VIRUS CAUSING TROPICAL

DISEASES

I N AYAT I H A B I B
 Tropical diseases

ARBOVIRUS
 Rubella
 Dengue
 Campak
 Morbili
 Mump’s
 etc

PARAMYXOVIRUS
 ARBOVIRUS

 Arbovirus adalah istilah yang menggambarkan beberapa

virus dari beberapa famili yang ditransmisi melalui
arthropoda
 Penyakit-penyakit yang disebabkan adalah encephalitis,
febrile diseases (kadang-kadang diikuti dengan gejala
rash) dan demam berdarah ( hemorrhagic fevers)
 Zoonotic viruses

 Zoonotic viruses adalah virus-virus yang dapat

ditransmisikan dari hewan (arthropods, vertebrates) ke
manusia

 Beberapaditransmisikan oleh arthopoda penghisap

darah , vektor arthoropoda (arthropod borne =
arboviruses).

 Yang lainnya mungkin ditransmisikan dengan cara

inhalasi, kontak konjunctiva dengan sekret yang infektif
atau dengan kontak langsung dengan hewan ( misalnya
rabies)
 ARTHROPOD VECTORS

 Virus bereplikasi pada vektor tetapi tidak menginfeksi

vektor

 Pada mosquito-borne diseases, virus menimbulkan

infeksi persistent pada kelenjar saliva dan terdapat
cukup virus dalam saliva sehingga dapat menginfeksi
hospes lainnya selama menghisap darah ( feeding )
 LIFE CYCLES OF ARBOVIRUSES

Beberapa tipe siklus hidup ARBOVIRUS :

1. Sylvatic cycle ( the jungle cycle):

Siklus terjadi antara arthropoda dan hospes mammalia dimana
manusia biasanya sebagai dead-end host yang terinfeksi melalui
arthropoda

2. Urban cycle.
Siklus terjadi antara manusia dengan species arthropoda

Pada Yellow fever dan Dengue fever , keduanya terdapat urban cycle
juga sylvatic/jungle cycle
 DEAD END HOSTS ??

 Apabila virus ditransmisikan pada hewan selain hospes

normalnya, maka viremia bersifat rendah atau transient dan
hewan yang terinfeksi, sedikit kemampuanya mengeluarkan
virus dalam jumlah yang cukup ke arthropod untuk
menimbulkan infeksi

 Dalam kasus ini, hewan tersebut dinamakan sebagai dead-end

host (buntu)

 Manusia sebagai dead-end host pada mayoritas kasus penyakit

infeksi disebabkan Arbovirus (perkecualian yellow fever and
dengue fever).
LIFE CYCLES OF ARBOVIRUSES
LIFE CYCLES OF ARBOVIRUSES
Transmission cycles of yellow fever and dengue viruses. These viruses have enzootic maintenance cycles
involving Aedes vectors and nonhuman primates. Dengue viruses are transmitted principally between
humans and Aedes aegypti that breed in domestic water containers
 ARBO-VIRUS

Arbovirus are extremly numerous and include many

unrelated viruses belonging to different virus groups :

1. Alphavirus (formerly group A arbovirus)

2. Flavivirus (formerly group B arbovirus)
3. Bunyavirus
 ARBOVIRUS DISEASE

Penyakit yang disebabkan oleh Arbovirus adalah :

1. encephalitis
2. febrile diseases (kadang berhubungan dengan rash)
3. hemorrhagic fevers

Terdapat beberapa gejala yang overlap antara beberapa variasi tipe

virus , contoh : Virus yang bukan tergolong virus encephalitis
mungkin menyebabkan gejala pada CNS .
 Properties of Most Arbovirus :

ALPHAVIRUSES

 26 recognized viruses
 RNA viruses-single stranded,+ sens RNA
 Enveloped particles, roughly spherical, 70 nm
 Haemaglutinate avian red cells
 Grow in cell culture: pathogenic for suckling mice
(mencit yang menyusu )
 Properties of Most Arbovirus :

FLAVIVIRUS

 67 viruses
 RNA viruses-single strand ,+ sens RNA
 Envelope particles- diameter 40 – 50 nm
 Haemaglutinate avian red cells
 Grow in cell culture: pathogenic for suckling mice
 Properties of Most Arbovirus :

BUNYAVIRUS

 A large family containing nearly 300 viruses

 RNA viruses-single strand , - sens RNA in three segments
 Envelope particles- approximately 90 – 100 nm diameter
 Haemaglutinate avian red cells
 Grow in cell culture: generally pathogenic for suckling mice
or other rodents
+ sense virus : transmisible, the function of all the
molecule act as m RNA in infected cells

