Hampir semua obat-obatan untuk otak saat dalam uji klinis lipid molekul kecil yang larut

dengan MW <400 Da. Obat ini sesuai dengan kriteria ganda untuk lipid-dimediasi difusi
bebas melintasi BBB, yaitu (1) MW <400 threshold Da dan (2) kelarutan lipid yang tinggi,
yang setara dengan ikatan hidrogen rendah. Dalam prakteknya, sangat sedikit calon obat
dengan molekul kecil untuk otak sesuai kriteria ganda, dan tidak melewati BBB. 46.000 obat
dalam database Komprehensif Obat Kimia, hanya 6% yang aktif di otak. Dalam studi lain,
hanya 12% dari semua obat yang CNS aktif, tetapi jika gangguan afektif dikecualikan, hanya
1% dari semua obat aktif dalam obat aktif CNS. CNS membentuk ikatan hidrogen 7 dengan
air. Pelarut pertimbangan ini menunjukkan bahwa transportasi BBB dari calon obat molekul
kecil dapat diprediksi berdasarkan struktur kimia obat, yang memungkinkan untuk
perhitungan (1) BM dan (2) ikatan hidrogen.

Berat molekul Threshold

Permeasi molekul obat kecil melalui membran lipid menunjukkan ambang MW, yang tidak
diprediksi oleh aturan klasik Overton untuk difusi zat terlarut dalam water. Tidak seperti
difusi melalui air, zat terlarut difusi melalui membran lipid tergantung pada volume molekul
zat terlarut, yang umumnya sebanding dengan MW zat terlarut atau luas permukaan zat
terlarut. Artinya, ketika ukuran obat melebihi ambang batas volume, maka permeasi membran
kurang dari yang diperkirakan atas dasar kelarutan lipid obat. Darah-otak penghalang
permeasi berkurang 100 kali lipat ketika ukuran obat meningkat dari MW dari 300 Da, yang
sesuai dengan luas permukaan 50 angstrom persegi, ke MW dari 450 Da, yang sesuai dengan
luas permukaan 100 angstroms.

Ikatan hidrogen

Kelarutan lipid pada obat dapat ditentukan dengan pengukuran 1-oktanol dengn koefisien
partisi lipid. Namun, parameter penting, yang dapat ditentukan hanya dari pemeriksaan
struktur obat, adalah ikatan hidrogen dari obat dan pelarut air, yang merupakan 55 molar.
Stein mengamati bahwa ada penurunan 10 kali lipat dalam permeasi membran dengan
masing-masing sepasang ikatan hidrogen pada zat terlarut, dan aturan ini umumnya telah
dikonfirmasi dalam studi in vivo BBB transportasi hormon steroid dan oligopeptida.
Pertimbangan aturan untuk ikatan hidrogen menunjukkan bahwa dipeptida, Glycylglycine,
yang membentuk ikatan delapan hidrogen dengan air, akan memiliki BBB permeasi yang
sangat rendah. Sebaliknya, jika Glycylglycine itu disiklisasi, jumlah ikatan hidrogen dari
Glycylglycine siklik akan dikurangi menjadi 4, dan transportasi BBB akan diprediksi
meningkat 100 kali lipat untuk bentuk siklik dari dipeptide Glycylglycine, karena glisin tidak
memiliki sisi rantai polar. Ketika dihadapkan dengan masalah obat yang larut dalam air yang
tidak menembus BBB, ahli kimia obat diminta untuk memperbaiki masalah dengan lipidizing
obat. Hal ini dapat dilakukan dengan memblokir ikatan hidrogen membentuk kelompok
fungsional pada obat. Misalnya, ketika dua kelompok hidroksil dari morfin asetat, untuk
membentuk heroin, tingkat penetrasi BBB meningkatkan 100 kali lipat. Namun, terlepas dari
contoh morfin / heroin, telah ada beberapa keberhasilan dalam mengembangkan obat baru
untuk gangguan otak manusia oleh lipidization dari obat yang larut dalam air. Hal ini karena
hidrogen menghalangi kelompok fungsional dengan cepat dihidrolisis in vivo. Jika ikatan
hidrogen diblokir dengan kelompok noncleavable, maka aktivitas obat dapat dikurangi.
Pendekatan alternatif untuk modifikasi kimia obat obat non-BBB-penetrasi adalah untuk
fokus pada sistem CMT endogen dalam BBB. Alih-alih memblokir ikatan hidrogen, kimia
obat dapat digunakan untuk memodifikasi struktur obat untuk meningkatkan afinitas obat
untuk salah satu dari beberapa endogen carrier-dimediasi BBB transporter.

