dari adipogenesis melalui
Peroksisom proliferator-diaktifkan isoform reseptor gamma. J Biol
Chem 277 (44): 41.925-41.930
32. Tontonoz P et al (1994) mPPAR gamma 2: tissuespeci fi c
pengatur peningkat adiposit. Gen Dev 8 (10): 1224-1234
33. Hu E, Tontonoz P, Spiegelman BM (1995) transdifferentiation
dari myoblasts oleh transkripsi adipogenic faktor PPAR gamma
dan C / EBP alpha. Proc Natl Acad Sci USA 92 (21): 9856-9860
34. Rosen ED et al (2002) C / EBPalpha menginduksi adipogenesis
melalui PPARgamma: a uni fi kasi jalur. Gen Dev 16 (1): 22-26
35. Akune T et al (2004) PPARgamma insufisiensi meningkatkan
osteogenesis melalui pembentukan osteoblas dari nenek moyang
sumsum tulang. J Clin Invest 113 (6): 846-855
36. Freytag SO, Paielli DL, Gilbert JD (1994) ekspresi ektopik dari
CCAAT yang / protein enhancer mengikat
227
alpha mempromosikan program adipogenic dalam berbagai sel
broblastic tikus fi. Gen Dev 8 (14): 1654-1663
37. Lin FT, Lane MD (1992) Antisense CCAAT / enhancer mengikat
RNA protein menekan mengkoordinasikan ekspresi gen dan
akumulasi trigliserida selama diferensiasi dari preadipocytes
3T3-L1. Gen Dev 6 (4): 533-544
38. Linhart HG et al (2001) C / EBPalpha diperlukan untuk diferensiasi
putih, tapi tidak coklat, jaringan adiposa. Proc Natl Acad Sci USA
98 (22): 12.532-12.537
39. Yeh WC et al (1995) peraturan Cascade diferensiasi adiposit
terminal oleh tiga anggota keluarga C / EBP protein leusin
ritsleting. Gen Dev 9 (2): 168-181
40. Rosen ED et al (1999) PPAR gamma diperlukan untuk
diferensiasi jaringan adiposa in vivo dan in vitro. Mol Sel 4 (4):
611-617
41. Wu Z et al (1999) Cross-regulasi C / EBP alpha dan PPAR
gamma mengontrol jalur transkripsi dari adipogenesis dan
sensitivitas insulin. Mol Sel 3 (2): 151-158
42. Kim JB, Spiegelman BM (1996) ADD1 / SREBP1 mempromosikan
diferensiasi adiposit dan ekspresi gen yang terkait dengan
metabolisme asam lemak. Gen Dev 10 (9): 1096-1107
43. Fajas L et al (1999) Peraturan Peroksisom proliferator-activated
receptor ekspresi gamma oleh diferensiasi adiposit dan tekad
faktor 1 / sterol elemen regulasi protein 1 mengikat: implikasi
untuk diferensiasi adiposit dan metabolisme. Mol Sel Biol 19
(8): 5495-5503
44. Tang QQ, Lane MD (2000) Peran C / EBP protein homolog
(CHOP-10) dalam aktivasi diprogram dari CCAAT /
enhancer-binding protein-beta selama adipogenesis. Proc Natl
Acad Sci USA 97 (23): 12.446-12.450
45. Moldes M et al (1999) antagonisme Fungsional antara inhibitor
DNA mengikat (Id) dan adiposit tekad dan faktor diferensiasi 1 /
sterol peraturan elemen-binding protein-1c (ADD1 / SREBP-1c)
transfactors untuk pengaturan asam lemak sintase promotor di
adiposit. Biochem J 344 (Pt 3): 873-880
46. ​Tong Q et al (2000) Fungsi faktor gata transkripsi dalam transisi
praadiposit-adiposit. Ilmu 290 (5489): 134-138
47. Tong Q et al (2005) Interaksi antara gata dan keluarga C / EBP
