Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Hindawi Publishing Corporation

ISRN Onkologi
Volume 2013, ID Artikel 910849,8halaman
http://dx.doi.org/10.1155/2013/910849

Artikel Penelitian
Penyimpangan Kromosom pada Sel yang Terinfeksi Bovine
Papillomavirus: Membandingkan Cutaneous Papilloma,
Esophagus Papilloma, dan Lesi Sel Kandung Kemih

Kamp SRC,1TC Melo,1,2S.Assaf,1RP Araldi,1,3J.Mazzuchelli-de-Souza,1,3

MP Sircili,1,3RF Carvalho,1,3F.Roperto,4W.Becak,1,5dan RC Stocco1,3
1Laboratório de Genetica, Instituto Butantan, Avenida Vital Brasil, 1500, Butantã, 05503-900 São Paulo, SP, Brasil
2Program Pós-gradução em Biologia Estrutural e Funcional, Universidade Federal de São Paulo, Rua Botucatu,
740, 04023-900 São Paulo, SP, Brasil
3Programa de Pós-graduação Interunidades em Biotecnologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo,
Avenida Prof. Lineu Prestes, 2415 Edifı́cio ICB-III-Cidade Universitária, 05508-900 São Paulo, SP, Brazil
4Departemen Biologi, Naples University Federico II, Via Mezzocannone 16, 80134 Naples, Italia
5Departamento de Biologia, Universidade Federal da Integração Latino-Americana (UNILA), Avenida Tancredo Neves,
6731 blok 4, 85867-970 Foz do Iguaçú, PR, Brasil

Korespondensi harus dialamatkan ke RC Stocco; ritastocco@butantan.gov.br

Diterima 3 Juni 2013; Diterima 2 Juli 2013

Editor Akademik: K. Sonoda, M. Strake, dan K. van Golen

Hak Cipta © 2013 SRC Campos dkk. Ini adalah artikel akses terbuka yang didistribusikan di bawah Lisensi Atribusi Creative Commons, yang
mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tanpa batas dalam media apa pun, asalkan karya asli dikutip dengan benar.

Sebagian besar sel ganas menunjukkan ketidakstabilan genetik dengan perubahan jumlah kromosom ditambah cacat segmental:
perubahan ini melibatkan kromosom utuh dan perubahan yang disebabkan oleh kerusakan. Beberapa jalur ketidakstabilan kromosom telah
diusulkan sebagai kerusakan acak, fusi telomer, dan fisi sentromer. Perubahan kromosom pada sel tumor telah dijelaskan pada model
hewan danin vitroeksperimen. Satu pertanyaan penting adalah tentang kemungkinan perbedaan antara model hewan,in vitro studi, dan
kejadian nyata dalam sel kankerin vivo. Papillomavirus adalah agen yang relevan dalam proses onkogenik yang terkait dengan aksi pada
genom inang. Baru-baru ini, banyak laporan yang membahas keberadaan DNA virus dalam darah tepi, pada manusia dan pada hewan yang
terinfeksi oleh papillomavirus. Arti dari peristiwa ini adalah kontroversi: kemungkinan produk dari apoptosis yang terjadi pada sel kanker, sel
kanker yang bermetastasis, atau sekuens DNA aktif yang beredar di aliran darah. Studi ini membandingkan aberasi kromosom yang
terdeteksi pada sel sapi, pada sel darah tepi, dan pada sel lesi BPV: literaturnya sedikit dalam jenis penelitian ini. Membandingkan
penyimpangan kromosom yang dijelaskan dalam sel yang berbeda, mekanisme umum asalnya, dapat disarankan. Selanjutnya sel darah
dapat dievaluasi sebagai cara penularan virus yang efektif.

