LABORATORIUM BIOPROSES

SEMESTER GANJIL TAHUN AJARAN 2013/2014

MODUL

: Fermentasi Etanol (Anaerobik)

PEMBIMBING

: Dr. Ir. Bintang IM, MT.

Tanggal Praktikum

: 29 Oktober

2013
Tanggal Penyerahan : 21
Oleh :
Kelompok

: VII

Nama

Kelas

: 1. Meylin

121411018

2. Neng Sri Widianti

121411020

3. Rima Puspitasari

121411026

: 2A

PROGRAM STUDI DIPLOMA III TEKNIK KIMIA

JURUSAN TEKNIK KIMIA
POLITEKNIK NEGERI BANDUNG
2013

PROSES FERMENTASI ETANOL ANAEROBIK

SECARA BATCH
I. Tujuan Percobaan
1. Memahami proses fermentasi etanol secara anaerobic yang dijalankan secara batch.
2. Menguasai teknik pembuatan inokulum dan persiapan untuk proses fermentasi
anaerobic.
3. Menentukan kurva kalibrasi untuk konsentrasi etanol dan konsentrasi sukrosa
terhadap indeks bias.
4. Menentukan kurva perubahan konsentrasi sel, konsentrasi etanol,dan konsentrasi
substrat sisa terhadap waktu.
5. Menentukan konstanta Michaelles Menten untuk prosesfermentasi etanol.
II. Landasan Teori
Pembuatan etanol dapat dilakukan dengan hidrasi etilen dan fermentasi. Metode
hidrasi etilen menggunakan bahan baku minyak bumi sementara bahan baku untuk proses
fermentasi berupa bahan mentah, seperti mono atau disakarida (gula, tebu, tetes tebu),
bahan berpati (padi,umbi, jagung,dll), dan bahan selusola (kayu, limbah pertanian).
Ragi yang dapat digunakan dalam proses fermentasi etanol adalah Saccharomyces
cerevisiae, Saccharomyces uvarum, Candida utillis, Saccharomyces anamensis,
Schizosccharomyces Pombe. Proses fermentasi dapat dijalankan secara batch maupun
kontinyu.
Saccharomyce cerevisiae merupakan salah satu jenis mikroba fakultatif yaitu, proses
fermentasinya dapat berlangsung pada kondisi aerob dan anaerob. Pada kondisi aerob,
proses fermentasi akan meningkatkan biomassa sel.
Menurut Pasteur oksigen dapat menghambat jalur fermentasi didalam sel khamir
sehingga sumber sel yang ada akan digunakan melalui jalur respirasi. Fenomena ini
disebut Pasteur effect. Berdasarkan fenomena ini, maka produksi etanol oleh Khamir
terjadi pada kondisi anaerob.
Reaksi dalam fermentasi berbeda-beda tergantung pada jenis gula yang digunakan
dan produk yang dihasilkan. Secara singkat, glukosa (C 6H12O6) yang merupakan gula
paling sederhana, melalui fermentasi akan menghasilkan etanol (2C2H5OH).
Persamaan reaksi kimia :
C6H12O6
2C2H5OH + 2CO2 + 2ATP (energy yang dilepaskan: 118 KJ/mol).
Tahapan Fermentasi Etanol

Secara
setiap

teoritik

satu molekul glukosa

menghasilkan 2 mol etanol dan 2 mol karbon dioksida dan melepaskan energy. Nutrient
diperlukan dalam pertumbuhan ragi, setiap satu gram glukosa menghasilkan 0,51 gram
etanol. Hasil samping yang terbentuk antara lain : asaetaldehid (sebagian kecil eter) dan
minyak fusel yang merupakan campuran senyawa alcohol tingkat tinggi dengan
komposisi tergantung bahan baku. Laju produksi asetaldehid sekitar satu liter setiap
1000L etanol dan laju produksi minyak fusel 5L/1000L alcohol.
Fermentasi secara batch membutuhkan waktu kurang lebih 50jam, pH awal 4,5,
dan suhu 20-300C. untuk menghasilkan Yield etanol 90% dari nilai gula teoritis. Hasil
akhir etanol sekitar 10-16% v/v.
Kriteria proses fermentasi yang baik : perolehan alcohol tinggi, laju fermentasi
tinggi, tahan terhadap konsentrasi gula, dan etanol yang tinggi, tahan terhadap suhu yang
tinggi.
Laju pengurangan konsentrasi substrat mengikuti persamaan Michaellis Menten :
Cs
V = Vmaks x Ks+ Cs
dCs
V= - dt
dCp/dt = dx/dt
dx/dt= Vx
Kondisi operasi yang berpengaruh : konsentrasi glukosa, konsentrasi etanol, pH,
temperature, jenis mikroba yang digunakan. Ragi dapat tahan sampai konsentrasi glukosa
22% b/v. Pertumbuhan sel ragi seluruhnya terhenti pada konsentrasi etanol diatas 110 g/L,
temperature pertumbuhan sel ragi adalah 28-38 0C sedangkan temperature optimum
pembentukan produk adalah 380C pada konsentrasi etanol rendah.
III.Percobaan
III.1
Alat dan Bahan
Bahan yang digunakan :
Biakan saccharomyces cerevisiae
Alcohol

Media aktivasi (100 ml)