- sense virus : not transmisible, virion with RNA

polimerase, transcripe molc RNA genom to some
molc complementary RNA in the cells, act as
mRNA
 DNA Positif Sense

 Positif – sense DNA virus merupakan untaian

yang mengandung sequen basa yang sama
seperti mRNA, dimana mRNA dari beberapa untai
ganda DNA virus dapat langsung di terjemahkan
atau di transcribe baik dari untaian atau pada daerah
trankripsi yang mungkin dapat terjadi tumpang
tindih (overlap).
 DNA Negatif Sense

 Negatif – sense DNA (antisense) adalah

untai tunggal DNA yang dapat
berhibiridisasi dengan untai DNA yang
berfungsi sebagai template dalam proses
transkripsi. Negatif – sense DNA ini tidak dapat
diterjemahkan menjadi protein langsung.
Sebaliknya, terlebih dahulu harus ditranskripsi
menjadi positif-sense DNA yang bertindak seperti
mRNA.
 ARBOVIRUSES
ASSOCIATED WITH FEVER OR HEMORRHAGIC
FEVER
 Colorado tick fever (Reovirus family)

 Terjadi di Rocky Mountain

States.
 Penyakit ringan dengan gejala
demam, headache, myalgia dan
sering rash.
 Virus ditransmisikan oleh ticks.
 Differential Diagnosis : Rocky
Mountain spotted fever
(rickettsial disease) yang
memiliki kesamaan tanda-
tanda awal dan sebaiknya
segera diberikan terapi
 Reoviridae

 double-stranded RNA viruses

 multisegmented genomes,
icosahedral
 80-nm particles , do not have
a lipid envelope (insensitive to
detergents)
YELLOW FEVER VIRUS (Flavivirus family)

Yellow fever (hemorrhagic fever)

 Hanya ditemukan Afrika and South Amerika Selatan .

 Di Amerika Selatan bersifat sporadik dan terjadi di area hutan
 Di Afrika, yellow fever sering terjadi pada saat musim hujan di wilayah
barat dan wilayah pusat benua
 Yellow fever (hemorrhagic fever) ditransmisikan oleh nyamuk
 Hospes alami virus adalah kera dan manusia
 Memiliki siklus hidup ; urban and a jungle cycle.
 Infeksi menyebabkan penyakit sistemik berat , hemorrhages, degenerasi
pada liver, ginjal dan jantung.
 Case-fatality rate : 50%.
 Flaviviridae

 positive-sense
 single-stranded RNA viruses that form particles
of 40 to 50 nm in the endoplasmic reticulum
DENGUE VIRUS (Flavivirus family)

DENGUE FEVER
DENGUE HAEMORHAGIC FEVER
 DF dan DHF
Dengue fever (DF)
 Infeksi oleh virus Dengue,
hospes alami manusia dan
kera. Nyamuk sebagai vektor.
 Virus Dengue memiliki siklus
hidup urban dan jungle cycle.
 Terdapat empat serotypes
(1,2,3,4).
 Salah satu penyakit yang terjadi
di daerah tropis dan seluruh
dunia (50-100 million cases per
year).
Dengue Hemorrhagic
Fever (DHF)
 komplikasi yang fatal
(kematian) infeksi virus dengue
 DHF  konsekuensi
imunopatologi adanya infeksi
pada orang yang sebelumnya
telah mengembangkan suatu
imunitas terhadap satu serotipe
virus Dengue (mekanisme
belum sepenuhnya diketahui)
 DENGUE FEVER