1. Perkenalan
Papillomaviruses (PVs) adalah virus yang membutuhkan
lingkungan epitel yang berdiferensiasi untuk siklus replikasinya.
1]. PV menginfeksi mamalia, termasuk manusia, dan terkait
dengan perkembangan lesi jinak yang dapat berkembang
menjadi kanker.2]. Kanker serviks uteri, kanker kedua yang
paling sering terjadi pada wanita di seluruh dunia, disebabkan
oleh infeksi human papillomavirus (HPV) [3,4].
Genom Papillomavirus terdiri dari tiga wilayah: LCR, "wilayah
kontrol panjang" yang bertanggung jawab untuk kontrol transkripsi
genom, wilayah L, yang mengkode kapsid mayor dan minor
protein (L1 dan L2, resp.), menghadirkan transkripsi akhir dalam
siklus replikasi virus, dan wilayah E, dengan transkripsi awal
dalam siklus virus, yang mengkodifikasi protein terkait dengan
aksi karsinogenik [5,6]. Penularan virus diakui terjadi melalui
kontak langsung: abrasi kulit atau hubungan seksual
menyebabkan infeksi PV [7]. Onkoprotein PV adalah sumber
perubahan yang terkait dengan karsinogenesis: mereka
mengganggu kontrol siklus sel inang, melalui interaksi dengan
protein spesifik, seperti p53, p RB, p21, dan p27 [8]. Sebagai
contoh aksi onkoprotein virus, E6 menginduksi percepatan
degradasi p53 [9]. E7 mengikat dan mendegradasi p RB dan
berinteraksi dengan p21 dan p27 [10].
2 Onkologi ISRN
Papillomavirus mempertahankan genomnya dalam kondisi
episomal, terkait dengan kromosom sel inang selama pembelahan
sel dan didistribusikan dalam sel yang membelah.11]. Protein E2
papillomavirus secara bersamaan menghubungkan kromatin inang
dan genom virus selama mitosis.12]. Virus dalam bentuk
episomalnya ditemukan pada lesi jinak dan E2 juga berperan dalam
integrasi sekuens virus dalam kromatin inang sel neoplastik. Sel-sel
ini terkait erat dengan ekspresi onkogen human papillomavirus
(HPV) risiko tinggi E6 dan E7 dan menunjukkan ketidakstabilan
kromosom.13].
Virus ini khusus untuk epitel, tetapi, baru-baru ini, banyak
laporan menggambarkan urutan DNA virus dalam aliran darah [
14–21]. Sumber pasti dari urutan ini tidak jelas: DNA virus yang
bersirkulasi telah dibahas sebagai produk lisis sel kanker yang
bersirkulasi atau mikrometastasis dari tumor.18]. DNA Bovine
Papillomavirus (BPV) secara bersamaan terdeteksi di jaringan
berbeda dari hewan yang sama, termasuk darah, sehingga
menunjukkan penyebaran virus aliran darah [17,22– 24].
Telah berspekulasi bahwa sel mononuklear darah, yang
bermigrasi ke tempat peradangan jaringan dapat bertindak sebagai
sumber virus (BPV, misalnya) dalam infeksi sel epitel dan dapat
terlibat dalam perkembangan tumor secara mandiri atau bersama-
sama dengan beberapa faktor biologis dan/atau atau kofaktor kimia
[14,20].
Pertanyaan seminarnya adalah sebagai berikut: dapatkah
urutan ini mewakili status replikasi virus dalam aliran darah,
khususnya dalam limfosit, yang bertindak sebagai reservoir
infeksi virus? Bisakah virus menampilkan ekspresi onkogen di
jaringan lain?
Urutan DNA papillomavirus telah diidentifikasi dalam
aliran darah sapi khusus dalam laporan terbaru [16– 19,25,
26]. Studi menganalisis seluruh darah, plasma, limfosit
terisolasi, dan kultur limfosit perifer jangka pendek: DNA
BPV terdeteksi di semua sistem [15,17, 18,22,23]. Selain itu,
DNA BPV terdeteksi juga pada air mani, rahim, urin, susu,
dan cairan mani.17]. Selain itu, analisis sitogenetik yang
dilakukan pada kultur limfosit perifer jangka pendek
mengungkapkan peningkatan yang signifikan dari
penyimpangan kromosom pada sampel dari hewan yang
terinfeksi.15–18]. Mekanisme aksi virus pada kromatin inang
menjadi isu penting untuk dipelajari.
Dalam penelitian ini, kami menganalisis tingkat dan jenis
penyimpangan kromosom yang diverifikasi dalam sel kultur
yang diperoleh dalam sampel yang dikumpulkan dari darah
tepi, papiloma kulit, papiloma esofagus, dan sel kandung
kemih hewan yang menunjukkan hematuria enzootik.
Sampel dikumpulkan dari sapi yang terinfeksi virus
papiloma sapi dan kontrol normal. Kultur limfosit jangka
pendek dilakukan dengan sampel darah dan fragmen lesi
digunakan untuk mendapatkan kultur sel primer.
2. Bahan dan Metode
2.1. Pernyataan Etis.Protokol yang digunakan dalam penelitian
ini telah disetujui oleh Komite Etik dalam Penelitian
Universidade Federal de São Paulo(nomor 0835.07) yang
ditugaskan oleh ketua panitia ini. Semua upaya dilakukan untuk
meminimalkan penderitaan pada hewan.
2.2. Pemilihan Hewan.sembilan hewan (Bos taurus) dipilih untuk
penelitian ini: 2 laki-laki dan 7 perempuan, usia sebanding. Hewan-
hewan tersebut diserahkan untuk evaluasi klinis yang dilakukan
oleh dokter hewan. Semua prosedur mengikuti prinsip etika.
Kelompok hewan termasuk 2 hewan yang secara klinis normal, 3
menunjukkan papilomatosis kulit yang parah, 2 memiliki papiloma
esofagus, dan 2 mengalami hematuria enzootik, menunjukkan lesi
seperti papiloma di kandung kemih.
2.3. Sampel.Sampel darah dikumpulkan dalam dua jarum suntik steril
dengan heparin atau EDTA, masing-masing, untuk kultur dan ekstraksi
DNA. Fragmen jaringan diperoleh dengan prosedur pembedahan yang
dilakukan oleh dokter hewan dengan anestesi lokal.
2.4. Analisis Histologis.Untuk analisis histologis, fragmen
sampel yang diperoleh dari lesi padat difiksasi dalam formalin
buffer netral 10% dan tertanam dalam lilin parafin: 5 m bagian
yang dicentang diwarnai dengan hematoxylin / eosin.
2.5. Kultur Limfosit Jangka Pendek.Delapan belas tetes darah
diinkubasi dalam media RPMI yang disuplai dengan 10% serum
janin dan 2% phytohemagglutinin selama 72 jam pada suhu 37∘
C.
2.6. Kultur Sel Primer.Fragmen jaringan dicuci dalam PBS,
diserahkan ke kolagenase 0,01%, 30 menit, 37∘C, dan diinkubasi
dalam Dulbecco MEM yang disuplai dengan serum janin 10%
dalam CO2suasana 37∘C.
2.7. Persiapan sitogenetik.Kolkisin 16 g/mL, 0,1 mL ditambahkan
ke sel biakan selama 1 jam pada suhu 37∘C. Sel-sel dimasukkan
ke dalam larutan hipotonik, KCl 0,075M, pada suhu 37∘C, 10