faktor transkripsi sangat penting dalam penekanan
GATA-dimediasi diferensiasi adiposit. Mol Sel Biol 25 (2):
706-715
48. Zhao Q et al (1997) ekspresi Paralel Sox9 dan COL2A1 di sel
yang mengalami khondrogenesis. Dev Dyn 209 (4): 377-386
49. Akiyama H et al (2002) The transkripsi faktor Sox9 memiliki
peran penting dalam langkah-langkah berturut-turut dari
kondrosit diferensiasi jalur dan diperlukan untuk ekspresi Sox5
dan Sox6. Gen Dev 16 (21): 2813-2828
50. Ikeda T et al (2004) Kombinasi SOX5, SOX6, dan Sox9 (SOX
trio) memberikan sinyal mencukupi untuk induksi tulang rawan
permanen. Arthritis Rheum 50 (11): 3561-3573
228
51. Frith J, Genever P (2008) kontrol transkripsi diferensiasi sel
induk mesenchymal. Transfus Med Hemother 35 (3): 216-227
52. Smits P et al (2001) transkripsi The Faktor L-Sox5 dan Sox6 sangat
penting untuk pembentukan tulang rawan. Dev Sel 1 (2): 277-290
53. Lefebvre V, Behringer RR, de Crombrugghe B (2001) L-Sox5,
Sox6 dan kontrol Sox9 langkah-langkah penting dari jalur
diferensiasi kondrosit. Osteoarthr Cartil 9 (suppl A): S69-S75
54. Bridgewater LC, Lefebvre V, de Crombrugghe B (1998) unsur fi c
penambah Chondrocyte-spesifik dalam gen Col11a2 menyerupai
COL2A1 jaringan-spesifik penambah. J Biol Chem 273 (24):
14.998-15.006
55. Saito T et al (2007) S100A1 dan S100B, target transkripsi dari
SOX trio, menghambat diferensiasi terminal kondrosit. EMBO
Rep 8 (5): 504-509
56. Kim IS et al (1999) Peraturan diferensiasi kondrosit oleh Cbfa1.
Mech Dev 80 (2): 159-170
57. Enomoto-Iwamoto M et al (2001) Partisipasi Cbfa1 dalam
peraturan dari kondrosit pematangan. Osteoarthr Cartil 9 (suppl
A): S76-S84
58. Boyden LM et al protein (2002) Tinggi kepadatan tulang karena
mutasi dalam LDL-reseptor terkait 5. N Engl J Med 346 (20):
1513-1521
59. Yamaguchi A, Komori T, Suda T (2000) Peraturan diferensiasi
osteoblas dimediasi oleh protein bm, landak, dan Cbfa1. Endocr
Rev 21 (4): 393-411
60. Shimoyama A et al (2007) Ihh / Gli2 signaling mempromosikan
diferensiasi osteoblas dengan mengatur ekspresi Runx2 dan fungsi.
Mol Biol Sel 18 (7): 2411-2418
61. Ling L, Nurcombe V, Keren SM (2009) pensinyalan Wnt
mengontrol nasib sel induk mesenchymal. Gene 433 (1-2): 1-7
62. Gong Y et al (2001) LDL terkait reseptor-protein 5 (LRP5)
mempengaruhi akrual tulang dan pengembangan mata. Sel 107 (4):
513-523
63. Babij P et al (2003) massa tulang Tinggi pada tikus
mengekspresikan gen LRP5 mutan. J tulang Miner Res 18 (6):
960-974
64. Bodine PV et al (2004) The Wnt antagonis disekresikan frizzled
terkait protein-1 adalah regulator negatif pembentukan tulang
trabekular pada tikus dewasa. Mol Endocrinol 18 (5): 1222-1237
65. Bennett CN et al (2005) Peraturan osteoblastogenesis dan massa
tulang dengan Wnt10b. Proc Natl Acad Sci USA 102 (9):
3324-3329
66. Krishnan V, Bryant HU, Macdougald OA (2006) Peraturan massa