 Gejala klinis 4–7 hari (range of 3–14 days) setelah gigitan nyamuk
terinfeksi
 Onset demam terjadi segera atau gejala prodromal : malaise, chills,
and headache. Rasa nyeri pada punggung, sendi, otot dan bola mata
 Viremia terjadi pada saat demam dan persisten selama 3–5 hari
 Suhu tubuh kembali normal setelah 5–6 hari atau hari ke-3 dan
kemudian naik sekitar 5–8 hari ("saddleback" form).
 Rash muncul pada hari ke-3 atau ke-4 dan berlangsung selama 1 – 5
hari.
 Limfonodi membesar
 self-limited disease atau fase Convalescence memerlukan beberapa
minggu
 Komplikasi dan kematian jarang
 Dengue hemorrhagic fever
 A severe syndrome terjadi pada individu terutama anak-anak dengan passively
acquired (as maternal antibody) or preexisting nonneutralizing heterologous
dengue antibody berkaitan dengan infeksi sebelumnya dengan virus Dengue yang
berbeda serotipe.
 Pada gejala awal seperti dengue normal, keadaan pasien semakin memburuk
 Dengue shock syndrome adalah penyakit dengan keadaan yang lebih
berat dengan karakteristik adanya shock and hemokonsentrasi
 Terdapat bukti bahwa adanya infeksi sekunder oleh virus Dengue tipe 2 setelah
infeksi primer virus Dengue 1 merupakan faktor resiko utama terjadinya infeksi
yang berat.
 Pathogenesis severe syndrome melibatkan adanya preexisting dengue antibody.
 Virus-antibody complexes dibentuk selama beberapa hari pada saat infeksi
sekunder dan nonneutralizing enhancing antibodies memicu terjadinya infeksi
pada banyak sel mononuklear diikuti dengan pelepasan sitokin mediator
vasoaktif, pro-koagulan yang mengakibatkan disseminated intravascular
coagulation ( DIC) yang terjadi pada hemorrhagic fever syndrome.
 Dengue

Dengue is a serious viral disease

transmitted by the bite of the
mosquito, Aedes aegypti.

•Arbovirus
Flaviviridae fam, flavivirus genus
•single-stranded RNA
•DEN-1, 2, 3, 4
•Genetic var within serotypes  Female
•Each serotype provides  A daytime feeder
specific lifetime immunity  Human habitation
short term cross immunity  Lays eggs & produces
larvae preferentially
in artificial containers
 Hypothesis on Pathogenesis of DHF

1. Secondary heterologous infection

 Person who have experienced a dengue infection develop

serum antibodies that can neutralize the dengue virus of
that same (homologous) serotype
 In a subsequent infection, the pre-existing heterologous
antibodies form complexes with the new infecting virus
serotype, but do not neutralize the new virus
 1. Secondary heterologous infection

 Seseorang dengan riwayat terinfeksi virus dengue

mengembangkan antibodi serum yang dapat menetralisasi
virus dengue dengan serotipe yang sama (homolog)

 Pada infeksi berikutnya, antibodi heterolog yang sudah ada

sebelumnya membentuk kompleks dengan serotipe virus
dengue baru yang menginfeksi, tetapi tidak menetralisasi virus
dengue baru yang menginfeksi
 2. Antibody dependent enhancement (ADE)

 Antibody dependent enhancement (ADE) is the process in

which certain strain of dengue virus, complexed with non
neutralizing antibodies, can enter a greater proportion of
cells of the mononuclear lineage, thus increasing virus
production
 Infected monocytes release vasoactive mediators, resulting
in increased vasculer permeability and hemorhagic
manifestation that characterize DHF and DSS
2. Antibody dependent enhancement (ADE)

 Antibody dependent enhancement (ADE) adalah proses

dimana strain virus dengue tertentu membentuk kompleks
dengan non neutralizing antibodies, dan bisa masuk ke sel-sel
mononuklear dalam jumlah yang lebih banyak, sehingga
produksi virus bertambah.
 Sel monocytes terinfeksi akan melepaskan vasoactive
mediators, berakibat bertambahnya vasculer permeability
and hemorhagic manifestation, yang dikenal sebagai DHF
and DSS
 Pathogenesis of DHF

 Melibatkan terjadinya immune enhancement dimana terdapat peningkatan

uptake virus coated with non-neutralizing antibody ke dalam makrofag
melalui Fc receptor.
 Virus coated with non-neutralizing antibody ada pada saat terjadi infeksi virus
dengue yang awal dengan serotipe virus yang berbeda
 Virus bereplikasi dalam makrofag dan terjadi peningkatan virus load.
Makrofag menjadi teraktivasi dan melepaskan inflammatory cytokines.
 Immune enhancement oleh non-neutralizing antibody merupakan hal yang
mungkin menyulitkan untuk pengembangan vaksin
 Infeksi Dengue lebih berat pada anak-anak dan adanya antibodi ibu pada anak
merupakan DHF sebagai infeksi pertama virus Dengue
 Terdapat empat serotipe virus Dengue, banyak serotipe tersebar di Asia, Afrika
dan Amerika.
 Pada DHF, meningkatnya vascular permeability sebagai problem utama.
 IMUNITAS

 4 serotipe Dengue virus dapat dibedakan berdasarkan

pemeriksaan molekuler dan Neutralization test ( Nt Test)

 Infeksi memberikan perlindungan sepanjang hidup

terhadap serotipe tersebut, tetapi proteksi silang terhadap
antar serotipe hanya berlangsung pendek/sebentar.