menit. Setelah itu, sel difiksasi dalam tiga bak dengan 3 : 1,
metanol : asam asetat. Slide diwarnai dengan Giemsa 3%, 5
menit.
2.8. Analisis sitogenetik.Sel-sel dari setiap jenis kultur
dianalisis dan dicatat dalam Photomicroscopy Axiohot
Zeiss. Setiap jenis aberasi kromosom dicatat, menurut
Melo et al. [19].
2.9. Analisis statistik.Data sitogenetik dianalisis secara
statistik menggunakan Siswa -uji [26].
2.10. Identifikasi Virus
2.10.1. Ekstraksi DNA Jaringan dan Darah.Ekstraksi DNA
dilakukan menggunakan Cell & Tissue Kit Illustra
GenomicPrep Mini Spin (GE Healthcare, Buckinghamshire,
UK), dan DNA yang diekstraksi disimpan pada suhu −20∘C.
Kualitas sampel DNA yang diperoleh diverifikasi dengan
menggunakan teknik polymerase chain reaction (PCR),
melalui amplifikasi bovine -fragmen gen globin, (450 bp),
dengan primer spesifik (F: 5̸-aacctctttgttcacaac cag-3̸dan R: 5̸
-cag atgcttaacccactgagc-3̸), menurut Yaguiu et al. [24].
2.11. Identifikasi Virus.Identifikasi molekuler virus dilakukan
dengan menggunakan primer degenerasi FAP59 (maju,
Onkologi ISRN
Tabel 1: Penyimpangan kromosom pada sel darah tepi dan sel kultur primer. C: kelompok kontrol; 1: papilomatosis kulit; 2: papiloma
kerongkongan; 3: hematuria enzootik.
% Penyimpangan numerik
Kelompok Jumlah sel
(berarti ± SE)
Darah
C 126 7,86±1,87
1 149 19.87 ± 4.59∗
2 101 26.32 ± 5.53∗
3 125 19.76 ± 4.69∗
Sel kultur primer
C 124 14,43±4,34
1 188 28.27 ± 3.14∗
2 164 46,39±19,25¤
3 91 60.39 ± 0.55∗∗
∗ ≥ 0,05;∗∗ ≥ 0,01;¤ ≥ 0,1;§sel-sel yang hanya menampilkan celah dievaluasi secara terisolasi.
5̸-TAACWGTIGGICAYCCWTATT-3̸) dan FAP64 (membalik, 5̸
-CCWATATCWVHCATITCICCATC-3̸), yang mempromosikan
amplifikasi gen L1, menghasilkan fragmen 478 bp, Ogawa et al.,
2004 [27]. Secara rinci, reaksi amplifikasi dilakukan dalam
thermo cycler PTC-100TM (MJ Research, Inc.), dengan PCR
Master Mix (Promega, Madison, USA), dengan ketentuan
sebagai berikut: 10 menit pada 94∘C, diikuti oleh 45 siklus 1
menit dan 30 detik pada 94∘C, 2 menit pada 52∘C dan 1 menit
dan 30 detik pada 72∘C, dan langkah ekstensi akhir 5 menit pada
72∘C, untuk primer FAP59/FAP64. Untuk BPV1, 2, dan 4 tertentu:
BPV-1 (5-ggagcgcctgctaac tat agg a-3̸/5̸-atctgttgtttgggtggtgac-3̸
), BPV-2 (5̸-gttatacca ccc aaagaagaccct-3̸/5̸
-ctggttgcaacagctctctttc-3̸), dan BPV-4 (5̸-gctgaccttccagtctta di—3̸
/5̸-cag tttcaatctcctcttca-3̸), secara rinci, reaksi amplifikasi
dilakukan dalam thermo cycler PTC-100TM (MJ Research, Inc.),
dengan PCR Master Mix (Promega, Madison, USA), dengan
ketentuan sebagai berikut: 3 menit pada 94∘C, diikuti oleh 35
siklus 50 detik pada 94∘C, 1 menit pada 60∘C dan 1 menit pada
72∘C, dan langkah ekstensi akhir 5 menit pada 72∘C. Produk PCR
dianalisis dalam elektroforesis gel agarosa 2% yang diwarnai
dengan GelRed dalam buffer TAE, divisualisasikan di bawah
sinar UV.
3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Hasil.Analisis histologis mengkonfirmasi identifikasi
fragmen yang dikumpulkan untuk studi (Gambar 1). Secara
khusus, segmen kulit normal yang diperoleh melalui
prosedur pembedahan dari sapi normal dipilih sebagai
kontrol. Dengan prosedur serupa, biopsi diperoleh dari
papiloma kulit, papiloma esofagus, dan papiloma dari
kandung kemih hewan yang terkena hematuria enzootik.
Teknik PCR menggunakan primer FAP 59/64 mengamplifikasi
fragmen DNA sepanjang 474 bp yang menunjukkan adanya urutan
virus pada biopsi yang dikumpulkan dari lesi papiloma. Primer
spesifik memungkinkan identifikasi BPV1 (301 bp) dan BPV2 (164 bp)
(Gambar 2). Hanya satu hewan yang disajikan
3
% Penyimpangan struktural§ % Sel dengan celah
(berarti ± SE) (berarti ± SE)
9,46±0,97 3,93±0,59
30.89 ± 7.71∗ 13.28 ± 4.50∗
41.88 ± 2.25∗∗ 11.29 ± 3.77∗
33.89 ± 9.18∗ 10.97 ± 1.92∗
14,94±1,85 7,16±0,48
40.39 ± 1.40∗∗ 12,22±4,48
30.83 ± 0.37∗∗ 13.81 ± 0.67∗∗
28.46 ± 1.35∗∗ 10,17±3,92
BPV4 (170 bp) pada papiloma kulit. Juga, urutan virus yang sama
terdeteksi dalam kultur sel primer yang diperoleh dan dalam lima
bagian pertama mereka (Gambar2dan3). Prosedur PCR yang sama
dengan primer yang sama digunakan untuk menyelidiki keberadaan
sekuens virus dalam sampel darah, tetapi tidak mungkin untuk
mendeteksi sekuens virus apa pun pada sampel darah mana pun,
hewan normal atau yang terkena.
ItuGambar 3menampilkan sel dalam kultur primer.
Morfologi sel tidak berbeda di antara garis yang berbeda.
Untuk analisis sitogenetik, empat kelompok hewan
ditetapkan berdasarkan gambaran klinis: C: kontrol (tidak
terpengaruh dan tanpa deteksi DNA virus dalam sel kultur),
Grup 1: papiloma kulit;Grup 2: papiloma kerongkongan;
Grup 3: hematuria enzootik. Sebanyak 1068 sel dievaluasi:
501 berasal dari kultur limfosit jangka pendek dan 567
diperoleh dari kultur sel primer biopsi (Tabel1 dan2).
Hasil yang diamati dalam sel darah kultur memungkinkan untuk
memverifikasi bahwa hewan yang terkena menunjukkan tingkat
penyimpangan kromosom yang lebih tinggi dibandingkan dengan
hewan yang tidak terpengaruh. Karena prosedur PCR tidak dapat
mendeteksi urutan BPV dalam sel darah, data dianalisis sebagai hewan
yang tidak terpengaruh dibandingkan dengan sapi yang terpengaruh.
Namun, teknik PCR menunjukkan sekuens DNA BPV dalam biopsi yang
dikumpulkan dari hewan yang terkena seperti fragmen dari hewan yang
tidak terkena yang negatif untuk BPV dalam prosedur PCR. Jadi, data
dianalisis dengan membandingkan biopsi BPV positif dan negatif BPV
dan masing-masing sel kultur primer. Penting untuk ditekankan bahwa
biopsi negatif BPV diperoleh dari hewan yang tidak terkena dan hewan
ini adalah kontrol kami. Analisis spesifik dilakukan dengan
mempertimbangkan jenis aberasi kromosom yang berbeda dengan
membandingkan kelompok sebelumnya (C, 1, 2, dan 3). Dalam sel darah,
dibandingkan dengan kontrol, jenis aberasi yang menunjukkan tingkat
yang lebih tinggi secara signifikan dalam sel dari hewan yang terkena
adalah penambahan/penghapusan, pemutusan kromatid, fragmen
asentrik, dan asosiasi sentromer (Meja 2).
4 Onkologi ISRN