tulang dengan Wnt signaling. J Clin Invest 116 (5): 1202-1209
67. Clement-Lacroix P et al aktivasi (2005) Lrp5-independen Wnt
signaling oleh lithium klorida meningkatkan pembentukan tulang
dan massa tulang pada tikus. Proc Natl Acad Sci USA 102 (48):
17.406-17.411
68. Gaur T et al (2005) Canonical NTB signaling mempromosikan
osteogenesis dengan langsung merangsang ekspresi gen Runx2. J
Biol Chem 280 (39): 33.132-33.140
69. Boland GM et al (2004) 3a Wnt mempromosikan proliferasi dan
menekan diferensiasi osteogenik dari
D. Cook and P. Genever
sel batang mesenchymal manusia dewasa. J Sel Biochem 93
(6): 1210-1230
70. Baksh D, Boland GM, Tuan RS (2007) Cross-talk antara Wnt
jalur sinyal pada sel batang mesenchymal manusia
menyebabkan antagonisme fungsional selama diferensiasi
osteogenik. J Sel Biochem 101 (5): 1109-1124
71. Eijken M et al (2008) Wnt signaling tindakan dan diatur dengan cara
yang tergantung diferensiasi osteoblas manusia. J Sel Biochem
104 (2): 568-579
72. Quarto N, Behr B, Longaker MT (2010) spektrum Opposite
aktivitas kanonik sinyal Wnt dalam konteks osteogenik sel
mesenchymal dibedakan dan dibedakan: implikasi untuk teknik
jaringan. Tissue Eng Bagian A 16 (10): 3185-3197
73. Kahler RA et al (2006) Limfosit penambah mengikat faktor 1
(Lef1) menghambat diferensiasi terminal osteoblas. J Sel
Biochem 97 (5): 969-983
74. Prestwich TC, Macdougald OA (2007) Wnt / betacatenin sinyal di
adipogenesis dan metabolisme. Curr Opin Sel Biol 19 (6):
612-617
75. Bennett CN et al (2002) Peraturan Wnt signaling selama
adipogenesis. J Biol Chem 277 (34)
: 30.998-31.004
76. Okamura M et al (2009) KUDETA-TFII bertindak hilir Wnt sinyal
/ beta-catenin untuk diam
PPARgamma ekspresi gen dan menindas adipogenesis. Proc
Natl Acad Sci USA 106 (14): 5819-5824
77. Liu G et al (2009) fungsi Canonical Wnts regulator ampuh
osteogenesis oleh sel batang mesenchymal manusia. J Sel Biol
185 (1): 67-75
78. Hari TF et al (2005) Wnt / beta-catenin di progenitor
mesenchymal mengontrol osteoblas dan kondrosit diferensiasi
selama skeletogenesis vertebrata. Dev Sel 8 (5): 739-750
79. Dong YF et al (2006) induksi Wnt dari kondrosit hipertrofi melalui
faktor transkripsi Runx2. J Sel Physiol 208 (1): 77-86
80. Im GI, Lee JM, Kim HJ (2011) inhibitor Wnt meningkatkan
khondrogenesis sel batang mesenchymal manusia dalam budaya
pelet jangka panjang. Biotechnol Lett 33 (5): 1061-1068
81. Panjang F et al (2004) Ihh signaling langsung diperlukan untuk garis
turunan osteoblas dalam kerangka endokhondral. Pembangunan 131
(6): 1309-1318
82. St-Jacques B, Hammerschmidt M, McMahon AP (1999) India
landak signaling mengatur proliferasi dan diferensiasi kondrosit
dan sangat penting untuk pembentukan tulang. Gen Dev 13
(16): 2072-2086
83. Hu H et al (2005) peran Sequential dari Hedgehog dan Wnt
pemberian isyarat di osteoblas pengembangan.