CARRIER-MEDIATED TRANSPORT OF SMALL MOLECULES

Discovery of BloodBrain Barrier Carrier-Mediated Transport Systems

Bukti pertama saturable atau CMT dari zat terlarut melintasi BBB ditunjukkan oleh Crone
untuk D-glukosa menggunakan teknik indikator pengenceran, yang merupakan metode
injeksi arteri sampel-karotis vena. Selanjutnya, teknik Brain Serapan Indeks, jaringan sampel-
karotis metode injeksi arteri yang dikembangkan oleh Oldendorf, digunakan untuk
mengkarakterisasi kinetika saturable dari BBB transportasi dari beberapa substrat metabolik
yang larut dalam air. The Michelis-Menten kinetika BBB CMT untuk substrat metabolik
utama yang ditentukan, dan analisis ini menunjukkan berbagai afinitas (Km) dan aktivitas
transportasi maksimal (Vmax) untuk transporter nutrisi BBB.

Metode biologi molekuler yang digunakan untuk mengidentifikasi produk gen utama yang
bertanggung jawab untuk BBB transportasi dari kelas tertentu dari substrat metabolik. BBB
pembawa glukosa, yang juga mengangkut heksosa lainnya, termasuk mannose, galaktosa,
deoxyglucose, atau 3-0-metil glukosa, adalah transporter glukosa tipe 1 atau GLUT1. BBB
fenilalanin carrier, yang juga mengangkut lebih dari 10 asam amino netral besar lainnya, dan
pada tingkat lebih rendah asam amino netral kecil, diidentifikasi sebagai besar netral asam
amino transporter tipe 1 atau LAT1. BBB arginin carrier, yang juga mengangkut asam lainnya
kationik amino (lisin, ornithine), terbukti menjadi kationik amino-asam transporter tipe 1 atau
CAT1. BBB laktat carrier, yang juga mengangkut asam lainnya monokarboksilat (piruvat,
dan badan keton, asetoasetat, dan b-hydroxybutryyrate), diidentifikasi sebagai asam
monokarboksilat transporter tipe 1 atau MCT1. BBB adenosin transporter, yang juga
mengangkut nukleosida lain purin (guanosin, inosin), serta nukleosida pirimidin, uridin,
adalah konsentratif nucleoside transporter tipe 2 atau CNT2 pada tikus.

Kapiler diisolasi dari otak diikuti oleh pencernaan dengan tripsin. Peptida tryptic dipisahkan
dan diidentifikasi oleh LC-MS. Standar peptida, yang memungkinkan kuantifikasi ekspresi
transporter, dapat disintesis berdasarkan urutan dikenal asam-amino dari transporter kloning,
serta program-program standar untuk memprediksi urutan peptida tryptic berdasarkan urutan
asam amino yang dikenal dari menargetkan protein. Konsentrasi transporter di kapiler otak
manusia terisolasi, CCAP, tercantum pada Tabel 2 untuk GLUT1 manusia, MCT1, LAT1, dan
CAT1, dan dibandingkan dengan transporter nilai Vmax ditentukan in vivo pada tikus.
Perbandingan antara tikus nilai Vmax dan nilai-nilai CCAP manusia dibuat, karena nilai-nilai
CCAP umumnya sebanding untuk kapiler otak manusia dan hewan pengerat.

Nilai-nilai Vmax disajikan per gram, sedangkan nilai CCAP disajikan per mg protein kapiler
otak. Diperkirakan bahwa ada 0,17 protein kapiler mg per gram otak, karena ada 100 mg
protein per gram otak, dan volume air intraseluler dari ruang endotel kapiler otak, 1 mL / g,
61 adalah 1/700 bagian dari total Volume air dalam otak. Sebuah transporter diidentifikasi
dalam persiapan kapiler otak terisolasi dapat selektif diekspresikan pada endotelium kapiler,
pada pericyte kapiler, pada sel otot polos arteriol prekapiler, atau bahkan pada astrosit
endfeet, yang tetap berpegang pada membran basal kapiler terisolasi. Berikut lokalisasi
transporter pada endotel kapiler, perlu untuk menentukan apakah transporter dinyatakan pada
membran luminal, membran abluminal, atau keduanya. Ekspresi selular dan subselular dari
transporter BBB diilustrasikan dalam kasus ekspresi GLUT1 di BBB.