(sebuah) (b)

10 m

(c) (d)

Gambar 1: Bagian histologis: (a) fragmen kulit normal, (b) fragmen papiloma kulit, (c) fragmen papiloma esofagus, dan (d) fragmen
papiloma yang dikumpulkan dari kandung kemih hewan yang terkena hematuria enzootik (HE) ( 10x).

1 kb C− C+ A B CDE F GH SayaJ

C− C+ 1 kb ABCDEFGHI JLM

474 hal

164 hal

(sebuah) (b)

Gambar 2: Contoh sekuens DNA BPV yang terdeteksi pada lesi kulit dan pada masing-masing sel kultur primer: sampel dikumpulkan dari salah satu
hewan. I primer FAP59/64, II primer khusus BPV2. Kontrol C−negatif, kontrol C+ positif, PCR AB dengan DNA dari lesi papiloma, kultur sel primer C–E
menggunakan fragmen dari lesi positif BPV pada pasase 1, kultur sel primer F–H menggunakan fragmen dari lesi positif BPV pada pasase 2, IJ kultur sel
primer menggunakan fragmen dari lesi positif BPV pada pasase 3, kultur sel primer L menggunakan fragmen dari lesi positif BPV pada pasase 4, dan
kultur sel primer M menggunakan fragmen dari lesi positif BPV pada pasase 5. Penting untuk diperhatikan dalam amplikon yang berbeda,
menunjukkan kemungkinan beban virus yang berbeda.