 Reinfeksi dengan virus serotipe berbeda setelah infeksi

primer lebih memungkinkan berakibat penyakit yang berat
(dengue hemorrhagic fever).
 DENGUE VIRUS

DEN-1
 Kimura & Hotta, 1943
 Sabin & schlesinger, 1945
 (Haw-Den-1) as a prototype
DEN-2
 Isolates from New Guinea
 New Guinea C (NG”C”-DEN-2) as prototype
DEN-3
 From patient with hemorrhagic disease in Manila, 1956
DEN-4
 From patient with hemorrhagic disease in Manila, 1956
Genome organization and virion structure

 Flaviviruses
 Sperical particle
 Isometric nucleocapsid core (30 nm in diameter)
 Lipid envelope
 Single strand (+) sense RNA
 11 kb in length
 Genome has cap and lack of 3’ Poly A
Genome organization
virion structure
 Genome organization and virion structure

C prM E NS1 2A 2B NS3 4A 4B NS5 3’

 Flaviviruses
 Spherical particle
 Isometric nucleocapsid core (30 nm in diameter)
 Lipid envelope
 Single strand (+) sense RNA
 11 kb in length
 Genome has cap and lack of 3’ Poly A
 CAPSID & MEMBRAN PROTEIN

CAPSID
 112-127 aa
 purified C protein tidak menginduksi viral
neutralizing antibody

MEMBRAN
 prM contained in intracelullar immature virions
 M protein contained in extracellular mature virions
 ENVELOPE PROTEIN

 494-501 asam amino

 Receptor binding
 hemagglutionation of erythrocytes
 induction of major neutralizing antibody
 mediation of virus-specific membrane fusion in acid pH
endosomes
 virus assembly
NS-1 PROTEIN
• Soluble complement-fixing antigen.
• Secreted soluble form can elicit antibodies with complement-fixing
activities.
• Target for immune response (expressed in surface of infected cells)

NS-3 PROTEIN
• Help in viral replication
• Serine protease
• helicase
 Mature Dengue-2 virus particles
replicating in five day old tissue culture cells.
The original magnification is 123,000 times. CDC
 VIREMIA

 Dengue Virus dapat dideteksi setelah lebih 5 hari munculnya

gejala
 Isolasi Dengue Virus adalah paling penting untuk menentukan
diagnosis
 Semua tehnik uji serologi tidak bersifat spesifik
 Specific monoclonal antibodies merupakan uji yang tepat dan
dapat dipercaya
 Viral genetic analysis
 Pemeriksaan Laboratorium penunjang

 Isolasi virus, deteksi antigen/PCR dan uji serologis (diperlukan

pemahaman perjalanan penyakit)
 Isolasi virus terbaik saat viremia (3-5 hari)
 IgM terdeteksi hari ke 5, meningkat sampai minggu III,
menghilang setelah 60-90 hari
 IgG pada infeksi primer mulai terdeteksi pada hari 14, pada
infeksi sekunder mulai hari ke 2
 Uji HI, Dengue Blot (Single/Rapid/Duo)
Isolasi Virus pada cell line
PCR
 LABORATORY DIAGNOSIS OF DENGUE VIRUS

 Detection of antibody (IgG and IgM)

 Isolation, detection and identification of virus

Problems:
 Co-sirculation of Dengue Virus with other flaviviruses
 Serologic test available are using antibodies that may cross
reaction with other flaviviruses
 Some reagents are not commercially available.
 Immune response detection
Imunoglobulin M
 Ig M is for acute phase
 May be detectable form 1-6 day
after onset
 Persist for max 60-90 days
 Ig M alone is not definitive (
not type specific, persist up to
90 days)
Imunoglobulin G
 May be detectable after 5th day
after onset
 Titer continue to rise (weeks)
and persist for many years or
life time.
 Anamnestic IgG response (in
secondary infection)
IMMUNE RESPONS TO DENGUE INFECTION
 Response to primary infection
NS1 antigens
 Diproduksi mulai hari 1 setelah
onset demam dan naik sampai hari
ke-9
 Tidak dapat terdeteksi apabila anti-
NS1 IgG antibodies diproduksi
 Sirkulasi pada kadar yang tinggi
pada serum selama fase klinik dan
pada beberapa hari awal fase
penyembuhan
IgM antibodies
 Diproduksi sekitar 5 hari setelah
gejala muncul
 Meningkat 1 -3 minggu dan
mungkin menetap sampai 60 hari
 Mungkin dapat terdeteksi sampai 6
bulan
IgG antibodies
• Muncul sekitar 14 hari setelah
munculnya gejala dan menetap
sepanjang hidup
 Response to secondary infection