Biakan 1 tabung
Sukrosa 6 gram
(NH4)2SO4 0,2 gram
KH2PO4 0,5 gram
Diinkubasi anaerob selama 1 hari, T = 300C
Media fermentasi ( 1L)
: Sukrosa 150 gram
MgSO4.7H2O 0,4 gram
(NH4)2SO4 2 gram
KH2PO4 2gram
Schout emulsion 10 ml
Aquadest 1 L
Diinkubasi selama 15hari T=370C
Alat yang digunakan :
Fermentor (Erlenmeyer)
Beaker glass water bath
Hot plate
Tabung reaksi steril
Pipet tetes
Refraktometer
III.2

Prosedur Kerja
a. Pembuatan kurva kalibrasi

Siapkan larutan sukrosa 10% b/v,

ditambahkan etanol sehingga
diperoleh larutan dengan variasi
konsentrasi etanol 1%, 2%, 3%,
4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%.

Ukur index bias masing-masing

variasi konsentrasi .

Siapkan larutan etanol 5% v/v,

tambahkan larutan gula sehingga
diperoleh larutan dengan variasi
konsentrasi gula 3%, 5%, 7%, 9%,
11%, 13%, dan 15%.

Ukur index bias masing-masing

variasi konsentrasi.

b. Percobaan fermentasi anaerobic secara batch

Campurkan semua bahan dalam 1000

mL aquadest

Pisahkan 10 ml dan 90mL untuk media

pertumbuhan dan 900 ml untuk media
produksi
Lakukan sterilisasi pada semua media
tersebut. Media yang telah disterilisasi
didinginkan sampai suhu ruang.

Masukkan kultur murni jamur kedalam

media 10mL, lalu inkubasi dalam
incubator shaker 3 jam.

Setelah 3 jam, masukkan ke dalam media

pertumbuhan yang 90 mL.

Inkubasi dalam incubator shaker 24 jam

Masukkan ke dalam erlenmeyer berisi 900 ml

media produksi
Purging fermentor dengan gas N2 untuk mengusir
oksigen yang berada didalam fermentor (kondisi

Media produksi dalam fermentor diinkubasi

dengan menggunakan agitasi yang rendah.

Lakukan sampling dengan mengambil 5mL

media produksi kemudian ukur skala brix nya
untuk mengetahui konsentrasi glukosa sisa dan
untuk konsentrasi etanol (t = 0).

Pengambilan sample dilakukan setiap 3 jam

sekali.

IV. Data Pengamatan

Kurva Kalibrasi Glukosa
Konsentr
asi
Glukosa
0%
3%
5%
7%
9%
11%
13%
15%

Skala
Brix

Indeks
Bias

1,2

0,3424

3,8
4,8
6,6
8,4
9,8
10
11,4

0,3476
0,3496
0,3532
0,3568
0,3596
0,3600
0,3628

Kurva Pembentukkan Etanol

Waktu (Jam)
0,00

Skala Brix
0

0,25
1,25
2,25
27,25
48,00
53,25
77,25

0
0
0
0
0
0
0

Nilai Brix Etanol terhadap Waktu

1
0.9
0.8
0.7
0.6
brix etanol vs waktu

Nilai Brix 0.5

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

10 20 30 40 50 60 70 80 90
Waktu (jam)

Kurva Pengurangan Konsentrasi Glukosa

Waktu (Jam)

Skala Brix

Indeks Bias

0,00

13,2

0,3664

Konsentrasi
Glukosa
17,21 %

0,25
1,25
2,25
27,25
48,00

13,1
13,6
13,4
12,6
12,8

0,3662
0,3672
0,3668
0,3652
0,3656

17,06 %
17,79 %
17,50 %
16,32 %
16,62 %

53,25
12,2
0,3644
15,74 %
77,25
12,0
0,3640
15,44 %
Persamaan Kurva Kalibrasi Indeks Bias terhadap konsentrasi Glukosa :
y = 0,136x + 0,343 (y, indeks bias. x, konsentrasi glukosa)
Indeks Bias, y = 0,3664
0,3664 = 0,136x + 0,343
x = 0,1721 = 17,21 %
Indeks Bias, y = 0,3662
0,3662 = 0,136x + 0,343
x = 0,1706 = 17,06 %
Indeks Bias, y = 0,3672
0,3672 = 0,136x + 0,343
x = 0,1779 = 17,79 %
Indeks Bias, y = 0,3668
0,3668 = 0,136x + 0,343
x = 0,175 = 17,50 %
Indeks Bias, y = 0,3652
0,3652 = 0,136x + 0,343
x = 0,1632 = 16,32 %
Indeks Bias, y = 0,3656
0,3656 = 0,136x + 0,343
x = 0,1662 = 16,62 %
Indeks Bias, y = 0,3644
0,3644 = 0,136x + 0,343
x = 0,1574 = 15,74 %
Indeks Bias, y = 0,3640
0,3640 = 0,136x + 0,343

x = 0,1544 = 15,44 %

Pengurangan Konsentrasi Glukosa terhadap Waktu

18.00%
17.50%
17.00%
16.50%
Konsentrasi Glukosa

pengurangan konsentrasi
vs waktu

16.00%
15.50%
15.00%
14.50%
14.00%
0

20

60
40

100
80

Waktu (jam)

V. Pembahasan
VI. Kesimpulan
VII. Daftar Pustaka