Mempertimbangkan sel kultur primer, penyimpangan kromosom
yang lebih sering terjadi adalah penambahan / penghapusan,
pemutusan kromatid, pemutusan kromosom, fragmen asentrik, asosiasi
sentromer, dan asosiasi telomer (Meja 2 danGambar 4). Dimungkinkan
untuk memverifikasi bahwa sel-sel yang diperoleh dari hewan yang
terinfeksi BPV menunjukkan tingkat penyimpangan kromosom yang
lebih tinggi secara signifikan.
3.2. Diskusi.Sejauh mungkin untuk memverifikasi, ini adalah laporan
pertama yang menggambarkan penyimpangan kromosom dalam sel
yang berasal dari lesi virus papiloma sapi.
Seperti yang telah kami jelaskan sebelumnya dalam limfosit
perifer [15], penyimpangan kromosom terjadi pada tingkat
peningkatan yang signifikan dalam kultur limfosit jangka pendek
dan dalam kultur sel primer, yang ditetapkan dari sampel yang
diperoleh dari hewan yang terkena BPV.
Poin yang sangat penting harus didiskusikan: fakta bahwa tidak
mungkin untuk mendeteksi urutan DNA virus dalam darah tepi
hewan yang terkena atau tidak. Terlepas dari kenyataan ini, tingkat
penyimpangan kromosom diverifikasi lebih tinggi pada sampel
hewan yang terkena dampak. Karena tidak mungkin untuk
mengidentifikasi DNA virus dalam darah baik dalam kontrol atau
Onkologi ISRN
(sebuah)
(c)
Gambar 3: Kultur sel primer: (a) kulit normal; (b) papiloma kulit; (c) papiloma kerongkongan; (d) papiloma kandung kemih dari hewan yang
terkena hematuria enzootik (10x). Panah menunjukkan sel dengan morfologi yang berbeda.
hewan yang terkena, dapat didiskusikan bahwa penyimpangan
kromosom tidak disebabkan oleh aksi virus. Namun, jenis
penyimpangan yang sama terdeteksi pada sel yang berasal dari
lesi, positif adanya virus. Selain itu, ada perbedaan yang
signifikan antara tingkat aberasi kromosom, membandingkan
hewan yang terpengaruh dan tidak terpengaruh.
Faktanya, dengan mempertimbangkan kesamaan dari
penyimpangan kromosom yang terdeteksi, aksi virus pada kromatin
inang diverifikasi sebagai efektif baik dalam sel darah atau dalam sel
yang berasal dari lesi. Kami berpendapat bahwa muatan virus dalam
darah tepi hewan yang terkena dampak terlalu rendah untuk dideteksi
pada PCR konvensional. Argumen yang sama dapat digunakan untuk
hewan yang tidak terpengaruh, mengarah pada kebutuhan untuk
membandingkan hewan yang terpengaruh dengan yang tidak
terpengaruh dan menekankan perbedaan yang diamati pada tingkat
penyimpangan kromosom.
Tindakan virus diverifikasi meningkatkan penyimpangan kromosom
numerik dan struktural. Fakta ini menunjukkan bahwa virus bertindak
dengan cara yang berbeda dalam interaksinya dengan inang
5
(b)
(d)
kromatin. Sebelumnya dijelaskan aksi onkoprotein virus pada
telomere yang mengarah ke fusi sentris [28]. Selain itu, virus
bekerja pada gelendong mitosis, mengubah set kromosom dan
meningkatkan aneuploidi.29].
Meskipun BPV digambarkan sebagai tidak terintegrasi dalam sel
inang, aksinya menghasilkan berbagai jenis perubahan kromosom
yang menunjukkan interaksi besar dengan kromatin dan juga
dengan mekanisme perbaikan DNA.30].
Kami telah menggambarkan keberadaan urutan virus
dalam sel biakan primer, di bagian yang berbeda [31], tetapi
sekarang kami menunjukkan bahwa urutan ini aktif
mengarah ke perubahan kromosom.
4. Kesimpulan
Kami membandingkan untuk pertama kalinya aksi bovine
papillomavirus pada kromatin sel inang dalam kultur limfosit dan sel
kultur primer, menggambarkan peningkatan penyimpangan
kromosom pada kedua jenis sel. Kultur sel primer
6 Onkologi ISRN

(sebuah) (b) (c)

(d) (e) (f)

(g) (h)

Gambar 4: Penyimpangan kromosom dalam sel kultur primer ((a), (c), (e), dan (g)) dan limfosit perifer ((b), (d), (f), dan (h)): asentrik fragmen
((a), (b)); pemutusan kromosom (c); pemutusan kromatid (d); penataan ulang kromosom dengan penambahan/penghapusan ((e), (f)); asosiasi
telomerik (g), asosiasi sentromerik ((e), (h)); pemisahan kromatid awal (panah tipis di (a), (e)).

