Penentuan Aktivitas Lipase Serum SERUM DAN PLASMA DARAH a serum diperoleh dari darah tanpa penambahan antikoagulan sehingga fibrinogen (faktor pembeku) akan menggumpal, kemudian dilakukan pemisahan sehingga diperoleh serum (bagian atas) dan bagian bawah (fraksi sel dan fibrin) (Whole blood tanpa EDTA Pi disentrifugasi ® Atas = Serum, Bawah = Sel-sel darah yang menggumpal (blood clot)) (Whole blood dibiarkan & Ata: Serum, Bawah = Sel-sel darah) Plasma diperoleh dari darah yang ditambah antikoagulan sehingga fibrinogen tidak menggumpal. (Whole blood + EDTA @ disentrifugasi @ Atas = Plasma, Bawah: sel-sel darah)LIPASE * Lipase merupakan enzim yang dapat menghidrolisis trigliserida menjadi digliserida atau monogliserida dan asam lemak. Lipase pankreas memiliki pH optimum antara 8 sampai 9. * Aktivitas Lipase Serum Tingkat aktivitas lipase serum merupakan pencerminan aktivitas pankreas. UJI AKTIVITAS LIPASE SERUM lianas iia (Metode Cherry dan Crandall, 1932) Tujuan : Menentukan aktivitas lipase yang ada dalam serum Prinsip : Minyak olive (minyak zaitun) sebagai substrat diinkubasi dengan serum pada kondisi optimum. Asam-asam lemak yg dihasilkan pada proses hidrolisis ditentukan dengan titrasi menggunakan NaOH dan indikator PP. Titrasi diakhiri ketika wara larutan berubah menjadi pink yang menunjukkan semua asam lemak sudah berikatan dengan NaOH Interpretasi: aktivitas lipase normal lebih dari 0,018 UnitimI. Aktivitas lipase serum adalah refleksi aktivitas pankreas.Reaksi Bp owiversitas capa wan sm HMM We Gambar 1, Proses hidrolisis lemak oleh lipase e - Gambar 2. Proses titrasi dengan NaOH (Angka asam) &. UJI AKTIVITAS LIPASE SERUM (Metode Cherry dan Crandall) Reagen Kontrol | Enzim-Substrat Aquades 3mi 3m ‘Serum tml tml puter | Sm | Sm | foveor am Tmt Alkohol 95% ‘ami ml Indikator PP 2ietes 2ietes Tivast NaQH0,05N [NaOH 005Overview proses $B) universes oxvyan mac 1. Penambahan aquades dan serum 2. Satu tabung sebagai kontrol 4. Penambahan minyak ove Overview proses SB) uvvensias cana mana 5. Homogenisasi dengan vortex 6 Inkubasi di waterbath 7. Ditutup dengan kelereng 8. Penambahan alkohol 95% aOverview proses $B owas canan oan 98. Ditambah indikator PP 10 Tiasi dengan NaOH 0,05 N 11, Trasi diberhentikan 412, Perubahan wama hasil trasi & Bahan $B) nvesiras can mann Preparasi bahan meliputi 1. Aquades : Pelarut dan pengencer 2. Serum darah : Sumber enzim lipase 3. Larutan buffer : Mempertahankan pH 4, Emulsi minyak olive : Sebagai sumber substrat 5. Alkohol 95% : Melarutkan gliserol (hasil hidrolisis substrat) 6. Indikator PP : Indikator warna 7. NaQH 0,05 N : Sebagai titran basa (berikatan dengan asam lemak)PERHITUNGAN AKTIVITAS LIPASE SERUM“ Aktivitas lipase dalam wmol/ml serum = (mI NaOH sampel - ml NaOH kontrol) x 0,05 N x 1000 Aktivitas lipase dalam unit/ml serum pmol/ml waktu inkubasi (menit) + Waktu inkubas! =24 jam x 60 menit = 1440 menit * Unit aktivites enzim = benyaknya produk (mol) yang dihasitkan/menit, sotuan U/ml Thanks Tell Me if you have a question