DISOSIASI JARINGAN, PENENTUAN KEPADATAN DAN VIABILITAS

SEL

Oleh :
Nama
NIM
Rombongan
Kelompok

:
:
:
:

Bagus Hendrawan
B1J013184
I
4

LAPORAN PRAKTIKUM KULTUR JARINGAN HEWAN

KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN KEBUDAYAAN

UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN
FAKULTAS BIOLOGI
PURWOKERTO
2015

II. MATERI DAN METODE

A. Metode
Metode yang dilakukan dalam praktikum ini adalah:
1. Ikan dibedah, dilumpuhkan dengan merusak syarafnya menggunakan
gunting. Tangan kemudian dicuci dengan sabun hingga bersih.
2. Bagian abdomen dibersihkan dengan tissue yang sudah dibasahi alkohol
70%.
3. Dinding abdomen dibedah dengan alat bedah steril, hepar atau
hepatopankreas ikan kemudian diangkat dan diukur masanya dengan pocket
scale. Hepatopankreas ikan yang telah ditimbang diletakkan dalam petridish
steril, kemudian ditambahkan handling medium agar hepar tidak alami
dehidrasi.
4. Hepar kemudian dicincang halus dan disentrifuse dengan kecepatan 2000
rpm selama 3 menit.
5. Tabung berisi jaringan dalam tripsin dimasukkan dalam waterbash dengan
temperatur 37oC. Tabung diagitasi setiap 5 menit agar suspensi homogen.
6. Setelah diangkat dari waterbath tabung kemudian ditambahkan disociating
medium dan kemudian disentrifugasi dengan kecepatan 2000 rpm selama 3
menit.
7. Setelah disentrifugasi supernatan dalam tabung dibuang, kemudian pellet
dalam tabung ditambahkan washing medium dan disentrifugasi dengan
kecepatan 2000 rpm selama 3 menit. Tahap ini diulangi dua kali agar sisa
tripsin hilang.
8. Sebagian kecil suspensi (9 bagian) diambil dan supernatan dibuang.
Suspensi yang diambil kemudian ditambahkan pewarna trypan blue (1
bagian) dan dihomogenkan.
9. Suspensi yang telah diwarnai diletakkan pada haemocytometer dan diamati
di mikroskop. Proporsi sel yang hidup dihitung dengan haemocytometer
untuk ditentukan viabilitas selnya. Sel hidup tidak menyerap warna biru,
sedangkan sel mati akan menyerap warna biru.
10. Sisa suspensi sel dalam tabung steril dilabel dengan nama spesimen, nama

organ/sel, viabilitas, kepadatan, tanggal penyimpanan, dan nama kelompok.

Sel hasil disosiasi kemudian disimpan dalam refrigerator.