tidak hanya menyajikan urutan DNA BPV tetapi juga menyimpan
urutan ini di seluruh bagian yang berbeda. Data ini ditambah
laporan terbaru [18] menekankan kemungkinan infeksi BPV aktif
dalam darah serta dalamin vitrosel yang dikultur.
Konflik kepentingan
Semua penulis menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan
mengenai penelitian, kepenulisan, dan/atau publikasi makalah ini. Para
penulis menginformasikan bahwa semua bahan dan merek dagang
disebutkan digunakan hanya sebagai bagian dari protokol eksperimental
dan tidak ada keuntungan finansial atau favoritisme bisnis.
Terima kasih
Para penulis ingin mengucapkan terima kasihMinistério de Ciência,
Tecnologia e Innovação/Conselho Nacional de Desenvolvimento
Cientı́fico e Tecnológico(CNPq Proc. 554816/2006-7 dan
402539/2011-7), FAPESP (Proc. 2006/02439-6), Coordenação de
Aperfeiçoamento Pessoal de Nı́vel Superior (CAPES), dan
Onkologi ISRN 7

Tabel 2: Frekuensi penyimpangan berbeda yang terdeteksi dalam darah dan sel kultur primer hewan yang terkena papiloma kulit, papiloma
esofagus, dan hematuria enzootik.

Darah
Kelompok CA PADA AF CB Crb
C 0,88±1,24 2,48±1,46 2,33±0,81 1,75±2,48 1,60±0,22
1 4,27±2,20¤ 3,86±0,96 7,20±5,27 2,31 ± 2,00 8.67 ± 3.03∗
2 6.07 ± 1.28∗ 6,34±5,67 14.74 ± 1.11∗ 1,16±1,64 4,35±3,71
3 1,65±0,39 4,25±2,14 6,86±3,89 0,68±0,97 6.31 ± 0.76∗∗
Iklan/Del EcrS Aneu Polip Kesenjangan

C 2,33±0,81 0,72±1,02 7,86±1,19 0,72±1,02 3,93±0,59

1 15.02 ± 3.04∗∗ 2,85±2,55 17.10 ± 3.57∗ 2,77±1,02¤ 17.81 ± 4.97∗
2 26.28 ± 4.28∗∗ 11.55 ± 3.18∗ 23.14 ± 3.46∗ 3,19 ± 2,07 14.17 ± 2.98∗
3 20.03 ± 7.02∗ 12.34 ± 3.86∗ 16,74±6,24¤ 3,02±1,55 13.99 ± 3.46∗
Budaya primer
Kelompok CA PADA AF CB Crb
C 1,25±1,77 3,01±1,04 1,14 ± 1,61 0,63±0,88 1,14 ± 1,61
1 5,61±3,43¤ 8,80±3,50¤ 5,79±2,81¤ 0,86±0,75 5.59 ± 1.78∗
2 5.16 ± 1.02∗ 4,74±0,43¤ 5,43±1,74¤ 0,42±0,59 4.74 ± 0.42∗
3 3,21±1,01 7,94±2,91¤ 3,48±2,15 2,23±0,38¤ 2,23±0,38
Iklan/Del EcrS Aneu Polip Kesenjangan

C 7,67±2,01 5,28 ± 2,17 13,81±3,46 0,63±0,88 8.30±1.12

1 32.59 ± 7.82∗ 9,95±4,73 23,66±6,13¤ 3,57±4,29 13,61±5,73
2 26.36 ± 0.44∗∗ 3,63±1,99 38,70±23,83 7,68±4,58¤ 18.97 ± 1.69∗∗
3 18.55 ± 1.49∗ 5,71±2,53 52.72 ± 0.31∗ 6.42 ± 2.01∗ 13.11 ± 0.87∗

∗ >0,05,∗∗ >0,01,dan¤ ≥0,1.
CA: asosiasi sentromer, AT: asosiasi telomer, AF: fragmen asentrik, CB: pemutusan kromosom, CrB: pemutusan kromatid, Ad/Del: penambahan/penghapusan, EcrS:
pemisahan kromatid awal, Aneu: aneuploidi, Polip: poliploidi, dan celah .