IgM antibodies IgG antibodies

 Tidak diproduksi sampai 20 hari
setelah munculnya infeksi
 Diproduksi pada kadar yang
rendah atau tidak dapat terdeteksi
atau untuk periode yang lebih
pendek dibandingkan pada infeksi
primer
 Meningkat secara cepat 1 -2 hari
setelah munculnya gejala
 Kadar yang dicapai di atas terdapat
pada infeksi primer maupun infeksi
yang lalu ( past infection)
 Menetap pada kadar yang tinggi
selama 30-40 days, kemudian akan
menurun kadarnya seperti pada
infeksi primer atau infeksi yang
lalu ( past infection)

Sekitar 20-30% pasien dengan infeksi sekunder dengue tidak memproduksi anti-
dengue IgM antibodies pada kadar yang dapat terdeteksi sampai hari ke 10 dan
harus didiagnosis sebagai the elevation of dengue specific IgG antibodies
 Interpretation of Result

 Primary Dengue
is characterised by the presence of detectable IgM antibodies 3 -5 days
after the onset of infection

 Secondary Dengue
is characterised by elevation of spesific IgG antibodies 1-2 days after
the onset of infection, often accompanied by an elevation of IgM
 Detection of IgM antibody

 Fluorescent antibody (FA) test

 ELISA
 Dot blot test
 Detection of IgG antibody

 Hemagglutionation inhibition test

 plaque reduction neutralization test
 Fluorescent antibody test
 ELISA
 Dot blot tests
 Complement fixation test
 Principle of Dengue Rapid Test Cassette (Whole
Blood/Serum/Plasma)

 Dengue Rapid Test Cassette (Whole

Blood/Serum/Plasma) is a qualitative membrane-based
immunoassay for the detection of Dengue antibodies in
whole blood, serum, or plasma.
 This test consist of two components, an IgG component
and IgM component.
 Test Procedure

The Result should be read at 10 minutes. Do not

interpret the result after 20 minutes
 Interpretation Result

• If the specimen contain Dengue IgG antibodies, a colored line

will appear in IgG test line region.
• If the specimen Dengue IgM antibodies, a colored line will
appear in IgM test line region.
• If the specimen does not contain Dengue antibodies, no
colored line will appear in either of the test line regions,
indicating a negative result.
• To serve as a procedural control, a colored line will always appear
in the control line region, indicating that the proper volume of
specimen has been added and membrane wicking has occurred.
Isolation, Detection and Identification of Virus

 Mouse inoculation
 Mammalian cell culture (BHK-21, LLC- MK2, Vero)
 Mosquito cell culture
 Mosquito inoculation
 PCR
 Hybridization probes
 Immunohistochemistry
AN OUTBREAK OF DENGUE VIRUS SEROTYPE 1 INFECTION IN CIXI, NINGBO,
PEOPLE’S REPUBLIC OF CHINA, 2004, ASSOCIATED WITH A TRAVELER FROM
THAILAND AND HIGH DENSITY OF AEDES ALBOPICTUS
Am J Trop Med Hyg June 2007 vol. 76 no. 6 1182-1188
 Figure

 Dengue virus isolated from two of five cases + for dengue viral RNA.
 A, C6/36 cell monolayer inoculated with control serum
 B, Cytopathic effect (CPE) in monolayer cultured with patient serum at second passage
 C, RNA isolated from supernatants of cell culture with CPE by reverse transcription–
polymerase chain reaction. The DNA product (511-basepair [bp] fragment) was obtained
after amplification with consensus primers D1 and D2.
 Lane 1, parental C6/36 control;
 Lane 2, DNA marker;
 Lanes 3 and 4, supernatants from cells cultured with sera of two patients.
 D, DNA fragment (482 bp) for dengue 1 virus amplified with the serotype-specific
primer pairs.
 Lanes 1 and 2, supernatants of culture with sera of two patients;
 lane 3, DNA marker.
ARBOVIRUS-ASSOCIATED ENCEPHALITIS
ARBOVIRUS-ASSOCIATED ENCEPHALITIS