Hplc

high performance liquid

chromatography

KELOMPOK 1
JUMRIANA EKA SYAFITRI. A
NURYANTI M. YUNUS
NURJANNAH
 PENGERTIAN
Kromatografi cair berperforma
tinggi (high performance liquid
chromatography, HPLC) merupakan
salah satu teknik kromatografi untuk
zat cair yang biasanya disertai
dengan tekanan tinggi.
Kromatografi adalah suatu teknik
pemisahan molekul berdasarkan
perbedaan pola pergerakan antara
fase gerak dan fase diam untuk
memisahkan komponen (berupa
molekul) yang berada pada
larutan. Molekul yang terlarut dalam
fase gerak, akan melewati kolom
yang merupakan fase diam.
 Kromatografi cair-padat (KCP).

Hal ini menjadi dasar ditemukannya Kemudian, pada akhir tahun 1930an dan
kromatografi yang canggih yaitu kromatografi SEJARAH pada awal tahun 1940an, cara ini mulai
cair kinerja tinggi (High Perfomance Liquid SINGKAT berkembang. Dasar kromatografi lapis tipis
Chromatografi). (KLT) diletakkan oleh Izmailov.

Schraiber pada tahun 1938 dan kemudian diperhalus

Pada tahun 1952, Martindan James oleh Stahl pada tahun 1958. Karya Martin dan Synge
mempublikasikan makalah pertamanya mengenai yang pada tahun 1041 membuahkan hadiah Nobel,
kromatografi gas. Antara tahun 1952 dan akhir tidak hanya merevolusikan kromatografi cair, tetapi
tahun 1960an kromatografi gas berkembang juga secara umum meletakkan landasan bagi
menjadi alat analisis yang canggih. perkembangan kromatografi gas dan kromatografi
kertas.
Prinsip dasar dari HPLC adalah pemisahan
analit-analit berdasarkan kepolarannya.
Adapun prinsip kerja dari alat HPLC adalah
ketika suatu sampel yang akan diuji
diinjeksikan ke dalam kolom maka sampel
tersebut kemudian akan terurai dan terpisah
menjadi senyawa-senyawa kimia (analit) sesuai
dengan perbedaan afinitasnya. Hasil
pemisahan tersebut kemudian akan dideteksi
oleh detector (spektrofotometer UV,
fluorometer atau indeks bias) pada panjang
gelombang tertentu, hasil yang muncul dari
detektor tersebut selanjutnya dicatat oleh
recorder yang biasanya dapat ditampilkan
menggunakan integrator atau menggunakan
personal computer (PC) yang terhubung online
dengan alat HPLC tersebut.
Pada prinsipnya kerja HPLC adalah sama yaitu
pemisahan analit-analit berdasarkan
kepolarannya, alatnya terdiri dari kolom
(sebagai fasa diam) dan larutan tertentu
sebagai fasa geraknya. Yang paling
membedakan HPLC dengan kromatografi
lainnya adalah pada HPLC digunakan tekanan
tinggi untuk mendorong fasa gerak. Campuran
analit akan terpisah berdasarkan kepolarannya
dan kecepatannya untuk sampai kedektetor
(waktu retensinya) akan berbeda, hal ini akan
teramati pada spectrum yang puncak-
puncaknya terpisah.
 Kromatografi
Adsorbsi

Kromatografi Kromatografi
Afinitas fase terikat

Jenis-
jenis
hplc

Kromatografi
Kromatografi
Eksklusi
penukar ion
Ukuran

Kromatografi
Pasangan ion
METODE PEMISAHAN UMUM DALAM HPLC
 HPLC dengan prinsip kromatografi banyak digunakan pada industri farmasi dan pestisida.

K Zat- zat dengan kepolaran berbeda yaitu antara sedikit polar sampai polar dapat
E dipisahkan dengan HPLC berdasarkan partisi cair-cair.
G
U Asam-asam nukleat dapat dipisahkan dengan kolom penukar ion yang
dikombinasikan dengan kolom butiran berlapis zat berpori.
N
A
A Morfin, heroin dan semacamnya telah dapat dipisahkan dengan rezin Zipax-SAX.
N
Dapat memisahkan vitamin- vitamin yang larut dalam air.
H
P
L Digunakan untuk menentukan berat molekul polimer dan masalah-masalah biokimia.
C
Dapat digunakan untuk memurnikan dan mengidentifikasi suatu senyawa.
 • Mampu memisahkan molekul-molekul dari suatu
campuran dengan daya memisah yang tinggi.
KELEBIHAN • Dapat dihindari terjadinya dekomposisi/ kerusakan
bahan analisis.
HPLC • Kolom dapat digunakan kembali.
• Teknik HPLC dapat dilakukan pada suhu kamar.

• Dapat digunakan bermacan-macam detektor dengan

kepekaan yang tinggi.
KELEBIHAN • Waktu analisa cukup singkat.
• HPLC dapat digunakan untuk isolasi zat yang tidak
HPLC mudah menguap dan zat yang tidak stabil.
• Dapat menganalisis sampel yang kecil kuantitasnya.
 Pada kolom dengan diameter
rata-rata partikel fase
diam dengan ukuran 5 dan 3
mikrometer sela-sela partikel
lebih mudah tertutup oleh
kotoran, jadi harus seringkali
dicuci dan kemurnian larutan
harus dijaga.
Sering ada larutan
Harga sebuah alat
standar yang
HPLC cukup mahal
tertinggal diinjektor.

KEKURANGAN
HPLC