Fundação Butantan untuk dukungan finansial dan Carolina da Paz Sabino
untuk dukungan editorial.
Referensi
[1] G. Borzacchiello dan F. Roperto, “Bovine papillomaviruses, papilloma,
dan kanker pada sapi,”Penelitian Veteriner, vol. 39, tidak. 5, pasal 45,
2008.
[2] MS Campo, “Bovine papillomavirus dan kanker,”Jurnal Kedokteran Hewan,
vol. 154, tidak. 3, hlm. 175–188, 1997.
[3] S. Duensing dan K. Münger, “Onkoprotein human papillomavirus tipe
16 E6 dan E7 secara independen menginduksi ketidakstabilan
kromosom numerik dan struktural,”Penelitian kanker, vol. 62, tidak.
23, hlm. 7075–7082, 2002.
[4] S. Duensing, LY Lee, A. Duensing et al., “Human papillomavirus
tipe 16 E6 dan E7 oncoprotein bekerja sama untuk menginduksi
cacat mitosis dan ketidakstabilan genomik dengan melepaskan
duplikasi sentrosom dari siklus pembelahan sel,”Prosiding
National Academy of Sciences Amerika Serikat, vol. 97, tidak. 18,
hlm. 10002–10007, 2000.
[5] M. Kadaja, H. Isok-Paas, T. Laos, E. Ustav, dan M. Ustav,
“Mekanisme ketidakstabilan genom dalam sel yang terinfeksi
human papillomavirus berisiko tinggi,”Patogen PLoS, vol. 5,
tidak. 4, 2009.
[6] NA Hamid, C. Brown, dan K. Gaston, “Pengaturan proliferasi sel
oleh protein awal papillomavirus,”Ilmu Hayati Seluler dan
Molekuler, vol. 66, tidak. 10, hlm. 1700–1717, 2009.
[7] V. Kashyap dan BC Das, "DNA aneuploidi dan infeksi human
papillomavirus tipe 16 pada lesi preneoplastik serviks uterus:
korelasi dengan perkembangan menjadi keganasan," Surat
Kanker, vol. 123, tidak. 1, hlm. 47–52, 1998.
[8] D. Patel, A. Incassati, N. Wang, dan DJ McCance, “Human
papillomavirus tipe 16 E6 dan E7 menyebabkan poliploidi pada
keratinosit manusia dan peningkatan regulasi protein fase G2-M,”
Penelitian kanker, vol. 64, tidak. 4, hlm. 1299–1306, 2004.
[9] G. Boulet, C. Horvath, DV Broeck, S. Sahebali, dan J. Bogers,
“Human papillomavirus: onkogen E6 dan E7,”Jurnal
Internasional Biokimia dan Biologi Sel, vol. 39, tidak. 11, hlm.
2006– 2011, 2007.
[10] V. O'Brien, GJ Grindlay, dan MS Campo, “Transformasi sel
oleh protein E5/E8 dari bovine papillomavirus tipe 4.
p27Kip1, meningkat melalui peningkatan sintesis protein,
diasingkan oleh kompleks cyclin D1-CDK4,”Jurnal Kimia
Biologi, vol. 276, tidak. 36, hlm. 33861–33868, 2001.
[11] AA McBride, JG Oliveira, dan MG McPhillips, “Mempartisi genom virus
dalam mitosis: ide yang sama, target yang berbeda,”Siklus sel, vol. 5,
tidak. 14, hlm. 1499–1502, 2006.
[12] JG Oliveira, LA Colf, dan AA McBride, “Variasi dalam
asosiasi protein papillomavirus E2 dengan kromosom
mitosis,”Prosiding National Academy of Sciences
Amerika Serikat, vol. 103, tidak. 4, hlm. 1047–1052, 2006.
[13] S. Duensing dan K. Münger, “Human papillomaviruses and kesalahan
duplikasi centrosome: memodelkan asal-usul ketidakstabilan
genomik,”Onkogen, vol. 21, tidak. 40, hlm. 6241–6248, 2002.
8 Onkologi ISRN