Pembangunan 132 (1): 49-60
84. Bitgood MJ, McMahon AP (1995) Hedgehog dan Bmp gen
coexpressed di banyak situs beragam interaksi sel-sel dalam
embrio tikus. Dev Biol 172 (1): 126-138
85. Deschaseaux F, Sensebe L, Heymann D (2009) Mekanisme
perbaikan tulang dan regenerasi. Tren Mol Med 15 (9): 417-429
12 Peraturan Mesenchymal Stem Sel Diferensiasi
86. Vortkamp A et al (1996) Peraturan tingkat diferensiasi kartilago oleh
landak India dan protein yang berhubungan dengan PTH. Ilmu 273
(5275): 613-622
87. Sampath TK et al (1992) rekombinan manusia osteogenik protein-1
(hop-1) menginduksi pembentukan tulang baru in vivo dengan fi
aktivitas c spesifik sebanding dengan protein osteogenik alami sapi
dan merangsang osteoblas proliferasi dan diferensiasi in vitro. J Biol
Chem 267 (28): 20.352-20.362
88. Valcourt U, Moustakas A (2005) BMP sinyal dalam osteogenesis,
remodeling tulang dan perbaikan. Eur J Trauma 31 (5): 464-479
89. Gitelman SE et al (1995) VGR-1 / BMP-6 menginduksi diferensiasi
osteoblastik sel mesenchymal pluripotential. Pertumbuhan sel
Berbeda 6 (7): 827-836
90. Lee KS et al (2000) Runx2 adalah target umum dari mengubah
faktor pertumbuhan beta1 dan tulang morfogenetik protein 2,
dan kerjasama antara Runx2 dan Smad5 menginduksi fi c
ekspresi gen osteoblas-spesifik dalam garis sel mesenchymal
prekursor pluripotent C2C12. Mol Sel Biol 20 (23): 8783-8792
91. Lee MH et al (2003) BMP2-induced ekspresi Runx2 dimediasi oleh
Dlx5, dan TGF-beta 1 menentang osteoblas diferensiasi
BMP2-diinduksi oleh penekanan ekspresi Dlx5. J Biol Chem 278
(36): 34.387-34.394
92. Zaidi SK et al (2002) Integrasi RUNX dan Smad sinyal peraturan
di situs subnuclear transcriptionally aktif. Proc Natl Acad Sci
USA 99 (12): 8048-8053
93. Lee MH et al (2003) BMP-2 yang diinduksi ekspresi Osterix dimediasi
oleh Dlx5 tetapi independen dari Runx2. Biochem Biophys Res
Commun 309 (3): 689-694
94. De Luca F et al (2001) Peraturan lempeng pertumbuhan
khondrogenesis oleh tulang morfogenetik protein-2. Endokrinologi
142 (1): 430-436
95. Semba Aku et al (2000) khondrogenesis Secara kedudukan tergantung
diinduksi oleh BMP4 adalah co-diatur oleh Sox9 dan Msx2. Dev Dyn
217 (4): 401-414
229
96. Murtaugh LC et al (2001) ayam The transkripsi represor Nkx3.2
bertindak hilir Shh untuk mempromosikan BMP-dependent aksial
khondrogenesis. Dev Sel 1 (3): 411-422
97. Lengner CJ et al (2005) represi Nkx3.2-dimediasi Runx2
mempromosikan diferensiasi khondrogenik. J Biol Chem 280
(16): 15.872-15.879
98. Zeng L et al (2002) Shh menetapkan loop autoregulatory Nkx3.2 /
Sox9 yang dikelola oleh sinyal BMP untuk menginduksi
khondrogenesis somitic. Gen Dev 16 (15): 1990-2005
99. Alliston T et al (2001) TGF-beta-induced represi Cbfa1 oleh
Smad3 menurun Cbfa1 dan osteocalcin berekspresi dan
menghambat diferensiasi osteoblas. EMBO J 20 (9): 2254-2272
100. Lutz M, Knaus P (2002) Integrasi dari TGF-beta jalur ke jaringan
sinyal seluler. Sel Signal 14 (12): 977-988
101. Benfey PN (2003) Biologi Molekuler: microRNA di sini untuk tinggal.
Nature 425 (6955): 244-245
102. Li Z et al (2008) Sebuah microRNA tanda tangan untuk program
BMP2induced osteoblas komitmen keturunan. Proc Natl Acad Sci
USA 105 (37): 13.906-13.911
103. Hassan MQ et al (2010) Sebuah jaringan yang menghubungkan
Runx2, SATB2, dan mir-23a ~ 27a ~ 24-2 klaster mengatur
program diferensiasi osteoblas. Proc Natl Acad Sci USA 107 (46):
19.879-19.884
104. McMahon LA et al (2008) efek Regulatory regangan mekanis
pada diferensiasi khondrogenik dari MSC di perancah
kolagen-GAG: analisis eksperimental dan komputasi. Ann
Biomed Eng 36 (2): 185-194
105. Sim WY et al (2007) Sebuah chip sel mikro pneumatik untuk
diferensiasi sel induk mesenchymal manusia di bawah stimulasi
mekanik. Lab Chip 7 (12): 1775-1782
106. Caplan AI, Bruder SP (2001) sel induk Mesenchymal: blok
bangunan untuk obat molekul di abad ke-21. Tren Mol Med 7
(6): 259-264