Ekspresi GLUT1 Otak Apakah Localized ke Darah-Otak

Pembatas

Ada lebih dari 10 anggota dari glukosa GLUT keluarga gen transporter natrium-independen,
dan transporter pertama kali diidentifikasi, GLUT1, dikloning dari sel-sel hati HepG2
manusia menggunakan antibodi terhadap glukosa eritrosit transporter. Tak lama setelah
kloning dari sel hati manusia, glukosa GLUT1 transporter cDNA yang sama dikloning dari
cDNA library otak tikus, dan transporter ini awalnya dikenal sebagai otak-jenis transporter
glukosa. Transporter glukosa GLUT1 terpantau diperkaya di microvasculature otak. Namun,
penelitian glukosa GLUT1 ekspresi transporter mRNA dalam otak dengan metode penipisan
kapiler menunjukkan bahwa transporter glukosa GLUT1 diungkapkan dalam otak hanya di
BBB, dengan sedikit, jika ada, deteksi transkrip GLUT1 di mRNA tanpa kapiler berasal
mRNA . Namun, glukosa GLUT1 transporter mRNA adalah 495% dihapus dengan metode
penipisan kapiler, yang tidak berpengaruh pada kelimpahan transkrip umum, mRNA aktin
2.0-kb (Gambar 3B). Temuan ini mengindikasikan bahwa transport glukosa GLUT1-
dimediasi di BBB, tetapi tidak pada sel-sel otak. Ekspresi selektif isoform GLUT1 di BBB di
otak kemudian dikonfirmasikan dengan hibridisasi in situ, Western blotting kuantitatif, 50
dan kuantitatif immunogold mikroskop elektron. Transporter glukosa GLUT1 juga
dinyatakan dalam struktur penghalang lainnya di otak, termasuk membran basolateral dari
koroid pleksus epitel, dan membran apikal daerah tertentu dari epitel ependymal.

Lokalisasi transporter glukosa GLUT1 immunoreactive di BBB manusia ditunjukkan dengan

mikroskop elektron menggunakan antibodi yang ditujukan terhadap eritrosit manusia
transporter glukosa GLUT1 dan antibodi sekunder terkonjugasi dengan 10 nm transporter
glukosa emas particles.70 GLUT1 diamati pada membran endotel plasma , tapi tidak dalam
neuropil otak manusia. Ekspresi transporter glukosa GLUT1 pada kedua luminal dan
membran abluminal di BBB manusia menggambarkan bagaimana dua membran endotel ini
beroperasi dalam seri untuk mengatur BBB transportasi (Gambar 3C). GLUT1 juga terdeteksi
pada membran plasma dari eritrosit manusia (Gambar 3C). Kelimpahan GLUT1 dalam
membran eritrosit plasma manusia dikatakan tertinggi dari semua transporter. Namun,
kelimpahan transporter glukosa GLUT1, dinyatakan sebagai molekul transporter per mikron
panjang membran, 2.6 kali lipat lebih tinggi pada membran luminal manusia kapiler otak
endothelium relatif terhadap membran sel darah merah manusia. Kelimpahan dari transporter
glukosa GLUT1, CCAP, di microvasculature dari otak manusia yang tinggi, relatif terhadap
pengangkut lainnya, 139 46 pmol / mg protein, sebagaimana ditentukan oleh LC-MS. Nilai
CCAP ditentukan dengan LC-MS sesuai dengan perkiraan sebelumnya yang CCAP dari
GLUT1, 102 25 pmol / mg protein, ditentukan dengan uji Cytochalasin B radioreceptor di
otak terisolasi capillaries. yang CCAP dari transporter glukosa GLUT1 hampir 100 ganda
lebih tinggi dari CCAP untuk transporter lainnya, yang dikaitkan dengan satu-satunya
derivasi energi di otak dari pembakaran glukosa.