[14] RC Recouso, RC Stocco dos Santos, R. Freitas et al., “Efek kesalahan pembagian pada neoplasma dubur terkait human papillomavirus
klastogenik pakis pakis (Pteridium aquilinum aracnoideum) (HPV) berisiko tinggi,”Ilmu pengetahuan virus, vol. 372, tidak. 1, hlm. 157–164,
diet dalam limfosit perifer konsumen manusia: data awal,” 2008.
Onkologi Veteriner dan Komparatif, vol. 1, tidak. 1, hlm. 22– [30] Z. Liu, Y. Liu, Y. Hong, L. Rapp, EJ Androphy, dan JJ Chen, “sensitisasi yang
29, 2003. diinduksi Bovine papillomavirus tipe 1 E6 terhadap apoptosis berbeda
[15] RC Stocco Dos Santos, CJ Lindsey, OP Ferraz et al., “Penularan dari aktivitas transformasinya,”Ilmu pengetahuan virus, vol. 295, tidak. 2,
virus papiloma sapi dan penyimpangan kromosom: model hlm. 230–237, 2002.
eksperimental,”Jurnal Virologi Umum, vol. 79, tidak. 9, hlm. [31] SRC Campos, C. Trindade, OP Ferraz et al., “Dapatkah sel papiloma
2127–2135, 1998. yang dikultur mengandung bovine papillomavirus?”Genetika dan
[16] AC De Freitas, C. De Carvalho, O. Brunner et al., “Urutan Penelitian Molekuler, vol. 7, tidak. 4, hlm. 1119–1126, 2008.
DNA virus dalam darah tepi dan transmisi vertikal virus:
diskusi tentang BPV-1,”Jurnal Mikrobiologi Brasil, vol. 34,
tidak. 1, hlm. 76–78, 2003.
[17] CJ Lindsey, ME Almeida, CF Vicari et al., “Bovine papillomavirus DNA
dalam susu, darah, urin, air mani, dan spermatozoa dari hewan
yang terinfeksi virus papillomabovine,”Genetika dan Penelitian
Molekuler, vol. 8, tidak. 1, hlm. 310–318, 2009.
[18] S. Roperto, R. Brun, F. Paolini et al., "Deteksi bovine
papillomavirus tipe 2 dalam darah tepi sapi dengan tumor
kandung kemih: kemungkinan peran biologis,"Jurnal
Virologi Umum, vol. 89, tidak. 12, hlm. 3027–3033, 2008.
[19] TC Melo, N. Diniz, SRC Campos et al., “Studi sitogenetik pada
darah tepi sapi yang menderita papilomatosis,” Onkologi
Veteriner dan Komparatif, vol. 9, tidak. 4, hlm. 269–274,
2011.
[20] JW Moura, RC Stocco Dos Santos, MLZ Dagli, JL D'Angelino, EH
Birgel, dan W. Becak, “Penyimpangan kromosom pada sapi
yang dibesarkan di padang pakis pakis,”Pengalaman, vol. 44,
tidak. 9, hlm. 785–788, 1988.
[21] MB Lioi, R. Barbieri, G. Borzacchiello et al., “Penyimpangan
kromosom pada sapi dengan hematuria enzootik kronis,”Jurnal
Patologi Komparatif, vol. 131, tidak. 2-3, hlm. 233–236, 2004.
[22] C. De Carvalho, AC De Freitas, O. Brunner et al., “Bovine
papillomavirus tipe 2 dalam saluran reproduksi dan gamet
betina sapi yang disembelih,”Jurnal Mikrobiologi Brasil, vol. 34,
tidak. 1, hlm. 82–84, 2003.
[23] A. Yaguiu, C. Carvalho, AC Freitas et al., “Papilomatosis pada
sapi: deteksi in situ urutan DNA papillomavirus sapi dalam
jaringan reproduksi,”Jurnal Ilmu Morfologi Brasil, vol. 23,
tidak. 3-4, hlm. 525–529, 2006.
[24] A. Yaguiu, MLZ Dagli, EH Birgel Jr. et al., “Kehadiran simultan
virus papiloma sapi dan virus leukemia sapi dalam jaringan sapi
yang berbeda: hibridisasi in situ dan analisis sitogenetik,”
Genetika dan Penelitian Molekuler, vol. 7, tidak. 2, hlm. 487–
497, 2008.
[25] MS Campo, WFH Jarrett, W. O'Neil, dan RJ Barron, “Infeksi
papillomavirus laten pada sapi,”Penelitian dalam Ilmu
Kedokteran Hewan, vol. 56, tidak. 2, hlm. 151–157, 1994.
[26] V. Peretti, F. Ciotola, S. Albarella et al., “Kerapuhan kromosom pada
sapi dengan hematuria enzootik kronis,”Mutagenesis, vol. 22, tidak.
5, hlm. 317–320, 2007.
[27] T. Ogawa, Y. Tomita, M. Okada et al., “Deteksi spektrum luas
virus papiloma pada papiloma puting sapi dan kulit puting yang
sehat,”Jurnal Virologi Umum, vol. 85, tidak. 8, hlm. 2191– 2197,
2004.
[28] AM Leal, OP Ferraz, C. Carvalho et al., "Quercetin menginduksi
penyimpangan kromosom struktural dan penataan ulang yang tidak
biasa dalam sel sapi yang ditransformasikan oleh protein E7 dari
bovine papillomavirus tipe 4,"Onkologi Veteriner dan Komparatif,
vol. 1, tidak. 1, hlm. 15–21, 2003.
[29] A. Duensing, A. Chin, L. Wang, S.-F. Kuan, dan S. Duensing,
“Analisis overduplikasi sentrosom berkorelasi dengan sel
 MEDIATOR dari

PERADANGAN

Ilmiah Gastroenterologi Jurnal dari

Jurnal Dunia Penelitian dan Praktek

Hindawi Publishing Corporation http://
www.hindawi.com
Hindawi Publishing Corporation
Hindawi Publishing Corporation
Penelitian Diabetes Penanda Penyakit
http://www.hindawi.com Jilid 2014 Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation
Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014

Jurnal dari Jurnal Internasional dari

Penelitian Imunologi Endokrinologi

Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation
http://www.hindawi.com Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014

Kirimkan naskah Anda di

http://www.hindawi.com

BioMed
Riset PPAR
Hindawi Publishing Corporation
Riset Internasional
Hindawi Publishing Corporation
http://www.hindawi.com Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014

Jurnal dari

Kegemukan

Berbasis Bukti
Jurnal dari ells Pelengkap dan
Oftalmologi
Hindawi Publishing Corporation
Obat alternatif
Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation
http://www.hindawi.com Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014

Parkinson
Penyakit

Komputasi dan
Metode Matematika
dalam Kedokteran
milik kami

Hindawi Publishing Corporation
http://www.hindawi.com
ogy
AIDS
Penelitian dan Pengobatan
Pengobatan Oksidatif dan
Umur Panjang Seluler
Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation Hindawi Publishing Corporation
Jilid 2014 Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014 http://www.hindawi.com Jilid 2014