Transportasi obat ke dalam otak melalui darah-otak Barrier Carrier-Mediated

transporter

Karakterisasi transporter glukosa BBB GLUT1 mencontohkan basis pengetahuan yang luas
pada karakteristik molekuler dari sistem BBB CMT diberikan. L-DOPA adalah pengobatan
yang efektif untuk PD (Parkinson Diseases), karena prekursor dopamin ini merupakan asam
amino netral besar yang diangkut melintasi BBB melalui LAT1 netral asam amino carrier. L-
DOPA adalah contoh sederhana dari besar netral asam amino obat yang akan diperkirakan
memiliki afinitas untuk LAT1. Namun, ada contoh obat lain yang memiliki afinitas untuk
LAT1 yang tak terduga. Gabapentin adalah obat yang larut dalam air yang aktif dalam SSP
karena obat melintasi BBB pada transporter asam amino netral besar, yang LAT1. Afinitas
gabapentin untuk LAT1 tak terduga, karena gabapentin adalah asam -amino, dan LAT1
memiliki afinitas hanya untuk-asam amino. Namun, gabapentin adalah bentuk siklik dari
asam -amino, yang menempatkan amino dan karboksil kelompok dalam konformasi yang
meniru asam -amino. Paraquat adalah N, N0-dimetil-4,40-bipyridinium, banyak digunakan,
sangat larut dalam air herbisida, yang seharusnya tidak menyeberangi BBB. Namun, paraquat
adalah neurotoksik, yang menunjukkan bahwa dua garam amonium kuaterner ini BBB
menembus. Paraquat melintasi BBB melalui proses yang dihambat oleh valin adalah asam
amino netral besar, yang menunjukkan bahwa paraquat merupakan substrat untuk LAT1.
Melphalan adalah agen alkylating polar digunakan untuk mengobati kanker otak. Melphalan,
atau fenilalanin mustard, melintasi BBB melalui transportasi pada operator asam amino netral
besar BBB.

L-DOPA, gabapentin, paraquat, dan melphalan adalah contoh pengiriman BBB melalui LAT1
obat yang memiliki struktur yang menyerupai substrat endogen, asam amino netral.
Pendekatan alternatif adalah untuk konjugasi obat, yang biasanya tidak menyeberangi BBB,
dengan substrat CMT, misalnya, glukosa, yang melakukan menyeberangi BBB. Ini dicoba
dengan oligopeptida yang sedang terkonjugasi dengan glukosa. Namun, bagian glukosa dari
glycopeptide tidak lagi diangkut melalui GLUT1. Sebaliknya, struktur substrat CMT harus
dipertahankan menyusul konjugasi obat nontransportable. Contoh Novel adalah kasus di
mana obat nontransportable digabungkan dengan kelompok tiol dari L-sistein. Sistein adalah
asam amino netral kecil, yang memiliki afinitas rendah untuk LAT1. Namun, ketika obat ini
konjugasi kelompok thiol dari sistein, asam amino yang netral kecil dikonversi menjadi asam
amino netral besar, dan transportasi BBB signifikan melalui LAT1 adalah observed. Kasus ini
menunjukkan bahwa substrat CMT dapat digunakan sebagai pembawa obat, memberikan
karakteristik struktural asli dari kelas substrat untuk sistem CMT target dipertahankan.

Aktif penghabisan Pengangkut dan enzimatik Darah-Otak Barrier

Transporter penghabisan aktif (AET) berfungsi untuk memediasi penghabisan asimetris

metabolit dan obat-obatan dari otak ke darah. Sistem AET klasik dalam BBB adalah p-
glikoprotein, yang merupakan produk dari MDR (MDR) gen, MDR1, juga bernama ABC
(ATP-binding cassette) anggota subfamili B 1 (ABCB1). Terlepas dari p-glikoprotein, ada
banyak anggota lain dari keluarga gen ABC transporter yang disajikan di BBB, dan ini telah
diukur oleh Terasaki dan coworkers. Sistem AET dapat bekerja di konser dengan enzim
dinyatakan dalam BBB, seperti P450 enzymes. Kedua sistem AET, dan hambatan enzimatik
tunduk modulasi. penghalang darah-otak aktivitas p-glikoprotein ditekan oleh faktor
pertumbuhan endotel vaskular, dan enzim CYP1A1 dan CYP1B1 P450 yang diregulasi oleh
racun lingkungan, seperti derivatif dioxin, yang mengaktifkan reseptor aril hidrokarbon di
BBB. Selain lingkungan racun, atau faktor pertumbuhan, BBB permeabilitas dapat diubah
oleh negara penyakit, termasuk penuaan.